密度梯度離心課件

蛋白質(zhì)的化學(xué)3蛋白質(zhì)的化學(xué)3蛋白質(zhì)的分離與純化的基本原理一、蛋白質(zhì)的提取二、蛋白質(zhì)的分離與純化三、蛋白質(zhì)的純度鑒定、含量測(cè)定和結(jié)構(gòu)分析蛋白質(zhì)的分離與純化的基本原理一、蛋白質(zhì)的提取一、蛋白質(zhì)的提取1．材料的選擇

選擇適當(dāng)?shù)牟牧希璧鞍踪|(zhì)含量較高，來(lái)源方便。注意保存條件（低溫）2．組織細(xì)胞的粉碎超聲、反復(fù)凍融、溶菌酶等3．提取

選用適當(dāng)?shù)娜苊椒乐沟鞍酌笇?duì)有效成分的破壞。一、蛋白質(zhì)的提取1．材料的選擇二、蛋白質(zhì)的分離與純化（一）根據(jù)溶解度不同的分離純化方法（二）根據(jù)分子大小不同的分離純化方法（三）根據(jù)電離性質(zhì)不同的分離純化方法（四）根據(jù)配基特異性的分離純化方法二、蛋白質(zhì)的分離與純化（一）根據(jù)溶解度不同的分離純化方法根據(jù)溶解度不同的分離純化方法溶液的pH —— 等電點(diǎn)沉淀

離子強(qiáng)度 —— 鹽析沉淀溶劑性質(zhì) —— 低溫有機(jī)溶劑沉淀注意：溫度 —— 低溫根據(jù)溶解度不同的分離純化方法溶液的pH —— 等電點(diǎn)沉淀分子大小不同的分離純化方法透析和超濾透析（dialysis）法是利用蛋白質(zhì)大分子對(duì)半透膜的不可透過(guò)性而與其他小分子物質(zhì)分開(kāi)。超濾法(ultrafiltration)是依據(jù)分子大小和形狀，在10-8cm數(shù)量級(jí)進(jìn)行選擇性分離的技術(shù)。其原理是利用超濾膜在一定的壓力或離心力的作用下，大分子物質(zhì)被截留而小分子物質(zhì)則濾過(guò)排出。分子大小不同的分離純化方法透析和超濾半透膜阻留pr分子，而讓小的溶質(zhì)分子和水通過(guò)，以達(dá)到除去蛋白質(zhì)溶液中小分子（鹽、低分子酸等）半透膜阻留pr分子，而讓小的溶質(zhì)分子和水通過(guò)，以達(dá)到除去蛋白超濾膜，是一種孔徑規(guī)格一致，額定孔徑范圍為0.001-0.02微米的微孔過(guò)濾膜。在膜的一側(cè)施以適當(dāng)壓力，就能篩出小于孔徑的溶質(zhì)分子，以分離分子量大于500道爾頓、粒徑大于2～20納米的顆粒。超濾膜，是一種孔徑規(guī)格一致，額定孔徑范圍為0.001-0.0密度梯度離心課件密度梯度離心課件分子排阻層析：分子篩層析、凝膠過(guò)濾 葡聚糖凝膠(

