第18章-高效液相色譜法課件

第十八章高效液相色譜法

highperformanceliquidchromatography；HPLC.第十八章高效液相色譜法.1基本要求掌握：反相鍵合相色譜法的分離機(jī)制、保留行為的主要影響因素和分離條件選擇；化學(xué)鍵合相的性質(zhì)、特點(diǎn)和種類及使用注意事項(xiàng)；流動(dòng)相對(duì)色譜分離的影響；HPLC中的速率理論及其對(duì)選擇實(shí)驗(yàn)條件的指導(dǎo)作用；定量分析方法。

熟悉:反相離子對(duì)色譜法和正相鍵合相色譜法及其分離條件的選擇；高效液相色譜儀的部件；紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器的檢測(cè)原理和適用范圍。

了解：離子、手性和親合三種色譜法；溶劑強(qiáng)度和選擇性；混合溶劑強(qiáng)度參數(shù)的計(jì)算和流動(dòng)相最優(yōu)化方法?；疽笳莆眨悍聪噫I合相色譜法的分離機(jī)制、保留行為的主要影響基本內(nèi)容§18.1高效液相色譜法的主要類型和原理§18.2高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相及其選擇§18.3高效液相色譜儀§18.4高效液相色譜分析方法基本內(nèi)容§18.1高效液相色譜法的主要類型和原理流動(dòng)相為液體，采用高效固定相，以高壓輸送流動(dòng)相的色譜法。引入氣相色譜的塔板理論和速率理論及先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法，通過(guò)改進(jìn)固定相達(dá)到了高效，采用高壓輸送流動(dòng)相，達(dá)到了高速。特點(diǎn)：分離效能高、分析速度快及儀器化next高效液相色譜法流動(dòng)相為液體，采用高效固定相，以高壓輸送流動(dòng)相的色譜法。高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法對(duì)比經(jīng)典液相色譜法高效液相色譜法（分析型）固定相一般規(guī)格特殊規(guī)格固定相粒度（μm）75~5003~20固定相粒度分布(RSD)20~30%<5%柱長(zhǎng)（cm）10~10010~30柱內(nèi)徑（cm）2~50.1~0.5柱入口壓強(qiáng)（kg/cm2）0.01~120~300柱效(每米理論塔片數(shù))10~100104~105樣品用量（g）1~1010-7~10-2分析所需時(shí)間（h）1~200.05~0.5裝置非儀器化儀器化高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法對(duì)比經(jīng)典液相色譜法高效液相色譜高效液相色譜法與氣相色譜法對(duì)比氣相色譜（GC）高效液相色譜（HPLC）應(yīng)用范圍占有機(jī)物的20%占有機(jī)物的80%分離效果高更高選擇性流動(dòng)相是氣體，只能選擇固定相流動(dòng)相是液體，流動(dòng)相、固定相都可選擇。選擇性廣。溫度高溫常溫（分離效果好）靈敏度(g/ml)10-12

10-9

高效液相色譜法與氣相色譜法對(duì)比氣相色譜（GC）高效液相色譜第一節(jié)高效液相色譜法的主要類型和原理一、基本類型吸附色譜法（adsorptionchromatographyLSC）分配色譜法（partitionchromatographyLLC）離子交換色譜(ionexchangechromatographyIEC)空間排阻色譜(stericexclusionchromatographySEC)第一節(jié)高效液相色譜法的主要類型和原理一、基本類型吸附色主要類型化學(xué)鍵合相色譜法﹡（bondedphasechromatographyBPC）

離子對(duì)色譜法(pairedionchromatographyPIC)

離子抑制色譜法(ionsuppressionchromatographyISC)

親合色譜法(affinitychromatographyAC)

