對心肌缺血再灌注心律失常起保護(hù)作用藥物的藥理設(shè)計試驗課件

演示目錄背景知識試驗原理試驗方法試驗材料試驗步驟數(shù)據(jù)統(tǒng)計試驗結(jié)果預(yù)測討論演示目錄背景知識背景知識缺血性心臟病和急性心肌梗死已成為當(dāng)今威脅人類健康的兩大主要殺手，而心肌缺血損傷和心肌缺血再灌注損傷是導(dǎo)致這兩大病的主要病因。缺血性心臟病是由于血液供應(yīng)中斷一定時間后（一般30min)就會出現(xiàn)心肌細(xì)胞酸中毒，細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)改變和功能障礙，導(dǎo)致不可逆性損傷甚至死亡，也稱為缺血損傷。背景知識缺血性心臟病和急性心肌梗死已成為當(dāng)今威脅人類健康的兩背景知識急性心肌梗死是由于血液供應(yīng)中斷一定時間后（一般30min)，為恢復(fù)心肌功能及時提供血液，由于在閉塞的冠動脈再通，缺血區(qū)血運(yùn)重建后的一段時間內(nèi)，可發(fā)生血壓聚降，導(dǎo)致新功能不全，出現(xiàn)心律失常、猝死等病情惡化現(xiàn)象，也稱為缺血再灌注損傷。背景知識急性心肌梗死是由于血液供應(yīng)中斷一定時間后（一般30m試驗原理氧自由基(ORG)是心肌細(xì)胞呼吸產(chǎn)能過成中的副產(chǎn)物，包括超氧過離子，羥自由基和過氧化氫等。OFR可引起脂質(zhì)的過氧化，降低細(xì)胞膜流動性，增加它的通透性，損傷離子泵，引起細(xì)胞能量和離子穩(wěn)態(tài)異常，最終導(dǎo)致肌細(xì)胞損傷甚至死亡。試驗原理氧自由基(ORG)是心肌細(xì)胞呼吸產(chǎn)能過成中的副產(chǎn)物，試驗原理正常情況下，有機(jī)體存在的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px)等內(nèi)源性抗氧化防御系統(tǒng)可將OFR及時清除掉，維持正常的功能。在缺氧情況下，OFR明顯下降而生成的潛能增強(qiáng)，當(dāng)在恢復(fù)供氧時，OFR劇增超過了抗防御系統(tǒng)的清除能力，導(dǎo)致肌細(xì)胞損傷甚至死亡。試驗原理正常情況下，有機(jī)體存在的超氧化物歧化酶（SOD）、谷試驗方法采用在大鼠開胸結(jié)扎冠狀動脈前降肢30min后，松扎再灌注60造成的心臟缺血再灌注模型，以心電圖監(jiān)測心律失常情況，主要指標(biāo)以心律出現(xiàn)失常的時間，持續(xù)時間及室性心動過速（VT）、心室顫動（VF）的發(fā)生率，ST段在不同再灌注時間的變化。并測定心肌組織SOD、GSH-PX、及MDA、Ca2+的含量變化。試驗方法采用在大鼠開胸結(jié)扎冠狀動脈前降肢30min后，松扎再試驗材料試驗動物：Wister大鼠60只，雄雌各半220~240g.試驗儀器及用具：心電圖機(jī)、內(nèi)切式組織勻漿器、原子吸光光度計、恒流泵、手術(shù)臺及手術(shù)的相關(guān)器具、橡皮管和線。藥品與試劑：試藥復(fù)方五加刺注射液（CASI）、烏拉坦、生理鹽水、前列腺素E1、MDA、SOD及GSH-PX測定試劑盒、鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液。試驗材料試驗動物：Wister大鼠60只，雄雌各半220~2試驗步驟LD50的測定，取LD50的1/3為試樣的最大量。動物分組：將選好的60只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陽性前列腺素E1mug/kg組和CASIA、B、Cmg/kg組（A=1/2B=1/2C），其中每組10只。心肌缺血再灌注模型的制備：給各組大鼠胸腔注射烏拉坦1g/kg進(jìn)行麻醉，監(jiān)測肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖，分離氣管并插管，開胸后應(yīng)立即進(jìn)行人工呼吸機(jī)正壓呼吸（頻率54次/min流量每100g體重2ml).