植物離體快繁技術(shù)課件

第三章

植物離體快繁技術(shù)第一節(jié)離體快繁的方法一、植物的離體快速無性繁殖1、概念利用離體培養(yǎng)技術(shù)，將來自優(yōu)良植株的莖尖、腋芽、葉片、鱗片等器官、組織或細胞進行離體培養(yǎng)，在短期內(nèi)獲得大量遺傳性一致的個體的方法。2、特點：繁殖速度快、數(shù)量大；培養(yǎng)條件可控占地小管理方便，利于自動化便于種質(zhì)保存和交換利用組織培養(yǎng)快速繁殖已在糧食作物、經(jīng)濟作物、觀賞作物、藥用等100多種植物上獲得成功。其中在生產(chǎn)上推廣應用的有馬鈴薯、甘蔗、三倍體無籽西瓜、葡萄、山楂、菊花等。我國山東、東北等省區(qū)建立了無毒馬鈴薯原種場，廣西柳城已建立了甘蔗快速繁殖育苗車間。蘆筍石刁柏百合科植物石刁柏AsparagusofficinalisL.的塊根化學成分含皂甙，其皂甙元為美洲菝葜皂甙元潤肺鎮(zhèn)咳，祛痰殺蟲蘆筍是指石刁柏的嫩莖，因其嫩莖形似蘆葦?shù)哪矍o和竹筍，故稱蘆筍蘆筍雌雄異株，是一種多年生宿根性草本植物，以食其嫩莖為主蘆筍它是一種極好的保健蔬菜，為二十一世紀的“蔬菜之王”“蔬菜中的貴族菜”。蘆筍營養(yǎng)豐富，香肥、脆嫩，視感極佳，并帶有特殊的芳香味。具有人體所必需的多種氨基酸，含量比例也比較適當，無機鹽元素中有較多的硒、鉬、鎂、錳、鉻等微量元素，它們對防治癌癥及心臟病有重要的作用還含有大量的天門冬酰胺為主體的非蛋白質(zhì)含氮物質(zhì)和天門冬胺酸以及多種甾體、皂甙、蘆酊、甘露聚糖、膽堿等，對心臟病、高血壓、心率過速、疲勞癥、水腫、膀胱炎、排尿困難等病癥有一定的療效。含有天門冬酰胺酶，能治療白血病.石刁柏干種子———我國首次植物上太空7天后，衛(wèi)星載著石刁柏種子返回地面。由于干種子水分含量少，對環(huán)境的忍耐力高，種子沒有任何改變。細胞工程技術(shù)的研究和發(fā)展為蘆筍的快速繁殖開辟了新的途徑，其不僅能夠保持品種的優(yōu)良特性，而且能夠加大繁殖系數(shù)。如果每人每天接種500個來自母株的芽，每隔3～4個月就可以得到350株能夠移栽的生根小植株。如果每人每年工作200天可生產(chǎn)大約7萬棵蘆筍植株，繁殖速度比常規(guī)分株繁殖高幾萬倍以上。3、離體快繁的程序和技術(shù)關(guān)鍵培養(yǎng)物的建立莖芽的增殖完整植株的形成再生植株的鍛煉和移植（1）無菌外植體的制備方法概念：在無菌條件下，用于試管內(nèi)繼代增殖的植物材料，稱為無菌外植體或繁殖外植體。制備方法：田間取回嫩枝、消毒、接種、形成叢芽技術(shù)關(guān)鍵：材料的滅菌：殺菌、材料成活培養(yǎng)基的篩選：考慮植物種類、外植體類型、成苗途徑步驟1.入：將預備接種的培養(yǎng)基、菌種、接種用具及消毒用品全部放入接種箱，封閉接種箱2.擦：接種前用75%的酒精棉球擦手，然后伸進接種箱復擦一次，特別是手指夾內(nèi)，并擦拭所有用具。

3.燒：用酒精燈火焰外焰燒灼接種器具，待其冷卻待用。4.噴：雙手伸進接種箱，用已裝好3%來蘇水或5%石碳酸的小噴霧器噴霧，沉降粉塵，凈化接種箱。5.薰：將稱量好的高錳酸鉀倒入甲醛溶液中產(chǎn)生蒸汽薰蒸，消毒30分鐘，殺死箱內(nèi)雜菌，其比例為高錳酸鉀5g/m3，加10ml甲醛溶液。

6.照：用紫外線燈照射15-30分鐘7.輕：接種時輕拿輕放

8.除：指將無關(guān)物品全部清除出接種箱。

（2）不定芽的增殖不定芽型：抑制頂端優(yōu)勢，促進腋芽生長。頂芽和腋芽萌發(fā)途徑胚狀體途徑：形成胚狀體后成苗。特點：繁殖率高，遺傳性穩(wěn)定原球莖途徑：蘭屬特有；種子、原球莖、植株切割調(diào)節(jié)激素種類和配比外源激素的積累，過量會造成畸形芽、透明芽，影響不定芽的質(zhì)量，因此應適時降低激素的濃度。培養(yǎng)基內(nèi)誘導基質(zhì)生根法：糠灰、蛭石、珍珠巖、沙嫁接生根法：無籽西瓜嫁接在瓠子上長根誘導根分化的方法：濾紙橋瓶外

生根技術(shù)2、操作過程取材：在組培室中剪取1.5-2.0cm長的帶頂芽的莖段，余下部分可作繼代擴繁培養(yǎng)。生長素處理：所剪取莖段的基部在一定濃度的生長素蘸過后，輕輕插入濾紙橋中，放入棚內(nèi)有一定營養(yǎng)液的的長方形容器內(nèi)，然后啟動調(diào)控措施。保養(yǎng)：在操作過程當中，要對莖段不時的噴水霧以防止失水過多而萎蔫，通過觀察莖段的生根情況，并根據(jù)所出現(xiàn)的情況及時調(diào)整光強，溫度、濕度，篩選出最佳的生根條件。