Sephadex) 丙烯酰胺凝膠(Bio-gel) 瓊脂糖凝膠(Sepharose)分子排阻層析：分子篩層析、凝膠過(guò)濾聚糖凝膠是以葡聚糖與交聯(lián)劑形成有三維空間的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物，兩者的比例和反應(yīng)條件決定其交聯(lián)度的大小，用G表示。G越小、交聯(lián)度越大、孔徑越小。聚糖凝膠是以葡聚糖與交聯(lián)劑形成有三維空間的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物，兩者的密度梯度離心課件密度梯度離心（densitygradientcentrifugation）蛋白質(zhì)顆粒的沉降速度取決于它的大小和密度當(dāng)其在具有密度梯度的介質(zhì)中離心時(shí)，質(zhì)量和密度大的顆粒沉降得快并且每種蛋白質(zhì)顆粒沉降到與自身密度相等的介質(zhì)梯度時(shí)，即停滯不前，可分步收集。密度梯度離心（densitygradientcentri根據(jù)電離性質(zhì)不同的分離純化方法電泳法帶電質(zhì)點(diǎn)在電場(chǎng)中向電荷相反的方向移動(dòng)，這種性質(zhì)稱(chēng)為電泳蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中移動(dòng)的速度和方向主要取決于蛋白質(zhì)分子所帶的電荷的性質(zhì)、數(shù)量及質(zhì)點(diǎn)的大小和形狀。外界影響因素：電場(chǎng)強(qiáng)度、溶液的pH、離子強(qiáng)度及電滲等根據(jù)電離性質(zhì)不同的分離純化方法電泳法醋酸纖維薄膜電泳：臨床用于血漿蛋白電泳分析。1.濾紙橋2.電泳槽3.醋酸纖維素薄膜4.電泳槽膜支架5.電極室中央隔板醋酸纖維薄膜電泳：1.濾紙橋2.電泳槽3.醋酸纖維聚丙烯酰胺凝膠電泳:它以聚丙烯酰胺凝膠為支持物，具有電泳和凝膠過(guò)濾的特點(diǎn)聚丙烯酰胺凝膠電泳:等電聚焦電泳兩性電解質(zhì)作為支持物，電泳時(shí)即形成一個(gè)由正到負(fù)極逐漸增加的pH梯度。分辨率高，pl相差0.02pH單位即可分開(kāi)等電聚焦電泳兩性電解質(zhì)載體，實(shí)際上是許多異構(gòu)和同系物的混合物，它們是一系列多羧基多氨基脂肪族化合物，分子量在300~1000之間。載體兩性電解質(zhì)是一系列不同分子的兩性電解質(zhì)的混合物,在通電后，它們各自遷移到適當(dāng)位置形成一個(gè)連續(xù)的pH梯度。對(duì)兩性電解質(zhì)的要求是緩沖能力強(qiáng)，有良好的導(dǎo)電性，分子量要小，不干擾被分析的樣品等。兩性電解質(zhì)載體，實(shí)際上是許多異構(gòu)和同系物的混合物，它們是一系凝膠中加有兩性電解質(zhì)溶液（pH9-3）

加電場(chǎng)后在凝膠內(nèi)形成一個(gè)穩(wěn)定pH梯度

加樣品，然后繼續(xù)電泳凝膠染色表明樣品按照各自pI值沿著pH梯度分布凝膠中加有兩性電解質(zhì)溶液（pH9-3）加電場(chǎng)后在凝膠等電聚焦電泳進(jìn)行過(guò)程中等電聚焦電泳結(jié)束后（＋）（＋）（－）（－）高pH高pH低pH低pH等電聚焦電泳進(jìn)行過(guò)程中等電聚焦電泳結(jié)束后（＋）（＋）（－）（免疫電泳電泳技術(shù)和抗原與抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，一般以瓊脂或瓊脂糖凝膠為支持物。方法是先將抗原中各蛋白質(zhì)組分經(jīng)凝膠電泳分開(kāi)，然后加入特異性抗體經(jīng)擴(kuò)散可產(chǎn)生免疫沉淀反應(yīng)。免疫電泳免疫電泳免疫電泳二維電泳根據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和相對(duì)分子量采用等電聚焦方式和SDS在兩個(gè)相互垂直的方向上進(jìn)行分離。雙向電泳的第一向?yàn)榈入娋劢梗ǖ入婞c(diǎn)信息），第二向?yàn)镾DS（分子量信息）。是目前所有電泳技術(shù)中分辨率最高，信息量最多的技術(shù)。二維電泳第一向電泳：等電聚焦電泳聚焦后凝膠放置在SDS凝膠上，進(jìn)行第二向電泳第二向電泳：SDS分子量大分子量小pH9pH3pH9pH3第一向電泳：等電聚焦電泳聚焦后凝膠放置在SDS凝膠上，進(jìn)行第密度梯度離心課件大腸桿菌全蛋白提取液雙向電泳凝膠染色后照片大腸桿菌全蛋白提取液雙向電泳凝膠染色后照片利用離子交換基質(zhì)上的可解離活性基團(tuán)對(duì)各種蛋白結(jié)合力不同而達(dá)到分離目的的一種分離方法常用的支持基質(zhì)：纖維素，瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠、樹(shù)脂——CH2COO-H+——DEAE+Cl-活性基團(tuán)：陽(yáng)離子：羧甲基（CM）陰離子：二乙基氨基乙基（DEAE）由于蛋白質(zhì)分子具有兩性性質(zhì)，所以可用陽(yáng)離子交換劑，也可用陰離子交換劑進(jìn)行蛋白的分離純化。離子交換層析利用離子交換基質(zhì)上的可解離活性基團(tuán)對(duì)各種蛋白結(jié)合力不同而達(dá)到陰離子交換層析分離蛋白質(zhì)陰離子交換層析分離蛋白質(zhì)陽(yáng)離子交換層析原理洗脫方法：改變鹽濃度和改變pH的方法陽(yáng)離子交換層析原理洗脫方法：改變鹽濃度和改變pH的方法親和層析(affinitychromatography)利用生物分子與配基之間所具有的專(zhuān)一而又可逆的親和力，使生物分子分離純化的技術(shù)。這種分離純化方法專(zhuān)一性強(qiáng)，理論上可以從復(fù)雜的體系中一步提取所需的物質(zhì)。免疫親和層析：抗原—抗體凝集素親和層析：糖—凝集素金屬螯和層析：如NTA-Ni—poly-His根據(jù)配基特異性的分離純化方法親和層析(affinitychromatography)利密度梯度離心課件氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)類(lèi)生物藥物(一)氨基酸及其衍生物1.AA營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及其與疾病治療關(guān)系①八種必需氨基酸：

