史上最強(qiáng)生物課件動(dòng)物細(xì)胞工程- XXXX

1.為什么要培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞？2.要培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，對(duì)取材有何要求？實(shí)驗(yàn)材料，藥性、毒性檢測(cè)，提取細(xì)胞分泌物等選擇胚胎細(xì)胞或幼年動(dòng)物組織，因?yàn)槠浞至言鲋衬芰?qiáng)。3.培養(yǎng)基是用液體的還是固體的？培養(yǎng)基中的成分有何特點(diǎn)？培養(yǎng)基是液體的，成份與動(dòng)物內(nèi)環(huán)境相似。

動(dòng)物血清4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件有何特點(diǎn)？體溫和PH都應(yīng)與動(dòng)物體內(nèi)環(huán)境相似。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。5.培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞需要哪些條件？液體、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（血清）、PH、溫度、氣體、無(wú)菌等動(dòng)物組織塊細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞幼齡動(dòng)物的器官組織；動(dòng)物胚胎細(xì)胞貼壁接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)加入培養(yǎng)液用胰蛋白酶等處理貼壁細(xì)胞適宜條件不死性細(xì)胞電激處理使供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎卵母細(xì)胞采集、培養(yǎng)MⅡ期卵母細(xì)胞供體牛供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞代孕母?？寺∨ｓw細(xì)胞培養(yǎng)去核卵母細(xì)胞去核胚胎移植體細(xì)胞核移植過(guò)程

（體細(xì)胞克隆動(dòng)物）體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題（1）成功率非常低（2）克隆動(dòng)物以表現(xiàn)早衰、生理缺陷等健康問(wèn)題1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)著名的實(shí)驗(yàn)：人—鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子是運(yùn)動(dòng)的。人—鼠細(xì)胞是怎樣實(shí)現(xiàn)融合的？動(dòng)物細(xì)胞融合有什么實(shí)踐意義呢？三、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體1.細(xì)胞融合：是指兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞融合為一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。⑴自然發(fā)生：

受精卵⑵人工誘導(dǎo)：

利用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合

誘導(dǎo)因素：聚乙二醇、滅活的病毒或電激等。

仙臺(tái)病毒紫外線滅活喪失感染活性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）①什么是病毒的滅活？滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。②滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合正在融合的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞正在融合的雞血細(xì)胞⑶動(dòng)物細(xì)胞融合的原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性把兩個(gè)不不同的動(dòng)動(dòng)物細(xì)胞胞放在一一起，用用滅活的的病毒處處理細(xì)胞胞，它們們先發(fā)生生質(zhì)融合合，再出出現(xiàn)核融融合，進(jìn)進(jìn)而形成成雜交細(xì)細(xì)胞。