動物實驗基本操作技術(shù)課件

2022/12/81動物實驗基本操作技術(shù)1動物實驗前的準備2實驗動物的抓取與固定3性別鑒定4年齡的大致判斷5妊娠檢查6動物編號7常規(guī)采血方法8給藥途徑與方法9麻醉方法10處死方法2022/12/82第一節(jié)、動物實驗前的準備（一）動物實驗室的選擇1.根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇合適的實驗室及飼養(yǎng)室。

2.動物實驗室要與實驗動物同等級別。

3.飼養(yǎng)室應(yīng)符合實驗動物的生活習(xí)性及國家實驗動物設(shè)施各項標準。

2022/12/83（二）實驗動物的購買

1.應(yīng)購買有實驗動物生產(chǎn)供應(yīng)許可證的單位所生產(chǎn)繁殖的實驗動物，并索取相應(yīng)實驗動物的質(zhì)量合格證明。2.如果從外地購買的動物，應(yīng)考慮運輸中的各種因素對實驗動物的影響，并應(yīng)查閱運輸檢疫證明。3.購買的動物需要經(jīng)過3-7天的隔離檢疫、觀察。（三）實驗動物的操作技術(shù)2022/12/852022/12/86小鼠固定盒固定2022/12/87大鼠固定盒固定2022/12/88二、兔子的抓取和固定1右手抓住兔頸背部的被毛和皮膚提起；2左手托其臀部，讓其體重大部分集中在左手上。注意：不能單純抓雙耳或抓提背腹部的毛皮。

2022/12/8101將盒式固定器的盒蓋打開；2按標準操作規(guī)程抓取兔子；3將兔子放入盒式固定器內(nèi)；露出頭部。4如果兔掙扎，可用手在它的背上輕輕撫摸，使其安靜。

注意：盒式固定，適用于兔耳采血、耳血管注射等。2022/12/812三、豚鼠的抓取與固定1先用手掌迅速輕扣住豚鼠背部；2抓住其肩胛上方皮膚，以拇指和食指環(huán)握頸部，中指和無名指輕輕扣住胸廓；也可像抓取大鼠一樣抓住雙耳和頸背部皮膚；另一只手托住臀部。注意：豚鼠較為膽小易驚，不宜強烈刺激和受驚，在抓取時，必須穩(wěn)、準和迅速；也不能單純抓取背腹部，否則易造成肝破裂而引起死亡。2022/12/814一、大、小鼠的性別鑒定根據(jù)生殖器到肛門的距離長短鑒定:距離長為雄性,距離短為雌性.第三節(jié)

性別鑒定2022/12/815Female

Male

二、兔的性別鑒定2022/12/816一、大、小鼠

1.根據(jù)形態(tài)鑒定日齡（大、小情況基本一樣）第四節(jié)年齡的大致判斷日齡/d外觀形態(tài)特征1仔鼠裸體鮮紅3耳殼露出表皮4臍帶瘢痕脫落5能翻身8能爬行10能聽到聲音9～11全身被白毛，門齒長出13～15眼皮張開，能跳躍，能抓取東西18以后能自行采食，獨立生活2022/12/8172022/12/8182022/12/820

二、豚鼠

1外觀:一般老年豚鼠牙齒和趾爪長，被毛稀疏無光澤，眼神呆滯，行動遲緩。而年輕豚鼠牙齒短白，爪短軟，眼睛圓亮，行動敏捷，被毛有光澤，且緊貼身體。2體重:根據(jù)體重推斷大致年齡。同日齡豚鼠，雌性體重略高于雄性。日齡/d

初生7203060體重/g60～80100～120150～200170～220240～300日齡/d90120180體重/g330～400400～470520～6002022/12/821