試驗步驟LD50的測定，取LD50的1/3為試樣的最大量。試驗步驟假手術(shù)組冠狀動脈前降肢下穿線不結(jié)扎外，其余各組均結(jié)扎冠狀動脈前降肢。結(jié)扎30min后，松解結(jié)扎線進(jìn)行再灌注，時間為60min.在松解的同時，各組均以恒流泵經(jīng)股靜脈勻速輸入藥物或生理鹽水。試驗步驟假手術(shù)組冠狀動脈前降肢下穿線不結(jié)扎外，其余各組均結(jié)扎試驗步驟心律失常率及ST波段變化測定：通過心電圖機(jī)，記錄再灌注30min內(nèi)心律失常出現(xiàn)的時間、持續(xù)時間及室性心動過速（VT）、心室顫動（VF）的發(fā)生率，并記錄15min、30min、60min的ST段時間變化如表1和表2。試驗步驟心律失常率及ST波段變化測定：試驗步驟心肌組織勻漿的制備：再灌注60后，各組立即取出心臟，用冰冷生理鹽水沖洗、吸干稱重后以生理鹽水為介質(zhì)，用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制10%的心肌勻漿組織備用。試驗步驟心肌組織勻漿的制備：試驗步驟心肌組織生化指標(biāo)測定SOD、GSH-PX活力及MDA含量均按試劑盒方法測定計算，心肌細(xì)胞內(nèi)Ca含量以Ca標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)對照，用原子吸光光度計測定,表3。試驗步驟心肌組織生化指標(biāo)測定數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗，所得計量資料均以x±s表示表1，CASI對大鼠心肌缺血再灌注出現(xiàn)心律失常時間、持續(xù)時間及發(fā)生率（x±sn=10)數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間檢驗，所得計量資料均以x±s表示表2，CASI對大鼠心肌缺血再灌注ST段抬高程度/mv（x±sn=10)數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間檢驗，數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間檢驗，所得計量資料均以x±s表示表3，CASI對大鼠心肌缺血再灌注MDA、Ca2+的含量及

SOD、GSH-Px活性的影響（x±sn=10)數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間檢驗，試驗結(jié)果預(yù)測CASI對大鼠缺血再灌注心律失常發(fā)生率及出現(xiàn)時間、持續(xù)時間的影響：假手術(shù)組：未出現(xiàn)任何心律失?，F(xiàn)象；模型組：出現(xiàn)心律失常時間短，持續(xù)時間長，發(fā)生率最高；陽性藥物組和CASI組（A、B、C㎎/㎏）：出現(xiàn)心律失常時間延長，持續(xù)時間明顯縮短，發(fā)生率明顯下降，與模型組比較有差異性顯著。試驗結(jié)果預(yù)測CASI對大鼠缺血再灌注心律失常發(fā)生率及出現(xiàn)時間試驗結(jié)果預(yù)測CASI對大鼠缺血再灌注15min、30min、60minST段變化的影響：假手術(shù)組：無明顯改變；模型組：顯著提高；陽性藥物組和CASI組（A、B、C㎎/㎏）：應(yīng)明顯降低ST段的抬高程度，與模型組比較有顯著性差異。試驗結(jié)果預(yù)測CASI對大鼠缺血再灌注15min、30min、試驗結(jié)果預(yù)測CASI對大鼠缺血再灌注心肌組織中MAD、Ca2﹢含量及SOD、GSH-PX活性的影響：與假手術(shù)組相比，模型組的MAD、Ca2﹢含量明顯增高，而SOD和GSH-PX活性明顯降低。陽性藥物組和CASI組（A、B、C㎎/㎏）與模型組相比，MAD、Ca2﹢含量明顯降低，而SOD和GSH-PX活性明顯提高，有顯著性的差異。