第一講-高效毛細(xì)管電泳法在藥物分析中的應(yīng)用(chaj)課件

現(xiàn)代儀器分析第一講:高效毛細(xì)管電泳法在藥物分析中的應(yīng)用CollegeofPharmacy,ShanxiMedicalUniversityProf.AnjiaCHEN

12/23/20221現(xiàn)代儀器分析CollegeofPharmacy,Sha第一節(jié)儀器分析法概述(generalization)儀器分析法

色譜分析法√光譜分析法√電化學(xué)分析法質(zhì)譜分析法12/23/20222第一節(jié)儀器分析法概述(generalization)儀器其他儀器分析法有：

流動(dòng)注射分析(FlowInjectionAnalysis, FIA)熱分析(ThermalAnalysis,TA)X射線分析(X-rayAnalysis)

…12/23/20223其他儀器分析法有：流動(dòng)注射分析(FlowInjecti

毛細(xì)管電泳(CE:CapillaryElectrophoresis)又稱高效毛細(xì)管電泳(HPCE),是指離子或帶電粒子以彈性石英毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的液相分離分析技術(shù)。

HPCE:以內(nèi)徑10~200μm的毛細(xì)管柱為分離通道，對(duì)大分子和小分子等進(jìn)行高效分離和檢測(cè)的有關(guān)技術(shù)的統(tǒng)稱。

第二節(jié)HPCE基本知識(shí)回顧

12/23/20224毛細(xì)管電泳(CE:CapillaryElectr一、HPCE原理電泳遷移：在高壓電場(chǎng)下，樣本中各帶電離子依據(jù)其所帶電荷的性質(zhì)、多少及大小、形狀的不同向相反方向移動(dòng)。電滲遷移：電滲遷移指在電場(chǎng)作用下溶液相對(duì)于帶電管壁移動(dòng)的現(xiàn)象。當(dāng)毛細(xì)管內(nèi)充滿緩沖溶液時(shí)，毛細(xì)管壁上的硅羥基發(fā)生解離，生成的氫離子溶解在溶液中，這樣就使毛細(xì)管壁帶上負(fù)電荷與溶液形成雙電層，在毛細(xì)管的兩端加上直流電場(chǎng)后，帶正電的溶液就會(huì)整體的向負(fù)極端移動(dòng)，這就形成了電滲流。帶電微粒在毛細(xì)管內(nèi)實(shí)際移動(dòng)的速度為電泳流和電滲流的矢量和。

分離的原因：電泳遷移，電滲遷移12/23/20225一、HPCE原理電泳遷移：在高壓電場(chǎng)下，樣本中各帶電離子依據(jù)高效毛細(xì)管電泳技術(shù)上的重要突破

高效毛細(xì)管電泳在技術(shù)上采取了兩項(xiàng)重要改進(jìn)：一是采用了25~75μm內(nèi)徑的毛細(xì)管；二是采用了高達(dá)數(shù)千伏的電壓。毛細(xì)管的采用使產(chǎn)生的熱量能夠較快散發(fā)，大大減小了溫度效應(yīng)，使電場(chǎng)電壓可以很高。電壓升高，電場(chǎng)推動(dòng)力大，又可進(jìn)一步使柱徑變小，柱長(zhǎng)增加，高效毛細(xì)管電泳的柱效遠(yuǎn)高于高效液相色譜，理論塔板數(shù)高達(dá)幾十萬(wàn)塊/米，特殊柱子可以達(dá)到數(shù)百萬(wàn)甚至數(shù)千萬(wàn)。12/23/20226高效毛細(xì)管電泳技術(shù)上的重要突破高效毛細(xì)管電泳在技術(shù)上

毛細(xì)管電泳原理示意圖12/23/20227毛細(xì)管電泳原理示意圖12/18/20227二、毛細(xì)管電泳的主要模式毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）毛細(xì)管凝膠電泳（CGE）毛細(xì)管等電聚焦（CIEF）毛細(xì)管電動(dòng)色譜（MECC;MEEKCetc.）毛細(xì)管電色譜（CEC）毛細(xì)管等速電泳（CITP）親和毛細(xì)管電泳（ACE）非水相毛細(xì)管電泳（NACE）12/23/20228二、毛細(xì)管電泳的主要模式毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）12/18/幾種常用的毛細(xì)管電泳分離模式

（1）毛細(xì)管區(qū)帶電泳

（CapillaryZoneElectrophoresis,CZE=FSCE）是指溶質(zhì)在毛細(xì)管內(nèi)均一的背景電解質(zhì)緩沖溶液中以不同速率遷移而形成彼此分離的溶質(zhì)帶的電泳模式，分離的基礎(chǔ)是淌度的差別。CZE只能分析帶有電荷的離子而不能分離中性物質(zhì)，是最基本、最普遍的一種分離模式。

12/23/20229幾種常用的毛細(xì)管電泳分離模式（1）毛細(xì)管區(qū)帶電泳12/18CZE中背景電解質(zhì)的濃度一般高于試樣，起運(yùn)載電流的作用，其離子有一定的遷移率。當(dāng)電流通過(guò)時(shí)，緩沖溶液中的陰、陽(yáng)離子以一特定的速度分別向正極和負(fù)極移動(dòng)。同時(shí)試樣中的不同離子將按各自的恒定速度移動(dòng)，形成背景電解質(zhì)離子流動(dòng)中伴隨有試樣離子的流動(dòng)。如果試樣中不同離子的遷移率差別很大，就能將不同離子分離。12/23/202210CZE中背景電解質(zhì)的濃度一般高于試樣，起運(yùn)載帶電粒子的遷移速度=電泳和電滲流速度的矢量和。正離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向一致，在負(fù)極最先流出；中性粒子：無(wú)電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽(yáng)離子后流出；陰離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向相反；u電滲流＞u電泳時(shí),陰離子在負(fù)極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,同種類離子由于差速遷移被相互分離。

12/23/202211帶電粒子的遷移速度=電泳和電滲流速度的矢量和。陰離子：兩種效BufferConsiderationsTypical[buffer]:25-200mMGoodbufferingcapacitywithinthedesiredrangeMinimalUVabsorbance（低紫外吸收）Lowconductivityifpossible(低電導(dǎo))Inexpensive/available(廉價(jià)/有效)12/23/202212BufferConsiderationsTypical[TypicalBufferSystems/FSCE(CZE)

BUFFERUsefulpHRangePhosphate 1.1-3.1Formate2.8-4.8Acetate3.8-5.8MES*(2-(N-嗎啉)乙磺酸介紹)5.2-7.2Citrate

(檸檬酸鹽

)

5.4-7.4PIPES(哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸))5.8-7.8Phosphate6.2-8.2HEPES*(羥乙基哌嗪乙硫磺酸)

6.6-8.6Tricine*(三(羥甲基)甲基甘氨酸)7.2-9.2Tris(三羥甲基氨基甲烷）7.3-9.3Borate(硼酸鹽)8.1-10.1CAPS*(3-(環(huán)己胺)-1-丙磺酸鈉)9.7-11.7

*

zwitterionicbuffer

(兩性離子緩沖液)*FromLanders,HandbookofCapillaryElectrophoresis,2ndEd.,CRCPress(1997)12/23/202213TypicalBufferSystems/FSCE(CZBufferModifiers(改性劑

)forCZEOrganicSolvent

–Solubilizer(增溶劑),EOFmodifier(ex.methanol,acetonitrile,ethyleneglycol(乙二醇)