是人體必需從食物中獲取的營(yíng)養(yǎng)物②胱氨酸、酪氨酸為非必需AA，但由蛋氨酸、苯丙氨酸產(chǎn)生所以食物中若有足夠的胱氨酸和Tyr，可以減少對(duì)Met和Phe的需求量，故胱氨酸和Tyr也稱(chēng)為半必需氨基酸。③Lys對(duì)嬰幼兒來(lái)說(shuō)具有特殊的重要意義賴(lài)氨酸的需求量，按每天每kg體重計(jì)算，成年人為12mg，1歲以下嬰幼兒為103mg。密度梯度離心課件谷氨酸谷氨酰胺乙酰谷酰胺鋁組胺酸鹽酸鹽

甘氨酸及其鋁鹽谷氨酸鹽酸鹽

通過(guò)調(diào)節(jié)胃液酸堿度，實(shí)現(xiàn)治療作用通過(guò)保護(hù)消化道粘膜或促進(jìn)粘膜增生而防治胃及十二指腸潰瘍2.治療消化道疾病的氨基酸谷氨酸通過(guò)調(diào)節(jié)胃液酸堿度，實(shí)現(xiàn)治療作用通過(guò)保護(hù)消化道精氨酸鹽酸鹽磷葡精氨酸鳥(niǎo)天氨酸谷氨酸鈉瓜氨酸賴(lài)氨酸鹽酸鹽天冬氨酸3.治療肝病的氨基酸及其衍生物支鏈氨基酸精氨酸鹽酸鹽3.治療肝病的氨基酸及其衍生物支鏈氨基酸4.治療腦及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的氨基酸及其衍生物谷氨酸鈣鹽及鎂鹽——維持神經(jīng)肌肉正常興奮，治療神經(jīng)衰弱氫溴酸，谷氨酸鈉官能癥

γ—酪氨酸——中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制性遞質(zhì)，治療記憶、色氨酸語(yǔ)言障礙、腦外傷后遺癥5—羥色氨酸酪氨酸亞硫酸鹽——治療脊髓灰質(zhì)炎、結(jié)核性腦膜炎4.治療腦及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的氨基酸及其衍生物谷氨酸鈣鹽及鎂鹽偶氮絲氨酸——治療白血病氯苯丙氨酸——治療癌癥綜合癥磷乙天冬氨酸——治療B16黑色素瘤及Lewis肺癌

氨基酸藥物中治療作用比較顯著的多數(shù)是其衍生物。5.用于腫瘤治療的氨基酸及其衍生物偶氮絲氨酸——治療白血病5.用于腫瘤治療的氨基酸及其衍生物密度梯度離心課件（二）多肽類(lèi)藥物1.多肽激素：促皮質(zhì)素（ACTH）

促黑激素（MSH）垂體多肽激素脂肪水解激素（LPH）

催產(chǎn)素（OT）

加壓素（AVP）

促甲狀腺激素釋放激素（TRH）下丘腦激素生長(zhǎng)素抑制激素（GRIF）

促性腺激素釋放激素（LHRH）

甲狀腺激素甲狀旁腺激素（PTH）

降鈣素（CT）（二）多肽類(lèi)藥物胰島激素胰高血糖素（不包括胰島素，因?yàn)橐葝u素是蛋白）胰解痙多肽

胃泌素膽囊收縮素—促胰酶素（CCK—PZ）

腸泌素胃腸道激素腸血管活性肽抑胃肽(GIP)