三、家兔家兔的門齒和爪隨年齡增長而增長，是年齡鑒別的重要標志。青年兔門齒潔白，短小，排列整齊；老年兔門齒暗黃，厚而長，排列不整齊，有時破損。白色家兔趾小基本呈紅色，尖端呈白色。1歲家兔紅色與白色長度相等；1歲以下，紅多于白；1歲以上，白多于紅。還可根據(jù)趾爪的長度與彎曲度來區(qū)別。青年兔趾爪較短，直平，隱在腳毛中，隨年齡的增長，趾爪露出于腳毛之外，而且爪尖鉤曲。另外，皮薄而緊，眼神明亮，行動活潑的為青年兔；皮厚而松，眼神頹廢，行動遲緩的為老年兔。2022/12/823

左前腿上部為1，左腰部為2，左后腿為3，頭部為4，背部為5，尾基部為6，

右側(cè)從前至后依次為7、8、9。用黃色表示個位數(shù)，紅色表示十位數(shù)。2022/12/8242．個體耳號標記法

3.個體斷趾標記法

4.耳號鉗標記法

5.掛牌法2022/12/826一、大、小鼠的采血方法

1．頸靜脈或頸動脈采血

2．股靜脈或股動脈采血

3．心臟采血

4．尾部采血

5．摘除眼球采血6．眼眶后靜脈叢(竇)采血2022/12/827摘除眼球采血法：

(1)左手抓住大小鼠頸部皮膚，輕壓在實驗臺上，取側(cè)臥位;

(2)左手食指盡量將大小鼠眼周皮膚往頸后壓，使眼球突出。

(3)用眼科彎鑷夾去眼球，將鼠倒立，用試管接住流出的血液。(4)采血完畢即用紗布壓迫止血。

采血量：每次0.6-2.0ml/次。

2022/12/828眼眶后靜脈叢(竇)取血：

1、先將毛細管浸泡在1％肝素溶液中數(shù)分鐘，然后取出干燥備用。

2、將大小鼠進行麻醉，使大小鼠保持側(cè)臥位。3、左手拇指、食指抓住兩鼠耳之間的頸部頭皮，并輕輕向下壓迫頸部兩側(cè)，致大小鼠靜脈血回流障礙，眼球外突，眶后靜脈叢充血。4、右手持毛細管由大小鼠的內(nèi)毗部插入結(jié)膜，使毛細管與眶壁平行地向喉頭方向推進，深度約2—5mm

。5、輕輕旋動毛細管，使其穿破靜脈叢,讓血流順毛細管流出。采血量：0.2—1ml／次。

2022/12/830二、豚鼠的采血方法

1．耳緣剪口采血

2．心臟采血方法同大、小鼠。

3．股動脈采血方法同大、小鼠。

4．后肢背中足靜脈采血2022/12/831九、兔子耳緣采血靜脈（注射）1先拔去注射部位的被毛；2用手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈；3用消毒酒精消毒注射部位；4左手食指和中指托住注射部位的耳緣，大拇指順勢按在耳上面固定住兔耳；5右手持6號針頭（連注射器）盡量從靜脈的遠端刺入；6當針頭有回流血時，移動拇指于針頭上以固定針頭；7將藥液以均勻的速度注入；或以均勻的速度抽取血液；8注射（采血）完畢，拔出針頭；用消毒棉球（棉簽）壓迫針眼片刻。注意：兔耳部血管分布清晰，耳中央為動脈，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故不用；外緣靜脈表淺易固定，常用。2022/12/832三、家兔的采血方法

1．心臟采血

2．耳中央動脈采血

3．耳靜脈采血2022/12/8332022/12/834采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃為宜；采血用具有采用部位一般需要進行消毒；采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑。采血時要注意2022/12/835動物種類最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)小鼠0.20.3大鼠12豚鼠510兔1040最大安全采血量與最小致死采血量2022/12/836第八節(jié)

給藥途徑與方法

在動物實驗過程中，應(yīng)根據(jù)不同的實驗?zāi)康?、動物種類、藥物類型來決定動物的給藥途徑與方法。動物的給藥方法主要分為注射法和投入法兩種，注射法分為：皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、腦膜下注射、腦內(nèi)注射、胸腔內(nèi)注射、腰椎內(nèi)注射、靜脈注射、關(guān)節(jié)腔注射和心內(nèi)注射。投入法可分為：鼻腔內(nèi)投入、胃腔內(nèi)投入、腸管內(nèi)投入、氣管內(nèi)投入和經(jīng)口腔投入。以下將各種動物的主要給藥途徑和方法做一介紹。2022/12/8371皮下注射