融合后的的雜交細(xì)細(xì)胞經(jīng)過(guò)過(guò)有絲分分裂后仍仍能形成成兩個(gè)完完整的雜雜交細(xì)胞胞2.動(dòng)物細(xì)胞胞融合技技術(shù)的應(yīng)應(yīng)用：⑴突破了了有性雜雜交的局局限，使使遠(yuǎn)緣雜雜交成為為可能；；⑵為制造造單克隆抗抗體開辟了新新途徑使用相應(yīng)應(yīng)的抗體體檢測(cè)乙乙肝病毒毒——抗原3.單克隆抗抗體的制制備醫(yī)院一般般怎樣檢檢測(cè)人體體內(nèi)是否否存在乙乙肝病毒毒？乙肝病毒毒模式圖圖凡能夠引引起機(jī)體體產(chǎn)生特特異性免疫應(yīng)答答的物質(zhì)質(zhì)叫做抗抗原。⑴什么是抗抗原？例如花粉粉、病菌菌、病毒毒等。有有時(shí)自身身的組織織或細(xì)胞胞也會(huì)成成為抗原原，如癌癌細(xì)胞等等?？乖瓫Q定定簇：抗原表面面具有的的某些特定的化化學(xué)基團(tuán)團(tuán)，能決定抗抗原特異異性，是免疫疫細(xì)胞識(shí)識(shí)別抗原原的重要要依據(jù)。。各種抗原原的決定定簇?cái)?shù)目目不同，，同一抗抗原的決決定簇可可能有多多種。⑵什么是抗體？由何種種細(xì)胞產(chǎn)產(chǎn)生？主主要分布布在哪里里?起何作用用？當(dāng)機(jī)體受受到抗原原刺激劑劑后由效效應(yīng)B細(xì)胞（漿漿細(xì)胞））產(chǎn)生的的，并且且能與該該抗原發(fā)發(fā)生特異性性結(jié)合合的具有有免疫疫功能能的球球蛋白白——抗體。?？贵w分分布于于血清清中，，也分分布于于組織織液及及外分分泌液液中。。抗體與與相應(yīng)應(yīng)抗原原特異異性結(jié)結(jié)合

抗體由由何種種細(xì)胞胞產(chǎn)生生？主主要分分布在在哪里里?血清抗抗體（（也稱稱多克克隆抗抗體））由血清中提取取的抗抗體是是由不不同淋淋巴細(xì)細(xì)胞產(chǎn)產(chǎn)生的的多種種抗體體的混混合物物，可可達(dá)百百萬(wàn)種種以上上，稱稱為多克隆隆抗體體。特點(diǎn)：：產(chǎn)量低低、純純度低低、特特異性性差、、反應(yīng)應(yīng)不夠夠靈敏敏。抗原不不純抗體不不純

抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗體每一個(gè)個(gè)B淋巴細(xì)細(xì)胞只只分泌泌一種種化學(xué)性性質(zhì)單單一，，特異異性強(qiáng)強(qiáng)的抗抗體。如果利利用單單個(gè)B淋巴細(xì)細(xì)胞進(jìn)進(jìn)行無(wú)無(wú)性繁繁殖（（克隆?。?，，形成成細(xì)胞胞群，，這樣樣的細(xì)細(xì)胞群群就有有可能能產(chǎn)生生出化學(xué)性性質(zhì)單單一、特異性性強(qiáng)的抗體體——單克隆隆抗體體。問(wèn)題：：怎樣獲獲得化化學(xué)性性質(zhì)單單一、、特異異性強(qiáng)強(qiáng)的抗抗體呢呢？在體外外培養(yǎng)養(yǎng)的條條件下下，一一個(gè)B淋巴細(xì)細(xì)胞能能無(wú)限限增殖殖形成成細(xì)胞胞群?jiǎn)釂幔渴裁礃訕拥募?xì)細(xì)胞能能夠在在體外外無(wú)限限增殖殖呢？？——腫瘤細(xì)細(xì)胞??！科勒米爾斯斯坦榮獲1984年諾貝貝爾生生理學(xué)學(xué)或醫(yī)醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)獎(jiǎng)如果把把一種種B淋巴細(xì)細(xì)胞與與能在在體外外大量量增殖殖的骨骨髓瘤瘤細(xì)胞胞進(jìn)行行融合合，所所得到到的融合細(xì)細(xì)胞既能大大量增增殖，，又能能產(chǎn)生生足夠夠數(shù)量量的特特定抗抗體。。⑵如何誘誘導(dǎo)融融合？？加入聚聚乙二二醇（PEG）⑴如何得得到B淋巴細(xì)細(xì)胞？？3.制備單克隆隆抗體體的過(guò)程⑶細(xì)胞兩兩兩融融合后后，有有哪些些類型型？B-BB-瘤(雜交瘤瘤細(xì)胞胞)瘤-瘤⑷如何篩篩選出出雜交交瘤細(xì)細(xì)胞？？