最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件

上海師范大學(xué)植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件上海師范大學(xué)植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件1植物組織滲透勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)植物組織細(xì)胞內(nèi)的汁液其周?chē)哪撤N溶液處于滲透平衡狀態(tài)，植物細(xì)胞內(nèi)的壓力勢(shì)為零時(shí)，細(xì)胞汁液的滲透勢(shì)就等于該溶液的滲透勢(shì)。這種滲透勢(shì)相等的溶液為等滲溶液。該溶液的濃度稱(chēng)為等滲濃度。當(dāng)用一系列梯度濃度溶液觀(guān)察細(xì)胞質(zhì)壁分離現(xiàn)象時(shí)，細(xì)胞的等滲濃度將介于剛剛引起初始質(zhì)壁分離的濃度和尚不能引起質(zhì)壁分離的濃度之間的溶液濃度。代入公式即可計(jì)算其滲透勢(shì)。植物組織滲透勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理2最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件3最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件4最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件5最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件6最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件7最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件8植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟用1.00mol/L蔗糖母液配制一系列不同濃度的蔗糖溶液（0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L）各10mL，分別注入編好號(hào)的7支對(duì)照組試管中。另取7個(gè)青霉素小瓶對(duì)應(yīng)試管編號(hào)，從對(duì)照管中分別吸2mL溶液入相同編號(hào)的試驗(yàn)組小瓶中。用打孔器在葉片中部靠近主脈附近打取葉圓片，隨機(jī)取樣，每試驗(yàn)組小瓶中放入30片葉圓片，加塞，放置30min，其間搖動(dòng)數(shù)次。植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟9植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟到時(shí)間后，用解剖針沾取少許甲烯藍(lán)粉末加入小瓶中，并震蕩，此時(shí)溶液呈藍(lán)色。用7支毛細(xì)滴管從試驗(yàn)組小瓶中依次吸取著色的液體少許，伸入同號(hào)對(duì)照組溶液的中部，緩慢放出藍(lán)色溶液，輕輕取出滴管，觀(guān)察藍(lán)色液滴的移動(dòng)方向。根據(jù)公式計(jì)算葉片細(xì)胞的水勢(shì)ψw=

-icRTi為解離系數(shù)，蔗糖為1；c為小液滴在其中基本不動(dòng)的溶液的濃度，單位為mol/L；R為摩爾氣體常數(shù)，R=0.0083L·MPa/mol·K；T為熱力學(xué)溫度，單位K植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟10植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

外液濃度mol/L小液滴移動(dòng)方向組織水勢(shì)與外液水勢(shì)比較組織水勢(shì)計(jì)算0.050.10.20.30.40.50.6植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果外液濃度mol/L11植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果在0.05、0.1mol/L溶液中液滴下降，說(shuō)明葉片細(xì)胞水勢(shì)小于外液水勢(shì)，細(xì)胞吸水，外液密度變大；在0.3、0.4、0.5、0.6mol/L溶液中液滴上升，說(shuō)明葉片細(xì)胞水勢(shì)大于外液水勢(shì)，細(xì)胞失水，外液密度變小在0.2mol/L溶液中液滴基本不動(dòng)，說(shuō)明細(xì)胞水勢(shì)與此外液的滲透勢(shì)相等實(shí)驗(yàn)所測(cè)葉片細(xì)胞水勢(shì)

=-1×0.2×0.0083×（273+20）=-0.48638MPa實(shí)驗(yàn)溫度為20℃

植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果12植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)原理植物的生長(zhǎng)發(fā)育，除需要充足的陽(yáng)光和水分外，還需要礦質(zhì)元素，否則植物就不能很好地生長(zhǎng)發(fā)育甚至死亡。應(yīng)用溶液培養(yǎng)技術(shù)，可以觀(guān)察礦質(zhì)元素對(duì)植物生活的必需性；用溶液培養(yǎng)做植物的營(yíng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，可以避免土壤里的各種復(fù)雜因素。植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)原理13植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分析天平，培養(yǎng)缸，燒杯，移液管實(shí)驗(yàn)材料玉米（或番茄、蓖麻、小麥）種子植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)器材與試劑14植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)試劑按下表配制貯備液藥品名稱(chēng)用量/（g?L－1）藥品名稱(chēng)用量/（g?L－1）Ca(NO3)282.07CaCl255.50KNO350.56KCl37.28MgSO4·7H2O61.62Fe-EDTANa-EDTA7.45g，F(xiàn)eSO4·7H2O5.57gKH2PO427.22NaH2PO424.00微量元素H3BO32.860g，MnSO41.015g，CuSO4·5H2O0.079g，ZnSO4·7H2O0.220g，H2MoO40.090gNaNO342.45MgCl223.81Na2SO435.51植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)器材與試劑藥品名稱(chēng)用量/（g?L－1）15植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)步驟材料準(zhǔn)備種子用漂白粉溶液滅菌30min，用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，然后放在洗凈的石英砂中發(fā)芽，加蒸餾水，等幼苗長(zhǎng)出第一真葉時(shí)待用。植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)步驟16植物的元素缺乏癥配制缺元素培養(yǎng)液貯備液貯備液/mL完全－N－P－K－Ca－Mg－S－FeCa(NO3)25－55－555KNO35－5－5555MgSO4·7H2O55555－－5KH2PO455－－5555NaH2PO4－－－5－－－－Fe-EDTA0.50.50.50.50.50.50.5－微量元素0.50.50.50.50.50.50.50.5NaNO3－－－55－－－MgCl2－－－－－－5－Na2SO4－－－－－5－－CaCl2－5－－－－－－KCl－52－－－－－植物的元素缺乏癥配制缺元素培養(yǎng)液貯備液貯備液/mL完全－N－17植物的元素缺乏癥配制時(shí)先于棕色瓶中加入300mL蒸餾水，然后加貯備液，最后配成500mL，用稀酸、堿調(diào)節(jié)至pH5～6。選取大小一致的植株，小心剝?nèi)ナＳ嗯呷?，用棉花包裹莖部，穿過(guò)瓶蓋小孔，使根部浸入培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶移到溫室中，注意管理并觀(guān)察記錄植株的生長(zhǎng)情況，各種元素缺乏癥的癥狀及出現(xiàn)的部位。植物的元素缺乏癥配制時(shí)先于棕色瓶中加入300mL蒸餾水18植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)結(jié)果植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)結(jié)果19硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理硝酸還原酶是植物氮素代謝作用中的關(guān)鍵性酶，與作物吸收和利用氮肥有關(guān)。它作用于NO3－使之還原為NO2－：NO3－＋NADH＋H+→NO2－＋NAD+＋H2O產(chǎn)生的NO2－可以從組織內(nèi)滲透到外界溶液中，并積累在溶液中，測(cè)定反應(yīng)液中NO2－含量的增加，即表現(xiàn)該酶活性的大小。硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理20硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理NO2－含量的測(cè)定用磺胺（對(duì)氨基苯磺酸胺）比色法。在酸性溶液中磺胺與NO2－形成重氮鹽，再與α-萘胺偶聯(lián)形成紫紅色的偶氮染料。反應(yīng)液的酸度大，則增加重氮化作用的速度，但降低偶聯(lián)作用的速度，顏色比較穩(wěn)定。增加溫度可以增加反應(yīng)速度，但降低重氮鹽的穩(wěn)定度。所以反應(yīng)需要在相同條件下進(jìn)行。這種方法非常靈敏，能測(cè)定每毫升含0.5μg的NaNO2。硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理21硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分光光度計(jì)，注射器，溫箱，天平，鉆孔器，三角燒瓶，移液管，燒杯，試管實(shí)驗(yàn)試劑0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.5），0.2mol/LKNO3，磺胺試劑，α-萘胺試劑，NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)驗(yàn)材料蓖麻、向日葵、油菜、小麥或棉花的葉子硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑22硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟將新鮮取回的葉片水洗，用吸水紙吸干，然后用鉆孔器打葉圓片，用蒸餾水洗滌2～3次，吸干水分，于分析天平上稱(chēng)取等重的葉圓片兩份。每份約0.3～0.4g（或每份取50個(gè)圓片），分別置于含下列溶液的燒瓶中：①0.1mol/L磷酸緩沖液5mL+蒸餾水5mL；②0.1mol/L磷酸緩沖液5mL+0.2mol/LKNO35mL。用注射器抽氣，至葉圓片沉于溶液中。將燒瓶放入30℃溫箱中，避光保溫30min。硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟23硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟分別吸取反應(yīng)液1mL于試管中，加入磺胺試劑2mL及α-萘胺試劑2mL，混合搖勻，靜置30min，用分光光度計(jì)（520nm）進(jìn)行測(cè)定，記下OD值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出NO2－含量，再計(jì)算酶的活性。硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟24硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟用5μg/mLNaNO2母液稀釋成0.5、1、2、3、4μg/mL的梯度濃度的NaNO2溶液