(1)注射部位：頸背部、腋下、腹側(cè)和后肢的皮下豚鼠在后大腿的內(nèi)側(cè)或小腹部；大白鼠可在側(cè)下腹部。兔在背部或耳根部注射。

(2)常規(guī)消毒注射部位的皮膚，注射時以左手拇指和食指提起皮膚，將連有針頭的注射器取一銳角角度刺入皮下。

(3)將針頭輕輕向左右擺動，易擺動則表示已刺入皮下，再輕輕抽吸，如無回血，可緩慢地將藥物注入皮下。

注射量：0.01ml—0.03ml／g體重。2022/12/8382.皮內(nèi)注射此法用于觀察皮膚血管通透性變化或皮膚反應(yīng)。注射部位：動物背部局部脫毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器連4(1/2)細針頭，緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液，此時可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。3.肌肉注射給藥

注射部位：一般選擇肌肉豐富而無大血管通過的臀部或大腿外測，回抽無血即可注射。

2022/12/8394尾靜脈注射1）大小鼠尾靜脈注射1將大小鼠固定在金屬籠或固定器中，使尾巴露出；2用45～50℃的溫水浸潤尾部半分鐘或用75％酒精棉球反復(fù)擦拭使血管擴張和使表皮角質(zhì)軟化；3用食指和中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，大拇指再輕輕按住尾部；4右手持注射器，使針頭與靜脈平行（小于30度角），從尾下1／4處（約距尾尖2-3厘米）處進針；5先緩注少量藥液，如無阻力，無白色皮丘出現(xiàn)，表示針頭已進入靜脈，可繼續(xù)注入；6注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血或以消毒棉簽(棉球)止血。如需反復(fù)注射，應(yīng)盡可能從末端開始，以后向尾根部方向移動注射。注意：鼠尾靜脈有三根，左右兩側(cè)及背側(cè)各一根，多采用左右兩側(cè)尾靜脈。

注射量：小鼠

0.005m1—0.01m1／g體重。

大鼠1.0-2.0

m1／100g體重2022/12/8402022/12/8412）兔耳緣靜脈給藥

(1)將兔放在保定架內(nèi)保定。(2)拔去注射部位的被毛，用手指彈動或輕揉兔耳，并酒精消毒，使兔的耳緣靜脈充盈。(3)用左手食指和中指夾住兔的耳緣靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠端，無名指和小指放在耳郭下作墊。(4)右手拿注射器，針尖的斜面朝上，將針頭從遠心端插入血管，放松對靜脈近心端的壓迫，回抽有血即可注射，拔針后用棉球止血。注：兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動脈，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故不用。外緣靜脈表淺易固定，常用。2022/12/8425大小鼠腹腔注射1左手抓取和固定動物，使腹部向上，以及使鼠頭稍朝下大約15度角（頭低位）；2用消毒酒精進行進針部位消毒；3右手將注射器針頭于左（或右）小腹部刺入皮下；4使針頭向前推進0.5cm～1.0cm，再以45度角穿過腹??；5定住針頭，緩緩注入藥液。注意：為避免傷及內(nèi)臟，一定要使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹；若大鼠體積過大，可由第二個操作員協(xié)助進行腹腔注射。2022/12/843

2022/12/844注射途徑小鼠大鼠豚鼠兔腹腔0.2～1.01～32～55～10肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～1靜脈0.2～0.51～21～53～10皮下0.1～0.50.5～10.5～21～3幾種動物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）2022/12/845（六）經(jīng)口給藥