單克隆隆抗體體制備備過(guò)程程中，，總共共有兩兩次篩篩選，，第一一次篩篩選出出雜交交瘤細(xì)細(xì)胞，，第二二次篩篩選出出能產(chǎn)產(chǎn)生特特異性性抗體體的雜雜交瘤瘤細(xì)胞胞，兩兩次篩篩選的的原理理和方方法是是不相相同的的。①首先先用選選擇培培養(yǎng)基基篩選選出雜雜交瘤瘤細(xì)胞胞①細(xì)胞合合成DNA有D和S兩條途途徑，，其中中D途徑能能被氨氨基嘌嘌呤阻阻斷。。②人淋巴巴細(xì)胞胞中有有這兩兩種DNA的合成成途徑徑，但但一般般不分分裂增增殖。。③鼠骨髓髓瘤細(xì)細(xì)胞中中只有有D途徑，，沒(méi)有有S途徑，，可是是能不不斷分分裂增增殖。。你想到到篩選選雜交交瘤細(xì)細(xì)胞的的方案案了么么？小資料料：在培養(yǎng)養(yǎng)液中中加入入氨基基蝶呤呤，收收集增增殖細(xì)細(xì)胞！！加入氨氨基嘌嘌呤后后，使使D合成途途徑阻阻斷，，僅有有D合成途途徑的的骨髓髓瘤細(xì)細(xì)胞及及其彼彼此融融合的的細(xì)胞胞就不不能增增殖，，但人淋淋巴細(xì)細(xì)胞和和骨髓髓瘤細(xì)細(xì)胞融融合后后的雜雜種細(xì)細(xì)胞因因?yàn)榭煽梢岳昧芰馨图?xì)細(xì)胞中中的S途徑合合成DNA而增殖殖。通常采用有有限稀稀釋克克隆細(xì)細(xì)胞的的方法法，將雜雜交瘤瘤細(xì)胞胞多倍倍稀釋釋，接接種在在多孔孔細(xì)胞胞培養(yǎng)養(yǎng)板上上培養(yǎng)養(yǎng)，使使每孔孔細(xì)胞胞不超超過(guò)一一個(gè)，，再由這這些單單細(xì)胞胞克隆隆生長(zhǎng)長(zhǎng)，然后檢檢測(cè)各各孔上上清液液中細(xì)細(xì)胞分分泌的的抗體體，那那些上上清液液可與與特定定抗原原結(jié)合合的培培養(yǎng)孔孔為陽(yáng)陽(yáng)性孔孔。最終選選出分分泌預(yù)預(yù)定特特異抗抗體的的雜交交細(xì)胞胞株進(jìn)進(jìn)行擴(kuò)擴(kuò)大培培養(yǎng)。。②再篩選選出能分泌泌所需需抗體體的雜雜交瘤瘤細(xì)胞胞陽(yáng)性孔孔方法——抗原-抗體雜雜交法法在單克克隆抗抗體制制備過(guò)過(guò)程中中，兩兩次篩篩選的的原理理和方方法是是不相相同的的。⑻如何得得到大大量的的單克克隆抗抗體？？體內(nèi)培培養(yǎng)體外培培養(yǎng)單克隆隆抗體體——化學(xué)性性質(zhì)單單一、、特異異性強(qiáng)強(qiáng)抗體體抗原原應(yīng)答答抗體體的不不純性性動(dòng)物細(xì)細(xì)胞受受到抗抗原刺刺激,引起免免疫反反應(yīng)產(chǎn)產(chǎn)生的的球蛋蛋白.不是自自己的的而又又能引引起免免疫應(yīng)應(yīng)答反反應(yīng)的的物質(zhì)質(zhì)就是是抗原原.一種抗抗原有有多種種不同同的決決定簇簇,刺激的的是多多種B細(xì)胞,作用于于不同同的B細(xì)胞后后,會(huì)產(chǎn)生生多種種抗體體,這是多多克隆隆的,故不純純!1.制備單單克隆隆抗體體的思思路抗原

B細(xì)胞漿細(xì)胞抗體

刺激怎么么才能能得到到純的的抗體體?光純還還不行行,還要大大量.怎么辦辦?但，有有問(wèn)題:找，什什么細(xì)細(xì)胞能能無(wú)限限繁殖殖呢?思路就就出來(lái)來(lái)了:要想獲獲單一一的純純抗體體,就必須須從一一個(gè)B細(xì)胞出出發(fā).讓B細(xì)胞大大量繁繁殖(克隆)就可以以產(chǎn)生生大量量抗體體了.B細(xì)胞是是不能能無(wú)限限繁殖殖的.怎么辦辦?癌!只有癌癌細(xì)胞胞.但它不不能產(chǎn)產(chǎn)生抗抗體.癌細(xì)胞胞能無(wú)無(wú)限繁繁殖,但不能能產(chǎn)生生抗體體.B細(xì)胞能能產(chǎn)生生抗體體,但不能能大量量繁殖殖.融合呀呀!只要將將兩個(gè)個(gè)細(xì)胞胞融合合即可可互補(bǔ)補(bǔ).2.技術(shù)思思路的的重點(diǎn)點(diǎn)雜交瘤細(xì)胞

HAT篩選McAb大量培養(yǎng)PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合免疫B