。分別吸取0.5、1、2、3、4、5μg/mL的NaNO21mL于試管中，加入磺胺試劑2mL及α-萘胺試劑2mL，混合搖勻，靜置30min，用分光光度計(jì)（520nm）進(jìn)行測(cè)定，記下OD值，以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，NaNO2濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟25硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)NaNO2

mol/L磺胺比色法OD520值0.512345對(duì)照反應(yīng)液反應(yīng)液注意：比色空白用1mL水加同樣顯色劑同樣反應(yīng)條件標(biāo)出根據(jù)對(duì)照反應(yīng)液和反應(yīng)液的比色OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出的NaNO2含量硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果NaNO2mol/L磺胺比色法26硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果酶的活性硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果27單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)原理離子間的拮抗現(xiàn)象的本質(zhì)是復(fù)雜的，它可能反映不同離子對(duì)原生質(zhì)親水膠粒的穩(wěn)定性、原生質(zhì)膜的透性，以及對(duì)各類(lèi)酶活性調(diào)節(jié)等方面的相互制約作用，從而維持機(jī)體的正常生理狀態(tài)。單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)原理28單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器燒杯，紗布，石蠟實(shí)驗(yàn)試劑0.12mol/LKCl，0.06mol/LCaCl2，0.12mol/LNaCl（所用藥品均需用分析純）實(shí)驗(yàn)材料小麥種子單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)器材與試劑29單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)前3～4天選擇飽滿(mǎn)的小麥種子100粒浸種，在室溫下萌發(fā)，待根長(zhǎng)1cm時(shí)可用作材料。取4個(gè)小燒杯，分別加入下列溶液0.12mol/LKCl0.06mol/LCaCl20.12mol/LNaCl0.12mol/LNaCl100mL+0.06mol/LCaCl21mL+0.12mol/LKCl2.2mL單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)步驟30單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)步驟小燒杯用涂石蠟的紗布蓋上。挑選大小相等及根系發(fā)育一致的小麥幼苗16株，小心種植在紗布蓋的孔眼里，使根系接觸到溶液，在室溫下培養(yǎng)2～3周后，觀(guān)察幼苗根的生長(zhǎng)情況。培養(yǎng)期間注意補(bǔ)充水分，可更換一次培養(yǎng)液。單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)步驟31單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)結(jié)果在單鹽溶液中小麥幼苗生長(zhǎng)受阻，特別是根部出現(xiàn)畸形。單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)結(jié)果32葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)原理葉綠體色素是植物吸收太陽(yáng)光能進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì)，主要由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。根據(jù)它們?cè)谟袡C(jī)溶劑中的溶解特性，可用丙酮將它們從葉片中提取出來(lái)。并可根據(jù)它們?cè)诓煌袡C(jī)溶劑中的溶解度不同以及在吸附劑上的吸附能力不同，將它們彼此分離開(kāi)。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)原理33葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)原理葉綠素是一種雙羧酸的酯，可與堿發(fā)生皂化反應(yīng)，產(chǎn)生的鹽能溶于水，可用此法將葉綠素與類(lèi)胡蘿卜素分開(kāi)。葉綠素在光照下可產(chǎn)生暗紅色的熒光。葉綠素中的鎂可被H+取代而生成褐色的去鎂葉綠素；加入銅鹽作用，后者則成為綠色的銅代葉綠素。銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易破壞，故常用此法制作綠色植物的浸漬標(biāo)本。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)原理34葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器大試管，臺(tái)天平，研缽，量筒，漏斗，橡皮塞，新華濾紙，毛細(xì)管，剪刀，分液漏斗，燒杯實(shí)驗(yàn)試劑丙酮，碳酸鈣，石英砂，無(wú)水硫酸鈉，四氯化碳，乙醚，甲醇，氫氧化鉀，鹽酸，醋酸銅實(shí)驗(yàn)材料新鮮菠菜葉片葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)器材與試劑35葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的提取分離稱(chēng)取新鮮葉片2g，放入研缽中加丙酮5mL，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成均漿，再加丙酮10mL，以漏斗過(guò)濾之，即為色素提取液。把展層用的濾紙剪成2cm×20cm的紙條，將其一端剪去兩側(cè)，中間留一長(zhǎng)約1.5cm，寬約0.5cm的窄條。用毛細(xì)管吸取葉綠素溶液點(diǎn)于窄條的上方，注意一次所點(diǎn)溶液不可過(guò)多，風(fēng)干后再點(diǎn)，重復(fù)多次。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟36葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的提取分離在大試管中加入四氯化碳3～5mL及少許無(wú)水硫酸鈉。然后將濾紙條固定于軟木塞上，插入試管內(nèi)，使窄條浸入溶劑中（色素點(diǎn)要略高于液面），蓋緊軟木塞，直立于陰暗處進(jìn)行層析。待四種色素帶清晰展開(kāi)后，取出濾紙條，稍干后用鉛筆勾出色素帶邊緣。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟37葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的理化性質(zhì)葉綠素的熒光現(xiàn)象取上述色素提取液少許于試管中，分別在反射光和透射光一側(cè)觀(guān)察提取液的顏色。銅代反應(yīng)取上述色素提取液少許于試管中，1滴1滴加濃鹽酸，直至溶液出現(xiàn)褐綠色。然后加醋酸銅晶體少許，慢慢加熱溶液，則又產(chǎn)生鮮亮的綠色。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟38葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的理化性質(zhì)黃色素與綠色素的分離取上述色素提取液10mL，加到盛有20mL乙醚的分液漏斗中，搖動(dòng)分液漏斗，并沿漏斗邊緣加入30mL蒸餾水，輕輕搖動(dòng)分液漏斗，靜止片刻，溶液即分為兩層。色素已轉(zhuǎn)入上層乙醚中，棄去下層丙酮和水，再用蒸餾水沖洗乙醚溶液1～2次。然后加入5mL30%KOH甲醇溶液，用力搖動(dòng)分液漏斗，靜置約10min，再加蒸餾水約10mL，搖動(dòng)后靜置，則得到黃色素層和綠色素層。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟39葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果葉綠體色素的提取分離濾紙條自上而下的色素帶分別是橙色的胡蘿卜素黃色的葉黃素藍(lán)綠色的葉綠素a黃綠色的葉綠素b葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果40葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果葉綠體色素的理化性質(zhì)葉綠素的熒光現(xiàn)象銅代反應(yīng)黃色素與綠色素的分離葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果41葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素都有光學(xué)特性，表現(xiàn)出一定的吸收光譜，可用分光光度計(jì)精確測(cè)定。如果混合液中的兩個(gè)組分，它們的光譜吸收雖然有明顯的差異，但吸收曲線(xiàn)彼此有些重疊，可根據(jù)Lambert-Beer定律，通過(guò)代數(shù)方法，計(jì)算一種組分由于另一種組分存在時(shí)對(duì)光密度的影響。最后分別得到兩種組分的含量。葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理如果混合42葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理根據(jù)Lambert-Beer定律，最大吸收光譜峰不同的兩個(gè)組分的混合液，它們的濃度C與光密度OD之間有如下關(guān)系：OD1=