)DivalentAmine(二胺)-EOFModifier/chargemodifier(ex.Diamino-propane(丙二胺))SulfonicAcids(磺酸)

-Ion-pairing(ex.HexaneSA己烷磺酸)Urea-Biomoleculedenaturant/solubilizer(生物分子變性劑/增溶劑)CationicSurfactant

-EOFReversal(ex.DTAB,CTAB)(Note:highconc=micellarphase[MEKC])Cellulose(纖維素)

-EOFModifier,SievingMedium(ex.methylcellulose,hydroxypropylmethylcellulose)Cyclodextrins

-Solubilizerforveryhydrophobicsamples,chiral-analytediscriminator12/23/202214BufferModifiers(改性劑)forCZE毛細(xì)管電泳的幾種分離模式(續(xù))（2）膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MECCorMEKC）（MicellarElectrokineticCapillaryChromatography)在緩沖溶液中加入大于臨界膠束濃度(CMC)的表面活性劑。膠束相在分離中起準(zhǔn)固定相的作用，將電泳與分配色譜相結(jié)合，既可以分離離子型化合物，也可以分離中性化合物。12/23/202215毛細(xì)管電泳的幾種分離模式(續(xù))（2）膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（

緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達(dá)到臨界濃 度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。在電場(chǎng)力的 作用下，膠束在柱中移動(dòng)。12/23/202216緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達(dá)到臨界濃 度，形

電泳流和電滲流的方向相反，且u電滲流＞u電泳，負(fù)電膠束以較慢的速度向負(fù)極移動(dòng)；

中性分子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時(shí)間長(zhǎng)；12/23/202217電泳流和電滲流的方向相反，且u電滲流＞u電泳，負(fù)電膠（3）毛細(xì)管凝膠電泳（CapillaryGelElectrophoresis,CGE）在毛細(xì)管內(nèi)填充多孔性凝膠或其它篩分介質(zhì)，將電泳和凝膠色譜分離模式相結(jié)合，可用于生物大分子的分析，如蛋白質(zhì)和DNA的分子量和堿基數(shù)的測(cè)定。

毛細(xì)管電泳的幾種分離模式(續(xù))12/23/202218（3）毛細(xì)管凝膠電泳毛細(xì)管電泳的幾種分離模式(續(xù))12/凝膠具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分?jǐn)U散，所得峰型尖銳，分離效率高。蛋白質(zhì)、DNA等由于其電荷/質(zhì)量比與分子大小無(wú)關(guān)，CZE模式很難將其分離；而采用CGE能獲得良好分離。它是DNA測(cè)序的重要手段。特點(diǎn)：抗對(duì)流性好，散熱性好，分辨率極高。無(wú)膠篩分技術(shù)：采用低粘度的線性聚合物分子在溶液中的物理纏擾作用代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。柱便宜、易制備。將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。12/23/202219凝膠具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。是一種根據(jù)等電點(diǎn)的差別分離生物大分子的電泳技術(shù)。兩性物質(zhì)以電中性狀態(tài)存在時(shí)的pH值稱為等電點(diǎn)，用pI表示。將被分離的物質(zhì)和兩性電解質(zhì)混合物裝入毛細(xì)管，在電場(chǎng)作用下，不同等電點(diǎn)的兩性載體電解質(zhì)沿毛細(xì)管自動(dòng)形成pH梯度，被分離的兩性物質(zhì)各自遷移至其等電點(diǎn)，形成很窄的區(qū)帶，分辨率很高。

毛細(xì)管電泳的幾種分離模式(續(xù))（4）毛細(xì)管等電聚焦（CapillaryIsoelectricFocusing,CIEF）12/23/202220是一種根據(jù)等電點(diǎn)的差別分離生物大分子的電泳技術(shù)。1.CIEF是根據(jù)等電點(diǎn)差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)；2.毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)(合成的具有不同等電點(diǎn)范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物)，當(dāng)施加直流電壓（6～8V）時(shí)，管內(nèi)將建立一個(gè)由陽(yáng)極到陰極逐步升高的pH梯度；3.氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等所帶電荷與溶液pH有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負(fù)電荷。在其等電點(diǎn)時(shí)，呈電中性，淌度為零；12/23/2022211.CIEF是根據(jù)等電點(diǎn)差別分離生物大分子的高分辨率電泳技4.聚焦：具有不同等電點(diǎn)的生物試樣在電場(chǎng)力的作用下遷 移，分別到達(dá)滿足其等電點(diǎn)pH的位置時(shí)，呈電中性， 停 止移動(dòng)，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離；5.陽(yáng)極端裝稀磷酸溶液，陰極端裝稀NaOH溶液；6.加壓(力)將毛細(xì)管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過(guò)檢測(cè)器檢測(cè)；7.電滲流在CIEF中不利，應(yīng)消除或減小。12/23/2022224.聚焦：具有不同等電點(diǎn)的生物試樣在電場(chǎng)力的作用下遷在毛細(xì)管內(nèi)涂層或在凝膠在中加入親和配基，以親和力的不同達(dá)到分離目的?？捎糜谘芯靠乖?抗體或配體-受體等特異性相互作用。毛細(xì)管電泳的幾種分離模式(續(xù))（5）親和毛細(xì)管電泳

(Affinitycapillaryelectrophoresis,ACE)12/23/202223在毛細(xì)管內(nèi)涂層或在凝膠在中加入親和配基，以親和把毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管液相色譜結(jié)合起來(lái)的一種分離技術(shù)。在毛細(xì)管中填充或在毛細(xì)管內(nèi)壁涂布、鍵合色譜固定相，依靠電滲流推動(dòng)流動(dòng)相，使中性和帶有電荷的樣品分子根據(jù)它們?cè)谏V固定相和流動(dòng)相之間分配平衡常數(shù)的不同和電泳速率的不同而達(dá)到彼此分離的目的。毛細(xì)管電泳的幾種分離模式(續(xù))（6）毛細(xì)管電色譜（CEC）（CapillaryElectroosmoticChromatography）12/23/202224把毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管液相色譜結(jié)合起來(lái)的一種分離毛細(xì)管電色譜作為HPLC和CE的融合技術(shù)，主要有以下特點(diǎn)：（1）采用電滲流EOF驅(qū)動(dòng)（下圖），EOF的柱塞流型較HPLC的拋物線流型可以達(dá)到更高的柱效。（2）具有色譜和電泳的雙重分離機(jī)理和選擇性，既可分離中性分子，也可分離帶電分子。（3）毛細(xì)管電色譜中沒(méi)有反壓?jiǎn)栴}，可以使用更小粒度的填料和更長(zhǎng)的毛細(xì)管柱，因而具有更高的分辨能力。（4）在分離中性粒子時(shí)，毛細(xì)管電色譜不需要像膠束電動(dòng)力學(xué)色譜那樣使用表面活性劑，有利于和質(zhì)譜方法（MS）的聯(lián)用。12/23/202225毛細(xì)管電色譜作為HPLC和CE的融合技術(shù)，主要有以下特點(diǎn)：1毛細(xì)管柱和電滲流示意圖（5）由于毛細(xì)管電色譜中所用的毛細(xì)管柱內(nèi)徑小，與傳統(tǒng)的HPLC相比，其溶劑和樣品量只是后者的萬(wàn)分之一，這種對(duì)溶劑和樣品的巨大節(jié)約，使毛細(xì)管電色譜十分經(jīng)濟(jì)，也更符合環(huán)保要求。12/23/202226毛細(xì)管柱和電滲流示意圖（5）由于毛細(xì)管電色譜中所用的毛細(xì)管柱三、毛細(xì)管電泳的主要優(yōu)點(diǎn)較高靈敏度(檢測(cè)器相關(guān))高分離效率高速度（一般不超過(guò)20min，有的僅需幾十秒鐘）所需樣品量少運(yùn)行成本較低應(yīng)用范圍廣有多種模式可供選擇可免于接觸HPLC流動(dòng)相的毒性和污染方法的開(kāi)發(fā)過(guò)程簡(jiǎn)單快速12/23/202227三、毛細(xì)管電泳的主要優(yōu)點(diǎn)較高靈敏度(檢測(cè)器相關(guān))12/18/毛細(xì)管電泳的高分離效率HPCE:扁平型塞子流（flatflow）HPLC:拋物線狀層流（laminarflow）12/23/202228毛細(xì)管電泳的高分離效率HPCE:扁平型塞子流（flat四、毛細(xì)管電泳與HPLC的比較相同之處：1. 快速高效分離技術(shù)2. 可定量3. 全自動(dòng)化4. 可用不同模式5.在某些領(lǐng)域逐步取代HPLC/另一些領(lǐng)域則 相互驗(yàn)證/互補(bǔ)使用。12/23/202229四、毛細(xì)管電泳與HPLC的比較相同之處：12/18/2022四、毛細(xì)管電泳與HPLC的比較（續(xù))

