氨基酸的分離鑒定-紙層析法

氨基酸的分離鑒定——紙層析法氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆瞻被峒垖游龅姆椒ê驮?，學(xué)會(huì)分析待測(cè)樣品的氨基酸成分。氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!二、實(shí)驗(yàn)原理紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析。濾紙纖維上的羥基具有親水性，吸附一層水作為固定相，有機(jī)溶劑為流動(dòng)相。當(dāng)有機(jī)相流經(jīng)固定相時(shí)，物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離。溶質(zhì)在濾紙上的移動(dòng)速度用Rf值表示：Rf=原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸。氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!三、實(shí)驗(yàn)器材（1）大燒杯（5000mL）：1只/組（2）培養(yǎng)皿：1只/組。（5）層析濾紙（長20cm、寬12cm的濾紙）：1張/組。（6）直尺、鉛筆（7）電吹風(fēng)：1只/組。（8）托盤、雙面膠：1套/組。（9）手套：1雙/組。（10）塑料薄膜：公用。（11）量筒：50mL，1只/組。氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!實(shí)驗(yàn)試劑氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!（2）規(guī)劃：帶上手套，取寬約12cm、高約20cm的層析濾紙一張。在紙的下端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃一條平行于底邊的直線A，在直線上做3個(gè)記號(hào)（×），記號(hào)之間間隔3cm，這就是原點(diǎn)的位置。另在距左邊緣1cm處畫一條平行于左邊緣的直線B，在B線上以A、B兩線的交點(diǎn)為原點(diǎn)標(biāo)明刻度（以厘米為單位），參見左圖。氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!（4）層析：用雙面膠將濾紙粘成筒狀，點(diǎn)樣面向外，紙的兩側(cè)邊緣不能接觸且要保持平行，參見圖3-3。向培養(yǎng)皿中加入擴(kuò)展劑，使其液面高度達(dá)到1cm左右，將點(diǎn)好樣的濾紙筒直立于培養(yǎng)皿中（點(diǎn)樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面在A線下約1cm），罩上大燒杯，仍用塑料薄膜密封。當(dāng)展開劑上升到8～10cm，取出濾紙，剪斷雙面膠連線，立即用電吹風(fēng)熱風(fēng)吹干。氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!（6）計(jì)算各種氨基酸的Rf值，并判斷混合樣品中都有哪些氨基酸，各人將自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果貼在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上，見表3-2。（7）以層析時(shí)間為橫坐標(biāo)，擴(kuò)展劑上升高度為縱坐標(biāo)畫圖，求出擴(kuò)展劑上升到18cm時(shí)所需要的時(shí)間。（8）將微量注射器內(nèi)外用蒸餾水清洗干凈，倒掉用過的展層液和平衡液，將培養(yǎng)皿洗凈，整理好桌面上的儀器和試劑，并注意清潔自己的操作臺(tái)，請(qǐng)老師驗(yàn)收，實(shí)驗(yàn)報(bào)告當(dāng)場(chǎng)交給老師。計(jì)算：Rf=原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離

氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!四、實(shí)驗(yàn)試劑（1）擴(kuò)展劑：將4體積正丁醇和1體積冰醋酸放入分液漏斗中，與3體積水混合，倒入分液漏斗充分振蕩，靜置后分層，棄去下層水層。再按0.1%濃度的比例加入質(zhì)量相當(dāng)?shù)能崛?。?）氨基酸溶液：1、0.25%蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取0.125g蛋氨酸，溶于50mL蒸餾中，搖勻、充分溶解。2、0.25%組氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取0.125g蛋氨酸，溶于50mL蒸餾水中，搖勻、充分溶解。3、0.25%待測(cè)溶液：精確稱取0.125g待測(cè)樣品，溶于50mL蒸餾中，搖勻、充分溶解。氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!五、實(shí)驗(yàn)操作檢查培養(yǎng)皿是否干燥、潔凈；若否，將其洗凈并置于干燥箱內(nèi)120℃烘干。（1）平衡：剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上，將層析缸或大燒杯到置于塑料薄膜上，再把盛有約20mL展層溶液的小燒杯置于倒置的層析缸或大燒杯內(nèi)，用塑料薄膜密封起來，平衡20min。氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!（3）點(diǎn)樣：用毛細(xì)管將各氨基酸樣品分別點(diǎn)在中間3個(gè)記號(hào)（×）上，風(fēng)干后再點(diǎn)一次。每點(diǎn)在紙上擴(kuò)散的直徑，最大不超過3mm。每人須點(diǎn)3個(gè)樣，其中2個(gè)是已知樣，1個(gè)是待測(cè)樣品。氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!（5）顯色：用噴霧器在通風(fēng)廚中向?yàn)V紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后立即用熱風(fēng)吹干，即可顯出各層析斑點(diǎn)，參見左圖。氨基酸的分離鑒定—紙層析法共13頁，您現(xiàn)在瀏覽的