第一次實(shí)驗(yàn)課微生物實(shí)驗(yàn)課介紹與要求及環(huán)境人體表面微生物的檢測(cè)張理珉

主要參考書(shū)1．杜連祥，路福平主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M]．北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，2005．2．周德慶．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程（第2版）[M]．北京：高等教育出版社，2006．3．楊文博主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004．4．趙斌，何紹江主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]．北京：科學(xué)出版社，2002．5．東秀珠，蔡妙英主編．常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)分類(lèi)和鑒定方法[M]．北京：科學(xué)出版社，2001．

第一頁(yè)，共五十二頁(yè)。本次實(shí)驗(yàn)的主要內(nèi)容1、明確實(shí)驗(yàn)課的目的；2、實(shí)驗(yàn)課的內(nèi)容介紹；3、實(shí)驗(yàn)課的具體安排和要求；4、實(shí)驗(yàn)安全知識(shí)介紹5、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及人體表面微生物檢測(cè)第二頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課介紹

與安全教育第三頁(yè)，共五十二頁(yè)。1、實(shí)驗(yàn)課的目的掌握微生物實(shí)驗(yàn)的最基本操作技術(shù)相關(guān)技術(shù)得到充分訓(xùn)練（熟練掌握最好）讀\想\學(xué)\會(huì)\用第四頁(yè)，共五十二頁(yè)。2、實(shí)驗(yàn)課的內(nèi)容介紹意義：微生物學(xué)是生命科學(xué)中最基礎(chǔ)的學(xué)科之一，實(shí)驗(yàn)技術(shù)的獨(dú)特性和重要性。促進(jìn)了多個(gè)學(xué)科的建立和發(fā)展——生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、免疫學(xué)、病毒學(xué)等等廣泛的應(yīng)用——基礎(chǔ)理論研究、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)境、醫(yī)學(xué)、食品等，第五頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容無(wú)菌操作技術(shù)；培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌技術(shù)；微生物的分離培養(yǎng)純化技術(shù)；菌種的保藏技術(shù)微生物制片染色技術(shù)；微生物數(shù)量和大小測(cè)定技術(shù)；噬菌體的分離純化及效價(jià)的測(cè)定；微生物生理生化反應(yīng)；微生物DNA提取技術(shù)介紹；免疫學(xué)技術(shù)介紹；第六頁(yè)，共五十二頁(yè)。3、實(shí)驗(yàn)課的具體安排和要求實(shí)驗(yàn)課學(xué)習(xí)要求實(shí)驗(yàn)過(guò)程的要求實(shí)驗(yàn)課安排良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣實(shí)驗(yàn)報(bào)告的形式成績(jī)的評(píng)定及組成第七頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)課學(xué)習(xí)要求認(rèn)真對(duì)待，做好預(yù)習(xí)，加強(qiáng)自主拋磚引玉，增強(qiáng)學(xué)科聯(lián)系注重原理，努力創(chuàng)新培養(yǎng)興趣，掌握技能多發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，多和教師交流做到“讀\想\學(xué)\會(huì)\用”第八頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程的要求實(shí)驗(yàn)過(guò)程注意安全（具體介紹）操作時(shí)要預(yù)防空氣對(duì)流接種時(shí)不要走動(dòng)和講話認(rèn)真做好環(huán)境衛(wèi)生，做到“干干凈凈進(jìn)來(lái)，干干凈凈出去”進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室要洗手第九頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)課安排根據(jù)教學(xué)計(jì)劃，本門(mén)實(shí)驗(yàn)課程2學(xué)分，4學(xué)時(shí)/周，14周共56學(xué)時(shí)，每學(xué)時(shí)45分鐘；實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察是實(shí)驗(yàn)過(guò)程的重要內(nèi)容,也將計(jì)算學(xué)時(shí)數(shù)。分組——兩人一組，登記聯(lián)系電話；穿白色實(shí)驗(yàn)服進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室；每組準(zhǔn)備記號(hào)筆和打火機(jī)各一個(gè)；值日生由班委每次實(shí)驗(yàn)前委派；下午實(shí)驗(yàn)課改在13：30上，上午的不變。第十頁(yè)，共五十二頁(yè)。良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣不遲到，不缺席，有事提前請(qǐng)假；遲到5分鐘以上以缺席計(jì)入實(shí)驗(yàn)習(xí)慣成績(jī)；愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)用具；實(shí)驗(yàn)完成后認(rèn)真清洗實(shí)驗(yàn)用具，并擺放整齊；離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室要經(jīng)教師檢查同意方可離開(kāi)；認(rèn)真做好值日生工作，有人具體負(fù)責(zé)安排檢查。第十一頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的格式實(shí)驗(yàn)題目（完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告表頭）目的要求實(shí)驗(yàn)原理（需要濃縮總結(jié)）實(shí)驗(yàn)材料和器材實(shí)驗(yàn)方法和步驟（簡(jiǎn)潔）實(shí)驗(yàn)結(jié)果、數(shù)據(jù)（有一定說(shuō)明）分析討論及思考題第十二頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求