Ca·ka1+C

b·kb1OD2=

Ca·ka2+C

b·kb2Ca為組分a的濃度（g·L－1），Cb為組分b的濃度（g·L－1）；OD1為在波長(zhǎng)λ1（即組分a的最大吸收峰波長(zhǎng)）時(shí)，混合液的光密度值，OD2為在波長(zhǎng)λ2（即組分b的最大吸收峰波長(zhǎng)）時(shí)，混合液的光密度值；ka1和ka2分別為組分a的比吸收系數(shù)，kb1和kb2分別為組分b的比吸收系數(shù)葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理43葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理葉綠素a和b的80%丙酮溶液的比吸收系數(shù)將數(shù)據(jù)代入上式經(jīng)整理后，并把濃度單位改為mg/LCa=12.7OD663－2.69OD645Cb=22.9OD663－4.68OD645CT=Ca+Cb=8.02OD663＋20.21OD645波長(zhǎng)/nm葉綠素a葉綠素b66382.049.2764516.7545.60葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理波長(zhǎng)/n44葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分光光度計(jì)，離心機(jī)，臺(tái)天平，研缽，量筒，剪刀，移液管實(shí)驗(yàn)試劑丙酮，碳酸鈣，石英砂實(shí)驗(yàn)材料新鮮菠菜葉片葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑45葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟稱(chēng)取新鮮葉片1g，放入研缽中加丙酮5mL，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成均漿，再加80%丙酮5mL，將勻漿轉(zhuǎn)入離心管，并用80%丙酮洗滌研缽，一并轉(zhuǎn)入離心管，離心后去沉淀，上清液用80%丙酮定容至20mL。取上述色素提取液1mL，加80%丙酮6mL稀釋?zhuān)D(zhuǎn)入比色杯中，以80%丙酮為對(duì)照，在400～500nm波長(zhǎng)區(qū)每隔10nm，在500～600nm波長(zhǎng)區(qū)每隔20nm，在600～700nm波長(zhǎng)區(qū)每隔10nm，測(cè)定光密度，以繪制吸收光譜。另外測(cè)定645nm和663nm處的光密度，以計(jì)算葉綠素a和b的含量。葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟46葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果吸收光譜葉綠素a和b含量計(jì)算波長(zhǎng)/nm400410420430440450460470480490500520540光密度波長(zhǎng)/nm560580600610620630640650660670680690700光密度波長(zhǎng)/nm645663光密度葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果波長(zhǎng)/n47離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)原理在低溫下以等滲溶液制備完整的葉綠體，將其懸浮于適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)介質(zhì)中，并有氧化劑如2，6-二氯酚靛酚（簡(jiǎn)稱(chēng)DCIP）存在時(shí)，在光照下會(huì)放出O2，同時(shí)將染料還原，這就是葉綠體中進(jìn)行的光還原反應(yīng)。染料被還原后，顏色從藍(lán)色變?yōu)闊o(wú)色，因此可根據(jù)溶液OD值的變化進(jìn)行測(cè)定，該變化在4-5min內(nèi)呈線(xiàn)性關(guān)系。離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)原理48離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器離心機(jī)，研缽，天平，紗布，試管，100W燈泡，722型分光光度計(jì)實(shí)驗(yàn)試劑提取介質(zhì)50mmol/L（pH7.5）Tris-HCl緩沖液（內(nèi)含0.4mmol/L蔗糖、10mmol/LNaCl），1mmol/L2，6-DCIP（2，6-二氯酚靛酚）溶液（用上述提取介質(zhì)配制）實(shí)驗(yàn)材料新鮮菠菜葉片離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)器材與試劑49離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)步驟離體葉綠體的提取稱(chēng)取10g新鮮菠菜葉片（去除粗葉脈），剪碎，加10mL預(yù)冷的提取介質(zhì)（分兩次加入）和少許石英砂，冰浴中迅速研磨成勻漿，再加10mL提取介質(zhì)，用4層紗布將勻漿過(guò)濾于一離心管中，2500r/min離心3min，棄沉淀，上清液4000r/min離心10min，棄上清。所得沉淀即為完整葉綠體。用15mL提取介質(zhì)使葉綠體懸浮，置冰浴中備用。離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)步驟50離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體光還原反應(yīng)的測(cè)定取3支潔凈試管，分別編號(hào)，按下表加入試劑：注：2號(hào)管加熱煮沸，然后加染料，3號(hào)管為比色時(shí)的空白對(duì)照將試管置于離100W燈光60cm處照光，3min后于620nm處測(cè)光密度。管號(hào)提取介質(zhì)/mL葉綠體懸液/mL煮沸時(shí)間/min染料/mL14.50.5－124.50.515135.50.5－－離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)步驟管號(hào)提取介質(zhì)/mL51離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)結(jié)果1號(hào)管的OD620值2號(hào)管的OD620值說(shuō)明：離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)結(jié)果52環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)原理植物光合強(qiáng)度的大小受光強(qiáng)、光質(zhì)、CO2濃度、溫度等環(huán)境條件的影響。利用真空滲入法排除細(xì)胞間隙的空氣，使葉片沉于水中。由于光合作用放出的O2在水中溶解度很小，而在細(xì)胞間積累，結(jié)果使原來(lái)下沉的葉片上浮，根據(jù)上浮所需時(shí)間長(zhǎng)短，即能比較光合作用的強(qiáng)弱。環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)原理53環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器打孔器，注射器，100W燈泡，小燒杯實(shí)驗(yàn)材料新鮮青菜葉片環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑54環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)步驟選取健壯、葉齡相似的成熟葉片，用打孔器避開(kāi)主脈打取葉圓片共60片，置于注射器中，注入水，抽氣至葉片沉入水中。取6只小燒杯，各倒入20mL冷開(kāi)水，用吸管向其中5只小燒杯的水中吹氣，使CO2達(dá)到飽和。然后于6只小燒杯中各放入10片葉圓片，分別置于不同的條件下。杯號(hào)光強(qiáng)光質(zhì)CO21強(qiáng)白光飽和2強(qiáng)紅光飽和3強(qiáng)藍(lán)光飽和4強(qiáng)綠光飽和5強(qiáng)白光微量6弱白光飽和環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)步驟杯號(hào)光強(qiáng)光55環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)步驟記錄各燒杯中每一葉圓片上浮所需的時(shí)間，計(jì)算各處理中葉圓片上浮所需的平均時(shí)間或一定時(shí)間內(nèi)上浮的葉圓片數(shù)。比較不同條件下光合作用的強(qiáng)弱。環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)步驟56環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：杯號(hào)葉圓片上浮所需的平均時(shí)間123456環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)結(jié)果杯號(hào)葉圓片57植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)原理利用Ba(OH)2