手性色譜法(chiralchromatographyCC)主要類型化學(xué)鍵合相色譜法﹡（bondedphasechr疏溶劑理論疏溶劑締合作用示意圖l.鍵合烴基2.溶劑膜3.溶質(zhì)的極性部分4.溶質(zhì)的非極性部分締和解締和疏溶劑理論疏溶劑締合作用示意圖締和解締和（1）反相離子抑制色譜離子抑制劑：弱酸、弱堿性物質(zhì)

pH一定的緩沖溶液酸性物質(zhì)——加入酸，如HAc，tR↑，K↑

堿性物質(zhì)——加入堿，如NH3·H2O，tR↑，K↑調(diào)節(jié)pH范圍：2.0~8.0適用：

pH=3~7弱酸；pH=7~8弱堿；兩性化合物3.反相離子抑制色譜和反相離子對(duì)色譜（1）反相離子抑制色譜離子抑制劑：弱酸、弱堿性物質(zhì)3.反相離(2)反相離子對(duì)色譜法適用：pH:離子對(duì)試劑種類及濃度：(2)反相離子對(duì)色譜法適用：pH:離子對(duì)試劑(2)反相離子對(duì)色譜法離子對(duì)試劑種類及濃度：適用：pH:(2)反相離子對(duì)色譜法離子對(duì)試劑種類及濃度：適用：pH:第18章--高效液相色譜法課件第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相及其選擇一、化學(xué)鍵合相色譜的固定相（１）液－固吸附色譜法（ＬＳＣ）固定相常用硅膠、高分子多孔微球第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相及其選擇一、化學(xué)鍵合相第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相及其選擇一、化學(xué)鍵合相色譜的固定相優(yōu)點(diǎn)：固定液不易流失，穩(wěn)定（在pH2~8范圍)，熱穩(wěn)定性好，且能用于梯度洗脫。硅膠-烷基鍵合相中烷基鏈長(zhǎng)對(duì)反相色譜分離的影響

1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯鍵合量評(píng)價(jià)：含碳量覆蓋度封尾第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相及其選擇一、化學(xué)鍵合相二、化學(xué)鍵合相色譜法的流動(dòng)相

要求：①與固定液不反應(yīng)②對(duì)樣品有良好溶解度k=1~10最佳k=2~5③與檢測(cè)器匹配④粘度小、純度高。⑤流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜濾過(guò)、脫氣。二、化學(xué)鍵合相色譜法的流動(dòng)相要求：(一）流動(dòng)相對(duì)分離的影響由填固充定質(zhì)相量及決色定譜受溶劑種類(選擇性)影響受溶劑配比(強(qiáng)度)影響(一）流動(dòng)相對(duì)分離的影響由填受受(二)溶劑的強(qiáng)度和選擇性1．溶劑的極性和強(qiáng)度斯奈德(Snyder)溶劑極性參數(shù)(polarityparameter)正相色譜溶劑極性越強(qiáng)，洗脫能力越強(qiáng)，是強(qiáng)溶劑。反相色譜溶劑極性越弱，洗脫能力越強(qiáng)，是強(qiáng)溶劑。強(qiáng)度因子S(二)溶劑的強(qiáng)度和選擇性1．溶劑的極性和強(qiáng)度正相色譜溶劑第18章--高效液相色譜法課件正相色譜極性參數(shù)P′反相色譜反相色譜常用溶劑的強(qiáng)度因子水甲醇乙腈丙酮二惡烷乙醇異丙醇四氫呋喃03.03.23.43.53.64.24.5強(qiáng)度因子S

正相色譜極性參數(shù)P′反相色譜反相色譜常用溶劑的強(qiáng)度因子水正相鍵合相色譜法式中和為純?nèi)軇?/p>

i

的極性參數(shù)及該溶劑在混合溶劑中的體積分?jǐn)?shù)。2.混合溶劑的強(qiáng)度反相鍵合相色譜法正相鍵合相色譜法式中和為純?nèi)軇﹊的極性參數(shù)及原則：控制k=2~5Xe=lg(K〞g)e/Pˊ,

Xd=lg(K〞g)d/Pˊ,

Xn=

lg(K〞g)n/Pˊ

3．溶劑的選擇性依據(jù)：溶劑和溶質(zhì)間的作用力---選擇性參數(shù)原則：控制k=2~5Xe=lg(K〞g)e/Pˊ,Xd=l處于同一組中的各溶劑的作用力類型相同，在色譜分離中具有相似的選擇性，而處于不同組別的溶劑，其選擇性差別較大。(三）流動(dòng)相最優(yōu)化方法四面體法