不同之處:HPCEHPLC2、分離效率1、分離依據(jù)3、樣品量4、檢測(cè)5、制備量保留時(shí)間差異(D)）級(jí)

電泳淌度差異(N)與擴(kuò)散系數(shù)（D）成反比與擴(kuò)散系數(shù)成正比納升（nl）級(jí)微升（ul在線檢測(cè)柱后檢測(cè)微量制備常量制備12/23/202230四、毛細(xì)管電泳與HPLC的比較（續(xù))不同之處:HPCEHP五、毛細(xì)管電泳技術(shù)的現(xiàn)狀

文獻(xiàn)中已有大量經(jīng)過(guò)認(rèn)證（Validated）/反復(fù)驗(yàn)證的、可行的毛細(xì)管電泳方法;許多國(guó)際官方權(quán)威機(jī)構(gòu)如：FDA、U.S.P、ICH(InternationalConferenceOnHarmonization國(guó)際藥品技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)合會(huì))、CBER(生物學(xué)評(píng)價(jià)和研究中心)、CDER(藥品評(píng)價(jià)和研究中心)等均已認(rèn)可毛細(xì)管電泳方法;權(quán)威機(jī)構(gòu)已經(jīng)認(rèn)可的一些方法如：EuropeanPharmacopoeia中認(rèn)可Levo-cabastinehydrochloride中雜質(zhì)的CE測(cè)定;Pharmeuropa(歐洲藥典論壇)中認(rèn)可Erythropoietin（EPO：促紅細(xì)胞生成素）的CE測(cè)定。12/23/202231五、毛細(xì)管電泳技術(shù)的現(xiàn)狀文獻(xiàn)中已有大量經(jīng)過(guò)認(rèn)證（Vali五、毛細(xì)管電泳技術(shù)的現(xiàn)狀（續(xù))

SYNAGIS（PALIVIZUMAB）帕利珠單抗注射液（預(yù)防幼兒呼吸道病毒感染）ENBREL（ETANERCEPT）依那西普（治療牛皮癬性關(guān)節(jié)炎）幾個(gè)公司的HumanGrowthHormoneInferon（Interferonalfacon-1）美國(guó)安進(jìn)公司（Amgen）生產(chǎn)復(fù)合干擾素Genetech（美國(guó)舊金山基因技術(shù)公司）的幾個(gè)治療性單克隆抗體

許多測(cè)試方法已經(jīng)作為藥廠的日常測(cè)試方法：12/23/202232五、毛細(xì)管電泳技術(shù)的現(xiàn)狀（續(xù))SYNAGIS（PALI五、毛細(xì)管電泳技術(shù)的現(xiàn)狀（續(xù)）

許多制藥公司將其作為日常藥物研發(fā)手段之一:---GlaxoSmithKlineR&D(Ware,UK)葛蘭素史克公司(英)

---GeneTechInc.(SouthSanFrancisco,CA，USA)

---CardiomePharmaCorp(Vancouver,Canada)

---Johnson&Johnson強(qiáng)生公司（美）

---Pfizer輝瑞公司（美）另：Abbott（美雅培）；Astrazenneca（英阿斯特拉捷利康

）；Lily（意）etc.有一些研發(fā)中心有多達(dá)20臺(tái)的CE設(shè)備；有些跨國(guó)公司則一次性購(gòu)買二、三十臺(tái)分在世界各地的基地在使用，一個(gè)公司內(nèi)總數(shù)達(dá)上百臺(tái)；有的公司僅從事毛細(xì)管電泳手性拆分的應(yīng)用專家就達(dá)200多人。許多工業(yè)質(zhì)量控制領(lǐng)域（P/ACE在PTA）

PTA(Pureterephthalicacid)

：對(duì)苯二甲酸（制造滌綸的化工原料）。12/23/202233五、毛細(xì)管電泳技術(shù)的現(xiàn)狀（續(xù)）許多制藥公司將其作為日常藥物五、毛細(xì)管電泳技術(shù)的現(xiàn)狀（續(xù)）

CE已成為化學(xué)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)、生物工程、藥學(xué)等眾多領(lǐng)域的一個(gè)常規(guī)科研工具；生物工程實(shí)驗(yàn)室、蛋白質(zhì)（含抗體）藥物研發(fā)實(shí)驗(yàn)室、手性分析實(shí)驗(yàn)室以及一些常規(guī)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室所必不可少的工具；（藥物）分析（化學(xué)）學(xué)科的一個(gè)碩士專業(yè)/博士專業(yè)的研究方向。12/23/202234五、毛細(xì)管電泳技術(shù)的現(xiàn)狀（續(xù)）CE已成為化學(xué)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)CEisOfficiallyReferenced12/23/202235CEisOfficiallyReferenced12/第三節(jié)毛細(xì)管電泳的主要應(yīng)用手性化合物堿性藥物分子中藥成分分析法醫(yī)毒物/臨床毒理蛋白質(zhì)/多肽/氨基酸糖類/糖蛋白核酸/核苷酸無(wú)機(jī)及有機(jī)離子/有機(jī)酸和其它小分子水溶液中分子間的相互作用單細(xì)胞分析藥物與細(xì)胞的相互作用12/23/202236第三節(jié)毛細(xì)管電泳的主要應(yīng)用手性化合物12/18/20223HPCE應(yīng)用實(shí)例一、手性/異構(gòu)體拆分二、堿性藥物分析三、中藥有效成分分析

