緩解體力疲勞功能評價方法

緩解體力疲勞功能

試驗項目、試驗原則與結(jié)果判定1.實驗項目1.1動物實驗1.1.1動物體重1.1.2負(fù)重游泳實驗1.1.3力竭實驗1.2人體試食試驗1.2.1臨床癥狀與體征1.2.2跑臺試驗2試驗原則2.1動物實驗所列指標(biāo)均為必做項目，動物負(fù)重游泳和力竭實驗前，對實驗動物進行運動能力篩選。2.2實驗前必須對同批受試樣品進行違禁藥物的檢測。2.3運動實驗與生化指標(biāo)檢測相結(jié)合。2.4在進行人體試食試驗時，應(yīng)對受試樣品的食用安全性作進一步的觀察。2.5停止給予受試物一天后進行效果觀察。3結(jié)果判定3.1動物實驗：負(fù)重游泳實驗結(jié)果陽性，力竭實驗結(jié)果為陰性（特指無顯著不利影響），可判定該受試樣品緩解體力疲勞功能的動物實驗結(jié)果為陽性。3.2人體試食試驗：（1）試食前后，受試組自身對照，肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶無不利的顯著性改變；（2）跑臺試驗：試食組自身對照，試食后運動時間與試食前相比顯著性增加，首次試食后運動時間與試食前相比無顯著性差異。滿足（1）和（2）可判定該受試樣品具有緩解體力疲勞的功能。緩解體力疲勞功能評價方法1.動物實驗1.1原理在一定時間給予一定量的受試樣品，通過持續(xù)服用，調(diào)整特定人群機體狀態(tài)，使其擁有更好的調(diào)節(jié)功能，該功能包括應(yīng)對潛在需求、使機體處于良好狀態(tài)，具有更長時間作業(yè)能力或在相同作業(yè)時間不出現(xiàn)更重的疲勞表現(xiàn)。1.2負(fù)重游泳實驗1.2.1儀器與器材游泳箱（大小約80cmx50cmx60cm），電子天平、鉛皮。1.2.2實驗方法1.2.2.1實驗動物推薦使用雄性小鼠，6周齡，體重20-24g。1.2.2.2劑量分組與受試樣品給予時間實驗設(shè)三個劑量組和一個陰性對照組，一個空白對照組，一個單次中劑量受試組。其中以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設(shè)二個劑量組，必要時設(shè)陽性對照組。陰性對照組灌胃給予安慰劑。受試樣品給予時間30天，必要時可延長至45天。1.2.2.3實驗步驟末次給受試樣品24小時后，將尾根部負(fù)荷6%體重鉛皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于40cm，水溫30°C±2.0°C，記錄小鼠自游泳開始至力竭時間，即小鼠負(fù)重游泳時間。力竭判斷標(biāo)準(zhǔn)為：小鼠沉入水中超過10秒，且放在平面上無法完成翻正反射。1.2.3數(shù)據(jù)處理與結(jié)果判定游泳時間為計量資料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值土F0.05,P<0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。（1）受試樣品組負(fù)重游泳時間明顯長于陰性對照組和空白對照組，且差異有顯著性；（2）單次中劑量組與陰性對照組相比，負(fù)重游泳時間無顯著差異。同時滿足（1）和（2）時，可判定該實驗結(jié)果陽性。1.3力竭實驗儀器與器材全自動生化儀，游泳箱，電子天平、鉛皮。1.3.2實驗方法1.3.2.1實驗動物雄性SD大鼠，體重160-200g。1.3.2.2劑量設(shè)計和分組大鼠以人體推薦量的5倍為基本劑量。其余同。1.3.2.3實驗步驟末次給受試樣品24小時后，采用尾部負(fù)重3%體重鉛皮的大鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于50cm，水溫31°C±1.0°C，當(dāng)大鼠游至連續(xù)3次沒入水底，每次超過10秒，視為力竭。記錄大鼠自游泳開始至力竭時間，大鼠腹主動脈采血全血，置4C冰箱約3h，血凝固后2000rpm離心、15min，取血清備用，測定尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性。1.3.3數(shù)據(jù)處理與結(jié)果判定血液生化數(shù)據(jù)為計量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值＜F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性;F值＞FO.O5，P＜0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計;對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。（1）受試樣品組與陰性對照組和空白對照組相比，血清尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性應(yīng)無顯著性差異；（2）單次中劑量組與陰性對照組相比，血清尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性應(yīng)無顯著性差異；同時滿足（1）和（2）時，可判定該實驗結(jié)果陰性（特指無顯著不利影響）。