試驗結(jié)果預(yù)測CASI對大鼠缺血再灌注心肌組織中MAD、Ca2討論心肌缺血再灌注損傷所致的嚴(yán)重性心律失常是造成冠心病患者猝死的重要原因，在心肌細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化狀態(tài)，心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2﹢超負(fù)等因素在心肌缺血再灌注室性心律失常起著重要的作用，因此抑制細(xì)胞膜過氧化的發(fā)生，降低細(xì)胞內(nèi)Ca2﹢的含量是防治心肌損傷和降低再灌注心律失常發(fā)生的重要途徑，也是我們研發(fā)該類藥物的依據(jù)。討論心肌缺血再灌注損傷所致的嚴(yán)重性心律失常是造成冠心病患者猝演示目錄背景知識試驗原理試驗方法試驗材料試驗步驟數(shù)據(jù)統(tǒng)計試驗結(jié)果預(yù)測討論演示目錄背景知識背景知識缺血性心臟病和急性心肌梗死已成為當(dāng)今威脅人類健康的兩大主要殺手，而心肌缺血損傷和心肌缺血再灌注損傷是導(dǎo)致這兩大病的主要病因。缺血性心臟病是由于血液供應(yīng)中斷一定時間后（一般30min)就會出現(xiàn)心肌細(xì)胞酸中毒，細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)改變和功能障礙，導(dǎo)致不可逆性損傷甚至死亡，也稱為缺血損傷。背景知識缺血性心臟病和急性心肌梗死已成為當(dāng)今威脅人類健康的兩背景知識急性心肌梗死是由于血液供應(yīng)中斷一定時間后（一般30min)，為恢復(fù)心肌功能及時提供血液，由于在閉塞的冠動脈再通，缺血區(qū)血運(yùn)重建后的一段時間內(nèi)，可發(fā)生血壓聚降，導(dǎo)致新功能不全，出現(xiàn)心律失常、猝死等病情惡化現(xiàn)象，也稱為缺血再灌注損傷。背景知識急性心肌梗死是由于血液供應(yīng)中斷一定時間后（一般30m試驗原理氧自由基(ORG)是心肌細(xì)胞呼吸產(chǎn)能過成中的副產(chǎn)物，包括超氧過離子，羥自由基和過氧化氫等。OFR可引起脂質(zhì)的過氧化，降低細(xì)胞膜流動性，增加它的通透性，損傷離子泵，引起細(xì)胞能量和離子穩(wěn)態(tài)異常，最終導(dǎo)致肌細(xì)胞損傷甚至死亡。試驗原理氧自由基(ORG)是心肌細(xì)胞呼吸產(chǎn)能過成中的副產(chǎn)物，試驗原理正常情況下，有機(jī)體存在的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px)等內(nèi)源性抗氧化防御系統(tǒng)可將OFR及時清除掉，維持正常的功能。在缺氧情況下，OFR明顯下降而生成的潛能增強(qiáng)，當(dāng)在恢復(fù)供氧時，OFR劇增超過了抗防御系統(tǒng)的清除能力，導(dǎo)致肌細(xì)胞損傷甚至死亡。試驗原理正常情況下，有機(jī)體存在的超氧化物歧化酶（SOD）、谷試驗方法采用在大鼠開胸結(jié)扎冠狀動脈前降肢30min后，松扎再灌注60造成的心臟缺血再灌注模型，以心電圖監(jiān)測心律失常情況，主要指標(biāo)以心律出現(xiàn)失常的時間，持續(xù)時間及室性心動過速（VT）、心室顫動（VF）的發(fā)生率，ST段在不同再灌注時間的變化。并測定心肌組織SOD、GSH-PX、及MDA、Ca2+的含量變化。試驗方法采用在大鼠開胸結(jié)扎冠狀動脈前降肢30min后，松扎再試驗材料試驗動物：Wister大鼠60只，雄雌各半220~240g.試驗儀器及用具：心電圖機(jī)、內(nèi)切式組織勻漿器、原子吸光光度計、恒流泵、手術(shù)臺及手術(shù)的相關(guān)器具、橡皮管和線。藥品與試劑：試藥復(fù)方五加刺注射液（CASI）、烏拉坦、生理鹽水、前列腺素E1、MDA、SOD及GSH-PX測定試劑盒、鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液。