1.每位學(xué)生準(zhǔn)備規(guī)定式樣的實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙。

2.上課時(shí)每給出一次作業(yè)，就在下一次上課前上交這一次的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，不得拖延時(shí)間，否則后果自負(fù)。

3.報(bào)告要求寫(xiě)清楚實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、步驟、結(jié)果及思考題。希望簡(jiǎn)潔、工整。

4.本門(mén)課結(jié)束前，要求使用統(tǒng)一的封面，把自己的所有實(shí)驗(yàn)報(bào)告按實(shí)驗(yàn)先后順序裝訂成一冊(cè)，交給實(shí)驗(yàn)任課教師。第十三頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)成績(jī)平時(shí)成績(jī)（20%，安排于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中或期末進(jìn)行操作考核）實(shí)驗(yàn)習(xí)慣（10%）期末考試（20%，筆試考試）實(shí)驗(yàn)報(bào)告（50%）可能組織就實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行答辯，替代期末考試

第十四頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)用到儀器設(shè)備顯微鏡（光學(xué)——普通、相差、微分干涉差、暗視野；電子——掃描、透射）；高壓蒸汽滅菌鍋（立式和臥式）；超凈工作臺(tái)、隔水式恒溫培養(yǎng)箱；鼓風(fēng)恒溫干燥箱；恒溫振蕩培養(yǎng)箱（旋轉(zhuǎn)式和往復(fù)式）；旋渦振蕩器；恒溫水浴鍋；pH計(jì)；分光光度計(jì)（紫外、可見(jiàn)光、紅外、原子吸收等）；離心機(jī)；電泳儀、PCR儀、發(fā)酵罐、酶標(biāo)儀、冰箱；微波爐等。第十五頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)用到器械試管（testtube）德漢氏小管（Durhamtube）小塑料離心管，又稱(chēng)Eppendorf管玻璃吸管（glass

pipette）微量吸管（micropipette）[微量加樣槍]培養(yǎng)皿（petridish）三角燒瓶（erlenmeyerflask）第十六頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)用到器械載玻片（slide）和蓋玻片（coverslip）滴瓶(dropperbottle)接種工具——接種環(huán)、接種針、接種鉤、接種鏟、接種刀、涂布器（玻璃或不銹鋼制作）等。第十七頁(yè)，共五十二頁(yè)。常見(jiàn)的接種工具

