帕金森動物模型課件

大鼠帕金森動物模型ZeyunZhu20160808帕金森及動物模型簡介帕金森動物模型制備模型效果評價目錄

帕金森

簡介調(diào)研方法第一部分

帕金森是繼阿耳茨海默?。ɡ夏臧V呆癥）后第二大普遍的老化大腦的神經(jīng)系統(tǒng)退行性病。1817年Jamesparkinson描述為震顫麻痹。引起該疾病運動癥狀主要是因為紋狀體內(nèi)多巴胺減少從而導致黑質(zhì)密致部實質(zhì)內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元逐步衰退。

病理第一部分

PD的癥狀是黑質(zhì)密致部區(qū)域的染色多巴胺分泌細胞減少繼發(fā)分泌的黑色素減少產(chǎn)生的結(jié)果。PS：黑質(zhì):在大腦腳底與中腦被蓋之間有一大的灰質(zhì)團塊是黑質(zhì)，見于中腦全長。黑質(zhì)細胞富含黑色素，是腦內(nèi)合成多巴胺的主要核團。黑質(zhì)主要與端腦的新紋狀體(尾狀核和殼核)有往返纖維聯(lián)系。由于某些原因使黑質(zhì)細胞變性，多巴胺合成減少，是引起震顫麻痹(Parkinson病)的主要病因。在正常生理狀態(tài)下，黑質(zhì)是調(diào)節(jié)運動的重要中樞。

黑質(zhì)

紋狀體調(diào)研方法第一部分紋狀體：殼核和尾狀核通過大量條紋狀細胞橋互相連接，所以得名紋狀體。根據(jù)發(fā)生的早晚可分為新、舊紋狀體，新紋狀體指豆狀核的殼和尾狀核，舊紋狀體指蒼白球，紋狀體屬錐體外系的結(jié)構(gòu)，與骨骼肌的活動有關。新紋狀體：

在發(fā)生學上比較年輕，包括尾狀核及殼核，它們起源于端腦。在這兩個神經(jīng)細胞團中，含有大量的小細胞和較少的大細胞。小細胞接受來自大腦皮層各部以及來自丘腦的神經(jīng)，因此，新紋狀體直接受到大腦皮層的影響，而且還間接地受到通過丘腦傳來的小腦以及其它錐體外系的影響。大細胞發(fā)出的傳出纖維到達同側(cè)的蒼白球。目前已知，新紋狀體與維持機體的固定姿勢有關。大量的臨床病理資料證明，尾狀核頭部的變性、萎縮，可出現(xiàn)舞蹈樣動作（如慢性進行性舞蹈?。粴ず说牟∽儎t與臨床所見的手足徐動癥、肝豆狀核變性、扭轉(zhuǎn)痙攣、舞蹈病等不自主運動有關。舊紋狀體：系指蒼白球。它起源于間腦，進化上比較古老，內(nèi)含大細胞，除接受同側(cè)新紋狀體來的纖維以外，還接受來自丘腦和從大腦皮層來的纖維。由它發(fā)出的纖維主要是蒼白球丘－丘腦束，一部分纖維分別向下傳到丘腦底核、黑質(zhì)。舊紋狀體被視為錐體外系中的一個重要傳出中間站。已經(jīng)證明，蒼白球的功能與肢體的肌張力姿勢反射有關。帕金森病患者到了中晚期幾乎都有蒼白球的變性。

癥狀調(diào)研方法第一部分

PD可見兩種癥狀1、非運動癥狀情緒障礙認識障礙睡眠障礙感覺障礙2、運動癥狀震顫僵直運動過慢/運動不能姿勢不穩(wěn)定其他癥狀包括步態(tài)和姿勢障礙拖著腳走慌張步態(tài)步態(tài)凍結(jié)（無法移動）語言和吞咽障礙發(fā)聲過弱語言倉促流涎吞咽困難第一部分簡介模型制備第二部分

術(shù)前準備第二部分1、儀器準備大鼠腦立體定位儀微量注射器鉆孔器2、手術(shù)器材：15%雙氧水、戊巴比妥鈉、75%乙醇、碘伏手術(shù)剪刀、鑷子、手術(shù)縫合線、醫(yī)用棉球、抗生素

頭部切口第二部分3、頭部切口用手術(shù)刀片沿顱骨正中線切開，再以15%H2O2去除結(jié)締組織（H2O2還可以起到止血的作用），以清晰看到顱骨表面縫隙為宜。第二部分

定位圖譜

確定注射位點冠狀切面第二部分

定位圖譜

確定注射位點矢狀切面第二部分

定位圖譜

確定注射位點水平切面第二部分

核團定位4、核團定位首先，在腦定位儀上讀出Bregma坐標（AP,ML,DV）,再根據(jù)文獻上尋找到的目標靶核團坐標（這些坐標都是基于Bregma坐標為0,0,0），換算出此核團在顱骨表面的實際坐標。

6-OHDA

注射第二部分6.6-OHDA注射1)用PBS沖洗微量注射器(5μl規(guī)格)3-5次；2)4ug/ul6-OHDA溶解于0.2%Vc（必須當天配置），3)將微量注射泵，微量注射器組裝好，置于鉆好的孔上方，針尖與顱骨平行(Z=0)，微調(diào)注射器位置使之與之前鉆孔時位置相同；4)根據(jù)定好的深度將注射針緩慢下降以0.05μl/min的速度注射6-OHDA，每點注射3ul注射完畢后，將注射針停留在注射位置5min待6-OHDA擴散，然后緩慢提針4mm，繼續(xù)留針5min后緩慢退針7)用PBS清洗微量注射器5次備用；8)注意注射過程中若有出血立刻用棉簽吸走，以免帶出6-OHDA

縫合

抗感染第二部分7、縫合定位注射后縫合頭皮，即可完成腦立體定位注射。8、術(shù)后抗感染先鋒v50mg/kg肌肉注射或慶大霉素2ml，兌100ml鹽水中，每只大鼠0.5m效果評價第三部分模型評價誘導：3