緩激肽

P物質(zhì)

胸腺素胸腺激素胸腺肽胸腺血清因子密度梯度離心課件2.多肽類(lèi)細(xì)胞因子這是一類(lèi)目前研究十分活躍的多肽類(lèi)藥物。①已批準(zhǔn)生產(chǎn)的細(xì)胞因子多肽藥物名稱(chēng)適應(yīng)癥IFNα白血病、Kaposi肉瘤、肝炎、癌癥、AIDSIFNγ慢性肉芽腫、生殖器疣、過(guò)敏性皮炎、感染性疾病、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎G-CSF自身骨髓移植、化療導(dǎo)致的粒細(xì)胞減少癥、AIDS、白血病、再生障礙性貧血GM-CSF自身骨髓移植、化療導(dǎo)致的粒細(xì)胞減少癥、AIDS、再生障礙性貧血、MDSEPO慢性腎衰竭導(dǎo)致的貧血、癌癥或癌癥化療導(dǎo)致的貧血、失血后貧血IL-2癌癥、免疫缺陷、疫苗佐劑IFNβ多發(fā)性硬化癥TF免疫缺陷癥、病毒感染、腫瘤EGF燒傷2.多肽類(lèi)細(xì)胞因子名稱(chēng)適應(yīng)癥IFNα白血病、Kaposi肉瘤②已批準(zhǔn)臨床試驗(yàn)的細(xì)胞因子多肽藥物名稱(chēng)適應(yīng)癥IL-1α放化療所導(dǎo)致的骨髓抑制、癌癥IL-1β同上、促進(jìn)傷口愈合IL-3骨髓衰竭、血小板缺乏、自身骨髓移植、化療佐劑、外周血干細(xì)胞移植IL-4免疫缺陷、癌癥、疫苗佐劑IL-6放化療所導(dǎo)致的血小板減少、癌癥、疫苗佐劑M-CSF癌癥、白血病、骨髓移植、降膽固醇TNF癌癥干細(xì)胞因子（SCF）骨髓衰竭TNF-β炎癥IL-11血小板減少癥IL-1受體拮抗劑敗血性休克、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎PIXY321骨髓衰竭名稱(chēng)適應(yīng)癥IL-1α放化療所導(dǎo)致的骨髓抑制、癌癥IL-1β同③有可能用于臨床的細(xì)胞因子多肽藥物名稱(chēng)適應(yīng)癥IL-7免疫缺陷、血小板減少癥IL-8腫瘤局部治療IL-9造血功能障礙、免疫缺陷IL-10感染、炎癥IL-12癌癥IL-13感染、炎癥、移植排斥MIF（巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子）感染、疫苗佐劑MIP（巨噬細(xì)胞炎癥蛋白）感染、腫瘤MCP（巨噬細(xì)胞趨化因子）感染、腫瘤LIF（白血病抑制因子）白血病、造血功能障礙GIF（糖基化抑制因子）炎癥名稱(chēng)適應(yīng)癥IL-7免疫缺陷、血小板減少癥IL-8腫瘤局部治療

3.含有多肽成份的其它生化藥物

骨寧——抗關(guān)節(jié)炎、鎮(zhèn)痛眼生素——用于眼科疾病腦氨肽——作用類(lèi)似腦活素蜂毒——治療關(guān)節(jié)炎蛇毒——抗血栓谷胱甘肽——解毒劑婦血寧胎盤(pán)提取物花粉提取物脾水解物肝水解物密度梯度離心課件（三）蛋白質(zhì)類(lèi)生物藥物1.蛋白質(zhì)激素生長(zhǎng)素（GH）

催乳激素（PRL）①垂體蛋白質(zhì)激素促甲狀腺素（TSH）

促黃體生成激素（LH）

促卵泡激素（FSH）

人絨毛膜促性腺激素（HCG）②促性腺激素絕經(jīng)尿促性腺激素(HMG)

血清性促性腺激素(SGH)

胰島素③胰島素及其它蛋白質(zhì)激素胰抗脂肝素松弛素尿抑胃素（三）蛋白質(zhì)類(lèi)生物藥物2.血漿蛋白質(zhì)白蛋白纖維蛋白溶酶原血漿纖維結(jié)合蛋白（FN）