溶液吸收呼吸過(guò)程中釋放的CO2，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用草酸溶液滴定殘留的Ba(OH)2，從空白和樣品兩者消耗草酸溶液之差，即可計(jì)算出呼吸過(guò)程中釋放CO2的量。植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)原理58植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器廣口瓶，酸式滴定管，紗布實(shí)驗(yàn)試劑0.05mol/LBa(OH)2，1/44mol/L草酸溶液（每mL相當(dāng)于1mgCO2），指示劑實(shí)驗(yàn)材料萌發(fā)的小麥種子植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑59植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)步驟稱(chēng)取萌發(fā)的小麥種子15g，包入紗布袋內(nèi)，將紗布袋掛在廣口瓶的橡皮瓶塞上，注意不要掛得太低。在廣口瓶中加0.05mol/LBa(OH)225mL，塞上瓶塞，用熔化的石蠟密封瓶口，防止漏氣。每10min左右輕輕搖動(dòng)廣口瓶，破壞溶液表面的BaCO3薄膜，以利對(duì)CO2的吸收。1h后，打開(kāi)瓶塞，迅速加2滴指示劑，用1/44mol/L草酸滴定，直到綠色變成紫色為止。記錄所耗用的草酸溶液的體積（mL）數(shù)。植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)步驟60植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)步驟另取同樣重量的煮沸殺死的小麥種子，作同樣測(cè)定，以次作為對(duì)照。計(jì)算呼吸強(qiáng)度。植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)步驟61植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)結(jié)果死種子裝置滴定所耗草酸量（V0）：活種子裝置滴定所耗草酸量（V1）：呼吸強(qiáng)度（CO2，mg/g·h）=（V0－V1）/種子鮮重（g）×?xí)r間（h）植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)結(jié)果62過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理過(guò)氧化物酶廣泛存在于植物的各個(gè)組織器官中。在有過(guò)氧化氫存在下，過(guò)氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化，生成茶褐色物質(zhì)，可用分光光度計(jì)測(cè)量生成物的含量。過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理63過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分光光度計(jì)，離心機(jī)，天平，研缽實(shí)驗(yàn)試劑愈創(chuàng)木酚，30%過(guò)氧化氫，20mmol/LKH2PO4，100mmol/L磷酸緩沖液（pH6.0），反應(yīng)混合液[100mmol/L磷酸緩沖液（pH6.0）50mL，加入愈創(chuàng)木酚28μL，加熱攪拌至愈創(chuàng)木酚溶解，冷卻后加入30%過(guò)氧化氫19μL，混合均勻，保存于冰箱中]實(shí)驗(yàn)材料馬鈴薯塊莖過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑64過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟粗酶液的提取稱(chēng)取去皮馬鈴薯塊莖1g，加20mmol/LKH2PO4

5mL，于研缽中研磨成均漿，以4000r/min離心15min，收集上清液保存于冷處，所得殘?jiān)谟?mLKH2PO4溶液提取一次，合并兩次上清液。酶活性的測(cè)定取比色杯2只，于一只中加入反應(yīng)混合液3mL，KH2PO4

1mL，作為校零對(duì)照，另一只中加入反應(yīng)混合液3mL，上述酶液1mL，立即于分光光度計(jì)470nm測(cè)量OD值，每隔1min讀數(shù)一次。以每分鐘OD變化值表示酶活性大小。過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟65過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果ΔOD470/min·鮮重g=次數(shù)12345678910OD470過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果次數(shù)12345678910OD466種子活力的快速測(cè)定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實(shí)驗(yàn)原理凡有生命力的種子胚部，在呼吸作用過(guò)程中都有氧化還原反應(yīng)，而無(wú)生命活力的種胚則無(wú)此反應(yīng)。當(dāng)TTC滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶（NADH或NADPH）上的氫還原時(shí)，便由無(wú)色TTC變?yōu)榧t色的TTF。種子活力的快速測(cè)定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實(shí)驗(yàn)原67種子活力的快速測(cè)定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器恒溫箱，燒杯，培養(yǎng)皿，鑷子，刀片實(shí)驗(yàn)試劑0.5%TTC溶液實(shí)驗(yàn)材料大麥、小麥、秈谷或粳谷的種子種子活力的快速測(cè)定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實(shí)驗(yàn)器68種子活力的快速測(cè)定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實(shí)驗(yàn)步驟浸種將待測(cè)種子在30～35℃溫水中浸種，以增強(qiáng)種胚的呼吸強(qiáng)度。顯色取吸脹種子100粒，，用刀片沿種子胚的中心線(xiàn)縱切為兩半，將其中的一半置于培養(yǎng)皿中，加入適量的0.5%TTC溶液覆蓋種子。然后置于30℃恒溫箱中1h。觀(guān)察結(jié)果。將另一半在沸水中煮5min殺死胚，作同樣染色處理，作為對(duì)照觀(guān)察。種子活力的快速測(cè)定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實(shí)驗(yàn)步69種子活力的快速測(cè)定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實(shí)驗(yàn)步驟計(jì)算活種子的百分?jǐn)?shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果煮沸殺死的種子胚部均為白色。未煮沸殺死的種子胚部大部分為紅色，少數(shù)為白色。活種子的百分率為：種子活力的快速測(cè)定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實(shí)驗(yàn)步70種子活力的快速測(cè)定

（紅墨水法）實(shí)驗(yàn)原理凡活細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有選擇性吸收物質(zhì)的能力，而死的種子胚細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失這種能力，于是染料便能進(jìn)入死細(xì)胞而染色。種子活力的快速測(cè)定

（紅墨水法）實(shí)驗(yàn)原理71種子活力的快速測(cè)定

（紅墨水法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器恒溫箱，燒杯，培養(yǎng)皿，鑷子，刀片實(shí)驗(yàn)試劑5%紅墨水實(shí)驗(yàn)材料大麥、小麥、秈谷或粳谷的種子種子活力的快速測(cè)定

（紅墨水法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑72種子活力的快速測(cè)定

（紅墨水法）實(shí)驗(yàn)步驟浸種將待測(cè)種子在30～35℃溫水中浸種，以增強(qiáng)種胚的呼吸強(qiáng)度。顯色取吸脹種子100粒，用刀片沿種子胚的中心線(xiàn)縱切為兩半，將其中的一半置于培養(yǎng)皿中，加入5%紅墨水淹沒(méi)種子。染色10～15min。倒去紅墨水，用水沖洗種子，至沖洗液無(wú)色，觀(guān)察結(jié)果。種子活力的快速測(cè)定

（紅墨水法）實(shí)驗(yàn)步驟73種子活力的快速測(cè)定

（紅墨水法）實(shí)驗(yàn)步驟將另一半在沸水中煮5min殺死胚，作同樣染色處理，作為對(duì)照觀(guān)察。計(jì)算活種子的百分?jǐn)?shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果煮沸殺死的種子胚與胚乳均染上紅色。未煮沸殺死的種子胚部大部分為白色或淺紅色，少數(shù)為紅色?；罘N子的百分率為：種子活力的快速測(cè)定