（可根據(jù)要求自已定做）第十八頁(yè)，共五十二頁(yè)。常用玻璃儀器第十九頁(yè)，共五十二頁(yè)。第二十頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室安全實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中出現(xiàn)的各類(lèi)突發(fā)事故和事件主要有：1、火災(zāi)；2、觸電；3、跑（漏）水；4、化學(xué)品傷害及中毒；5、灼傷；6、割（劃）傷。第二十一頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室安全！？第二十二頁(yè)，共五十二頁(yè)。事故以預(yù)防為主，具體的要求實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行；對(duì)使用的化學(xué)藥品試劑、儀器設(shè)備、實(shí)驗(yàn)器材等清楚其性質(zhì)和使用注意事項(xiàng)；不在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)餐、飲水；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁明火取暖，實(shí)驗(yàn)用到的加熱設(shè)備在人離開(kāi)時(shí)，關(guān)閉加熱；清楚實(shí)驗(yàn)室或?qū)嶒?yàn)樓內(nèi)配備的防護(hù)用具的使用方法和擺放位置（消防設(shè)施——滅火器、消防用水、防毒面具，沖淋設(shè)施——桌面沖眼器、緊急沖淋設(shè)備，通風(fēng)柜，醫(yī)藥箱等）。第二十三頁(yè)，共五十二頁(yè)。事故處理要求首先保護(hù)好自身的安全，再施救（觀察好退路）；遇事不要慌張，冷靜按預(yù)案處理；認(rèn)真負(fù)責(zé)，不推缷責(zé)任；逐級(jí)上報(bào)，不隱瞞事故。第二十四頁(yè)，共五十二頁(yè)。（一）化學(xué)藥品及溶劑的處理方法1、在使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿時(shí)必需戴上安全手套，并戴上安全眼鏡。2、有機(jī)溶劑，固體化學(xué)藥品，酸、堿化合物均需分類(lèi)存放，揮發(fā)性之化學(xué)藥品更必需放置于具有抽氣裝置的藥品柜內(nèi)。3、高揮發(fā)性或易于氧化之化學(xué)藥品必需存放于冰箱或冰柜之中。4、強(qiáng)酸或強(qiáng)堿（包括廢酸堿）不得存放于金屬架之上。第二十五頁(yè)，共五十二頁(yè)。（二）安全用電，防止事故1、了解實(shí)驗(yàn)室總電源開(kāi)關(guān)的安裝位置。2、不可用濕手操作電器，使用電工工具前確認(rèn)其完好無(wú)損。3、嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)私自接用電源。4、確保漏電保護(hù)器起作用，用電器外殼接好地線，實(shí)驗(yàn)室無(wú)人時(shí)要切斷電源。5、遇有電器失火，先要切斷電源，再行滅火。6、人身觸電，立即人工呼吸，再送醫(yī)院，切忌打強(qiáng)心針。第二十六頁(yè)，共五十二頁(yè)。（三）節(jié)約用水，防止跑漏1、不用水時(shí)，隨手關(guān)閉閥門(mén)。2、廢物廢液不準(zhǔn)倒在水槽內(nèi)，實(shí)驗(yàn)完了放水沖洗水槽和下水管，勿使廢液殘留其中。第二十七頁(yè)，共五十二頁(yè)。（四）安全用藥，防中毒1、使用化學(xué)藥品前，要充分了解其化學(xué)性質(zhì)、物理性質(zhì)和使用注意事項(xiàng)。2、不能?chē)L化學(xué)藥品，也不能直接去聞化學(xué)藥品，避免用手直接去接觸藥品；使用藥品和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即用肥皂水洗手。3、盡量不可在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)餐。4、有毒或帶剌激味的實(shí)驗(yàn)要在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)期間要開(kāi)排風(fēng)扇，或開(kāi)窗通風(fēng)。5、做好廢液處理，防止環(huán)境污染；發(fā)現(xiàn)中毒現(xiàn)象，及時(shí)對(duì)癥治療，必要時(shí)送醫(yī)院。第二十八頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)時(shí)需特別注意：人身安全防止割傷、灼傷，如有發(fā)生，應(yīng)用急救藥品施治。第二十九頁(yè)，共五十二頁(yè)。意外對(duì)策第三十頁(yè)，共五十二頁(yè)。學(xué)生衣服著火的對(duì)策以滅火「氈」包裹該同學(xué)，并把其在地上滾動(dòng)；并由其他同學(xué)輔助使用滅火器進(jìn)行滅火。不要亂跑，以免擴(kuò)大事故傷害；其他同學(xué)立刻通知老師，并撥打120、119。第三十一頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)易燃物品著火的對(duì)策利用配備的滅火器材進(jìn)行滅火。滅火器的使用過(guò)程①取出滅火器，拔出安全針。②把噴咀對(duì)準(zhǔn)火源。③按掣使滅火器噴出二氧化碳。其他同學(xué)立刻通知老師。并根據(jù)火情撥打119、120。第三十二頁(yè)，共五十二頁(yè)。酒精濺在長(zhǎng)桌上并著火的對(duì)策！人先離開(kāi)著火的位置，防止酒精流到身上著火。利用沙桶或濕抹布把燃燒的液體用沙蓋著。其他同學(xué)立刻通知老師。根據(jù)火情撥打119、120。第三十三頁(yè)，共五十二頁(yè)。打破了燒杯等玻璃器皿，被碎片割傷流血的對(duì)策以清水沖洗傷口，并確定有無(wú)碎片殘留。貼上干凈的消毒膠布。其他同學(xué)立刻通知老師，注意止血！有必要請(qǐng)撥打120。第三十四頁(yè)，共五十二頁(yè)?；瘜W(xué)藥品濺進(jìn)學(xué)生的臉、眼睛內(nèi)及其它皮膚的對(duì)策用桌面上沖眼器以大量清水沖洗眼睛等相關(guān)部位。其他同學(xué)立刻通知老師。并即時(shí)送往專(zhuān)科醫(yī)院治療。第三十五頁(yè)，共五十二頁(yè)。學(xué)生在實(shí)驗(yàn)過(guò)程皮膚等部位意外接觸到酸等的對(duì)策立刻以大量清水沖洗患處最少五分鐘。其他同學(xué)立刻通知老師。如有需要可以送往專(zhuān)科醫(yī)院治療。第三十六頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)物品常見(jiàn)警告標(biāo)識(shí)符號(hào)第三十七頁(yè)，共五十二頁(yè)。滅火器及其使用方法第三十八頁(yè)，共五十二頁(yè)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容二