試驗材料試驗動物：Wister大鼠60只，雄雌各半220~2試驗步驟LD50的測定，取LD50的1/3為試樣的最大量。動物分組：將選好的60只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陽性前列腺素E1mug/kg組和CASIA、B、Cmg/kg組（A=1/2B=1/2C），其中每組10只。心肌缺血再灌注模型的制備：給各組大鼠胸腔注射烏拉坦1g/kg進(jìn)行麻醉，監(jiān)測肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖，分離氣管并插管，開胸后應(yīng)立即進(jìn)行人工呼吸機(jī)正壓呼吸（頻率54次/min流量每100g體重2ml).試驗步驟LD50的測定，取LD50的1/3為試樣的最大量。試驗步驟假手術(shù)組冠狀動脈前降肢下穿線不結(jié)扎外，其余各組均結(jié)扎冠狀動脈前降肢。結(jié)扎30min后，松解結(jié)扎線進(jìn)行再灌注，時間為60min.在松解的同時，各組均以恒流泵經(jīng)股靜脈勻速輸入藥物或生理鹽水。試驗步驟假手術(shù)組冠狀動脈前降肢下穿線不結(jié)扎外，其余各組均結(jié)扎試驗步驟心律失常率及ST波段變化測定：通過心電圖機(jī)，記錄再灌注30min內(nèi)心律失常出現(xiàn)的時間、持續(xù)時間及室性心動過速（VT）、心室顫動（VF）的發(fā)生率，并記錄15min、30min、60min的ST段時間變化如表1和表2。試驗步驟心律失常率及ST波段變化測定：試驗步驟心肌組織勻漿的制備：再灌注60后，各組立即取出心臟，用冰冷生理鹽水沖洗、吸干稱重后以生理鹽水為介質(zhì)，用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制10%的心肌勻漿組織備用。試驗步驟心肌組織勻漿的制備：試驗步驟心肌組織生化指標(biāo)測定SOD、GSH-PX活力及MDA含量均按試劑盒方法測定計算，心肌細(xì)胞內(nèi)Ca含量以Ca標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)對照，用原子吸光光度計測定,表3。試驗步驟心肌組織生化指標(biāo)測定數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗，所得計量資料均以x±s表示表1，CASI對大鼠心肌缺血再灌注出現(xiàn)心律失常時間、持續(xù)時間及發(fā)生率（x±sn=10)數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間檢驗，所得計量資料均以x±s表示表2，CASI對大鼠心肌缺血再灌注ST段抬高程度/mv（x±sn=10)數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間檢驗，數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間檢驗，所得計量資料均以x±s表示表3，CASI對大鼠心肌缺血再灌注MDA、Ca2+的含量及

SOD、GSH-Px活性的影響（x±sn=10)數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間檢驗，試驗結(jié)果預(yù)測CASI對大鼠缺血再灌注心律失常發(fā)生率及出現(xiàn)時間、持續(xù)時間的影響：假手術(shù)組：未出現(xiàn)任何心律失?，F(xiàn)象；模型組：出現(xiàn)心律失常時間短，持續(xù)時間長，發(fā)生率最高；陽性藥物組和CASI組（A、B、C㎎/㎏）：出現(xiàn)心律失常時間延長，持續(xù)時間明顯縮短，發(fā)生率明顯下降，與模型組比較有差異性顯著。試驗結(jié)果預(yù)測CASI對大鼠缺血再灌注心律失