四、蛋白質(zhì)、氨基酸等的分離鑒定五、碳水化合物/糖的分析六、核酸、基因和遺傳分析七、其他應(yīng)用

12/23/202237HPCE應(yīng)用實(shí)例一、手性/異構(gòu)體拆分12/18/20223一、HPCE應(yīng)用于手性/異構(gòu)體拆分方法簡(jiǎn)單改善分辨率快速成本降低方法開(kāi)發(fā)過(guò)程簡(jiǎn)單特點(diǎn)：12/23/202238一、HPCE應(yīng)用于手性/異構(gòu)體拆分方法簡(jiǎn)單特點(diǎn)：12/18EnantiomersStereoisomerswithchiral/asymmetriccentersNon-superimpossiblemirrorimagesPhysiochemicallyidenticalDifferoptically12/23/202239EnantiomersStereoisomerswithRacemicDrugsActive/inactive--L-propanololisabetablockerD-propanololisnot（心得安：治高血壓和心臟病的藥物）Differentactivities--D-sotalolisatypeIIIantiarrythmicL-sotalolisabetablocker（心得怡（抗心律失常藥））Toxicitylinkage--GranulocytopeniarelatedtotheD-isomeroflevodopa（粒細(xì)胞減少癥）--VomitinglinkedwiththeD-isomeroflevomisole（左旋咪唑，左旋驅(qū)蟲(chóng)凈）12/23/202240RacemicDrugsActive/inactive1StructureofNativeCD12/23/202241StructureofNativeCD12/18/20Highly簡(jiǎn)單的手性拆分方法：HighlySulfatedCyclodextrinsa,b

andg

ScreeningMethodCapillary:50μmx20cmtodetectorBuffer:25mMphosphatepH2.5Selector:5%ofeithera,borg

HSCDCapillarytemperature:25℃Fieldstrength:500Volts/cmPolarity:cathodeatinletOHOHOHOSO3-OSO3--O3SOCH2CH2OSO3-CH2OSO3-OSO3-12/23/202242Highly簡(jiǎn)單的手性拆分方法：HighlySulfateAnalysisofAmphetamineracemate

PTSHighlySulfatedgCyclodextrin12/23/202243AnalysisofAmphetamineracemaPhenylpropanolamine-<0.1%detection苯丙醇胺PPA（去甲麻黃堿）12/23/202244Phenylpropanolamine-<0.1%dPhenylpropanolamine0.1to5%(-)enantiomer12/23/202245Phenylpropanolamine0.1to5%Optimize12/23/202246Optimize12/18/202246DNS-Phenylalanine-10cmcapillary0.0030.060.090.0120.0Time(Seconds)1.03.0Absorbance(AU,x1E+004)R=3.2PTS丹磺酰-苯丙氨酸12/23/202247DNS-Phenylalanine-10cmcapiLabetalolenantiomers-multiplechiralcentersg-HSCDR=6.0拉貝洛爾:用于治療高血壓

12/23/202248Labetalolenantiomers-multipCEVsHPLCin

Chiralanalysis

AllthefollowingexamplesarestateoftheartHPLCChiralseparationsextractedfromChromTechcolumncatalogue.NeverthelessnotehowCEprovidesmoreresolutionandfasteranalysis.

“ChromTechABisaSwedishcompanysituatedinStockholm.ThecompanywasfoundedbyProfessorJ?rgenHermansson,oneofthepioneersinthedevelopmentofchiralstationaryphases.Thecompanyisfocusedonresearch,developmentandproductionofHPLCphases.ChromTechhasbeenverysuccessfulinthefieldof

chiralseparations”.12/23/202249CEVsHPLCinChiralanalysis

Prozac(百解憂)CEHPLC12/23/202250 Prozac(百解憂)CEHPLC12Salbutamol（舒喘寧）CEHPLC12/23/202251Salbutamol（舒喘寧）CEHPLC12/18/202Thalidomide（薩力多胺(安眠藥),

～incident反應(yīng)停事件）

CE

HPLCThalidomide（薩力多胺(安眠藥),～incideVerapamil（維拉帕米：降壓藥）

CE HPLC12/23/202253Verapamil（維拉帕米：降壓藥）

CE HPLWarfarin（殺鼠靈）CE HPLC12/23/202254Warfarin（殺鼠靈）12/18/202254二、HPCE用于堿性藥物分析12/23/202255二、HPCE用于堿性藥物分析12/18/202255CZE:ElectropherogramofaMixtureof17BasicDrugs(1)

methapyrilene,(2)brompheniramine,(3)amphetamine,(4)methamphetamine,(5)procaine,(6)

tetrahydrozoline,(7)

phenmetrazine,(8)butacaine,(9)

medazepam,(10)

lidocaine,(11)

codeine,(12)acepromazine,(13)

meclizine,(14)diazepam,(15)

doxapram,(16)benzocaine,(17)

methaqualone.Separationconditions:0.05Msodiumdihydrogenphosphate-phosphoricacid,pH

2.35;capillary:60

cm′75μm;injection:10s;hydrostaticloading;22

kV;detection:214nm.Peakiisan

artifactofbenzocaine(peak16).ReproducedwithpermissionfromChee

andWan,1993.i:Benzocaine,苯坐卡因=麻醉劑

CZE:ElectropherogramofaMix7種堿性藥物的分離1.苯胺2.鹽酸可卡因3.鹽酸小檗堿4.二甲基嗎啡5.鹽酸藥根堿6.鹽酸麻黃堿7.可待因磷酸堿12/23/2022577種堿性藥物的分離1.苯胺2.鹽酸可卡因3.鹽

19種混合堿性藥物的質(zhì)量控制分析12/23/20225819種混合堿性藥物的質(zhì)量控制分析12/18/202258藥材中的生物堿成分分析1.苦參堿2.槐定堿3.槐果堿4.lehmannine（拉馬寧堿）5.sophoramine（槐胺）6.氧化苦參堿7.氧化槐果堿8.金雀花堿9.苦豆堿10.蝙蝠葛堿11.東莨菪堿12/23/202259藥材中的生物堿成分分析1.苦參堿2.槐定堿方法簡(jiǎn)單（SimpleMethodology）MethodParametersBuffer:100mMphosphate,pH2.38Capillary:75umx50cm(det)-fusedsilicaSampleintroduction:ElectrokineticFieldstrength:300Volts/cmCaptemperature:25℃AssayLOQ:10ng/mldruginwholeblood12/23/202260方法簡(jiǎn)單（SimpleMethodology）Metho三、中藥有效成分分析

膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜在18.2min內(nèi)分離黃芩中6種黃酮類成分。1.漢黃芩苷；2.黃芩素；3.黃芩苷；4.千層子素；5.漢黃芩素；6.內(nèi)標(biāo)：水楊酸；7.白楊素示例一：12/23/202261三、中藥有效成分分析膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜在18.2min內(nèi)分示例二：藥材中黃酮化合物的分析對(duì)照品樣品OG：木蝴蝶素A－7－O-葡萄苷酸B：黃芩素WG：漢黃芩素－7－O-葡萄苷酸BG：黃芩苷W：漢黃芩素O：木蝴蝶素A12/23/202262示例二：藥材中黃酮化合物的分析對(duì)照品樣品示例三：甾醇類與香豆素類活性化合物測(cè)定(1)Triamcinolone(2)Hydrocortisone(3)Betamethasone(4)Hydrocortisoneacetate(5)Dexamethasoneacetate,(6)Triamcinoloneacetonide,(7)Fluocinoloneacetonide(8)Fluocinonide(1)香豆素(2)7－羥基香豆素(3)蛇床子素(4)補(bǔ)骨脂素(5)花椒毒素(6)香柑內(nèi)酯12/23/202263示例三：甾醇類與香豆素類活性化合物測(cè)定(1)Triamcin非水毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜在分離測(cè)定丹參及其復(fù)合制劑中活性組份的應(yīng)用J.Pharm.Biomed.Anal.37(2005)811-816.AnjiaChen,CunhongLi,WenhuaGao,ZhideHu?示例四：12/23/202264非水毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜在分離測(cè)定丹參及其復(fù)合制劑中活性組份的四、蛋白質(zhì)、氨基酸等的分離鑒定毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦肽、蛋白和糖蛋白的鑒別分析純度檢測(cè)免疫毛細(xì)管電泳檢測(cè)SDS-分子量測(cè)定肽譜分析酶與底物相互作用分析結(jié)合和動(dòng)力學(xué)研究微量制備ECORIEndeonuclease