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及人體表面微生物的檢測(cè)第三十九頁(yè)，共五十二頁(yè)。

一、目的要求

檢查實(shí)驗(yàn)室空氣中及各人手上的微生物（細(xì)菌為主），并加以統(tǒng)計(jì)、比較和描述（數(shù)量、菌落形態(tài)等）。使學(xué)生認(rèn)識(shí)到微生物無(wú)處不在，以便在以后的實(shí)驗(yàn)中重視無(wú)菌操作。第四十頁(yè)，共五十二頁(yè)。二、實(shí)驗(yàn)原理微生物廣泛分布于室內(nèi)外、水、空氣和土壤中；通過(guò)對(duì)環(huán)境和人體表面微生物的檢測(cè)及觀察，建立起微生物“無(wú)處不在、無(wú)孔不入”的概念。形成自身良好的衛(wèi)生習(xí)慣，認(rèn)識(shí)到在微生物實(shí)驗(yàn)中無(wú)菌操作的重要性。第四十一頁(yè)，共五十二頁(yè)。平板培養(yǎng)基含有微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)成分，當(dāng)不同來(lái)源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)，1~2天內(nèi)每一菌體細(xì)胞即能通過(guò)很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖，形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的細(xì)胞群體（菌落）；每種微生物都有其特有的菌落形態(tài)，一般情況下一個(gè)菌落對(duì)應(yīng)一個(gè)微生物活細(xì)胞，這樣就可以統(tǒng)計(jì)不同微生物在某樣品中的數(shù)量。第四十二頁(yè)，共五十二頁(yè)。第四十三頁(yè)，共五十二頁(yè)。三、實(shí)驗(yàn)材料及器材牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板3個(gè)/組；洗手液、酒精燈、記號(hào)筆、恒溫培養(yǎng)箱等。第四十四頁(yè)，共五十二頁(yè)。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟（一）實(shí)驗(yàn)室空氣中微生物檢查（二）手上微生物檢測(cè)第四十五頁(yè)，共五十二頁(yè)。

1、取一無(wú)菌牛肉膏蛋白胨瓊脂平板，打開(kāi)上皿蓋（扣放，開(kāi)始計(jì)時(shí)），使培養(yǎng)基暴露于空氣中30分鐘，蓋上皿蓋。

2、在37℃下倒置培養(yǎng)24~48小時(shí)，觀察結(jié)果，統(tǒng)計(jì)微生物數(shù)量。（一）實(shí)驗(yàn)室空氣中微生物檢查

（沉降法）第四十六頁(yè)，共五十二頁(yè)。3、利用沉降法測(cè)定計(jì)算空氣中微生物的數(shù)量，結(jié)果的表示的方法有兩種：①一種是每一平皿上菌落形成單位;②另一種是每一平皿實(shí)測(cè)得的菌落形成單位再按奧梅梁斯基公式換算成為每立方米多少個(gè)細(xì)菌。

第四十七頁(yè)，共五十二頁(yè)。根據(jù)前蘇聯(lián)奧梅梁斯基提出的建議：面積為100cm2的平板培養(yǎng)基，暴露在空氣中5分鐘相當(dāng)于10升空氣中的菌落數(shù)。具體計(jì)算公式如下：第四十八頁(yè)，共五十二頁(yè)。除沉降法外，常用還有撞擊式（有專(zhuān)門(mén)儀器設(shè)備）。多級(jí)撞擊式空氣微生物采樣器第四十九頁(yè)，共五十二頁(yè)。1、取一個(gè)牛肉膏蛋白胨瓊脂平板，用記號(hào)筆在平板底部（外面）劃線等分成2半，用手指在其中一半上印（或摩擦）幾下（不能把培養(yǎng)基劃破）；然后用肥皀洗手，用同一手指在另一半上?。ɑ蚰Σ粒紫?。2、在37℃下倒置培養(yǎng)24~48小時(shí)，觀察結(jié)果，統(tǒng)計(jì)比較洗手前后的