抗壞血酸(維生素C)含量的測定

抗壞血酸（維生素C）含量的測定維生素C（VitaminC）又稱抗壞血酸，一般水果、蔬菜中維生素C的含量均較高，不同的水果、蔬菜品種，以及同一品種在不同栽培條件、不同成熟度等情況下，其維生素C的含量都有所不同。測定維生素C含量，可以作為果蔬品質(zhì)指標(biāo)之一。I滴定法一、原理維生素C具有很強(qiáng)的還原性，染料2，6~二氯酚靛酚（2，6-dichlorophenolin-dophenol）具有較強(qiáng)的氧化性，且在酸性溶液中呈紅色，在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色。因此當(dāng)用藍(lán)色的堿性2，6-二氯酚靛酚溶液滴定含有抗壞血酸的草酸溶液時，其中的抗壞血酸可以將2，6-二氯酚靛酚還原成無色的還原型。但當(dāng)溶液中的抗壞血酸完全被氧化之后，則再滴2，6-二氯酚靛酚就會使溶液呈紅色。借此可以指示滴定終點，根據(jù)滴定用去的標(biāo)準(zhǔn)2，6-二氯酚靛酚溶液的量，可以計算出被測樣品中抗壞血酸的含量。二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料新鮮水果或蔬菜。（二）儀器設(shè)備蒸發(fā)皿，小研缽及杵一套，移液管，漏斗，濾紙，容量瓶，微量滴定管。試劑（1）2%草酸。（2）2，6-二氯酚靛酚（NaOC6（H4NC6H2OCl2，相對分子質(zhì)量為290.09）：將50mg2，6-二氯酚靛酚染料溶解于200mL含有52mgNaHCO3，的熱水中，冷卻后，稀釋至250mL、裝人棕色瓶內(nèi)，放在冰箱里保存（因該染料性質(zhì)不穩(wěn)定，配制后超過一周必須重新配制）。標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液：將50mg純抗壞血酸溶解于少量2%草酸溶液中，然后用2%草酸溶液定容至500mL（使用前臨時配制）。三、實驗步驟（1）稱取水果和蔬菜樣品10g，放在研缽中加入2%草酸溶液約5mL研碎。通過漏斗將研碎的樣品倒入一只100mL的容量瓶中，研缽及杵用2%草酸沖洗、并將洗液一并倒入該容量瓶中，最后用2%草酸定容到刻度，過濾、濾液備用。（2）染料的標(biāo)定：取10mL標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液至蒸發(fā)皿中，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至粉紅色，并在30s內(nèi)不褪色為終點。計算1mL染料相當(dāng)于抗壞血酸的毫克數(shù)（重復(fù)3次，取平均值）。（3）取濾液10mL于蒸發(fā)皿中，用已標(biāo)定過的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至粉紅色，并且在30s內(nèi)不褪色為止，記下染料的用量（重復(fù)3次，取平均值）。計算Ⅱ比色法常規(guī)測定抗壞血酸的方法是采用2，6-二氯酚靛酚滴定法，但因某些葉片中花青素量較高，當(dāng)用酸提取時呈紅色，因而無法滴定。本試驗采用二甲苯萃取比色法，則不受花青素的干擾。一、原理向一定量提取液中加入過量的2.6-二氯酚靛酚染料溶液與維生素C作用后，多余染料用二甲苯萃取比色。待測液中抗壞血酸的含量與二甲苯萃取的顏色呈線性負(fù)相關(guān)，即待測液中抗壞血酸含量越多，未被還原的染料就越少，二甲苯萃取的顏色也就越淺。由于水溶性的花青素不溶于二甲苯，因而不影響測定結(jié)果。二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料新鮮甘藍(lán)葉片、白蘿卜等。（二）儀器設(shè)備722型分光光度計、容量瓶，研缽，不銹鋼刀，具塞大試管。試劑（1）1%草酸。（2）2%草酸。（3）30%硫酸鋅。（4）15%亞鐵氰化鉀。（5）染料溶液：稱取100mg2，6-二氧酚靛酚和82mg碳酸氫鈉溶于約60mL熱水中，過濾定容至100mL容量瓶中，倒入棕色試劑瓶存放于冰箱內(nèi)。使用時稀釋4倍，此溶液每毫升約相當(dāng)于0.1mg的維生素C。6.抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取100mg分析純抗壞血酸，溶于1%草酸，定容至100mL，再從中吸取5mL，用1%草酸再稀釋至100mL，稀釋后每毫升含抗壞血酸0.05mg（標(biāo)準(zhǔn)溶液在使用前臨時配制）。7.二甲苯：分析純（本法使用過的二甲苯可用20%NaOH中和后、蒸餾回收）。三、實驗步驟1.標(biāo)準(zhǔn)曲線取具塞大試管6個，分別吸取抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0ml、1mL、2mL、2.5mL、3mL、4mL，用1%草酸補充至4mL。各管中抗壞血酸含量相應(yīng)為0、0.05mg、0.10mg、0.125mg、0.15mg、0.20mg。各管中加入染料溶液2mL，隨即加入二甲苯5mL，迅速搖動約0.5min，靜置后二甲苯與水層分離，將上層二甲苯萃取液輕輕倒入1cm比色杯，在500mm波長下測定吸光度。以二甲苯作空白調(diào)零，求得標(biāo)準(zhǔn)系列抗壞血酸毫克數(shù)與相應(yīng)的吸光度值的回歸方程。2.樣品提取取新鮮蔬菜洗凈，擦干，在玻板上用不銹鋼刀切碎混勻。稱取2g樣品放至研缽中，加入3mL2%草酸研磨至勻漿，然后將勻漿倒至100mL容量瓶中，殘渣用1%草酸沖洗，洗液一并倒至容量瓶中，加入1mL30%硫酸鋅，搖動容量瓶，再加入1mL15%亞鐵氰化鉀，以除去脂溶性色素，再用1%草酸定容至刻度，搖勻后過濾到干凈小燒杯中。3.測定取上述提取液4mL（若抗壞血酸含量高，可適當(dāng)減少取量，不足4mL的可用1%草酸補足至4mL）至具塞大試管中，依次加