（4）小植株的馴化和移栽日光鍛煉，恢復葉綠體光合作用濕度鍛煉，打開培養(yǎng)瓶1~2周沖洗干凈培養(yǎng)基選擇基質(zhì)保濕，移栽10天內(nèi)空氣相對濕度應在80%~90%注意事項在培養(yǎng)中，如果出現(xiàn)雜菌污染，應立即將該培養(yǎng)物倒掉。對于愈傷組織或試管苗長勢良好，僅有局部雜菌污染的試管或三角瓶，也可在無菌條件下，將愈傷組織或試管苗取出，重新放入裝有相應培養(yǎng)基的試管或三角瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。煉苗后，也可先將試管苗浸泡在含有生長素的清水中1-2h，再移栽到馴化苗圃中。在馴化過程中，要注意防止各種病蟲害的發(fā)生。蘆薈蘆薈在二戰(zhàn)中，美國在日本的長崎和廣島投下兩顆原子彈后，大量的幸存者被原子同位素核輻射灼傷。任何藥物都醫(yī)治無效，醫(yī)學專家也沒切實可行治療方案，后來有人提議用蘆薈絞汁抹于傷口，并開始了試用，驚人的奇跡出現(xiàn)，傷口竟愈合的又快又好，比其他藥物再生速度要快２倍以上，甚至不留痕跡。素有“萬應良藥”、“天然美容師”、“家庭醫(yī)生”等美稱美容、藥用的蘆薈種類庫拉索蘆薈、巴巴多斯蘆薈，俗稱美國蘆薈元江蘆薈樹蘆薈好望角蘆薈華蘆薈皂質(zhì)蘆薈蘆薈的用途用于風濕癥、體內(nèi)外各種潰瘍、高血壓、糖尿病、癌癥、膽固醇疾病等患者。蘆薈中的脂肪酸可以有效地防治皮膚病癥，因此在治療燒傷、割傷、擦傷、皮膚病、傷疤等具有顯著的療效蘆薈可以促進皮膚細胞更新。蘆薈對皮膚的滲透性強(可深達七層細胞組織)，廣泛用于化妝品和保健品等。蘆薈可以有效地清體內(nèi)自由基，排除體內(nèi)有害物質(zhì)，促進新陳代謝。蘆薈組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)蘆薈不能自花授粉結(jié)實，用種子繁殖非常困難。繁殖方法主要是分株和分蘗，難以快速、大量地繁殖種苗對蘆薈莖尖進行組織培養(yǎng)快速繁殖試管苗，可在短期內(nèi)繁殖上百萬株的種苗，成本低，效益高材料和培養(yǎng)基l0-l5cm高的蘆薈幼苗愈傷組織誘導培養(yǎng)基為MS+(1-6mg/)BA+(0.1一0.5mg/L)NAA分化培養(yǎng)基為MS+(2-4mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA生根培養(yǎng)基為MS+(0.1一0.5mg/L)IBA+(2一5mg/L)PP331、誘導愈傷組織蘆薈幼苗在清水中沖洗，取莖尖部分，再沖洗1-2次，淋干。在超凈臺上，先用75%的乙醇將莖尖浸泡30-60s，再用升汞浸5-l0min，最后用無菌水沖洗數(shù)次。用解剖刀取出包括莖尖生長點的組織切塊，接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基上。光照10-12h，光照度為1000一2000Lx，溫度(25士)2℃。15-25d后，外植體膨大，形成愈傷組織。愈傷組織形成1周后，就可將愈傷組織轉(zhuǎn)管進行繼代培養(yǎng)或分化培養(yǎng)。2、繼代培養(yǎng)無菌水反復清洗附著于愈傷組織的培養(yǎng)基將愈傷塊切成數(shù)個小塊，再接種到裝有愈傷組織誘導培養(yǎng)基的三角瓶中，在相同的培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)。通過繼代培養(yǎng)，可繁殖出大量愈傷組織來，用于分化培養(yǎng)。3、分化培養(yǎng)將愈傷組織用無菌水洗凈，切成小塊，接種到分化培養(yǎng)基中。30-50d后，愈傷組織就可分化出芽，并繼續(xù)長出小葉片。4、生根培養(yǎng)幼苗葉片長到3cm左右時，將幼苗放入裝有生根培養(yǎng)基的三角瓶中培養(yǎng)。大約半個月后，幼苗即可生根。5、煉苗

當幼苗的根長到一定長度，幼苗形體已顯健壯時。將幼苗取出，在清水中洗除附著在根上的培養(yǎng)基(注意:一定要嚴格洗凈，否則會爛根)。將洗凈的幼苗排好，用清水噴濕，在15-25℃、濕度60%-80%的條件下煉苗24h6、移栽煉苗后，將幼苗移栽入由蛭石組成的馴化苗圃中馴化，每天定期給幼苗噴施馴化培養(yǎng)液和清水，大約15-20d后，視幼苗長勢，即可移栽到苗圃中。注意事項蘆薈的蟲害主要是紅蜘蛛和蚜蟲，可噴施40%的氧化樂果乳油1200倍液防治。蘆薈的病害主要是黑斑病，可噴施50%多菌靈可濕性粉劑1000倍液防治。及時排除田間積水，控制土壤溫度，消除低溫高濕、高溫高濕，及時清除雜草第二節(jié)快繁中的常見問題物種的局限無