1.4注意事項1.4.1每一游泳箱一次放入動物不宜太多，每只小鼠占用的水面積大多在300平方厘米以上，每平方米水面同時不超過6只大鼠游泳，否則互相擠靠，影響實驗結(jié)果。1.4.2水溫對小鼠的游泳時間有明顯的影響，因此要求各組水溫控制一致，每一批實驗動物下水之前都應(yīng)測量水溫，水溫以30-31C為宜，如果過低可能引起實驗動物痙攣，影響實驗結(jié)果。1.4.3鉛皮纏繞松緊應(yīng)適宜。1.4.4觀察者應(yīng)在整個實驗過程中使每只實驗動物四肢保持運動。如果實驗動物漂浮在水面四肢不動，可用木棒在其附近攪動。同時適時清除水中雜質(zhì)，以避免影響實驗結(jié)果。1.4.5不同批的實驗動物因飼養(yǎng)環(huán)境、季節(jié)等原因的變化體質(zhì)上會出現(xiàn)差異。因此受試樣品組和對照組應(yīng)采用同一批動物同時進行實驗。負(fù)重游泳實驗、力竭實驗前對實驗動物進行能力篩選。1.5結(jié)果判定負(fù)重游泳實驗結(jié)果陽性，力竭實驗結(jié)果為陰性，可判定該受試樣品緩解體力疲勞功能的動物實驗結(jié)果為陽性。2人體試食試驗2.1受試者的選擇標(biāo)準(zhǔn)2.1.1納入受試者標(biāo)準(zhǔn)：需要較長時間持續(xù)中等強度作業(yè)或易于疲勞的自愿受試者人群。2.1.2排除受試者標(biāo)準(zhǔn)：2.1.2.1年齡在20歲以下或45歲以上男性，年齡在20歲以下或55歲以上女性與妊娠或哺乳期婦女，過敏體質(zhì)與對本樣品過敏者。已知患有心、血管、肺臟（如哮喘等）和（或）代疾?。ㄈ缣悄虿〉龋?，精神病患者；心血管、肺臟和（或）代疾病的癥狀或體征。經(jīng)常用藥、嗜酒吸煙或戒煙不足6個月，血漿膽固醇〉200mg/dl4周參加過其它實驗。2.1.2.4正在服用其它營養(yǎng)補充劑、治療藥物或接受其它治療者。2.1.2.5未按規(guī)定服用樣品，無法判斷功效，或資料不全等影響功效或安全性判斷者。2.2試驗設(shè)計與分組要求：采用自身對照設(shè)計。受試者不少于50例。2.3受試樣品的劑量和使用方法：受試者在試食觀察期間，按推薦服用方法、服用量服用受試產(chǎn)品，連續(xù)給予受試樣品30天，必要時可延長至45天。2.4觀察指標(biāo)2.4.1安全性指標(biāo)一般狀況包括精神、睡眠、飲食、大小便等2.4.1.2試食前后進行血、尿、便常規(guī)檢查（肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶）2.4.1.3肝、腎功能檢查心、電圖2.4.2功效性指標(biāo)一般情況詳細詢問病史，了解受試者飲食情況、活動量。觀察主要癥狀：頭痛、眩暈、心悸、耳鳴、失眠、煩躁、腰膝酸軟等。2.4.2.3跑臺試驗（1）試食前測試在跑步機上0坡度，以8km/小時速度進行跑步運動，對心、率進行實時監(jiān)測。從55%最大心、率開始計時，連續(xù)運動60分鐘以上，且心率達到69%最大心、率時為止，為試食前運動時間，并于運動后采血。其中最大心、率=220-年齡。（2）試食中測試第二次試食2小時后，在跑步機上0坡度，以8km/小時速度進行跑步運動，對心、率進行實時監(jiān)測。從55%最大心、率開始計時，連續(xù)運動60分鐘以上，且心率達到69%最大心、率時為止，為首次試食運動時間。其中最大心率=220-年齡。（2）試食后測試試食結(jié)束24小時，在跑步機上0坡度，以8km/小時速度進行跑步運動，對心、率進行實時監(jiān)測。從55%最大心、率開始計時，連續(xù)運動60分鐘以上，且心率達到69%最大心、率時為止，為試食后運動時間，并于運動后采血。其中最大心率=220-年齡。2.5注意事項跑臺試驗中三次測試為測試當(dāng)日同一時間，以避免時間周期對運動時長產(chǎn)生的影響；跑臺試驗中試食前測試60分鐘以即超過69%最大心、率者不可納入受試者人群；跑臺試驗中試食后測試前，先對受試者進行安全性觀察和一般性觀察，若受試者不符合測試條件，該受試者不進行試食后測試。2.6數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定測得數(shù)據(jù)為計量資料，可用t檢驗進行分析。凡自身對照資料可以采用配對t檢驗，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗，后者需進行方差齊性檢驗，對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進行t檢驗；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t’檢驗或秩和檢驗；但變異系數(shù)太大（如CV>50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗。結(jié)果判定（1）試食前后，受試組自身對照，肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶無不利的顯著性改變；（2）跑臺試驗：試食組自身對照，試食后