兩種免疫球蛋白抗淋巴細(xì)胞免疫球蛋白抗—HBs免疫球蛋白抗—血友病球蛋白纖維蛋白原抗凝血酶Ⅲ凝血因子Ⅷ凝血因子Ⅸ密度梯度離心課件3.蛋白質(zhì)類(lèi)細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子干擾素（α、β、γ）

神經(jīng)生長(zhǎng)因子（MGF）

肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）

血小板衍生的生長(zhǎng)因子（PDGF）

組織纖溶酶原激活因子（tPA）

促紅細(xì)胞生成素（EPO）

胃發(fā)生蛋白（BMP）（從小牛骨中提取，促進(jìn)斷骨接上）密度梯度離心課件4.粘蛋白胃膜素硫酸糖肽內(nèi)在因子血型物質(zhì)A和B等5.膠原蛋白明膠氧化聚合明膠、阿膠、新阿膠、凍干豬皮等6.堿性蛋白質(zhì)硫酸魚(yú)精蛋白7.蛋白酶抑制劑胰蛋白酶抑制劑（抑肽酶）大豆胰蛋白酶抑制劑8.植物凝集素

PHA、ConA(促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化)密度梯度離心課件蛋白質(zhì)的化學(xué)3蛋白質(zhì)的化學(xué)3蛋白質(zhì)的分離與純化的基本原理一、蛋白質(zhì)的提取二、蛋白質(zhì)的分離與純化三、蛋白質(zhì)的純度鑒定、含量測(cè)定和結(jié)構(gòu)分析蛋白質(zhì)的分離與純化的基本原理一、蛋白質(zhì)的提取一、蛋白質(zhì)的提取1．材料的選擇

選擇適當(dāng)?shù)牟牧?，所需蛋白質(zhì)含量較高，來(lái)源方便。注意保存條件（低溫）2．組織細(xì)胞的粉碎超聲、反復(fù)凍融、溶菌酶等3．提取

選用適當(dāng)?shù)娜苊椒乐沟鞍酌笇?duì)有效成分的破壞。一、蛋白質(zhì)的提取1．材料的選擇二、蛋白質(zhì)的分離與純化（一）根據(jù)溶解度不同的分離純化方法（二）根據(jù)分子大小不同的分離純化方法（三）根據(jù)電離性質(zhì)不同的分離純化方法（四）根據(jù)配基特異性的分離純化方法二、蛋白質(zhì)的分離與純化（一）根據(jù)溶解度不同的分離純化方法根據(jù)溶解度不同的分離純化方法溶液的pH —— 等電點(diǎn)沉淀

離子強(qiáng)度 —— 鹽析沉淀溶劑性質(zhì) —— 低溫有機(jī)溶劑沉淀注意：溫度 —— 低溫根據(jù)溶解度不同的分離純化方法溶液的pH —— 等電點(diǎn)沉淀分子大小不同的分離純化方法透析和超濾透析（dialysis）法是利用蛋白質(zhì)大分子對(duì)半透膜的不可透過(guò)性而與其他小分子物質(zhì)分開(kāi)。超濾法(ultrafiltration)是依據(jù)分子大小和形狀，在10-8cm數(shù)量級(jí)進(jìn)行選擇性分離的技術(shù)。其原理是利用超濾膜在一定的壓力或離心力的作用下，大分子物質(zhì)被截留而小分子物質(zhì)則濾過(guò)排出。分子大小不同的分離純化方法透析和超濾半透膜阻留pr分子，而讓小的溶質(zhì)分子和水通過(guò)，以達(dá)到除去蛋白質(zhì)溶液中小分子（鹽、低分子酸等）半透膜阻留pr分子，而讓小的溶質(zhì)分子和水通過(guò)，以達(dá)到除去蛋白超濾膜，是一種孔徑規(guī)格一致，額定孔徑范圍為0.001-0.02微米的微孔過(guò)濾膜。在膜的一側(cè)施以適當(dāng)壓力，就能篩出小于孔徑的溶質(zhì)分子，以分離分子量大于500道爾頓、粒徑大于2～20納米的顆粒。超濾膜，是一種孔徑規(guī)格一致，額定孔徑范圍為0.001-0.0密度梯度離心課件密度梯度離心課件分子排阻層析：分子篩層析、凝膠過(guò)濾 葡聚糖凝膠(