脾礦物油骨髓瘤瘤問(wèn)題:在培養(yǎng)養(yǎng)體系系中,有4種細(xì)胞胞.B細(xì)胞、、瘤細(xì)細(xì)胞,和雜交交細(xì)胞胞。我們還還是拿拿不到到McAb,怎么辦辦?篩選??！篩出出雜交交瘤細(xì)細(xì)胞。。怎么么篩?又是一一個(gè)思思路問(wèn)問(wèn)題。。關(guān)鍵一步單克隆隆抗體體篩選雜交細(xì)細(xì)胞雜交瘤瘤細(xì)胞胞體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性性雜交交瘤細(xì)細(xì)胞雜交瘤瘤細(xì)胞胞系提取經(jīng)過(guò)免免疫的的B淋巴細(xì)細(xì)胞動(dòng)物細(xì)細(xì)胞融融合技技術(shù)動(dòng)物細(xì)細(xì)胞培培養(yǎng)技技術(shù)單克隆隆抗體體的制制備過(guò)過(guò)程：：特點(diǎn)點(diǎn)：：既既能能產(chǎn)產(chǎn)生生專專一一抗抗體體又又能能大大量量繁繁殖殖特點(diǎn)點(diǎn)：：特特異異性性強(qiáng)強(qiáng)靈靈敏敏度度高高可可大大量量制制備備注射抗原免疫4、單單抗抗隆隆抗抗體體的的應(yīng)應(yīng)用用①作為為診診斷斷試試劑劑②定位位診診斷斷腫腫瘤瘤、、心心血血管管畸畸形形等等疾疾病病用于于體體外外診診斷斷人人類類和和動(dòng)動(dòng)植植物物疾疾病病及及病病原原鑒鑒定定，，純度度高高、、特特異異性性強(qiáng)強(qiáng)，具具有有準(zhǔn)確確、、高高效效、、簡(jiǎn)簡(jiǎn)易易、、快快速速的優(yōu)優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)。。③用于于治治療療疾疾病病和和運(yùn)運(yùn)載載藥藥物物利用用同同位位素素標(biāo)標(biāo)記記單單抗抗，，在在特特定定組組織織成成像像制成成生物物導(dǎo)導(dǎo)彈彈，將將藥藥物物定定向向帶帶到到癌癌細(xì)細(xì)胞胞所所在在的的位位置置，，在在原原位位殺殺死死癌癌細(xì)細(xì)胞胞，，療療效效高高、、副副作作用用小小。。單克克隆隆抗抗體體的的優(yōu)優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)：：特異異性性強(qiáng)強(qiáng)，，靈靈敏敏度度高高，，并并可可以以大大量量制制備備。。

⑵用用于于治治療療疾疾病病和和運(yùn)運(yùn)載載藥藥物物①特特異異性性強(qiáng)強(qiáng)、、靈靈敏敏度度高高生物物導(dǎo)導(dǎo)彈彈———單克克隆隆抗抗體體＋＋抗抗癌癌藥藥物物②療療效效高高、、毒毒副副作作用用小小結(jié)合同位素的單抗-----生物導(dǎo)彈結(jié)合合同同位位素素的的單單抗抗-----生物物導(dǎo)導(dǎo)彈彈單抗抗放射射性性同同位位素素項(xiàng)目動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性融合前提分散成單個(gè)細(xì)胞去除細(xì)胞壁誘導(dǎo)方法聚乙二醇、離心、振動(dòng)、電激、滅活病毒聚乙二醇、離心、振動(dòng)、電激、結(jié)果獲得雜種細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物獲得雜種植株用途制備單克隆抗體培育作物新品種意義使遠(yuǎn)緣雜交成為可能克服遠(yuǎn)緣雜交障礙動(dòng)物物細(xì)細(xì)胞胞工工程程小小結(jié)結(jié)動(dòng)物物細(xì)細(xì)胞胞培培養(yǎng)養(yǎng)：：原理理、、營(yíng)營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)、、條條件件、、過(guò)過(guò)程程、、細(xì)細(xì)胞胞生生長(zhǎng)長(zhǎng)特特點(diǎn)點(diǎn)、、結(jié)結(jié)果果、、應(yīng)應(yīng)用用動(dòng)物物細(xì)細(xì)胞胞融融合合：：原理理、、誘誘導(dǎo)導(dǎo)方方法法、、過(guò)過(guò)程程、、應(yīng)應(yīng)用用單克克隆隆抗抗體體的的制制備備：：原理理、、過(guò)過(guò)程程、、特特點(diǎn)點(diǎn)、、應(yīng)應(yīng)用用核移移植植與與克克隆隆動(dòng)動(dòng)物物：：供體體、、受受體體、、核核移移植植方方法法、、克克隆隆動(dòng)動(dòng)物物的的方方法法、、克克隆隆動(dòng)動(dòng)物物的的遺遺傳傳特特性性、、應(yīng)應(yīng)用用動(dòng)、、植植物物細(xì)細(xì)胞胞工工程程的的比比較較：：植物物組組培培技技術(shù)術(shù)與與動(dòng)動(dòng)物物細(xì)細(xì)胞胞培培養(yǎng)養(yǎng)技技術(shù)術(shù)、、植植物物體體細(xì)細(xì)胞胞雜雜交交技技術(shù)術(shù)與與動(dòng)動(dòng)物物細(xì)細(xì)胞胞融融合合技技術(shù)術(shù)⑶圖中中B為________過(guò)程程，，常用用_________作為為誘誘導(dǎo)導(dǎo)劑劑，該該細(xì)細(xì)胞胞繼繼承承___________的遺遺傳傳特特性性，，既既能能__________,又能能___________。B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC1.下圖圖為為某某同同學(xué)學(xué)根根據(jù)據(jù)雜雜交交瘤瘤技技術(shù)術(shù)的的方方法法，，設(shè)設(shè)計(jì)計(jì)的的生生產(chǎn)產(chǎn)破破傷傷風(fēng)風(fēng)桿桿菌菌的的抗抗體體實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)方方案案⑴該實(shí)驗(yàn)方方案的目是；⑵A是從小鼠鼠的脾臟臟中取得得_______,該細(xì)胞能能夠產(chǎn)生生；制備單克克隆抗體體B細(xì)胞專一抗體體細(xì)胞融合合滅活病毒毒雙親細(xì)胞胞分泌專一一抗體無(wú)限增殖殖單克隆抗抗體的制制備1、怎樣獲獲得能分分泌專一一抗體的的B淋巴細(xì)胞胞？2、從何處處獲得較較多的B淋巴細(xì)胞胞？3、用什么么方法可可以使B淋巴細(xì)胞胞與骨髓髓瘤細(xì)胞胞融合？？4、怎樣篩篩選出雜雜交瘤細(xì)細(xì)胞？5、篩選出出的雜交交瘤細(xì)胞胞產(chǎn)生的的抗體都都一樣嗎嗎？6、怎樣獲獲得只產(chǎn)產(chǎn)生特異異性抗體體的雜交交瘤細(xì)胞胞？7、怎樣獲獲得大量量的單一一抗體？？反復(fù)注射射特定的的抗原，，免疫小小鼠。小鼠的脾脾臟PEG、滅活的的病毒等等利用HAT選擇培養(yǎng)養(yǎng)基培養(yǎng)養(yǎng)，篩選選否用多孔細(xì)細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)板培養(yǎng)養(yǎng)，稀釋釋度要保證每個(gè)個(gè)孔內(nèi)不不多于一一個(gè)細(xì)胞胞?？乖贵w體雜交法法檢測(cè)——呈陽(yáng)性反反應(yīng)體內(nèi)或體體外大量量培養(yǎng)特特異的雜雜交瘤細(xì)細(xì)胞，從從中提取取單一抗抗體。單克隆抗抗體篩選雜交細(xì)胞胞雜交瘤細(xì)細(xì)胞體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜雜交瘤細(xì)細(xì)胞雜交瘤細(xì)細(xì)胞系提取經(jīng)過(guò)免疫疫的B淋巴細(xì)胞胞動(dòng)物細(xì)胞胞融合技技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞胞培養(yǎng)技技術(shù)單克隆抗抗體的制制備過(guò)程程：特點(diǎn)：既既能產(chǎn)生生專一抗抗體又能能大量繁繁殖特點(diǎn)：特特異性強(qiáng)強(qiáng)靈敏度度高可大大量制備備注射抗原免疫1975年Kohler和Milstein的單克隆抗體體技術(shù)在生產(chǎn)產(chǎn)和使用抗體體方面開創(chuàng)了了新紀(jì)元，圖圖10示單克隆抗體體制備流程階階段示意圖。。請(qǐng)據(jù)圖回答答下列問(wèn)題：：圖10（1）該技術(shù)是在在動(dòng)物細(xì)胞培培養(yǎng)技術(shù)和技術(shù)的基礎(chǔ)上上發(fā)展起來(lái)的的。（2）圖10中細(xì)胞A體外培養(yǎng)不具具有分裂能力，但但能分泌，細(xì)胞B體外培養(yǎng)能夠夠。（3）動(dòng)物細(xì)胞融融合常用的方方法是。圖10（1）動(dòng)物細(xì)胞融融合（2）分泌特異性性抗體、無(wú)無(wú)限增殖（3）PEG（滅活的病毒毒、電刺激））（4）細(xì)胞融合是是隨機(jī)的過(guò)程程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)養(yǎng)，要篩選出出細(xì)胞。