限制性內(nèi)切核酸酶

12/23/202265四、蛋白質(zhì)、氨基酸等的分離鑒定毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦ECORIECZEOfNonfatMilkProteins

(脫脂奶蛋白)Usinga23cmfused-silicacapillary.Buffer,0.5

M

sodiumphosphate,4Murea,pH7.0.Peakidentification:(1)b-casein(酪蛋白);(2)

a-lactalbumin(乳白蛋白);(3)a-caseinandb-lactoglobulinB;

(4)b-lactoglobulinA(b-乳球蛋白A).

Dimethylformamide(DMF)wasaddedasanEOFmarker.FromChen,BeckmanApplicationDataSheetDS-818(1991).DMF：二甲基甲酰胺

CZEOfNonfatMilkProteins(脫

不同分子量蛋白的分離12/23/202267不同分子量蛋白的分離12/18/202267

4種堿性蛋白的分離

4種堿性蛋白的電泳分離圖。A：涂層管；B：未涂層管。1：細(xì)胞色素，2：溶菌酶，3：胰蛋白酶原，4：α-胰凝乳蛋白酶原12/23/2022684種堿性蛋白的分離4種堿性蛋＊聚乙烯醇（PVA：polyvinylalcohol）：非離子表面活性劑作為添加劑對(duì)毛細(xì)管柱進(jìn)行動(dòng)態(tài)修飾（涂層）。12/23/202269＊聚乙烯醇（PVA：polyvinylalcohol）＊熒光素異硫氰酸酯(FITC)衍生氨基酸

12/23/202270＊熒光素異硫氰酸酯(FITC)衍生氨基酸12/18/202MDQ/MS/MS用于生物工程蛋白（methionylhuman granulocytecolonystimulatingfactor）的鑒定12/23/202271MDQ/MS/MS用于生物工程蛋白（methionylh蛋白質(zhì)（單克隆抗體）的毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦電泳等電點(diǎn)的定量測(cè)定等電點(diǎn)的自動(dòng)測(cè)定Pi測(cè)定的精確度異質(zhì)性的信息12/23/202272蛋白質(zhì)（單克隆抗體）的毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦電泳等電點(diǎn)的定量測(cè)定12RecombinantHumanErythropoetin（重組人類促血紅細(xì)胞生長(zhǎng)素）

12/23/202273RecombinantHumanErythropoeti促血紅細(xì)胞生長(zhǎng)素(EPO)生產(chǎn)的質(zhì)控

H.P.BietlotandM.Girard,JChromatogrA,759:1-2,177-84,199712/23/202274促血紅細(xì)胞生長(zhǎng)素(EPO)生產(chǎn)的質(zhì)控H.P.BietloAffinityCE(親和毛細(xì)管電泳)12/23/202275AffinityCE(親和毛細(xì)管電泳)12/18/2022AffinityElectrophoresis(BindingStudy)

12/23/202276AffinityElectrophoresis(Bind五、毛細(xì)管電泳在糖類/糖蛋白中的應(yīng)用多糖譜圖的制定碳水化合物分離及測(cè)定糖蛋白分析異構(gòu)體分析糖脂研究*dextran-40：低分子右旋糖酐，平均分子量約為40000

12/23/202277五、毛細(xì)管電泳在糖類/糖蛋白中的應(yīng)用多糖譜圖的制定*dext糖的毛細(xì)管電泳分析分辨率好快速自動(dòng)化可定量12/23/202278糖的毛細(xì)管電泳分析分辨率好12/18/202278寡糖圖譜10.0020.0030.00Time(min)

1.0

2.0Rel.Unit(RU,x1E+01)21235101020203040501:APTS-glucose2:APTS-glucopyranosyl-a-1,6-glucose3:APTS-glucopyranosyl-a-1,6-glucopyranosyl-a-1,6-glucoseA:Dextran-1,000(averageMwt:1000)B:Dextran-5,000(averageMwt:5000)C:Dextran-12,0006014104012/23/202279寡糖圖譜10.0020.0030.00Time(min)APTS衍生化反應(yīng)12/23/202280APTS衍生化反應(yīng)12/18/202280寡糖圖譜（相差僅一個(gè)糖基的60個(gè)寡糖分子的

毛細(xì)管電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)）APTSRFU3210010203010204050603012/23/202281寡糖圖譜（相差僅一個(gè)糖基的60個(gè)寡糖分子的

毛細(xì)管電泳激光誘單糖的毛細(xì)管電泳分析乙酰氨基半乳糖；N-乙酰-D-甘露糖胺；乙酰葡糖胺；甘露糖；葡萄糖；木糖；巖藻糖；半乳糖12/23/202282單糖的毛細(xì)管電泳分析乙酰氨基半乳糖；N-乙酰-D-甘露糖胺六、核酸、基因和遺傳分析核酸、基因疫苗的質(zhì)量控制堿基、核苷和核苷酸的分析純度檢測(cè)、片段收集和微量制備PCR產(chǎn)物分析和dsDNA分析蛋白質(zhì)-DNA相互作用測(cè)定基因突變測(cè)定基因表達(dá)測(cè)定DNA序列測(cè)定(CEQ2000XL)12/23/202283六、核酸、基因和遺傳分析核酸、基因疫苗的質(zhì)量控制12/18/毛細(xì)管電泳用于質(zhì)粒DNA構(gòu)型的分析Schmidt,T.,Friehs,K.,Schleef,F.,Voss,Cl.,Flaschel,E.,AnalyticalBiochemistry,274,235-240,199912/23/202284毛細(xì)管電泳用于質(zhì)粒DNA構(gòu)型的分析Schmidt,T.,CE在45-寡核甘酸質(zhì)控中的應(yīng)用

DenaturingGel(7MUrea;LinearPolyacrylamide)Coatedcapillarysurface注：變性凝膠（尿素；線性聚丙烯酰胺）

12/23/202285CE在45-寡核甘酸質(zhì)控中的應(yīng)用DenaturingGCE

在雙鏈DNA片段（72bp-12Kbp）的檢測(cè)10.015.01.02.03.0123456789101112131415161718192023242526272829303031323334IS21RelativeFluorescenceIntensity12/23/202286CE在雙鏈DNA片段（72bp-12Kbp）的檢測(cè)CE用于雙鏈DNA片段（72bp-48.5Kbp）的分離檢測(cè)RelativeFluorescenceIntensity10.00Time(min)1.02.015.0020.0025.0030.00IS1822214046201236373031324116172119232425262728291514134544434233343938351011986754312/23/202287CE用于雙鏈DNA片段（72bp-48.5Kbp）D1S80Ladder16.0017.0018.0019.0020.0021.00Time(min)0.05.010.0RelativeFluorescenceIntensityAllele142728293031323334353637383940412122232425261617181920369bp801bp16bp689bp641bp529bp433bp12/23/202288D1S80Ladder16.0017.0018.0019.毛細(xì)管電泳用于等位基因的Typing16.0018.0020.0022.00Time(min)-1.04.09.014.0RelativeFluorescenceIntensityR1