一、經(jīng)口給藥1.自動口服給藥：2.灌胃給藥:是借器械將藥物直接灌入動物胃內(nèi)的方法。適用于小白鼠、大白鼠、家兔等動物。此法可以準確控制給藥量，但如果操作不當易造成動物死亡。2022/12/846（1）大小鼠和豚鼠的灌胃1用輸血針頭或小號腰穿針頭，將其尖端斜面磨平，用焊錫在針尖周圍焊一圓頭，即成灌胃針；或購買現(xiàn)成的灌胃針；2灌胃時將針接在注射器上，吸入藥液；3左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動物固定；體位為頭高尾低；4操作前，大致量一下從口到胃的距離，估計灌胃針頭插入的深度。5右手持注射器，將灌胃針插入動物口中，沿口腔頂壁和咽后壁徐徐插入食道；針插入時應(yīng)無阻力。若感到阻力或動物掙扎時，應(yīng)立即停止進針或?qū)⑨槹纬?，以免損傷或穿破食道以及誤入氣管。6用右手食指將針栓慢慢往下壓，將注射器中的藥液灌入動物的胃中一般當灌胃針插入小鼠3－4cm，大鼠或豚鼠4-6cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2-1ml，大鼠1-4ml，豚鼠為1-5ml。注

意：在灌胃過程中，避免誤插入氣管。

2022/12/847劑量：小鼠約0.1-0.5ml／10g體重。最大體積為1.0ml/只；大鼠約1-2ml／100g體重，最大體積為1.0ml/只2022/12/848

（2）兔灌胃

1、將兔放進保定架內(nèi)，助手用手輕輕壓住兔的背部，避免兔的掙扎。

2、灌胃者用左手拇指和中指擠壓兔兩頰，將下頜擠開使兔被動張口。

3、右手將開口器從一側(cè)口角插入口腔并固定。

4、用泡在石蠟油中的胃管，經(jīng)開口器的孔插入，向前推進約15cm，可達胃內(nèi)。

5、在插管時應(yīng)將胃管另一端泡在水中確認沒有冒氣泡，即可用注射器經(jīng)胃管注入藥液。灌胃量：

80-150ml／只／次。2022/12/849第九節(jié)麻醉方法

麻醉(anesthesia)的基本任務(wù)是消除實驗過程中所至的疼痛和不適感覺，保障實驗動物的安全，使動物在實驗中服從操作，確保實驗順利進行。一、常用的麻醉劑動物實驗中常用的麻醉劑分為三類，即揮發(fā)性麻醉劑、非揮發(fā)性麻醉劑和中藥麻醉劑。

2022/12/8501．揮發(fā)性麻醉劑包括乙醚、氯仿等，乙醚吸入麻醉適用于各種動物，其麻醉量和致死量差距大，所以安全度亦大，動物麻醉深度容易掌握，而且麻后蘇醒較快。其缺點是對局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液體分泌增多，再通過神經(jīng)反射可影響呼吸、血壓和心跳活動，并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醉時必需有人照看，以防麻醉過深而出現(xiàn)以上情況。

2022/12/8512．非揮發(fā)性麻醉劑這類麻醉劑種類較多，包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時間，麻醉過程較平衡，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。但缺點是蘇醒較慢。

3．中藥麻醉劑動物實驗時有時也用到象洋金花和氫溴酸東莨菪堿等中藥麻醉劑，但由于其作用不夠穩(wěn)定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故在使用過程中不能得到普及，因而，多數(shù)實驗室不選用這類麻醉劑進行麻醉。2022/12/852

二、動物的麻醉方法

1．全身麻醉（1）吸入法用一塊圓玻璃板和一個鐘罩或一個密閉的玻璃箱作為揮發(fā)性麻醉劑的容器，多選用乙醚作麻藥。麻醉時用幾個棉球，將乙醚倒入其中，迅速轉(zhuǎn)入鐘罩或箱內(nèi)，讓其揮發(fā)，然后把待麻醉動物投入，約隔4～6分鐘即可麻醉，麻醉后應(yīng)立即取出，并準備一個蘸有乙醚的棉球小燒杯，在動物麻醚變淺時給套在鼻上使其補吸麻藥。本法最適于大、小鼠的短期操作性實驗的麻醉，也可用于較大的動物。由于乙醚燃點很低，遇火極易燃燒，所以在使用時，一定要遠離火源。2022/12/853