(a)四面體內(nèi)的等洗脫面ΔABC

（b）等洗脫面中10個(gè)初試實(shí)驗(yàn)溶劑的配比（A/B/C）處于同一組中的各溶劑的作用力類型相同，在色譜分離中具有相似的第18章--高效液相色譜法課件三、分離條件選擇（一）HPLC中的速率理論（與GC對(duì)比）GC:H=A+B/u+C·u(填充柱）或

H=B/u+C·u(毛細(xì)管柱）HPLC:

H=A+C·u三、分離條件選擇（一）HPLC中的速率理論（與GC對(duì)比）HP2）渦流擴(kuò)散項(xiàng)及其影響因素

1）流動(dòng)相流速對(duì)HPLC板高的影響討論2）渦流擴(kuò)散項(xiàng)及其影響因素1）流動(dòng)相流速對(duì)HPLC板高的影3）傳質(zhì)阻抗項(xiàng)及其影響因素注：只考慮流動(dòng)相和靜態(tài)流動(dòng)相的傳質(zhì)阻抗，忽略固定相的傳質(zhì)阻抗ωm：色譜柱及填充情況決定的因子3）傳質(zhì)阻抗項(xiàng)及其影響因素注：只考慮流動(dòng)相和靜態(tài)流動(dòng)相的傳渦流擴(kuò)散與各種傳質(zhì)阻抗對(duì)液相色譜峰展寬的影響渦流擴(kuò)散與各種傳質(zhì)阻抗對(duì)液相色譜峰展寬的影響HPLC法的分離條件(1)固定相的選擇：小粒度、分布均勻的球形化學(xué)鍵合相固定相（dp≤10μm）(2)流動(dòng)相及其流速的選擇：選粘度小、低流速(1ml/min)的流動(dòng)相——甲醇或乙腈

(3)柱溫的選擇：一般選室溫250C左右(4)洗脫方式：等度洗脫（恒組成溶劑洗脫）梯度洗脫HPLC法的分離條件(1)固定相的選擇：小粒度、分布均勻的第三節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程圖1．貯液罐(濾棒，可濾去顆粒狀物質(zhì))2．高壓泵（輸液泵）3．進(jìn)樣裝置4．色譜柱——分離5．檢測(cè)器——分析6．廢液出口或組分收集器7．記錄裝置第三節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程圖1．貯液罐１.輸液泵:柱塞往復(fù)泵壓力：20~50MPa。特點(diǎn)：具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性。１.輸液泵:柱塞往復(fù)泵壓力：20~50MPa。特點(diǎn)：具有壓力１.輸液泵:柱塞往復(fù)泵１.輸液泵:柱塞往復(fù)泵

1.等度洗脫洗脫方式2.梯度洗脫梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：①縮短分析周期；②提高分離效果；③改善峰形，很少拖尾；④增加檢測(cè)靈敏度（因峰變瘦、變高）。但有時(shí)引起基線漂移及重復(fù)性不佳是其缺點(diǎn)。1.等度洗脫洗脫方式2.梯度洗脫梯度洗脫兩種實(shí)現(xiàn)梯度洗脫的裝置：高壓梯度和低壓梯度兩種實(shí)現(xiàn)梯度洗脫的裝置：高壓梯度和低壓梯度二、進(jìn)樣系統(tǒng)和色譜柱

（一）進(jìn)樣器

流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置，其結(jié)構(gòu)如圖所示：loadinjection二、進(jìn)樣系統(tǒng)和色譜柱（一）進(jìn)樣器loadinject(二)色譜柱

柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑1～6mm，柱長(zhǎng)5～40cm。發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。(4.0mm×250mm，5μm),(二)色譜柱柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)三、檢測(cè)器（一）光電二極管陣列檢測(cè)器（PDAD）三、檢測(cè)器（一）光電二極管陣列檢測(cè)器（PDAD）二、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)二、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)第四節(jié)高效液相色譜分析方法定性分析方法定量分析方法：外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法同GC第四節(jié)高效液相色譜分析方法定性分析方法作業(yè)：3,13,19作業(yè)：3,13,19三、分離條件選擇（自學(xué)）（一）HPLC中的速率理論（與GC對(duì)比）GC:H=A+B/u+C·u(填充柱）或

H=B/u+C·u(毛細(xì)管柱）HPLC:

H=A+C·u三、分離條件選擇（自學(xué)）（一）HPLC中的速率理論（與GC對(duì)2）渦流擴(kuò)散項(xiàng)及其影響因素

1）流動(dòng)相流速對(duì)HPLC板高的影討論2）渦流擴(kuò)散項(xiàng)及其影響因素1）流動(dòng)相流速對(duì)HPLC板高的影3）傳質(zhì)阻抗項(xiàng)及其影響因素注：只考慮流動(dòng)相和靜態(tài)流動(dòng)相的傳質(zhì)阻抗，忽略固定相的傳質(zhì)阻抗ωm：色譜柱及填充情況決定的因子3）傳質(zhì)阻抗項(xiàng)及其影響因素注：只考慮流動(dòng)相和靜態(tài)流動(dòng)相的傳渦流擴(kuò)散與各種傳質(zhì)阻抗對(duì)液相色譜峰展寬的影響渦流擴(kuò)散與各種傳質(zhì)阻抗對(duì)液相色譜峰展寬的影響HPLC法的分離條件(1)固定相的選擇：小粒度、分布均勻的球形化學(xué)鍵合相固定相（dp≤10μm）(2)流動(dòng)相及其流速的選擇：選粘度小、低流速(1ml/min)的流動(dòng)相——甲醇或乙腈

(3)柱溫的選擇：一般選室溫250C左右(4)洗脫方式：等度洗脫（恒組成溶劑洗脫）梯度洗脫HPLC法的分離條件(1)固定相的選擇：小粒度、分布均勻的第十八章高效液相色譜法

highperformanceliquidchromatography；HPLC.第十八章高效液相色譜法.46基本要求掌握：反相鍵合相色譜法的分離機(jī)制、保留行為的主要影響因素和分離條件選擇；化學(xué)鍵合相的性質(zhì)、特點(diǎn)和種類及使用注意事項(xiàng)；流動(dòng)相對(duì)色譜分離的影響；HPLC中的速率理論及其對(duì)選擇實(shí)驗(yàn)條件的指導(dǎo)作用；定量分析方法。

熟悉:反相離子對(duì)色譜法和正相鍵合相色譜法及其分離條件的選擇；高效液相色譜儀的部件；紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器的檢測(cè)原理和適用范圍。

了解：離子、手性和親合三種色譜法；溶劑強(qiáng)度和選擇性；混合溶劑強(qiáng)度參數(shù)的計(jì)算和流動(dòng)相最優(yōu)化方法。基本要求掌握：反相鍵合相色譜法的分離機(jī)制、保留行為的主要影響基本內(nèi)容§18.1高效液相色譜法的主要類型和原理§18.2高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相及其選擇§18.3高效液相色譜儀§18.4高效液相色譜分析方法基本內(nèi)容§18.1高效液相色譜法的主要類型和原理流動(dòng)相為液體，采用高效固定相，以高壓輸送流動(dòng)相的色譜法。引入氣相色譜的塔板理論和速率理論及先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法，通過(guò)改進(jìn)固定相達(dá)到了高效，采用高壓輸送流動(dòng)相，達(dá)到了高速。特點(diǎn)：分離效能高、分析速度快及儀器化next高效液相色譜法流動(dòng)相為液體，采用高效固定相，以高壓輸送流動(dòng)相的色譜法。高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法對(duì)比經(jīng)典液相色譜法高效液相色譜法（分析型）固定相一般規(guī)格特殊規(guī)格固定相粒度（μm）75~5003~20固定相粒度分布(RSD)20~30%<5%柱長(zhǎng)（cm）10~10010~30柱內(nèi)徑（cm）2~50.1~0.5柱入口壓強(qiáng)（kg/cm2）0.01~120~300柱效(每米理論塔片數(shù))10~100104~105樣品用量（g）1~1010-7~10-2分析所需時(shí)間（h）1~200.05~0.5裝置非儀器化儀器化高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法對(duì)比經(jīng)典液相色譜法高效液相色譜高效液相色譜法與氣相色譜法對(duì)比氣相色譜（GC）高效液相色譜（HPLC）應(yīng)用范圍占有機(jī)物的20%占有機(jī)物的80%分離效果高更高選擇性流動(dòng)相是氣體，只能選擇固定相流動(dòng)相是液體，流動(dòng)相、固定相都可選擇。選擇性廣。溫度高溫常溫（分離效果好）靈敏度(g/ml)10-12