R2

R3141824313441Allele16Allele30Sample112/23/202289毛細(xì)管電泳用于等位基因的Typing16.0018.0020毛細(xì)管電泳用于BRCA1andBRCA2基因的SSCP分析b:185delAG(reverse)a:185delAG(forward)

3.5

44.5

55.5

62RFU2RFU2RFU2RFU20RFU10RFU10RFU10RFUMigrationTime(min)c:6174delT(forward)d:6174delT(reverse)RelativeFluorescenceIntensity(RFU)A:wildtypeB:mutant3.5

44.5

55.5

612/23/202290毛細(xì)管電泳用于BRCA1andBRCA2基因的SSCPCE用于HIV直接雜交檢測(cè)12/23/202291CE用于HIV直接雜交檢測(cè)12/18/202291DNASequencing/Fragments-CEQTM8000

Totalautomation:fromgelloadingtobasecalling12/23/202292DNASequencing/Fragments-CEQ藥物代謝動(dòng)力學(xué)

Nortran制藥公司(加)：P/ACESetter,Vol4,Issue1,June2000InternalStandardDrugblankratbrainratbrainafterdruginfusionratbrainspikedwithdrugendogenouspeak七、其他應(yīng)用12/23/202293藥物代謝動(dòng)力學(xué)Nortran制藥公司(加)：P/A毛細(xì)管電泳-多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜（CE/MS/MS）聯(lián)用用于小分子藥物的結(jié)構(gòu)鑒定12/23/202294毛細(xì)管電泳-多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜（CE/MS/MS）聯(lián)用用于小分子藥毛細(xì)管：50cm(有效長(zhǎng)度)×70μmi.d.緩沖液：36mmol/LSodiumteraborate–15mmol/LSodiumhydrophosphite(pH9.2)電壓：14kV檢測(cè)：UV=254nm中藥指紋圖譜分析12/23/202295毛細(xì)管：50cm(有效長(zhǎng)度)×70μmi.d.中在毒品分析中的應(yīng)用12/23/202296在毒品分析中的應(yīng)用12/18/202296藥材（黃芩）中黃酮化合物的分析對(duì)照品樣品OG：木蝴蝶素A－7－O-葡萄苷酸B：黃芩素WG：漢黃芩素－7－O-葡萄苷酸BG：黃芩苷W：漢黃芩素O：木蝴蝶素A12/23/202297藥材（黃芩）中黃酮化合物的分析對(duì)照品樣品OG：木蝴蝶素A－啤酒中的陰離子分析12/23/202298啤酒中的陰離子分析12/18/202298第四節(jié)毛細(xì)管電泳儀簡(jiǎn)介（一）CE儀器的裝置組成

進(jìn)樣系統(tǒng)(包括高壓源系統(tǒng))分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)12/23/202299第四節(jié)毛細(xì)管電泳儀簡(jiǎn)介（一）CE儀器的裝置組成進(jìn)樣系統(tǒng)電泳儀進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)12/23/2022100電泳儀進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)12/18/20212/23/202210112/18/2022101毛細(xì)管電泳儀基本結(jié)構(gòu)+-高壓電源毛細(xì)管檢測(cè)器放大器模數(shù)轉(zhuǎn)換工作站緩沖液池電極12/23/2022102毛細(xì)管電泳儀基本結(jié)構(gòu)+-高壓電源毛細(xì)管檢測(cè)器放大器模數(shù)轉(zhuǎn)換工毛細(xì)管電泳分離分析裝置示意圖12/23/2022103毛細(xì)管電泳分離分析裝置示意圖12/18/2022103進(jìn)樣系統(tǒng)靜壓力進(jìn)樣和電動(dòng)進(jìn)樣進(jìn)樣體積一般在納升級(jí)進(jìn)樣長(zhǎng)度必須控制在毛細(xì)管總長(zhǎng)度的1%~2%，否則將影響分離效率。12/23/2022104進(jìn)樣系統(tǒng)靜壓力進(jìn)樣和電動(dòng)進(jìn)樣12/18/2022104

分離系統(tǒng)毛細(xì)管:由熔融石英制成,內(nèi)徑通常為25~75μm,外徑為350~400μm，有效長(zhǎng)度為20~100cm;恒溫系統(tǒng):控制柱溫變化在±0.10C；高壓電源:電流0~300μA,電壓0~30KV,電壓穩(wěn)定性在±0.1%;12/23/2022105分離系統(tǒng)毛細(xì)管:由熔融石英制成,內(nèi)徑通常為25~7512/23/202210612/18/2022106檢測(cè)系統(tǒng)常用的檢測(cè)方式是紫外-可見(jiàn)光吸收。檢測(cè)器位于距樣品盤(pán)約毛細(xì)管總長(zhǎng)的2/3~4/5處，對(duì)毛細(xì)管壁內(nèi)部分進(jìn)行光聚焦。此外，熒光，激光誘導(dǎo)熒光，質(zhì)譜等檢測(cè)方法也被應(yīng)用于毛細(xì)管電泳。12/23/2022107檢測(cè)系統(tǒng)常用的檢測(cè)方式是紫外-可見(jiàn)光吸收。檢測(cè)器位于距樣品盤(pán)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)計(jì)算機(jī)＋程序軟件包

美國(guó)貝克曼?庫(kù)爾特公司：P/ACE5000系列:Gold軟件包P/ACEMDQ:32karat軟件包12/23/2022108數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)計(jì)算機(jī)＋程序軟件包12/18/2022108（二）主要部件(mainassembly)12/23/2022109（二）主要部件(mainassembly)12/18/21.高壓電源（1）0～30kV穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源；（2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出；（3）電場(chǎng)強(qiáng)度程序控制系統(tǒng)；（4）電壓穩(wěn)定性：0.1%；（5）電源極性易轉(zhuǎn)換；2.毛細(xì)管柱

（1）材料：石英：各項(xiàng)性能好；玻璃：光學(xué)、機(jī)械性能差；（2）規(guī)格：內(nèi)徑20～75μm，外徑350～400μm；有效長(zhǎng)度 為20～100cm。12/23/20221101.高壓電源（1）0～30kV穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源；常用毛細(xì)管為石英玻璃毛細(xì)管石英玻璃

缺點(diǎn)：質(zhì)地脆、易折斷聚酰亞胺涂層

優(yōu)點(diǎn)：增強(qiáng)毛細(xì)管韌性缺點(diǎn)：紫外光不透明（使用時(shí)需開(kāi)檢測(cè)窗口）

12/23/2022111常用毛細(xì)管為石英玻璃毛細(xì)管石英玻璃聚酰亞胺涂層熔融石英毛細(xì)管橫截面結(jié)構(gòu)示意圖12/23/2022112熔融石英毛細(xì)管橫截面結(jié)構(gòu)示意圖12/18/2022112石英玻璃毛細(xì)管直觀示意圖檢測(cè)窗聚酰亞胺涂層石英毛細(xì)管使用時(shí)12/23/2022113石英玻璃毛細(xì)管直觀示意圖檢測(cè)窗聚酰亞胺涂層石英毛細(xì)管使用時(shí)1石英玻璃毛細(xì)管內(nèi)表面結(jié)構(gòu)玻璃二氧化硅（SiO2)xSiOSiSiOSiSiOSiOSiOOOHHH油污等12/23/2022114石英玻璃毛細(xì)管內(nèi)表面結(jié)構(gòu)玻璃二氧化硅（SiO2)xSiOSi毛細(xì)管的清洗：