（2）腹腔和靜脈給藥麻醉法非揮發(fā)性和中藥麻醉劑均可用作腹腔和靜脈注射麻醉，操作簡便，是實驗室最常采用的方法之一。腹腔給藥麻醉多用于大小鼠和豚鼠，較大的動物如兔、狗等則多用靜脈給藥進行麻醉。由于各麻醉劑的作用長短以及毒性的差別。所以在腹腔和靜脈麻醉時，一定要控制藥物的濃度和注射量。2022/12/8542．局部麻醉⑴貓的局部麻醉一般應(yīng)用0.5～1.0%鹽酸普魯卡因注射。粘膜表面麻醉宜用2%鹽酸可卡因。

⑵兔在眼球手術(shù)時，可于結(jié)膜囊滴入0.02%鹽酸可卡因溶液，數(shù)秒鐘即可出現(xiàn)麻醉。⑶狗的局部麻醉用0.5～1%鹽酸普魯卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%鹽酸可卡因。2022/12/8553.麻醉效果的觀察動物的麻醉效果直接影響實驗的進行和實驗結(jié)果。如果麻醉過淺，動物會因疼痛而掙扎，甚至出現(xiàn)興奮狀態(tài)，呼吸心跳不規(guī)則，影響觀察。麻醉過深，可使機體的反應(yīng)性降低，甚至消失，更為嚴重的是抑制延髓的心血管活動中樞和呼吸中樞，使呼吸、心跳停止，導(dǎo)致動物死亡。因此，在麻醉過程中必須善于判斷麻醉程度，觀察麻醉效果。判斷麻醉程度的指標有：2022/12/856

呼吸：加快或不規(guī)則，則麻醉過淺，可再追加麻醉，若呼吸由不規(guī)則轉(zhuǎn)變?yōu)橐?guī)則且平穩(wěn)，說明已達到麻醉深度。若動物呼吸變慢，且以腹式呼吸為主，說明麻醉過深，動物有生命危險。反射活動：角膜反射靈敏，則麻醉過淺；反射遲鈍，麻醉程度適宜；反射消失，伴瞳孔散大，則麻醉過深。肌張力：亢進，麻醉過淺；全身肌肉松弛，麻醉合適。皮膚夾捏反應(yīng)：麻醉過程中可隨時用止血鉗或有齒鑷夾捏動物皮膚，若反應(yīng)靈敏，則麻醉過淺；若反應(yīng)消失，則麻醉程度合適。2022/12/8574．麻醉注意事項⑴麻醉前應(yīng)禁食8h以上（2）麻醉前應(yīng)準確稱體重，注意麻醉劑量（3）麻醉過程中注意觀察動物的反應(yīng)情況。靜脈注射必須緩慢，同時觀察肌肉緊張性、角膜反射和對皮膚夾捏的反應(yīng)，當這些活動明顯減弱或消失時，立即停止注射。配制的藥液濃度要適中，不可過高，以免麻醉過急；但也不能過低，以減少注入溶液的體積。（4）麻醉時需注意保溫。麻醉期間，動物的體溫調(diào)節(jié)機能往往受到抑制，出現(xiàn)體溫下降，可影響實驗的準確性。此時常需采取保溫措施。保溫的方法有，實驗桌內(nèi)裝燈，電褥，臺燈照射等。無論用哪種方法加溫都應(yīng)根據(jù)動物的肛門體溫而定。常用實驗動物正常體溫：貓為38.6℃±1.0℃，兔為38.4℃±1.0℃，大鼠為39.3℃±0.5℃。（5）作慢性實驗時，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動物體溫水平。

2022/12/858麻醉方法與麻醉藥麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通過吸入、注射（靜脈、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使動物麻醉。常用麻醉藥物：乙醚（吸入），戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉、氯胺酮（靜脈），普魯卡因、利多卡因（局麻），2022/12/859常用麻醉藥的劑量及注射途徑種類戊巴比妥硫賁妥鈉鹽酸氯胺酮水合氯醛烏拉坦mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg小鼠3550IVIP2550I.V.IP22-44I