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高效液相色譜法與氣相色譜法對(duì)比氣相色譜（GC）高效液相色譜第一節(jié)高效液相色譜法的主要類型和原理一、基本類型吸附色譜法（adsorptionchromatographyLSC）分配色譜法（partitionchromatographyLLC）離子交換色譜(ionexchangechromatographyIEC)空間排阻色譜(stericexclusionchromatographySEC)第一節(jié)高效液相色譜法的主要類型和原理一、基本類型吸附色主要類型化學(xué)鍵合相色譜法﹡（bondedphasechromatographyBPC）

離子對(duì)色譜法(pairedionchromatographyPIC)

離子抑制色譜法(ionsuppressionchromatographyISC)

親合色譜法(affinitychromatographyAC)

手性色譜法(chiralchromatographyCC)主要類型化學(xué)鍵合相色譜法﹡（bondedphasechr疏溶劑理論疏溶劑締合作用示意圖l.鍵合烴基2.溶劑膜3.溶質(zhì)的極性部分4.溶質(zhì)的非極性部分締和解締和疏溶劑理論疏溶劑締合作用示意圖締和解締和（1）反相離子抑制色譜離子抑制劑：弱酸、弱堿性物質(zhì)

pH一定的緩沖溶液酸性物質(zhì)——加入酸，如HAc，tR↑，K↑

堿性物質(zhì)——加入堿，如NH3·H2O，tR↑，K↑調(diào)節(jié)pH范圍：2.0~8.0適用：

pH=3~7弱酸；pH=7~8弱堿；兩性化合物3.反相離子抑制色譜和反相離子對(duì)色譜（1）反相離子抑制色譜離子抑制劑：弱酸、弱堿性物質(zhì)3.反相離(2)反相離子對(duì)色譜法適用：pH:離子對(duì)試劑種類及濃度：(2)反相離子對(duì)色譜法適用：pH:離子對(duì)試劑(2)反相離子對(duì)色譜法離子對(duì)試劑種類及濃度：適用：pH:(2)反相離子對(duì)色譜法離子對(duì)試劑種類及濃度：適用：pH:第18章--高效液相色譜法課件第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相及其選擇一、化學(xué)鍵合相色譜的固定相（１）液－固吸附色譜法（ＬＳＣ）固定相常用硅膠、高分子多孔微球第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相及其選擇一、化學(xué)鍵合相第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相及其選擇一、化學(xué)鍵合相色譜的固定相優(yōu)點(diǎn)：固定液不易流失，穩(wěn)定（在pH2~8范圍)，熱穩(wěn)定性好，且能用于梯度洗脫。硅膠-烷基鍵合相中烷基鏈長(zhǎng)對(duì)反相色譜分離的影響

1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯鍵合量評(píng)價(jià)：含碳量覆蓋度封尾第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相及其選擇一、化學(xué)鍵合相二、化學(xué)鍵合相色譜法的流動(dòng)相

要求：①與固定液不反應(yīng)②對(duì)樣品有良好溶解度k=1~10最佳k=2~5③與檢測(cè)器匹配④粘度小、純度高。⑤流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜濾過(guò)、脫氣。二、化學(xué)鍵合相色譜法的流動(dòng)相要求：(一）流動(dòng)相對(duì)分離的影響由填固充定質(zhì)相量及決色定譜受溶劑種類(選擇性)影響受溶劑配比(強(qiáng)度)影響(一）流動(dòng)相對(duì)分離的影響由填受受(二)溶劑的強(qiáng)度和選擇性1．溶劑的極性和強(qiáng)度斯奈德(Snyder)溶劑極性參數(shù)(polarityparameter)正相色譜溶劑極性越強(qiáng)，洗脫能力越強(qiáng)，是強(qiáng)溶劑。反相色譜溶劑極性越弱，洗脫能力越強(qiáng)，是強(qiáng)溶劑。強(qiáng)度因子S(二)溶劑的強(qiáng)度和選擇性1．溶劑的極性和強(qiáng)度正相色譜溶劑第18章--高效液相色譜法課件正相色譜極性參數(shù)P′反相色譜反相色譜常用溶劑的強(qiáng)度因子水甲醇乙腈丙酮二惡烷乙醇異丙醇四氫呋喃03.03.23.43.53.64.24.5強(qiáng)度因子S