在細(xì)胞胞培養(yǎng)過(guò)程中中，為了促進(jìn)進(jìn)細(xì)胞攝取葡葡萄糖，常向向培養(yǎng)液中加加入（激素）。（5）培養(yǎng)2周后，即測(cè)定定培養(yǎng)細(xì)胞的特征，篩選選出細(xì)胞置于不同孔孔內(nèi)（如圖所所示）培養(yǎng)。。此操作前要將將培養(yǎng)細(xì)胞稀稀釋到7～10個(gè)細(xì)胞/ml，每孔滴入0.1ml細(xì)胞稀釋液，，其目的是。（6）要獲得大量量的單克隆抗抗體，可對(duì)獲得的雜雜交瘤細(xì)胞進(jìn)進(jìn)行培養(yǎng)。（4）雜交瘤、胰胰島素（5）特異性分泌泌抗X蛋白抗體的、、保證每個(gè)孔孔內(nèi)不多于一一個(gè)細(xì)胞，達(dá)達(dá)到單克隆培培養(yǎng)的目的（（單一細(xì)胞培培養(yǎng)以保證抗抗體的純度））、（6）體外或體內(nèi)內(nèi)⑴寫出ａ、、ｂ所指的細(xì)細(xì)胞工程各稱稱：ａｂ。⑵實(shí)施細(xì)胞工工程ａ時(shí)，所所需的受體細(xì)細(xì)胞大多采用用動(dòng)物卵細(xì)胞胞的原因是：。。⑶多莉面部的的毛色是，判斷依據(jù)是是：。⑷繼植物組織織培養(yǎng)之后，，克隆綿羊培培育成功，證證明動(dòng)物細(xì)胞胞也具有。⑸請(qǐng)舉例說(shuō)明明克隆綿羊培培育成功的實(shí)實(shí)際意義：。2.世界上第一只只克隆綿羊““多莉”的培培育等程序如如圖所示。請(qǐng)請(qǐng)仔細(xì)看圖后后回答問(wèn)題：：黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊卵腺細(xì)胞核重組細(xì)胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生核移植胚胎移植卵細(xì)胞體積大大，易于操作作，卵細(xì)胞中中有啟動(dòng)核基基因表達(dá)的物物質(zhì)白色多利的核基因因全部來(lái)自白白面綿陽(yáng)全能性保存瀕危物種種，繁殖優(yōu)良良品種，醫(yī)學(xué)學(xué)上克隆器官官3.科學(xué)家用小鼠鼠骨髓癌細(xì)胞胞與某種細(xì)胞胞融合，得到到雜交細(xì)胞，，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)產(chǎn)生大量的單單克隆抗體，，與骨髓癌細(xì)細(xì)胞融合的是是A.經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞B.不經(jīng)過(guò)免疫的的T淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞D.不經(jīng)過(guò)免疫的的B淋巴細(xì)胞A4.科學(xué)家將雌黑黑鼠乳腺細(xì)胞胞的細(xì)胞核移移入白鼠去核核的卵細(xì)胞內(nèi)內(nèi)，待發(fā)育成成早期胚胎后后移植入褐鼠鼠的子宮，該該褐鼠產(chǎn)下小小鼠的體色和和性別分別是是A.黑、雌B.褐、雌C.白、雄D.黑、雄A5.將小鼠骨髓瘤瘤細(xì)胞與一種種B淋巴細(xì)胞融合合，可使融合合的細(xì)胞經(jīng)培培養(yǎng)產(chǎn)生單克克隆抗體，其其依據(jù)是A.B淋巴細(xì)胞可以以產(chǎn)生抗體，，但不能無(wú)限限增殖B.B淋巴細(xì)胞只有有與骨髓瘤細(xì)細(xì)胞融合后才才能產(chǎn)生抗體體C.骨髓瘤細(xì)胞可可以無(wú)限增殖殖，但不能產(chǎn)產(chǎn)生抗體D.骨髓瘤細(xì)胞可可以產(chǎn)生抗體體，但不能增增殖（多選）ACC4．單克隆抗體體是指A、單個(gè)骨髓瘤瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)產(chǎn)生的抗體B、單個(gè)B淋巴細(xì)胞增殖殖產(chǎn)生的抗體體C、單個(gè)雜交交瘤細(xì)胞增增殖產(chǎn)生的的抗體D、單個(gè)抗體體通過(guò)克隆隆化，產(chǎn)生生大量抗體體5.下列哪一項(xiàng)項(xiàng)屬于克隆?。緼.將雞的某個(gè)個(gè)DNA片段整合到到小鼠的DNA分子中B.將抗藥菌的的某基因引引人草履蟲蟲的細(xì)胞內(nèi)內(nèi)C.