（紅墨水法）實(shí)驗(yàn)步驟74植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物插條不定根發(fā)生的影響實(shí)驗(yàn)原理用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（生長(zhǎng)素類(lèi)）處理插條，可以促進(jìn)細(xì)胞恢復(fù)分裂能力，誘導(dǎo)根原基發(fā)生，促進(jìn)不定根的生長(zhǎng)。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物插條不定根發(fā)生的影響實(shí)驗(yàn)原理75植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物插條不定根發(fā)生的影響實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器電子天平，燒杯，移液管，量筒等實(shí)驗(yàn)試劑1000mg/L吲哚乙酸溶液實(shí)驗(yàn)材料各種植物材料植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物插條不定根發(fā)生的影響實(shí)驗(yàn)器材與試劑76植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物插條不定根發(fā)生的影響實(shí)驗(yàn)步驟用1000mg/L吲哚乙酸溶液配制100mg/L、200mg/L、300mg/L吲哚乙酸溶液。從室外取植物材料，自莖頂端或枝條上端向下10～15cm處剪去植物下部分，去除花，保留1～2片葉片（如葉面積較大，可保留半張葉）。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物插條不定根發(fā)生的影響實(shí)驗(yàn)步驟77植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物插條不定根發(fā)生的影響實(shí)驗(yàn)步驟將插枝基部2～3cm浸泡在吲哚乙酸溶液中（每種溶液中浸5枝），并以蒸餾水作對(duì)照，8h后取出枝條，插入砂質(zhì)苗床中培養(yǎng)，注意控制溫度和濕度。20d后，統(tǒng)計(jì)各處理枝條不定根發(fā)生的數(shù)目，觀(guān)察根的粗細(xì)和長(zhǎng)度，以了解不同濃度吲哚乙酸在一定處理時(shí)間下對(duì)生根的影響。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物插條不定根發(fā)生的影響實(shí)驗(yàn)步驟78植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物插條不定根發(fā)生的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果各吲哚乙酸溶液處理的插條生根情況（平均每株根數(shù)、平均根長(zhǎng)、粗細(xì)）好于對(duì)照。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物插條不定根發(fā)生的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果79高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)原理植物組織受到高溫或低溫傷害時(shí)，由于膜的功能受損或結(jié)構(gòu)破壞而透性增大，細(xì)胞內(nèi)各種水溶性物質(zhì)不同程度地外滲。將植物組織浸入無(wú)離子水中，水的電導(dǎo)率將因電解質(zhì)的外滲而加大。膜傷害愈重，電解質(zhì)外滲愈多，電導(dǎo)率的增加也愈大。故可用電導(dǎo)率儀測(cè)定外液的電導(dǎo)率而得知植物受傷害程度。高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)原理80高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器電導(dǎo)率儀，恒溫水浴鍋，打孔器，注射器，試管，移液管，恒溫箱，冰箱等實(shí)驗(yàn)試劑去離子水實(shí)驗(yàn)材料植物離體葉片高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)器材與試劑81高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)步驟取正常生長(zhǎng)的植株葉片若干，用水洗凈并用吸水紙吸干葉表面水分，將一份放在－20℃左右的溫度下冷凍30min，另一份放在40℃左右的溫度下處理30min，第三份裹入潮濕的紗布中在室溫下作對(duì)照。將處理葉片與對(duì)照葉片用去離子水沖洗2次，再用潔凈濾紙吸凈表面水分，每組葉片取葉圓片20片，分別放入注射器內(nèi)，各加10mL去離子水，抽氣使葉片沉入水中。高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)步驟82高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)步驟將葉片及去離子水分別倒入3個(gè)試管中，在室溫下保持1h，期間要多次搖動(dòng)試管。用電導(dǎo)率儀測(cè)定3組的初電導(dǎo)率（κ1）。測(cè)定后，將試管置沸水浴中10min，取出冷卻至室溫，并平衡20min，搖勻，測(cè)終電導(dǎo)率（κ2）。高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)步驟83高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)結(jié)果按下式計(jì)算相對(duì)電導(dǎo)率相對(duì)電導(dǎo)率L=κ1/κ2相對(duì)電導(dǎo)率的大小表示細(xì)胞受傷害的程度。由于對(duì)照也有少量電解質(zhì)外滲，故可用下式計(jì)算傷害度高溫傷害度=（L高－L常）/（1－L常）低溫傷害度=（L低－L常）/（1－L常）高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)結(jié)果84高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)結(jié)果如用蒸餾水實(shí)驗(yàn)，相對(duì)電導(dǎo)率計(jì)算可用下式相對(duì)電導(dǎo)率L=（κ1－κ0）/（κ2－

κ0）κ0為實(shí)驗(yàn)用蒸餾水的電導(dǎo)率高溫和低溫對(duì)植物的傷害實(shí)驗(yàn)結(jié)果85最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件86上海師范大學(xué)植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件上海師范大學(xué)植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件87植物組織滲透勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)植物組織細(xì)胞內(nèi)的汁液其周?chē)哪撤N溶液處于滲透平衡狀態(tài)，植物細(xì)胞內(nèi)的壓力勢(shì)為零時(shí)，細(xì)胞汁液的滲透勢(shì)就等于該溶液的滲透勢(shì)。這種滲透勢(shì)相等的溶液為等滲溶液。該溶液的濃度稱(chēng)為等滲濃度。當(dāng)用一系列梯度濃度溶液觀(guān)察細(xì)胞質(zhì)壁分離現(xiàn)象時(shí)，細(xì)胞的等滲濃度將介于剛剛引起初始質(zhì)壁分離的濃度和尚不能引起質(zhì)壁分離的濃度之間的溶液濃度。代入公式即可計(jì)算其滲透勢(shì)。植物組織滲透勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理88最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件89最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件90最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件91最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件92最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件93最新植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件94植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟用1.00mol/L蔗糖母液配制一系列不同濃度的蔗糖溶液（0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L）各10mL，分別注入編好號(hào)的7支對(duì)照組試管中。另取7個(gè)青霉素小瓶對(duì)應(yīng)試管編號(hào)，從對(duì)照管中分別吸2mL溶液入相同編號(hào)的試驗(yàn)組小瓶中。用打孔器在葉片中部靠近主脈附近打取葉圓片，隨機(jī)取樣，每試驗(yàn)組小瓶中放入30片葉圓片，加塞，放置30min，其間搖動(dòng)數(shù)次。植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟95植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟到時(shí)間后，用解剖針沾取少許甲烯藍(lán)粉末加入小瓶中，并震蕩，此時(shí)溶液呈藍(lán)色。用7支毛細(xì)滴管從試驗(yàn)組小瓶中依次吸取著色的液體少許，伸入同號(hào)對(duì)照組溶液的中部，緩慢放出藍(lán)色溶液，輕輕取出滴管，觀(guān)察藍(lán)色液滴的移動(dòng)方向。根據(jù)公式計(jì)算葉片細(xì)胞的水勢(shì)ψw=

-icRTi為解離系數(shù)，蔗糖為1；c為小液滴在其中基本不動(dòng)的溶液的濃度，單位為mol/L；R為摩爾氣體常數(shù)，R=0.0083L·MPa/mol·K；T為熱力學(xué)溫度，單位K植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟96植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

外液濃度mol/L小液滴移動(dòng)方向組織水勢(shì)與外液水勢(shì)比較組織水勢(shì)計(jì)算0.050.10.20.30.40.50.6植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果外液濃度mol/L97植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果在0.05、0.1mol/L溶液中液滴下降，說(shuō)明葉片細(xì)胞水勢(shì)小于外液水勢(shì)，細(xì)胞吸水，外液密度變大；在0.3、0.4、0.5、0.6mol/L溶液中液滴上升，說(shuō)明葉片細(xì)胞水勢(shì)大于外液水勢(shì)，細(xì)胞失水，外液密度變小在0.2mol/L溶液中液滴基本不動(dòng)，說(shuō)明細(xì)胞水勢(shì)與此外液的滲透勢(shì)相等實(shí)驗(yàn)所測(cè)葉片細(xì)胞水勢(shì)

