HPLC的實(shí)際應(yīng)用課件

周茜2014.10.31高效液相色譜（HPLC）在實(shí)際樣品分析中的應(yīng)用復(fù)雜基質(zhì)中抗生素殘留分析

環(huán)境水樣中全氟羧酸類化合物分析4123完整的HPLC方法建立3復(fù)雜基質(zhì)中抗生素殘留分析研究背景研究思路研究結(jié)果1濫用抗生素后果江蘇省范圍內(nèi)145個(gè)集約化養(yǎng)殖場(chǎng)81個(gè)雞糞樣品中，金霉素檢出率為42.2%，最大濃度達(dá)71.17mgkg-1；土霉素的檢出率為15.6%，最大濃度為16.64mgkg-1；強(qiáng)力霉素的檢出率為23.4%，最大濃度為26.05mgkg-1；上海黃浦江養(yǎng)豬場(chǎng)的養(yǎng)殖污水及污水貯流池連通的農(nóng)田灌溉渠中均檢出抗生素，2種四環(huán)素抗生素總量為294.0~376.1μgL-1；

長期施用動(dòng)物排泄物的表層土壤中，土霉素和四環(huán)素的最大殘留量高達(dá)32.3和26.4mg/kg。我國養(yǎng)殖業(yè)抗生素年排放3-4萬噸，再利用后導(dǎo)致水體、農(nóng)田、土壤和植物富集建立高效、準(zhǔn)確的抗生素分析方法我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)年消耗抗生素9.7萬噸

四環(huán)素類66％，大環(huán)內(nèi)酯類12％，青霉素類9％，其余抗生素為12％常用的四環(huán)素類有土霉素（OTC）、四環(huán)素（TC）、金霉素（CTC）、強(qiáng)力霉素（DC）R1R2R3pKa1pKa2pKa3OTCHOHOH3.37.39.1CTCClOHH3.37.89.6TCHOHH3.37.69.3DCHHOH3.17.79.3含四環(huán)素樣品測(cè)定存在的兩大難題1、基體干擾嚴(yán)重四環(huán)素和蛋白質(zhì)鍵合模式Z.X.Chietal./Biomacromolecules12(2011)203–209U.Anandetal./J.Phys.Chem.B115(2011)6312–6320四環(huán)素對(duì)蛋白質(zhì)熒光的影響2、某些基質(zhì)中四環(huán)素濃度低MRLs：肌肉組織100ug

L-1；肝臟300ug

L-1；雞蛋200ug

L-1研究思路1、消除樣品中蛋白質(zhì)干擾2、找尋樣品富集凈化技術(shù)檢測(cè)痕量組分復(fù)雜的體系將待測(cè)組分與母體或基體分離濃縮痕量的被測(cè)組分一個(gè)完整的固相萃取步驟包括固相萃取柱的預(yù)處理、上樣、洗去干擾物質(zhì)、分析物洗脫四個(gè)步驟。超聲酶解處理后，不同濃度蛋白質(zhì)溶液中TCs回收率超聲酶解法能快速破壞蛋白質(zhì)與四環(huán)素類抗生素的作用力，實(shí)現(xiàn)樣品中四環(huán)素類抗生素的準(zhǔn)確測(cè)定On-lineSPE：萃取和分離檢測(cè)是同時(shí)進(jìn)行的兩個(gè)過程，人工操作減少，有機(jī)試劑消耗量少。Off-lineSPE：萃取和分離檢測(cè)是分開進(jìn)行的兩個(gè)過程，需要經(jīng)過富集、洗脫、濃縮、定容等多個(gè)步驟才能完成，有耗時(shí)、溶劑消耗量大等缺點(diǎn)。Off-lineSPEvsOn-lineSPE在線固相萃?。∣n-lineSPE）

常規(guī)液相四元梯度泵雙三元液相二個(gè)并聯(lián)的三元梯度泵在線固相萃取步驟樣品基質(zhì)的完全餾出時(shí)間：tM分析物開始餾出時(shí)間：tG分析物的洗脫時(shí)間：tA閥切換上樣溶劑洗脫溶劑

環(huán)境水樣中全氟羧酸類化合物分析2研究背景研究思路研究結(jié)果PFCs(perfluorinatedcarboxylicacids)主要性質(zhì)

分子中與碳相連的氫被氟取代的一類有機(jī)化合物

通式為F-(CF2)n-COOH

用途：泡沫滅火劑的添加劑、電子元件助焊劑、紡織品服裝防水、金屬酸洗緩蝕劑和防腐抑制劑耐熱性、耐化學(xué)品性、紫外穩(wěn)定性，是目前最難降解的有機(jī)污染物之一環(huán)境殘留PFCs暴露水平

環(huán)境水中最主要PFCs類污染物為PFOA和PFOS海水中濃度一般在pg

L-1-ngL-1地表水中濃度一般在ngL-1-mgL-1地下水中的濃度則為μgL-1在污水處理廠污水的濃度范圍一般在ngL-1-mgL-1eg.某氟化工廠未經(jīng)過處理的污水中PFOA含量可高達(dá)559-1449mgL-1HoriHetal.EnvironmentalScience&Technology,2004,38(22):6118PFCs檢測(cè)方法測(cè)定方法檢測(cè)器優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)HPLCMS（四級(jí)桿/飛行時(shí)間）定性能力強(qiáng)，靈敏度高儀器昂貴，基質(zhì)效應(yīng)嚴(yán)重電導(dǎo)檢測(cè)器檢出限低線性范圍廣不能梯度洗脫，不適于復(fù)雜基質(zhì)熒光檢測(cè)器靈敏度高干擾多，需衍生GC電子捕獲檢測(cè)器選擇性強(qiáng)靈敏度高需衍生氫火焰離子化檢測(cè)器選擇性好需衍生，檢出限較高M(jìn)S定性能力強(qiáng)，靈敏度高需衍生CAD工作原理定量原則：A=aMbA：峰面積；M：化合物質(zhì)量分?jǐn)?shù)，a，b:數(shù)值取決于分析物和色譜條件取對(duì)數(shù)后：logA=blogM+loga①HPLC洗脫液入口②氮?dú)馊肟冖垤F化室④廢液管⑤干燥管⑥Corona電極⑦碰撞室⑧離子阱⑨采集器⑩靜電計(jì)3.1了解目標(biāo)物性質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)存在形式理化性質(zhì)耐受