將鼠骨髓瘤瘤細(xì)胞與經(jīng)經(jīng)過(guò)免疫的的脾細(xì)胞融融合成雜交交瘤細(xì)胞D.將某腫瘤細(xì)細(xì)胞在體外外培養(yǎng)繁殖殖成一個(gè)細(xì)細(xì)胞系D6.一只羊的卵卵細(xì)胞核被被另一只羊羊的體細(xì)胞胞核置換后后，這個(gè)卵卵細(xì)胞經(jīng)過(guò)過(guò)多次分裂裂，再植入入第三只羊羊的子宮內(nèi)內(nèi)發(fā)育，結(jié)結(jié)果產(chǎn)下一一只羊羔。。這種克隆隆技術(shù)具有有多種用途途，但是不不能A．有選擇地地繁殖某一一性別的家家畜B.繁殖家畜中中的優(yōu)秀個(gè)個(gè)體C．用于保存存物種D.改變動(dòng)物的的基因型D7.在動(dòng)物細(xì)胞胞融合和植植物體細(xì)胞胞雜交的比比較中，正正確的是（（））A.結(jié)果是相同同的B.雜種細(xì)胞的的形成過(guò)程程基本相同同C.操作過(guò)程中中酶的作用用相同D.誘導(dǎo)融合手手段的手段段相同B8.已知細(xì)胞合合成DNA有D和S兩條途徑，，其中D途徑能被氨氨基嘌呤阻阻斷。人淋巴細(xì)胞胞中有這兩兩種DNA的合成途徑徑，但一般般DNA不分裂增殖殖。鼠骨髓髓瘤細(xì)胞中中盡管沒(méi)有有S途徑，但能能不斷分裂裂增殖，將將這兩種細(xì)細(xì)胞在試管管中混合，，加聚乙二二醇促融，，獲得雜種種細(xì)胞。請(qǐng)請(qǐng)回答：⑴試管中除融融合的雜種種細(xì)胞外，，還有種融合細(xì)胞胞2⑵設(shè)計(jì)一方法法（不考慮慮機(jī)械方法法），從培培養(yǎng)液中分分離出雜種種細(xì)胞，并并說(shuō)原理。。培養(yǎng)液中加加入氨基嘌嘌呤，收集集增殖的細(xì)細(xì)胞。加入氨基嘌嘌呤后，使使D合成途徑阻阻斷，僅有有D合成途徑的的骨髓瘤細(xì)細(xì)胞及其彼彼此融合的的細(xì)胞就不不能增殖，，但人淋巴巴細(xì)胞和骨骨髓瘤細(xì)胞胞融合后的的雜種細(xì)胞胞因?yàn)榭梢砸岳昧馨桶图?xì)胞中的的S途徑合成DNA而增殖。制備單克隆隆抗體1、常規(guī)抗體體獲得的方方法及其特特點(diǎn)2、單克隆抗抗體制備的的原理◆利用產(chǎn)生特異性性抗體的功功能?！衾脽o(wú)限增殖的的特性?！衾眉夹g(shù)將兩種種細(xì)胞融合合獲得雜交瘤細(xì)胞胞?！衾眉夹g(shù)大量培培養(yǎng)雜交瘤瘤細(xì)胞。B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞胞動(dòng)物細(xì)胞融融合動(dòng)物細(xì)胞培培養(yǎng)3、單克隆抗體體的制備4、單克隆抗抗體的應(yīng)用用（1）融合后的的雜種細(xì)胞胞容易成活活嗎？（2）制備單克克隆抗體的的過(guò)程應(yīng)用用了哪些細(xì)細(xì)胞工程技技術(shù)手段？？（3）在整個(gè)制備備的過(guò)程中中要經(jīng)過(guò)幾幾次篩選？？思考：細(xì)胞的同源源性越近，，融合形成成的雜種細(xì)細(xì)胞越易成成活細(xì)胞融合技技術(shù)、細(xì)胞胞培養(yǎng)技術(shù)術(shù)Ⅰ.篩選得到雜雜交瘤細(xì)胞胞，Ⅱ.篩選先在多多孔培養(yǎng)板板上，在每每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞下培養(yǎng)篩選選出特異抗抗體的細(xì)胞胞群⑷怎樣篩選出出B淋巴細(xì)胞和和骨髓瘤細(xì)細(xì)胞間融合合所形成的的能產(chǎn)生特特定抗體的的雜交瘤細(xì)細(xì)胞？用抗體檢測(cè)測(cè)和克隆化化培養(yǎng)得到到能分泌所所需抗體的的雜種細(xì)胞胞——專一抗體檢檢測(cè)。18.如何利用雜雜交瘤細(xì)胞胞來(lái)大量生生產(chǎn)單克隆隆抗體？①將雜交瘤瘤細(xì)胞在體外大規(guī)模模培養(yǎng)，從細(xì)胞培培養(yǎng)液中就就能提取大大量的單克克隆抗體；；②把雜交瘤瘤細(xì)胞注射射到小鼠腹腔內(nèi)內(nèi)增殖，再?gòu)男∈笫蟾骨恢刑崽崛慰寺÷】贵w。⑸如何進(jìn)行雜雜交瘤細(xì)胞胞的抗體檢檢測(cè)及克隆隆化培養(yǎng)？？融合后的細(xì)細(xì)胞經(jīng)選擇擇性培養(yǎng)基基培養(yǎng)后，，能存活的的細(xì)胞就是是雜交瘤細(xì)細(xì)胞。