=-1×0.2×0.0083×（273+20）=-0.48638MPa實(shí)驗(yàn)溫度為20℃

植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果98植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)原理植物的生長(zhǎng)發(fā)育，除需要充足的陽(yáng)光和水分外，還需要礦質(zhì)元素，否則植物就不能很好地生長(zhǎng)發(fā)育甚至死亡。應(yīng)用溶液培養(yǎng)技術(shù)，可以觀(guān)察礦質(zhì)元素對(duì)植物生活的必需性；用溶液培養(yǎng)做植物的營(yíng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，可以避免土壤里的各種復(fù)雜因素。植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)原理99植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分析天平，培養(yǎng)缸，燒杯，移液管實(shí)驗(yàn)材料玉米（或番茄、蓖麻、小麥）種子植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)器材與試劑100植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)試劑按下表配制貯備液藥品名稱(chēng)用量/（g?L－1）藥品名稱(chēng)用量/（g?L－1）Ca(NO3)282.07CaCl255.50KNO350.56KCl37.28MgSO4·7H2O61.62Fe-EDTANa-EDTA7.45g，F(xiàn)eSO4·7H2O5.57gKH2PO427.22NaH2PO424.00微量元素H3BO32.860g，MnSO41.015g，CuSO4·5H2O0.079g，ZnSO4·7H2O0.220g，H2MoO40.090gNaNO342.45MgCl223.81Na2SO435.51植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)器材與試劑藥品名稱(chēng)用量/（g?L－1）101植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)步驟材料準(zhǔn)備種子用漂白粉溶液滅菌30min，用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，然后放在洗凈的石英砂中發(fā)芽，加蒸餾水，等幼苗長(zhǎng)出第一真葉時(shí)待用。植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)步驟102植物的元素缺乏癥配制缺元素培養(yǎng)液貯備液貯備液/mL完全－N－P－K－Ca－Mg－S－FeCa(NO3)25－55－555KNO35－5－5555MgSO4·7H2O55555－－5KH2PO455－－5555NaH2PO4－－－5－－－－Fe-EDTA0.50.50.50.50.50.50.5－微量元素0.50.50.50.50.50.50.50.5NaNO3－－－55－－－MgCl2－－－－－－5－Na2SO4－－－－－5－－CaCl2－5－－－－－－KCl－52－－－－－植物的元素缺乏癥配制缺元素培養(yǎng)液貯備液貯備液/mL完全－N－103植物的元素缺乏癥配制時(shí)先于棕色瓶中加入300mL蒸餾水，然后加貯備液，最后配成500mL，用稀酸、堿調(diào)節(jié)至pH5～6。選取大小一致的植株，小心剝?nèi)ナＳ嗯呷?，用棉花包裹莖部，穿過(guò)瓶蓋小孔，使根部浸入培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶移到溫室中，注意管理并觀(guān)察記錄植株的生長(zhǎng)情況，各種元素缺乏癥的癥狀及出現(xiàn)的部位。植物的元素缺乏癥配制時(shí)先于棕色瓶中加入300mL蒸餾水104植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)結(jié)果植物的元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)結(jié)果105硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理硝酸還原酶是植物氮素代謝作用中的關(guān)鍵性酶，與作物吸收和利用氮肥有關(guān)。它作用于NO3－使之還原為NO2－：NO3－＋NADH＋H+→NO2－＋NAD+＋H2O產(chǎn)生的NO2－可以從組織內(nèi)滲透到外界溶液中，并積累在溶液中，測(cè)定反應(yīng)液中NO2－含量的增加，即表現(xiàn)該酶活性的大小。硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理106硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理NO2－含量的測(cè)定用磺胺（對(duì)氨基苯磺酸胺）比色法。在酸性溶液中磺胺與NO2－形成重氮鹽，再與α-萘胺偶聯(lián)形成紫紅色的偶氮染料。反應(yīng)液的酸度大，則增加重氮化作用的速度，但降低偶聯(lián)作用的速度，顏色比較穩(wěn)定。增加溫度可以增加反應(yīng)速度，但降低重氮鹽的穩(wěn)定度。所以反應(yīng)需要在相同條件下進(jìn)行。這種方法非常靈敏，能測(cè)定每毫升含0.5μg的NaNO2。硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理107硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分光光度計(jì)，注射器，溫箱，天平，鉆孔器，三角燒瓶，移液管，燒杯，試管實(shí)驗(yàn)試劑0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.5），0.2mol/LKNO3，磺胺試劑，α-萘胺試劑，NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)驗(yàn)材料蓖麻、向日葵、油菜、小麥或棉花的葉子硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑108硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟將新鮮取回的葉片水洗，用吸水紙吸干，然后用鉆孔器打葉圓片，用蒸餾水洗滌2～3次，吸干水分，于分析天平上稱(chēng)取等重的葉圓片兩份。每份約0.3～0.4g（或每份取50個(gè)圓片），分別置于含下列溶液的燒瓶中：①0.1mol/L磷酸緩沖液5mL+蒸餾水5mL；②0.1mol/L磷酸緩沖液5mL+0.2mol/LKNO35mL。用注射器抽氣，至葉圓片沉于溶液中。將燒瓶放入30℃溫箱中，避光保溫30min。硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟109硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟分別吸取反應(yīng)液1mL于試管中，加入磺胺試劑2mL及α-萘胺試劑2mL，混合搖勻，靜置30min，用分光光度計(jì)（520nm）進(jìn)行測(cè)定，記下OD值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出NO2－含量，再計(jì)算酶的活性。硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟110硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟用5μg/mLNaNO2母液稀釋成0.5、1、2、3、4μg/mL的梯度濃度的NaNO2溶液

。分別吸取0.5、1、2、3、4、5μg/mL的NaNO21mL于試管中，加入磺胺試劑2mL及α-萘胺試劑2mL，混合搖勻，靜置30min，用分光光度計(jì)（520nm）進(jìn)行測(cè)定，記下OD值，以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，NaNO2濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟111硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)NaNO2