Sephadex) 丙烯酰胺凝膠(Bio-gel) 瓊脂糖凝膠(Sepharose)分子排阻層析：分子篩層析、凝膠過(guò)濾聚糖凝膠是以葡聚糖與交聯(lián)劑形成有三維空間的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物，兩者的比例和反應(yīng)條件決定其交聯(lián)度的大小，用G表示。G越小、交聯(lián)度越大、孔徑越小。聚糖凝膠是以葡聚糖與交聯(lián)劑形成有三維空間的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物，兩者的密度梯度離心課件密度梯度離心（densitygradientcentrifugation）蛋白質(zhì)顆粒的沉降速度取決于它的大小和密度當(dāng)其在具有密度梯度的介質(zhì)中離心時(shí)，質(zhì)量和密度大的顆粒沉降得快并且每種蛋白質(zhì)顆粒沉降到與自身密度相等的介質(zhì)梯度時(shí)，即停滯不前，可分步收集。密度梯度離心（densitygradientcentri根據(jù)電離性質(zhì)不同的分離純化方法電泳法帶電質(zhì)點(diǎn)在電場(chǎng)中向電荷相反的方向移動(dòng)，這種性質(zhì)稱(chēng)為電泳蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中移動(dòng)的速度和方向主要取決于蛋白質(zhì)分子所帶的電荷的性質(zhì)、數(shù)量及質(zhì)點(diǎn)的大小和形狀。外界影響因素：電場(chǎng)強(qiáng)度、溶液的pH、離子強(qiáng)度及電滲等根據(jù)電離性質(zhì)不同的分離純化方法電泳法醋酸纖維薄膜電泳：臨床用于血漿蛋白電泳分析。1.濾紙橋2.電泳槽3.醋酸纖維素薄膜4.電泳槽膜支架5.電極室中央隔板醋酸纖維薄膜電泳：1.濾紙橋2.電泳槽3.醋酸纖維聚丙烯酰胺凝膠電泳:它以聚丙烯酰胺凝膠為支持物，具有電泳和凝膠過(guò)濾的特點(diǎn)聚丙烯酰胺凝膠電泳:等電聚焦電泳兩性電解質(zhì)作為支持物，電泳時(shí)即形成一個(gè)由正到負(fù)極逐漸增加的pH梯度。分辨率高，pl相差0.02pH單位即可分開(kāi)等電聚焦電泳兩性電解質(zhì)載體，實(shí)際上是許多異構(gòu)和同系物的混合物，它們是一系列多羧基多氨基脂肪族化合物，分子量在300~1000之間。載體兩性電解質(zhì)是一系列不同分子的兩性電解質(zhì)的混合物,在通電后，它們各自遷移到適當(dāng)位置形成一個(gè)連續(xù)的pH梯度。對(duì)兩性電解質(zhì)的要求是緩沖能力強(qiáng)，有良好的導(dǎo)電性，分子量要小，不干擾被分析的樣品等。兩性電解質(zhì)載體，實(shí)際上是許多異構(gòu)和同系物的混合物，它們是一系凝膠中加有兩性電解質(zhì)溶液（pH9-3）