氫氧化鈉溶液

二次水

鹽酸

二次水12/23/2022115毛細(xì)管的清洗：12/18/2022115經(jīng)處理后石英玻璃毛細(xì)管內(nèi)表面結(jié)構(gòu)SiOSiSiOSiSiOSiOSiOOOHHHHHOHOH12/23/2022116經(jīng)處理后石英玻璃毛細(xì)管內(nèi)表面結(jié)構(gòu)SiOSiSiOSiSiOSSi-OHpH>3Si-O-+H+硅羥基的電離：12/23/2022117Si-OHpH>3Si-O-+H+硅羥基的電離：12/3.緩沖液池

化學(xué)惰性，機(jī)械穩(wěn)定性好；4.檢測(cè)器

要求：具有極高靈敏度，可柱端檢測(cè)；檢測(cè)器、數(shù)據(jù)采集與計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理一體化。

類型

檢測(cè)限/mol

特點(diǎn)紫外-可見(jiàn)10-13～10-15

加二極管陣列，光譜信息；熒光10-15～10-17靈敏度高，樣品需衍生；激光誘導(dǎo)熒光10-18～10-20靈敏度極高，樣品需衍生；電導(dǎo)10-18～10-19離子靈敏，需專用的裝置。12/23/20221183.緩沖液池化學(xué)惰性，機(jī)械穩(wěn)定性好；類型

毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法和檢測(cè)器（1）UV-可見(jiàn)吸收檢測(cè)器是最普通使用的一種檢測(cè)器。（2）光激發(fā)熒光檢測(cè)器特點(diǎn)是檢測(cè)限較低，但對(duì)大多數(shù)樣品需要衍生，特別是大多數(shù)生物樣品。（3）電化學(xué)檢測(cè)器：選擇性高，只有容易氧化和還原的溶質(zhì)才能被檢測(cè)。（4）質(zhì)譜檢測(cè)器：靈敏度高，專屬性強(qiáng)，能提供分子結(jié)構(gòu)信息，是CE非常理想的一種檢測(cè)器，接口問(wèn)題非常重要。（5）折射指數(shù)檢測(cè)器：與溶液組成，濃度，溫度有關(guān)。靈敏度低易漂移，很少使用，但具有非破壞性和通用性強(qiáng)，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，造價(jià)低。12/23/2022119毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法和檢測(cè)器12/18/2022119（三）CE商品儀器簡(jiǎn)介進(jìn)口：1.BECKMAN?COULTER(美貝克曼?庫(kù)爾特公司 (原);現(xiàn)Danaher(丹納赫)集團(tuán)?愛(ài)博才思公司)P/ACE5510P/ACEMDQPA800（MDQ升級(jí)版）PA800Plus（蛋白及核酸檢測(cè)）CEQ8000（八通道基因分析系統(tǒng)）

GeXP（遺傳分析系統(tǒng)）

2.AGILENT(安捷倫公司)

AgilentHP3D12/23/2022120（三）CE商品儀器簡(jiǎn)介進(jìn)口：12/18/2022120（三）CE商品儀器簡(jiǎn)介國(guó)內(nèi)：

北京彩陸

CL1020；CL1030

大連江申

HPCE-1012/23/2022121（三）CE商品儀器簡(jiǎn)介國(guó)內(nèi)：12/18/2022121高效毛細(xì)管電泳儀器（1）12/23/2022122高效毛細(xì)管電泳儀器（1）12/18/2022122高效毛細(xì)管電泳儀器（2）12/23/2022123高效毛細(xì)管電泳儀器（2）12/18/2022123高效毛細(xì)管電泳儀器（3）12/23/2022124高效毛細(xì)管電泳儀器（3）12/18/2022124高效毛細(xì)管電泳儀實(shí)圖（4）12/23/2022125高效毛細(xì)管電泳儀實(shí)圖（4）12/18/2022125高效毛細(xì)管電泳儀實(shí)圖（5）P/ACEMDQ(BECKMANCOULTER)12/23/2022126高效毛細(xì)管電泳儀實(shí)圖（5）P/ACEMDQ(BECKMA后基因組時(shí)代的DNA和基因分析

—CEQ8000DNA和基因分析系統(tǒng)八道毛細(xì)管同時(shí)進(jìn)樣從樣品變性、進(jìn)膠、分析至出報(bào)告,完全自動(dòng)化采用線性凝膠及涂層毛細(xì)管,更好處理復(fù)雜序列測(cè)序速度為90分鐘>850bp，30分鐘>500bp，準(zhǔn)確度>98%作測(cè)序與片段分析時(shí)，無(wú)需更換毛細(xì)管12/23/2022127后基因組時(shí)代的DNA和基因分析

—CEQ8000DNA和P/ACEMDQ的示意圖12/23/2022128P/ACEMDQ的示意圖12/18/2022128P/ACETMMDQ–MS/MS示意圖

12/23/2022129P/ACETMMDQ–MS/MS示意圖12/18/2P/ACEMDQ準(zhǔn)確、自動(dòng)的進(jìn)樣系統(tǒng)具有精確的進(jìn)樣控制和校正系統(tǒng)，進(jìn)樣量準(zhǔn)確可直接從96孔樣品板上自動(dòng)進(jìn)樣，也可從2ml或0.5ml或PCR試管中進(jìn)樣可電動(dòng)、壓力、真空或三者組合進(jìn)樣可從毛細(xì)管兩端的任一端進(jìn)樣進(jìn)樣后，有等待功能12/23/2022130P/ACEMDQ準(zhǔn)確、自動(dòng)的進(jìn)樣系統(tǒng)具有精確的進(jìn)樣控制和校P/ACEMDQ專利的設(shè)計(jì)技術(shù)可最有效地去除過(guò)量產(chǎn)生的焦耳熱，確保分離系統(tǒng)的溫度恒定確保獲得最佳的分離效率和最好的分離重現(xiàn)性可使用高離子強(qiáng)度的緩沖液（500mM）可對(duì)高鹽樣品進(jìn)行分析可使用大口徑的毛細(xì)管（150~200μm）柱溫可控在15-60℃

