高效液相色譜

高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定雞蛋中氯霉素殘留量的不確定度評(píng)定作者：黃偉蓉,張朋杰,張憲臣,陳麗斯,楊蕙,盧俊文,陳潤(rùn)雯來(lái)源：《現(xiàn)代食品》2018年第24期摘要：對(duì)高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)雞蛋中氯霉素殘留的測(cè)量不確定度進(jìn)行評(píng)定。參照GB/T22338-2008中的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法檢測(cè)雞蛋樣品，依據(jù)測(cè)量不確定度評(píng)定的相關(guān)指導(dǎo)文件建立了不確定度數(shù)據(jù)模型，分析了檢測(cè)過(guò)程中可能引入的不確定度來(lái)源，并算出測(cè)量結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度。當(dāng)雞蛋樣品中殘留量為0.493ug?kg-1時(shí)，其擴(kuò)展不確定度為U=0.0203X2=0.0406ug?kg-1，氯霉素殘留量為（0.493±0.0406）ug?kg-l（k=2）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中引入的不確定度對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較大的主要有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制、樣品重復(fù)測(cè)定、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合以及儀器定量校準(zhǔn)；而標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱(chēng)量、樣品稱(chēng)重質(zhì)量、最終定容體積以及樣品回收率等引入的不確定度分量對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響相對(duì)較小。關(guān)鍵詞：高效液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法；雞蛋；氯霉素；不確定度評(píng)定氯霉素是一種廣譜性抗生素，對(duì)革蘭氏陰性菌和陽(yáng)性菌均有良好的抑制作用，廣泛應(yīng)用于動(dòng)物細(xì)菌感染的臨床治療；但也能引起人的再生障礙性貧血、粒狀白細(xì)胞缺失癥、新生兒灰色綜合癥等［1-2］；因此食品中氯霉素的殘留會(huì)對(duì)人體健康造成嚴(yán)重危害。中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》將氯霉素列入禁用藥，其檢測(cè)限為0.1Ug?kg-1。我國(guó)規(guī)定在雞肉中的殘留限量為100Ug?kg-1,這一限度不會(huì)引起骨髓抑制或再生障礙性貧血，但對(duì)胚胎有毒性，妊娠動(dòng)物禁用，產(chǎn)蛋雞禁用，在雞蛋中不得檢出［3］。雞蛋也是動(dòng)物源性食品的重要部分，因此準(zhǔn)確測(cè)定雞蛋中氯霉素的殘留量具有重要意義。而不確定度的大小直接反應(yīng)了測(cè)量水平的高低，對(duì)質(zhì)量控制具有重要意義；因此為了檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果的可信度，本研究參考了GB/T22338-2008《動(dòng)物源性食品中氯霉素類(lèi)藥物殘留量測(cè)定》中的高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法檢測(cè)雞蛋中的氯霉素殘留量，并根據(jù)CNAS-GL06-2006《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》［4］，JJF1059.1-2012《測(cè)量不確定度與表示》［5］及JJG196-2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》［6］等相關(guān)指導(dǎo)性文件，建立了一套合理、完整的雞蛋中氯霉素殘留量的不確定度評(píng)估方案［7-11］。儀器與試劑ABSciexTripleQuad5500液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜：配電噴霧離子源（ESI）（美國(guó)AB公司）；天平HF-2000，感量0.01g；SartoriusBSA2245，感量0.0001g。攪拌機(jī)、振蕩器、離心機(jī)、氮吹儀、移液器（100UL、200uL、100nL）以及100mL容量瓶，A級(jí)。氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品，純度299.24%；氘代氯霉素內(nèi)標(biāo)，純度299.9%。乙酸乙酯，甲醇，正己烷：色譜純；無(wú)水硫酸鈉、氨水：分析純；0.22um有機(jī)相濾膜；實(shí)驗(yàn)室一級(jí)水。方法樣品的選擇和制備從市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)1kg鮮雞蛋作為試樣。取鮮雞蛋約500g,去殼經(jīng)高速組織攪拌機(jī)均勻搗碎混勻，裝入潔凈容器，密封，待測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制濃度為100ug?mL-1的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：按純度折算準(zhǔn)確稱(chēng)取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.0100g,置于100mL容量瓶中，用甲醇超聲溶解稀釋并定容至刻度，搖勻。濃度為1ug?mL-1的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間液：用移液器準(zhǔn)確移取濃度為100ug?mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。濃度為5ng?mL-1的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液：用移液器準(zhǔn)確移取濃度為1Ug?mL-1的標(biāo)準(zhǔn)中間液0.5mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。樣品前處理準(zhǔn)確稱(chēng)取攪拌均勻的雞蛋樣品5g（精準(zhǔn)至0.01g）置于50mL離心管，依次加入15mL乙酸乙酯，0.5mL氫氧化銨，5g無(wú)水硫酸鈉，振搖10min，4500r?minT離心10min，吸取上清液到另一50mL離心管中。另取15mL乙酸乙酯和0.5mL氫氧化銨溶解殘?jiān)?，重?fù)提取一次。將兩次提取液合并，并渦旋混勻。取6mL提取液于氮吹管中在50°C下吹至近干，加2mL水溶解，溶解后加3mL10%甲醇飽和正己烷渦旋混合，4500r?min-1離心5min，棄去上清液，用10%甲醇飽和正己烷重復(fù)凈化一次。取下層過(guò)0.2nm濾膜供高效液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)儀。儀器條件色譜條件色譜柱：C18柱（2.1mmX100mm，3.0nm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脫條件：0?2min，25%A；2?4min，80%A；4?6min，25%A；流速0.4mL?minT；柱溫：35C；進(jìn)樣量：10uLo質(zhì)譜條件電噴霧離子源（ESI）；負(fù)離子模式采集；噴霧電壓：-4500V；氣簾氣流速：30L?min-1;錐孔氣流速：45L?min-1；去溶劑氣流速：50L?min-1；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式（MRM）。

6結(jié)果與討論本實(shí)驗(yàn)使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)雞蛋樣品中氯霉素殘留量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果顯示，當(dāng)雞蛋樣品中殘留量為0.493ug?kg-1時(shí)，其擴(kuò)展不確定度為U=0.0203X2=0.0406Ug?kg-1。測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確度較高，適用于雞蛋中氯霉素的殘留檢測(cè)。通過(guò)表3可知，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中引入的不確定度對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較大的主要分量有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的配制、樣品重復(fù)測(cè)定、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、儀器定量校準(zhǔn)；而標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱(chēng)量、樣品稱(chēng)重質(zhì)量、最終定容體積、樣品回收率等過(guò)程引入的不確定度分量對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響相對(duì)較小。因此在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)調(diào)整儀器使之達(dá)到最佳狀態(tài)，制備樣品時(shí)使樣品充分均勻，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確、穩(wěn)定及可