加電場(chǎng)后在凝膠內(nèi)形成一個(gè)穩(wěn)定pH梯度

加樣品，然后繼續(xù)電泳凝膠染色表明樣品按照各自pI值沿著pH梯度分布凝膠中加有兩性電解質(zhì)溶液（pH9-3）加電場(chǎng)后在凝膠等電聚焦電泳進(jìn)行過(guò)程中等電聚焦電泳結(jié)束后（＋）（＋）（－）（－）高pH高pH低pH低pH等電聚焦電泳進(jìn)行過(guò)程中等電聚焦電泳結(jié)束后（＋）（＋）（－）（免疫電泳電泳技術(shù)和抗原與抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，一般以瓊脂或瓊脂糖凝膠為支持物。方法是先將抗原中各蛋白質(zhì)組分經(jīng)凝膠電泳分開(kāi)，然后加入特異性抗體經(jīng)擴(kuò)散可產(chǎn)生免疫沉淀反應(yīng)。免疫電泳免疫電泳免疫電泳二維電泳根據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和相對(duì)分子量采用等電聚焦方式和SDS在兩個(gè)相互垂直的方向上進(jìn)行分離。雙向電泳的第一向?yàn)榈入娋劢梗ǖ入婞c(diǎn)信息），第二向?yàn)镾DS（分子量信息）。是目前所有電泳技術(shù)中分辨率最高，信息量最多的技術(shù)。二維電泳第一向電泳：等電聚焦電泳聚焦后凝膠放置在SDS凝膠上，進(jìn)行第二向電泳第二向電泳：SDS分子量大分子量小pH9pH3pH9pH3第一向電泳：等電聚焦電泳聚焦后凝膠放置在SDS凝膠上，進(jìn)行第密度梯度離心課件大腸桿菌全蛋白提取液雙向電泳凝膠染色后照片大腸桿菌全蛋白提取液雙向電泳凝膠染色后照片利用離子交換基質(zhì)上的可解離活性基團(tuán)對(duì)各種蛋白結(jié)合力不同而達(dá)到分離目的的一種分離方法常用的支持基質(zhì)：纖維素，瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠、樹(shù)脂——CH2COO-H+——DEAE+Cl-活性基團(tuán)：陽(yáng)離子：羧甲基（CM）陰離子：二乙基氨基乙基（DEAE）由于蛋白質(zhì)分子具有兩性性質(zhì)，所以可用陽(yáng)離子交換劑，也可用陰離子交換劑進(jìn)行蛋白的分離純化。離子交換層析利用離子交換基質(zhì)上的可解離活性基團(tuán)對(duì)各種蛋白結(jié)合力不同而達(dá)到陰離子交換層析分離蛋白質(zhì)陰離子交換層析分離蛋白質(zhì)陽(yáng)離子交換層析原理洗脫方法：改變鹽濃度和改變pH的方法陽(yáng)離子交換層析原理洗脫方法：改變鹽濃度和改變pH的方法親和層析(affinitychromatography)利用生物分子與配基之間所具有的專(zhuān)一而又可逆的親和力，使生物分子分離純化的技術(shù)。這種分離純化方法專(zhuān)一性強(qiáng)，理論上可以從復(fù)雜的體系中一步提取所需的物質(zhì)。免疫親和層析：抗原—抗體凝集素親和層析：糖—凝集素金屬螯和層析：如NTA-Ni—poly-His根據(jù)配基特異性的分離純化方法親和層析(affinitychromatography)利密度梯度離心課件氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)類(lèi)生物藥物(一)氨基酸及其衍生物1.AA營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及其與疾病治療關(guān)系①八種必需氨基酸：

是人體必需從食物中獲取的營(yíng)養(yǎng)物②胱氨酸、酪氨酸為非必需AA，但由蛋氨酸、苯丙氨酸產(chǎn)生所以食物中若有足夠的胱氨酸和Tyr，可以減少對(duì)Met和Phe的需求量，故胱氨酸和Tyr也稱(chēng)為半必需氨基酸。③Lys對(duì)嬰幼兒來(lái)說(shuō)具有特殊的重要意義賴(lài)氨酸的需求量，按每天每kg體重計(jì)算，成年人為12mg，1歲以下嬰幼兒為103mg。密度梯度離心課件谷氨酸谷氨酰胺乙酰谷酰胺鋁組胺酸鹽酸鹽

甘氨酸及其鋁鹽谷氨酸鹽酸鹽

通過(guò)調(diào)節(jié)胃液酸堿度，實(shí)現(xiàn)治療作用通過(guò)保護(hù)消化道粘膜或促進(jìn)粘膜增生而防治胃及十二指腸潰瘍2.治療消化道疾病的氨基酸谷氨酸通過(guò)調(diào)節(jié)胃液酸堿度，實(shí)現(xiàn)治療作用通過(guò)保護(hù)消化道精氨酸鹽酸鹽磷葡精氨酸鳥(niǎo)天氨酸谷氨酸鈉瓜氨酸賴(lài)氨酸鹽酸鹽天冬氨酸3.治療肝病的氨基酸及其衍生物支鏈氨基酸精氨酸鹽酸鹽3.治療肝病的氨基酸及其衍生物支鏈氨基酸4.治療腦及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的氨基酸及其衍生物谷氨酸鈣鹽及鎂鹽——維持神經(jīng)肌肉正常興奮，治療神經(jīng)衰弱氫溴酸，谷氨酸鈉官能癥

γ—酪氨酸——中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制性遞質(zhì)，治療記憶、色氨酸語(yǔ)言障礙、腦外傷后遺癥5—羥色氨酸酪氨酸亞硫酸鹽——治療脊髓灰質(zhì)炎、結(jié)核性腦膜炎4.治療腦及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的氨基酸及其衍生物谷氨酸鈣鹽及鎂鹽偶氮絲氨酸——治療白血病氯苯丙氨酸——治療癌癥綜合癥磷乙天冬氨酸——治療B16黑色素瘤及Lewis肺癌