高效的毛細(xì)管液冷專利技術(shù)12/23/2022131P/ACEMDQ專利的設(shè)計(jì)技術(shù)可最有效地去除過(guò)量產(chǎn)生的焦耳P/ACEMDQ的檢測(cè)器系列二極管陣列檢測(cè)器（DAD）紫外檢測(cè)器（UV）激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器（LIF）（單波長(zhǎng)/雙波長(zhǎng)）質(zhì)譜儀（MS/MS）電導(dǎo)檢測(cè)器（Conductivity）等。12/23/2022132P/ACEMDQ的檢測(cè)器系列二極管陣列檢測(cè)器（DAD）12DAD、UV、LIF檢測(cè)器12/23/2022133DAD、UV、LIF檢測(cè)器12/18/2022133二極管陣列檢測(cè)器（DAD）光譜190-600nm可自動(dòng)對(duì)光譜譜圖庫(kù)進(jìn)行檢索具有譜峰純度分析，可檢出未能分辨或重疊的組分帶核準(zhǔn)的汞燈和氧化鈥濾光片校正，使波長(zhǎng)更精確12/23/2022134二極管陣列檢測(cè)器（DAD）光譜190-600nm12/18紫外檢測(cè)器（UV）適合于常規(guī)質(zhì)控進(jìn)行涂層毛細(xì)管的檢測(cè)和無(wú)膠篩分的分離，效果比DAD好在分離過(guò)程中可以改變檢測(cè)波長(zhǎng)可在程序中設(shè)定紫外燈的自動(dòng)啟或閉12/23/2022135紫外檢測(cè)器（UV）適合于常規(guī)質(zhì)控12/18/2022135激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器（LIF）靈敏度比UV和DAD高1000倍以上，可檢測(cè)到單分子的水平有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)LIF供選擇有488nm和635nm激光器光源供選擇也可自行連接其它波長(zhǎng)的激光器12/23/2022136激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器（LIF）靈敏度比UV和DAD高1000倍完美的系統(tǒng)軟件設(shè)計(jì)一個(gè)軟件包實(shí)現(xiàn)真正全自動(dòng)12/23/2022137完美的系統(tǒng)軟件設(shè)計(jì)一個(gè)軟件包實(shí)現(xiàn)真正全自動(dòng)12/18/202第五節(jié)研究進(jìn)展與展望1.微型化技術(shù)(毛細(xì)管陣列電泳芯片技術(shù)CAE等）

整體化學(xué)分析系統(tǒng)(TAS)及TAS微型化(μ-TAS)芯片技術(shù) (芯片實(shí)驗(yàn)室labonachip)；μlnl在硅片上光刻出矩形槽作為毛細(xì)管的芯片技術(shù)。2.聯(lián)用技術(shù)CE-MS、CE-NMR聯(lián)用技術(shù)。3.陣列毛細(xì)管凝膠電泳技術(shù)

應(yīng)用于人類基因DNA測(cè)序：

人類：5～10萬(wàn)個(gè)基因，30億個(gè)堿基對(duì)；CE為目前最有效的DNA序列分析儀；如用100支毛細(xì)管陣列電泳，速度可達(dá)280堿基對(duì)/小時(shí)/支。12/23/2022138第五節(jié)研究進(jìn)展與展望1.微型化技術(shù)(毛細(xì)管陣列電泳芯片技術(shù)毛細(xì)管電泳發(fā)展趨勢(shì)展望1.后基因時(shí)代，CE應(yīng)用于功能基因的分離、檢測(cè)、功能蛋白的分離、測(cè)定及基因突變等的研究；

2.毛細(xì)管陣列電泳儀（多支CE聯(lián)合）應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)。3.CE在蛋白質(zhì)性能與功能研究中的應(yīng)用4.CE在藥物分析、手性拆分及中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用。5.多維、多通道毛細(xì)管電泳分離技術(shù)及其在復(fù)雜生物樣品分離分析中的應(yīng)用。6.CE各模式理論和機(jī)制的研究。12/23/2022139毛細(xì)管電泳發(fā)展趨勢(shì)展望1.后基因時(shí)代，CE應(yīng)用于功能基因的參考文獻(xiàn)《高效毛細(xì)管電泳》鄧延倬,何金蘭編著

北京：科學(xué)出版社，1996

《毛細(xì)管電泳導(dǎo)論》林炳承

編著

北京：科學(xué)出版社，1996．《高效毛細(xì)管電泳》胡之德編著.

蘭州：蘭州大學(xué)出版社，1997《毛細(xì)管電泳》傅小蕓呂建德編著.杭州：浙江大學(xué)出版社，199712/23/2022140參考文獻(xiàn)《高效毛細(xì)管電泳》鄧延倬,何金蘭編著12/18/參考文獻(xiàn)《電泳》何忠效，張樹(shù)政主編.

北京：科學(xué)出版社，1999

《毛細(xì)管電泳技術(shù)及應(yīng)用》陳義編著.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000《毛細(xì)管電色譜及其應(yīng)用》鄒漢法等編著.北京：科學(xué)出版社，2001《儀器分析》吳謀成主編

北京:科學(xué)出版社，200312/23/2022141參考文獻(xiàn)《電泳》何忠效，張樹(shù)政主編.12/18/20221參考文獻(xiàn)《現(xiàn)代生物樣品分離分析方法》張玉奎編著.北京：科學(xué)出版社，2003《蛋白質(zhì)化學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)》夏其昌等編著.北京:科學(xué)出版社，2004

《毛細(xì)管電色譜及其在生命科學(xué)中的應(yīng)用》羅國(guó)安等著.北京：科學(xué)出版社，2005《毛細(xì)管電泳技術(shù)及應(yīng)用》（第二版）陳義編著.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，200612/23/2022142參考文獻(xiàn)《現(xiàn)代生物樣品分離分析方法》張玉奎編著.12/18參考文獻(xiàn)《中藥有效成分含量測(cè)定》陳發(fā)奎主編.

北京:人民衛(wèi)生出版社，2008《手性藥物分析》姚彤煒主編.

北京:人民衛(wèi)生出版社，2008《體內(nèi)藥物分析》李好枝主編.

北京:人民衛(wèi)生出版社，2008《中藥毛細(xì)管電泳分析技術(shù)與應(yīng)用》季一兵主編.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，200912/23/2022143參考文獻(xiàn)《中藥有效成分含量測(cè)定》陳發(fā)奎主編.12/18/作業(yè)題簡(jiǎn)述HPCE不同的分離模式及其在藥物分析中的應(yīng)用；并結(jié)合自己（導(dǎo)師）的研究方向，探討高效毛細(xì)管電泳應(yīng)用其中的可能性和現(xiàn)實(shí)性。12/23/2022144作業(yè)題簡(jiǎn)述HPCE不同的分離模式及其在藥物Merci!12/23/2022145Merci!12/18/2022145現(xiàn)代儀器分析第一講:高效毛細(xì)管電泳法在藥物分析中的應(yīng)用CollegeofPharmacy,ShanxiMedicalUniversityProf.AnjiaCHEN

12/23/2022146現(xiàn)代儀器分析CollegeofPharmacy,Sha第一節(jié)儀器分析法概述(generalization)儀器分析法

色譜分析法√光譜分析法√電化學(xué)分析法質(zhì)譜分析法12/23/2022147第一節(jié)儀器分析法概述(generalization)儀器其他儀器分析法有：

流動(dòng)注射分析(FlowInjectionAnalysis, FIA)熱分析(ThermalAnalysis,TA)X射線分析(X-rayAnalysis)

…12/23/2022148其他儀器分析法有：流動(dòng)注射分析(FlowInjecti

毛細(xì)管電泳(CE:CapillaryElectrophoresis)又稱高效毛細(xì)管電泳(HPCE),是指離子或帶電粒子以彈性石英毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的液相分離分析技術(shù)。

HPCE:以內(nèi)徑10~200μm的毛細(xì)管柱為分離通道，對(duì)大分子和小分子等進(jìn)行高效分離和檢測(cè)的有關(guān)技術(shù)的統(tǒng)稱。

第二節(jié)HPCE基本知識(shí)回顧

12/23/2022149毛細(xì)管電泳(CE:CapillaryElectr一、HPCE原理電泳遷移：在高壓電場(chǎng)下，樣本中各帶