mol/L磺胺比色法OD520值0.512345對(duì)照反應(yīng)液反應(yīng)液注意：比色空白用1mL水加同樣顯色劑同樣反應(yīng)條件標(biāo)出根據(jù)對(duì)照反應(yīng)液和反應(yīng)液的比色OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出的NaNO2含量硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果NaNO2mol/L磺胺比色法112硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果酶的活性硝酸還原酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果113單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)原理離子間的拮抗現(xiàn)象的本質(zhì)是復(fù)雜的，它可能反映不同離子對(duì)原生質(zhì)親水膠粒的穩(wěn)定性、原生質(zhì)膜的透性，以及對(duì)各類(lèi)酶活性調(diào)節(jié)等方面的相互制約作用，從而維持機(jī)體的正常生理狀態(tài)。單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)原理114單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器燒杯，紗布，石蠟實(shí)驗(yàn)試劑0.12mol/LKCl，0.06mol/LCaCl2，0.12mol/LNaCl（所用藥品均需用分析純）實(shí)驗(yàn)材料小麥種子單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)器材與試劑115單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)前3～4天選擇飽滿(mǎn)的小麥種子100粒浸種，在室溫下萌發(fā)，待根長(zhǎng)1cm時(shí)可用作材料。取4個(gè)小燒杯，分別加入下列溶液0.12mol/LKCl0.06mol/LCaCl20.12mol/LNaCl0.12mol/LNaCl100mL+0.06mol/LCaCl21mL+0.12mol/LKCl2.2mL單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)步驟116單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)步驟小燒杯用涂石蠟的紗布蓋上。挑選大小相等及根系發(fā)育一致的小麥幼苗16株，小心種植在紗布蓋的孔眼里，使根系接觸到溶液，在室溫下培養(yǎng)2～3周后，觀(guān)察幼苗根的生長(zhǎng)情況。培養(yǎng)期間注意補(bǔ)充水分，可更換一次培養(yǎng)液。單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)步驟117單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)結(jié)果在單鹽溶液中小麥幼苗生長(zhǎng)受阻，特別是根部出現(xiàn)畸形。單鹽毒害及離子拮抗實(shí)驗(yàn)結(jié)果118葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)原理葉綠體色素是植物吸收太陽(yáng)光能進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì)，主要由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。根據(jù)它們?cè)谟袡C(jī)溶劑中的溶解特性，可用丙酮將它們從葉片中提取出來(lái)。并可根據(jù)它們?cè)诓煌袡C(jī)溶劑中的溶解度不同以及在吸附劑上的吸附能力不同，將它們彼此分離開(kāi)。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)原理119葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)原理葉綠素是一種雙羧酸的酯，可與堿發(fā)生皂化反應(yīng)，產(chǎn)生的鹽能溶于水，可用此法將葉綠素與類(lèi)胡蘿卜素分開(kāi)。葉綠素在光照下可產(chǎn)生暗紅色的熒光。葉綠素中的鎂可被H+取代而生成褐色的去鎂葉綠素；加入銅鹽作用，后者則成為綠色的銅代葉綠素。銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易破壞，故常用此法制作綠色植物的浸漬標(biāo)本。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)原理120葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器大試管，臺(tái)天平，研缽，量筒，漏斗，橡皮塞，新華濾紙，毛細(xì)管，剪刀，分液漏斗，燒杯實(shí)驗(yàn)試劑丙酮，碳酸鈣，石英砂，無(wú)水硫酸鈉，四氯化碳，乙醚，甲醇，氫氧化鉀，鹽酸，醋酸銅實(shí)驗(yàn)材料新鮮菠菜葉片葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)器材與試劑121葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的提取分離稱(chēng)取新鮮葉片2g，放入研缽中加丙酮5mL，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成均漿，再加丙酮10mL，以漏斗過(guò)濾之，即為色素提取液。把展層用的濾紙剪成2cm×20cm的紙條，將其一端剪去兩側(cè)，中間留一長(zhǎng)約1.5cm，寬約0.5cm的窄條。用毛細(xì)管吸取葉綠素溶液點(diǎn)于窄條的上方，注意一次所點(diǎn)溶液不可過(guò)多，風(fēng)干后再點(diǎn)，重復(fù)多次。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟122葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的提取分離在大試管中加入四氯化碳3～5mL及少許無(wú)水硫酸鈉。然后將濾紙條固定于軟木塞上，插入試管內(nèi)，使窄條浸入溶劑中（色素點(diǎn)要略高于液面），蓋緊軟木塞，直立于陰暗處進(jìn)行層析。待四種色素帶清晰展開(kāi)后，取出濾紙條，稍干后用鉛筆勾出色素帶邊緣。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟123葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的理化性質(zhì)葉綠素的熒光現(xiàn)象取上述色素提取液少許于試管中，分別在反射光和透射光一側(cè)觀(guān)察提取液的顏色。銅代反應(yīng)取上述色素提取液少許于試管中，1滴1滴加濃鹽酸，直至溶液出現(xiàn)褐綠色。然后加醋酸銅晶體少許，慢慢加熱溶液，則又產(chǎn)生鮮亮的綠色。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟124葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的理化性質(zhì)黃色素與綠色素的分離取上述色素提取液10mL，加到盛有20mL乙醚的分液漏斗中，搖動(dòng)分液漏斗，并沿漏斗邊緣加入30mL蒸餾水，輕輕搖動(dòng)分液漏斗，靜止片刻，溶液即分為兩層。色素已轉(zhuǎn)入上層乙醚中，棄去下層丙酮和水，再用蒸餾水沖洗乙醚溶液1～2次。然后加入5mL30%KOH甲醇溶液，用力搖動(dòng)分液漏斗，靜置約10min，再加蒸餾水約10mL，搖動(dòng)后靜置，則得到黃色素層和綠色素層。葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)步驟125葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果葉綠體色素的提取分離濾紙條自上而下的色素帶分別是橙色的胡蘿卜素黃色的葉黃素藍(lán)綠色的葉綠素a黃綠色的葉綠素b葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果126葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果葉綠體色素的理化性質(zhì)葉綠素的熒光現(xiàn)象銅代反應(yīng)黃色素與綠色素的分離葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果127葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素都有光學(xué)特性，表現(xiàn)出一定的吸收光譜，可用分光光度計(jì)精確測(cè)定。如果混合液中的兩個(gè)組分，它們的光譜吸收雖然有明顯的差異，但吸收曲線(xiàn)彼此有些重疊，可根據(jù)Lambert-Beer定律，通過(guò)代數(shù)方法，計(jì)算一種組分由于另一種組分存在時(shí)對(duì)光密度的影響。最后分別得到兩種組分的含量。葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理如果混合128葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理根據(jù)Lambert-Beer定律，最大吸收光譜峰不同的兩個(gè)組分的混合液，它們的濃度C與光密度OD之間有如下關(guān)系：OD1=

