《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件

3730xl測(cè)序原理及特點(diǎn)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!3730xl測(cè)序儀的原理

雙脫氧鏈終止法測(cè)序原理

3730xl測(cè)序儀的構(gòu)造

3730xl測(cè)序儀的特點(diǎn)

測(cè)序基本流程3730xl測(cè)序儀的應(yīng)用文庫類型及特點(diǎn)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!Sanger測(cè)序法的原理《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!

1977年，英國(guó)人FredSanger發(fā)現(xiàn)，如果在DNA復(fù)制過程中摻入ddNTP，就會(huì)產(chǎn)生一系列末端終止的DNA鏈，并能通過電泳按長(zhǎng)度分辨。不同末端終止DNA鏈的長(zhǎng)度是由摻入到新合成鏈上隨機(jī)位置的ddNTP決定的。由此誕生了以Sanger命名的測(cè)序原理即雙脫氧鏈終止法測(cè)序原理?！秞l測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!“雙脫氧末端終止”的含義《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!3730xlSequenceMap《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!3730xl測(cè)序儀的構(gòu)造

《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!Capillary《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!1電進(jìn)樣及電泳1.毛細(xì)管和電極深入樣品溶液中2.加電壓3. 荷負(fù)電的DNA分子進(jìn)入毛細(xì)管在電場(chǎng)作用下向陽極泳動(dòng)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!

專利的熒光檢測(cè)技術(shù)多道毛細(xì)管同時(shí)檢測(cè)雙束激光激發(fā)光柵全波長(zhǎng)分光低溫CCD實(shí)時(shí)檢測(cè)每道毛細(xì)管同時(shí)檢測(cè)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!檢測(cè)：光柵+低溫CCD

同步成像支持4色或5色以上熒光，適用于多種商品化試劑盒。更新熒光化學(xué)時(shí)無需更換任何硬件設(shè)備低溫CCD有效提高信噪比，準(zhǔn)確度高。光柵全波長(zhǎng)分光低溫CCD實(shí)時(shí)檢測(cè)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!DNA測(cè)序基本流程

準(zhǔn)備質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物抽樣檢查DNA濃度和質(zhì)量，必要時(shí)純化測(cè)序PCR反應(yīng)純化測(cè)序產(chǎn)物變性上機(jī)電泳分析數(shù)據(jù)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!測(cè)序的應(yīng)用

基因組DNA測(cè)序cDNA測(cè)序未知序列測(cè)序已知序列再測(cè)序質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物BAC、YAC細(xì)菌基因組DNA法醫(yī)：線粒體DNA測(cè)序《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!ACCGTCTTGACCTCGTACGCATGAACCGTCCTGACCTCGTACGCATGA基因測(cè)序的重要工作：雜合子位點(diǎn)識(shí)別ACGT雜合子測(cè)序《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!再測(cè)序人類基因組計(jì)劃的完成，為遺傳分析開創(chuàng)了新的研究領(lǐng)域其他物種的測(cè)序項(xiàng)目已經(jīng)啟動(dòng)再測(cè)序項(xiàng)目的特點(diǎn)可以更好的理解遺傳多樣性在疾病中的作用可以在各種規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，而不是僅限于基因組測(cè)序中心要求更高質(zhì)量的數(shù)據(jù)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!文庫類型及特點(diǎn)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!基因組文庫含有某種生物全部遺傳信息的重組DNA分子的克隆總和《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!各種克隆載體的比較載體受體細(xì)胞結(jié)構(gòu)插入大小適用pUC18/19質(zhì)粒E.coli環(huán)形質(zhì)粒<10kb亞克隆文庫λ噬菌體E.coli線性載體~24kb基因組文庫粘質(zhì)粒E.coli環(huán)形質(zhì)粒35~45kb基因組文庫BACE.coli環(huán)形質(zhì)粒100~300kb基因組文庫PACE.coli環(huán)形質(zhì)粒100~300kb基因組文庫YAC酵母細(xì)胞線性染色體100~2000kb基因組文庫MAC哺乳類細(xì)胞線性染色體>1000kb基因組文庫《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!cDNA文庫直接以完整的mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄成的全長(zhǎng)cDNA分子與克隆載體連接后，轉(zhuǎn)導(dǎo)到寄主細(xì)胞，經(jīng)復(fù)制形成的在寄主細(xì)胞中保存的許多克隆《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!普通cDNA文庫應(yīng)用領(lǐng)域發(fā)現(xiàn)SNP克隆新基因基因表達(dá)譜分析從EST中發(fā)掘SSR標(biāo)記挖掘與病害、發(fā)育等功能相關(guān)的關(guān)鍵基因開展轉(zhuǎn)基因等功能研究，以改變某生物的性狀。保護(hù)瀕危珍惜生物資源，建立該生物的基因庫。EST可以作為構(gòu)建分子標(biāo)記連鎖圖譜所用的探針《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!建立cDNA文庫的特殊方法