正相色譜極性參數(shù)P′反相色譜反相色譜常用溶劑的強(qiáng)度因子水正相鍵合相色譜法式中和為純?nèi)軇?/p>

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3．溶劑的選擇性依據(jù)：溶劑和溶質(zhì)間的作用力---選擇性參數(shù)原則：控制k=2~5Xe=lg(K〞g)e/Pˊ,Xd=l處于同一組中的各溶劑的作用力類型相同，在色譜分離中具有相似的選擇性，而處于不同組別的溶劑，其選擇性差別較大。(三）流動(dòng)相最優(yōu)化方法四面體法

(a)四面體內(nèi)的等洗脫面ΔABC

（b）等洗脫面中10個(gè)初試實(shí)驗(yàn)溶劑的配比（A/B/C）處于同一組中的各溶劑的作用力類型相同，在色譜分離中具有相似的第18章--高效液相色譜法課件三、分離條件選擇（一）HPLC中的速率理論（與GC對(duì)比）GC:H=A+B/u+C·u(填充柱）或

H=B/u+C·u(毛細(xì)管柱）HPLC:

H=A+C·u三、分離條件選擇（一）HPLC中的速率理論（與GC對(duì)比）HP2）渦流擴(kuò)散項(xiàng)及其影響因素

1）流動(dòng)相流速對(duì)HPLC板高的影響討論2）渦流擴(kuò)散項(xiàng)及其影響因素1）流動(dòng)相流速對(duì)HPLC板高的影3）傳質(zhì)阻抗項(xiàng)及其影響因素注：只考慮流動(dòng)相和靜態(tài)流動(dòng)相的傳質(zhì)阻抗，忽略固定相的傳質(zhì)阻抗ωm：色譜柱及填充情況決定的因子3）傳質(zhì)阻抗項(xiàng)及其影響因素注：只考慮流動(dòng)相和靜態(tài)流動(dòng)相的傳渦流擴(kuò)散與各種傳質(zhì)阻抗對(duì)液相色譜峰展寬的影響渦流擴(kuò)散與各種傳質(zhì)阻抗對(duì)液相色譜峰展寬的影響HPLC法的分離條件(1)固定相的選擇：小粒度、分布均勻的球形化學(xué)鍵合相固定相（dp≤10μm）(2)流動(dòng)相及其流速的選擇：選粘度小、低流速(1ml/min)的流動(dòng)相——甲醇或乙腈

(3)柱溫的選擇：一般選室溫250C左右(4)洗脫方式：等度洗脫（恒組成溶劑洗脫）梯度洗脫HPLC法的分離條件(1)固定相的選擇：小粒度、分布均勻的第三節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程圖1．貯液罐(濾棒，可濾去顆粒狀物質(zhì))2．高壓泵（輸液泵）3．進(jìn)樣裝置4．色譜柱——分離5．檢測(cè)器——分析6．廢液出口或組分收集器7．記錄裝置第三節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程圖1．貯液罐１.輸液泵:柱塞往復(fù)泵壓力：20~50MPa。特點(diǎn)：具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性。１.輸液泵:柱塞往復(fù)泵壓力：20~50MPa。特點(diǎn)：具有壓力１.輸液泵:柱塞往復(fù)泵１.輸液泵:柱塞往復(fù)泵

1.等度洗脫洗脫方式2.梯度洗脫梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：①縮短分析周期；②提高分離效果；③改善峰形，很少拖尾；④增加檢測(cè)靈敏度（因峰變瘦、變高）。但有時(shí)引起基線漂移及重復(fù)性不佳是其缺點(diǎn)。1.等度洗