氨基酸藥物中治療作用比較顯著的多數(shù)是其衍生物。5.用于腫瘤治療的氨基酸及其衍生物偶氮絲氨酸——治療白血病5.用于腫瘤治療的氨基酸及其衍生物密度梯度離心課件（二）多肽類(lèi)藥物1.多肽激素：促皮質(zhì)素（ACTH）

促黑激素（MSH）垂體多肽激素脂肪水解激素（LPH）

催產(chǎn)素（OT）

加壓素（AVP）

促甲狀腺激素釋放激素（TRH）下丘腦激素生長(zhǎng)素抑制激素（GRIF）

促性腺激素釋放激素（LHRH）

甲狀腺激素甲狀旁腺激素（PTH）

降鈣素（CT）（二）多肽類(lèi)藥物胰島激素胰高血糖素（不包括胰島素，因?yàn)橐葝u素是蛋白）胰解痙多肽

胃泌素膽囊收縮素—促胰酶素（CCK—PZ）

腸泌素胃腸道激素腸血管活性肽抑胃肽(GIP)

緩激肽

P物質(zhì)

胸腺素胸腺激素胸腺肽胸腺血清因子密度梯度離心課件2.多肽類(lèi)細(xì)胞因子這是一類(lèi)目前研究十分活躍的多肽類(lèi)藥物。①已批準(zhǔn)生產(chǎn)的細(xì)胞因子多肽藥物名稱(chēng)適應(yīng)癥IFNα白血病、Kaposi肉瘤、肝炎、癌癥、AIDSIFNγ慢性肉芽腫、生殖器疣、過(guò)敏性皮炎、感染性疾病、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎G-CSF自身骨髓移植、化療導(dǎo)致的粒細(xì)胞減少癥、AIDS、白血病、再生障礙性貧血GM-CSF自身骨髓移植、化療導(dǎo)致的粒細(xì)胞減少癥、AIDS、再生障礙性貧血、MDSEPO慢性腎衰竭導(dǎo)致的貧血、癌癥或癌癥化療導(dǎo)致的貧血、失血后貧血IL-2癌癥、免疫缺陷、疫苗佐劑IFNβ多發(fā)性硬化癥TF免疫缺陷癥、病毒感染、腫瘤EGF燒傷2.多肽類(lèi)細(xì)胞因子名稱(chēng)適應(yīng)癥IFNα白血病、Kaposi肉瘤②已批準(zhǔn)臨床試驗(yàn)的細(xì)胞因子多肽藥物名稱(chēng)適應(yīng)癥IL-1α放化療所導(dǎo)致的骨髓抑制、癌癥IL-1β同上、促進(jìn)傷口愈合IL-3骨髓衰竭、血小板缺乏、自身骨髓移植、化療佐劑、外周血干細(xì)胞移植IL-4免疫缺陷、癌癥、疫苗佐劑IL-6放化療所導(dǎo)致的血小板減少、癌癥、疫苗佐劑M-CSF癌癥、白血病、骨髓移植、降膽固醇TNF癌癥干細(xì)胞因子（SCF）骨髓衰竭TNF-β炎癥IL-11血小板減少癥IL-1受體拮抗劑敗血性休克、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎PIXY321骨髓衰竭名稱(chēng)適應(yīng)癥IL-1α放化療所導(dǎo)致的骨髓抑制、癌癥IL-1β同③有可能用于臨床的細(xì)胞因子多肽藥物名稱(chēng)適應(yīng)癥IL-7免疫缺陷、血小板減少癥IL-8腫瘤局部治療IL-9造血功能障礙、免疫缺陷IL-10感染、炎癥IL-12癌癥IL-13感染、炎癥、移植排斥MIF（巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子）感染、疫苗佐劑MIP（巨噬細(xì)胞炎癥蛋白）感染、腫瘤MCP（巨噬細(xì)胞趨化因子）感染、腫瘤LIF（白血病抑制因子）白血病、造血功能障礙GIF（糖基化抑制因子）炎癥名稱(chēng)適應(yīng)癥IL-7免疫缺陷、血小板減少癥IL-8腫瘤局部治療

3.含有多肽成份的其它生化藥物

骨寧——抗關(guān)節(jié)炎、鎮(zhèn)痛眼生素——用于眼科疾病腦氨肽——作用類(lèi)似