但這這些雜交瘤瘤細(xì)胞并非非都是能分分泌所需抗抗體的細(xì)胞胞，通常用用“有限稀稀釋法”來(lái)來(lái)選擇。將雜交瘤細(xì)細(xì)胞稀釋，，用多孔細(xì)細(xì)胞培養(yǎng)板板培養(yǎng)，使使每孔細(xì)胞胞不超過(guò)一一個(gè)，通過(guò)過(guò)培養(yǎng)讓其其增殖。然然后檢測(cè)各各孔上清液液中細(xì)胞分分泌的抗體體（常用酶酶聯(lián)免疫吸吸附試驗(yàn)法法），那些些上清液可可與特定抗抗原結(jié)合的的培養(yǎng)孔為為陽(yáng)性孔。。陽(yáng)性孔中的的細(xì)胞還不不能保證是是來(lái)自單個(gè)個(gè)細(xì)胞，挑挑選陽(yáng)性孔孔的細(xì)胞繼繼續(xù)進(jìn)行有有限稀釋，，一般需進(jìn)進(jìn)行3～4次，直至確確信每個(gè)孔孔中增殖的的細(xì)胞為單單克隆細(xì)胞胞。該過(guò)程程即為雜交交瘤細(xì)胞的的克隆化培培養(yǎng)。第二次篩選選的原理和和方法：在實(shí)際免疫疫過(guò)程中，，由于采用用連續(xù)注射射抗原的方方法，且一一種抗原決決定簇刺激激機(jī)體形成成相對(duì)應(yīng)的的一種效應(yīng)應(yīng)B淋巴細(xì)胞，，因此，從從小鼠脾臟臟中取出的的效應(yīng)B淋巴細(xì)胞的的特異性是是不同的，，經(jīng)HAT培養(yǎng)液篩選選的雜交瘤瘤細(xì)胞特異異性也存在在差異，所所以必須從從雜交瘤細(xì)細(xì)胞群中篩篩選出能產(chǎn)產(chǎn)生針對(duì)某某一預(yù)定抗抗原快定簇簇的特異性性雜交瘤細(xì)細(xì)胞。通常采用有有限稀釋克克隆細(xì)胞的的方法，將將雜交瘤細(xì)細(xì)胞多倍稀稀釋，接種種在多孔的的細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)板上，使使每一孔含含一個(gè)或幾幾個(gè)雜交瘤瘤細(xì)胞（理理論上30%的孔中細(xì)胞胞數(shù)為0時(shí)，才能保保證有些孔孔中是單個(gè)個(gè)細(xì)胞），，再由這些些單細(xì)胞克克隆生長(zhǎng)，，最終選出出分泌預(yù)定定特異抗體體的雜交細(xì)細(xì)胞株進(jìn)行行擴(kuò)大培養(yǎng)養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)過(guò)過(guò)程程要要解解決決的的問(wèn)問(wèn)題題：：1、如如何何使使機(jī)機(jī)體體產(chǎn)產(chǎn)生生能能分分泌泌抗抗體體的的B淋巴巴細(xì)細(xì)胞胞？？2、從從實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動(dòng)動(dòng)物物的的什什么么部部位位提提取取B淋巴巴細(xì)細(xì)胞胞？？3、機(jī)機(jī)體體內(nèi)內(nèi)什什么么細(xì)細(xì)胞胞能能無(wú)無(wú)限限增增殖殖？？3、用用什什么么方方法法誘誘導(dǎo)導(dǎo)細(xì)細(xì)胞胞融融合合？？4、雜雜交交瘤瘤細(xì)細(xì)胞胞有有幾幾種種類類型型？？制制備備單單克克隆隆抗抗體體需需要要哪哪種種類類型型？？5、如如何何篩篩選選雜雜交交瘤瘤細(xì)細(xì)胞胞？？根據(jù)據(jù)下下面面植植物物體體細(xì)細(xì)胞胞雜雜交交技技術(shù)術(shù)流流程程圖圖回回答答相相關(guān)關(guān)問(wèn)問(wèn)題題：：（1）若若運(yùn)運(yùn)用用傳傳統(tǒng)統(tǒng)有有性性雜雜交交（（即即用用番番茄茄、、馬馬鈴鈴薯薯雜雜交交））能能否否得得到到雜雜種種植植株株？？為為什什么么？？_____________________________________________________________________________________.不能能，，不不同同種種的的植植物物存存在在生生殖殖隔隔離離（2）在在利利用用雜雜種種細(xì)細(xì)胞胞培培育育雜雜種種植植株株的的過(guò)過(guò)程程中中，，運(yùn)運(yùn)用用的的技技術(shù)術(shù)手手段段是是________________，依依據(jù)據(jù)的的原原理理是是_________________,其中中過(guò)過(guò)程