Ca·ka1+C

b·kb1OD2=

Ca·ka2+C

b·kb2Ca為組分a的濃度（g·L－1），Cb為組分b的濃度（g·L－1）；OD1為在波長(zhǎng)λ1（即組分a的最大吸收峰波長(zhǎng)）時(shí)，混合液的光密度值，OD2為在波長(zhǎng)λ2（即組分b的最大吸收峰波長(zhǎng)）時(shí)，混合液的光密度值；ka1和ka2分別為組分a的比吸收系數(shù)，kb1和kb2分別為組分b的比吸收系數(shù)葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理129葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理葉綠素a和b的80%丙酮溶液的比吸收系數(shù)將數(shù)據(jù)代入上式經(jīng)整理后，并把濃度單位改為mg/LCa=12.7OD663－2.69OD645Cb=22.9OD663－4.68OD645CT=Ca+Cb=8.02OD663＋20.21OD645波長(zhǎng)/nm葉綠素a葉綠素b66382.049.2764516.7545.60葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理波長(zhǎng)/n130葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分光光度計(jì)，離心機(jī)，臺(tái)天平，研缽，量筒，剪刀，移液管實(shí)驗(yàn)試劑丙酮，碳酸鈣，石英砂實(shí)驗(yàn)材料新鮮菠菜葉片葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑131葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟稱(chēng)取新鮮葉片1g，放入研缽中加丙酮5mL，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成均漿，再加80%丙酮5mL，將勻漿轉(zhuǎn)入離心管，并用80%丙酮洗滌研缽，一并轉(zhuǎn)入離心管，離心后去沉淀，上清液用80%丙酮定容至20mL。取上述色素提取液1mL，加80%丙酮6mL稀釋?zhuān)D(zhuǎn)入比色杯中，以80%丙酮為對(duì)照，在400～500nm波長(zhǎng)區(qū)每隔10nm，在500～600nm波長(zhǎng)區(qū)每隔20nm，在600～700nm波長(zhǎng)區(qū)每隔10nm，測(cè)定光密度，以繪制吸收光譜。另外測(cè)定645nm和663nm處的光密度，以計(jì)算葉綠素a和b的含量。葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟132葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果吸收光譜葉綠素a和b含量計(jì)算波長(zhǎng)/nm400410420430440450460470480490500520540光密度波長(zhǎng)/nm560580600610620630640650660670680690700光密度波長(zhǎng)/nm645663光密度葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果波長(zhǎng)/n133離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)原理在低溫下以等滲溶液制備完整的葉綠體，將其懸浮于適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)介質(zhì)中，并有氧化劑如2，6-二氯酚靛酚（簡(jiǎn)稱(chēng)DCIP）存在時(shí)，在光照下會(huì)放出O2，同時(shí)將染料還原，這就是葉綠體中進(jìn)行的光還原反應(yīng)。染料被還原后，顏色從藍(lán)色變?yōu)闊o(wú)色，因此可根據(jù)溶液OD值的變化進(jìn)行測(cè)定，該變化在4-5min內(nèi)呈線(xiàn)性關(guān)系。離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)原理134離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器離心機(jī)，研缽，天平，紗布，試管，100W燈泡，722型分光光度計(jì)實(shí)驗(yàn)試劑提取介質(zhì)50mmol/L（pH7.5）Tris-HCl緩沖液（內(nèi)含0.4mmol/L蔗糖、10mmol/LNaCl），1mmol/L2，6-DCIP（2，6-二氯酚靛酚）溶液（用上述提取介質(zhì)配制）實(shí)驗(yàn)材料新鮮菠菜葉片離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)器材與試劑135離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)步驟離體葉綠體的提取稱(chēng)取10g新鮮菠菜葉片（去除粗葉脈），剪碎，加10mL預(yù)冷的提取介質(zhì)（分兩次加入）和少許石英砂，冰浴中迅速研磨成勻漿，再加10mL提取介質(zhì)，用4層紗布將勻漿過(guò)濾于一離心管中，2500r/min離心3min，棄沉淀，上清液4000r/min離心10min，棄上清。所得沉淀即為完整葉綠體。用15mL提取介質(zhì)使葉綠體懸浮，置冰浴中備用。離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)步驟136離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體光還原反應(yīng)的測(cè)定取3支潔凈試管，分別編號(hào)，按下表加入試劑：注：2號(hào)管加熱煮沸，然后加染料，3號(hào)管為比色時(shí)的空白對(duì)照將試管置于離100W燈光60cm處照光，3min后于620nm處測(cè)光密度。管號(hào)提取介質(zhì)/mL葉綠體懸液/mL煮沸時(shí)間/min染料/mL14.50.5－124.50.515135.50.5－－離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)步驟管號(hào)提取介質(zhì)/mL137離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)結(jié)果1號(hào)管的OD620值2號(hào)管的OD620值說(shuō)明：離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實(shí)驗(yàn)結(jié)果138環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)原理植物光合強(qiáng)度的大小受光強(qiáng)、光質(zhì)、CO2濃度、溫度等環(huán)境條件的影響。利用真空滲入法排除細(xì)胞間隙的空氣，使葉片沉于水中。由于光合作用放出的O2在水中溶解度很小，而在細(xì)胞間積累，結(jié)果使原來(lái)下沉的葉片上浮，根據(jù)上浮所需時(shí)間長(zhǎng)短，即能比較光合作用的強(qiáng)弱。環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)原理139環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器打孔器，注射器，100W燈泡，小燒杯實(shí)驗(yàn)材料新鮮青菜葉片環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑140環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)步驟選取健壯、葉齡相似的成熟葉片，用打孔器避開(kāi)主脈打取葉圓片共60片，置于注射器中，注入水，抽氣至葉片沉入水中。取6只小燒杯，各倒入20mL冷開(kāi)水，用吸管向其中5只小燒杯的水中吹氣，使CO2達(dá)到飽和。然后于6只小燒杯中各放入10片葉圓片，分別置于不同的條件下。杯號(hào)光強(qiáng)光質(zhì)CO21強(qiáng)白光飽和2強(qiáng)紅光飽和3強(qiáng)藍(lán)光飽和4強(qiáng)綠光飽和5強(qiáng)白光微量6弱白光飽和環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)步驟杯號(hào)光強(qiáng)光141環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)步驟記錄各燒杯中每一葉圓片上浮所需的時(shí)間，計(jì)算各處理中葉圓片上浮所需的平均時(shí)間或一定時(shí)間內(nèi)上浮的葉圓片數(shù)。比較不同條件下光合作用的強(qiáng)弱。環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)步驟142環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：杯號(hào)葉圓片上浮所需的平均時(shí)間123456環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實(shí)驗(yàn)結(jié)果杯號(hào)葉圓片143植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)原理利用Ba(OH)2

溶液吸收呼吸過(guò)程中釋放的CO2，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用草酸溶液滴定殘留的Ba(OH)2，從空白和樣品兩者消耗草酸溶液之差，即可計(jì)算出呼吸過(guò)程中釋放CO2的量。植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)原理144植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器廣口瓶，酸式滴定管，紗布實(shí)驗(yàn)試劑0.05mol/LBa(OH)2，1/44mol/L草酸溶液（每mL相當(dāng)于1mgCO2），指示劑實(shí)驗(yàn)材料萌發(fā)的小麥種子植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)器材與試劑145植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)步驟稱(chēng)取萌發(fā)的小麥種子15g，包入紗布袋內(nèi)，將紗布袋掛在廣口瓶的橡皮瓶塞上，注意不要掛得太低。在廣口瓶中加0.05mol/LBa(OH)225mL，塞上瓶塞，用熔化的石蠟密封瓶口，防止漏氣。每10min左右輕輕搖動(dòng)廣口瓶，破壞溶液表面的BaCO3薄膜，以利對(duì)CO2的吸收。1h后，打開(kāi)瓶塞，迅速加2滴指示劑，用1/44mol/L草酸滴定，直到綠色變成紫色為止。記錄所耗用的草酸溶液的體積（mL）數(shù)。植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)步驟146植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)步驟另取同樣重量的煮沸殺死的小麥種子，作同樣測(cè)定，以次作為對(duì)照。計(jì)算呼吸強(qiáng)度。植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)步驟147植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)結(jié)果死種子裝置滴定所耗草酸量（V0）：活種子裝置滴定所耗草酸量（V1）：呼吸強(qiáng)度（CO2，mg/g·h）=（V0－V1）/種子鮮重（g）×?xí)r間（h）植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定

（小籃子法）實(shí)驗(yàn)結(jié)果148過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理過(guò)氧化物酶廣泛存在于植物的各個(gè)組織器官中。在有過(guò)氧化氫存在下，過(guò)氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化，生成茶褐色物質(zhì)，可用分光光度計(jì)測(cè)量生成物的含量。過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理149過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分光光度計(jì)，離心機(jī)，天平，研缽實(shí)驗(yàn)試劑愈創(chuàng)木酚，30%過(guò)氧化氫，20mmol/LKH2PO4，100mmol/L磷酸緩沖液（pH6.0），反應(yīng)混合液[100mmol/L磷酸緩沖液（pH6.0）50mL，加入愈創(chuàng)木酚28μL，加熱攪拌至愈創(chuàng)木酚溶解，冷卻后加入30%過(guò)氧化氫19μL，混合均勻，保存于冰箱中]實(shí)驗(yàn)材料馬鈴薯塊莖過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)器材與試劑150過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟粗酶液的提取稱(chēng)取去皮馬鈴薯塊莖1g，加20mmol/LKH2PO4

5mL，于研缽中研磨成均漿，以4000r/min離心15min，收集上清液保存于冷處，所得殘?jiān)谟?mLKH2PO4溶液提取一次，合并兩次上清液。酶活性的測(cè)定取比色杯2只，于一只中加入反應(yīng)混合液3mL，KH2PO4

1mL，作為校零對(duì)照，另一只中加入反應(yīng)混合液3mL，上述酶液1mL，立即于分光光度計(jì)470nm測(cè)量OD值，每隔1min讀數(shù)一次。以每分鐘OD變化值表示酶活性大小。過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟151過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果ΔOD470/min·鮮重g=次數(shù)12345678910OD470過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果次數(shù)12345678910OD4152種子活力的快速測(cè)定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實(shí)驗(yàn)原理凡有生命力的種子胚部，在呼吸作用過(guò)程中都有氧化還原反應(yīng)，而無(wú)生命活力的種胚則無(wú)此反應(yīng)。當(dāng)TTC滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶（NADH或NADPH）上的