1.Okayama–Berg法Okayama–Berg改進(jìn)法SMART(SwitchMechanismAtthe5’endofRNATemplates)方法4．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（PCR法）《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!5′磷酸3′羥基3′,5′-磷酸二酯鍵核苷酸形成3,5-磷酸二酯鍵示意圖核酸序列形成的基礎(chǔ)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!TemplatePrimerdNTPPolymeraseTerminatorCGTA終止物標(biāo)記方法因?yàn)轭伾煌?種終止物可以在一起進(jìn)行反應(yīng)?！秞l測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!測(cè)序反應(yīng)與PCR的比較

PCR測(cè)序反應(yīng)DNA聚合酶Taq酶測(cè)序酶引物一對(duì)單向底物dNTPdNTP+ddNTP*模板量少質(zhì)量要求高產(chǎn)物等長(zhǎng)的DNA片段相差一個(gè)堿基的一系l列片段熒光標(biāo)記無3’端帶熒光標(biāo)記測(cè)序產(chǎn)物指數(shù)擴(kuò)增線性擴(kuò)增《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!遺傳分析儀系統(tǒng)組成主機(jī)電腦及軟件耗材《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!3730xl測(cè)序儀的特點(diǎn)

《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!2熒光激發(fā)和檢測(cè)分別帶4色熒光標(biāo)記的DNA片段 從小到大依次經(jīng)過激光檢測(cè)區(qū)2. 激光激發(fā)熒光 產(chǎn)生長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光信號(hào)3. 熒光信號(hào)被冷CCD收集4. 軟件將光學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)換成電泳圖譜

《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!激發(fā)：DualSideIllumination

雙束激光兩側(cè)同時(shí)激發(fā)：靈敏度+均勻性+超速測(cè)序TopbeamBlockedBothBeamsBottomBeamBlocked《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!FullyIntegratedSystem3730xl型遺傳分析儀雙光束激光實(shí)時(shí)激發(fā)熒光全波長(zhǎng)實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)：光柵分光，后置超簿型CCD檢測(cè)96個(gè)樣品自動(dòng)進(jìn)樣及一體化16板自動(dòng)進(jìn)樣樣品架內(nèi)置樣品板條形碼自動(dòng)識(shí)別100次（9600個(gè)樣品）運(yùn)行試劑一次上機(jī)自動(dòng)堿基識(shí)別與質(zhì)量評(píng)分軟件長(zhǎng)讀測(cè)序POP-7液體分離膠，動(dòng)態(tài)內(nèi)鍍毛細(xì)管電泳溫度18-70C可調(diào)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!DNA測(cè)序技術(shù)應(yīng)用《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁!LongreadwithBigDye?Terminatorv3.1:>1010bp長(zhǎng)片段測(cè)序《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁!雜合子檢測(cè)：發(fā)現(xiàn)新突變位點(diǎn)《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁!基因分析技術(shù)

在生物、醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用

DNA測(cè)序

人類功能基因再測(cè)序細(xì)菌、真菌等微生物鑒定；HLA配型基因突變檢測(cè)SNP檢測(cè)SNaPshotMultiplexSNPlex二重TaqMan探針片段分析基于STR的法醫(yī)個(gè)體識(shí)別與親子鑒定：HID基于STR的致病基因連鎖定位：LMS基因突變篩選：SSCP農(nóng)牧業(yè)育種：AFLP基因表達(dá)定量TaqMan探針法與熒光染料法《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁!基因文庫（GeneLibrary）基因組文庫（GenomicLibrary）cDNA文庫（cDNALibrary）《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁!基因組文庫常用的載體及特點(diǎn)質(zhì)粒載體

簡(jiǎn)單、快速、易于操作，但僅適合一些低等真核生物和原核生物，如：pBR322,pUC18,pGEMλ噬菌體載體

由λ噬菌體改建而來，需要在體外包裝成噬菌體顆粒，再轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞粘質(zhì)粒載體（cosmid)

具有質(zhì)粒和λ噬菌體兩種載體的性質(zhì)人工染色體

能容納大片段的外源DNA。如YAC(酵母人工染色體），BAC(細(xì)菌人工染色體），PAC(P1來源的人工染色體），MAC（哺乳動(dòng)物人工染色體）《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁!《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁!分類質(zhì)粒cDNA文庫噬菌體cDNA文庫

表達(dá)文庫非表達(dá)文庫未處理cDNA文庫均一化cDNA文庫差減cDNA文庫《xl測(cè)序儀簡(jiǎn)易維護(hù)》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁!普通cDNA文庫構(gòu)建基本流程雙鏈cDNA末端的磷酸化及酶切提取totalRNA分離mRNA合成一鏈cDNA

合成二鏈cDNA雙鏈cDNA末端補(bǔ)平加接頭膠回收cDNA連接電轉(zhuǎn)化鑒定庫容及