色譜法氣相與液相

關(guān)于色譜法氣相與液相第1頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六1.生化項(xiàng)目檢測

分離分析氨基酸、蛋白質(zhì)、核糖核酸、維生素、肽、酶、抗原抗體2.臨床檢驗(yàn)

體液或者尿液中的有機(jī)酸、糖、激素等3.藥物檢測

藥物成分成分測定、含量分析色譜方法臨床應(yīng)用第2頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六檢測器色譜柱（固定相）樣品組分1＋2＋3流動相流動相流動相流動相流動相流動相時(shí)間（t）響應(yīng)R圖5.1色譜分離原理示意圖進(jìn)樣峰123112223333第3頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六第四節(jié)氣相色譜儀第4頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六試樣各組分在氣相和固定相間的分配系數(shù)不同被分離分離后的組分按保留時(shí)間的先后順序進(jìn)入檢測器記錄信號信號經(jīng)放大后，在記錄器上描繪出各組分的色譜峰定性分析：保留時(shí)間（出峰位置）定量分析：峰高或峰面積一、氣相色譜儀的工作原理第5頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六注射器氣路系統(tǒng)二、氣相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)載氣源減壓閥凈化器穩(wěn)壓閥穩(wěn)流閥進(jìn)樣氣化色譜柱檢測器放大器記錄儀溫度控制系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)檢測系統(tǒng)

分離系統(tǒng)

溫控系統(tǒng)

記錄系統(tǒng)

第6頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（一）氣路系統(tǒng)：作用：向色譜柱提供質(zhì)地潔凈、流動平穩(wěn)的流動相。組成：載氣源、減壓閥、凈化器、穩(wěn)壓閥、穩(wěn)流閥、柱子及全部連接管道構(gòu)成。常用的載氣：氮?dú)?、氫氣、氦氣、氬氣和空氣。?頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（二）進(jìn)樣系統(tǒng)：進(jìn)樣器、氣化室1．進(jìn)樣器微量注射器適用于液體樣品規(guī)格：有1l、5l、10l和50l。六通閥適用于氣體樣品。2．氣化室

第8頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（三）分離系統(tǒng)

色譜柱主要有兩類：填充柱和毛細(xì)管柱。第9頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六1．濃度型檢測器

熱導(dǎo)檢測器電子捕獲檢測器2．質(zhì)量流速型檢測器氫火焰離子化檢測器火焰光度檢測器（四）檢測系統(tǒng)第10頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（五）溫度控制系統(tǒng)

控制溫度：對色譜柱、氣化室、檢測器三處的溫度控制。

程序升溫：改善寬沸程樣品的分離效果并縮短分析時(shí)間。第11頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（六）放大與記錄系統(tǒng)放大信號、自動記錄電信號第12頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六1.噪聲和漂移（低）

噪音(mV

)：無樣品通過檢測器，由于儀器本身和工作條件等的偶然因素引起的基線起伏。漂移(mV/h)：基線在單位時(shí)間內(nèi)單方向緩慢變化的幅值。

三、氣相色譜儀的性能2.響應(yīng)時(shí)間（短）3.線性范圍（寬）4.靈敏度（高）5.檢出限（低）第13頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（一）氣相色譜儀的使用四、氣相色譜儀的的使用與維護(hù)第14頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六裝柱開機(jī)參數(shù)設(shè)置基線調(diào)節(jié)樣品測定關(guān)機(jī)結(jié)果分析裝好實(shí)驗(yàn)所需柱子，柱子連接部份保證不漏氣依次打開氣體發(fā)生器、氣體凈化器、儀器主機(jī)、電腦開關(guān)，進(jìn)入WINDOWS界面，啟動工作站，連接主機(jī)，待儀器自動進(jìn)行初始化自檢結(jié)束后，即可開始工作進(jìn)入菜單，設(shè)置實(shí)驗(yàn)所需的各種參數(shù)按已設(shè)定的參數(shù)和程序，使基線走平根據(jù)要求給儀器進(jìn)樣，按開始鍵儀器自動檢測根據(jù)實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果進(jìn)行分析，產(chǎn)生報(bào)告退出工作站，關(guān)掉電腦、主機(jī)電源，按要求關(guān)閉氣體發(fā)生器（或氣體鋼瓶）開關(guān)氣相色譜儀的操作流程第15頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（二）氣相色譜儀的維護(hù)1.氣源檢查管線泄漏檢查氣化室的維護(hù)檢測器的維護(hù)柱溫箱的維護(hù)維護(hù)周期（3個(gè)月）

第16頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六進(jìn)樣口：

清洗、更換硅膠墊

3.氣化室的維護(hù)進(jìn)養(yǎng)室螺帽隔墊吹掃出口載氣入口分流器出口1進(jìn)樣襯管2第17頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六18（三）常見故障處理3.峰型：變寬、變尖、拖尾、前突、平頂4.樣品不能分離、不出峰、怪峰1.FID不能點(diǎn)火2.基線不穩(wěn)、出現(xiàn)噪聲第18頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六19（四）色譜柱性能下降的癥狀切勿劃傷柱子堵上柱子兩端第19頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六1.在氣相色譜分析中,用于定量分析的參數(shù)是()A保留時(shí)間B保留體積C半峰寬D峰面積D2.良好的氣-液色譜固定液為()A.蒸氣壓低、穩(wěn)定性好

B.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定

C.溶解度大,對相鄰兩組分有一定的分離能力

D.A、B和CD第20頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六4.色譜體系的最小檢測量是指恰能產(chǎn)生與噪聲相鑒別的信號時(shí)()A進(jìn)入單獨(dú)一個(gè)檢測器的最小物質(zhì)量

B進(jìn)入色譜柱的最小物質(zhì)量

C組分在氣相中的最小物質(zhì)量

D組分在液相中的最小物質(zhì)量

3.試指出下列說法中,哪一個(gè)不正確?氣相色譜法常用的載氣是()A.氫氣B.氮?dú)釩.氧氣D.氦氣

CB第21頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六6.熱導(dǎo)池檢測器是一種()A濃度型檢測器

B質(zhì)量型檢測器

C只對含碳、氫的有機(jī)化合物有響應(yīng)的檢測器D只對含硫、磷化合物有響應(yīng)的檢測器

5.在氣-液色譜分析中,良好的載體為()A粒度適宜、均勻,表面積大B表面沒有吸附中心和催化中心C化學(xué)惰性、熱穩(wěn)定性好,有一定的機(jī)械強(qiáng)度DA、B和CDA第22頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六8.下列因素中,對色譜分離效率最有影響的是()A柱溫B載氣的種類C柱壓D固定液膜厚度7.使用氫火焰離子化檢測器,選用下列哪種氣體作載氣最合適？()AH2BHeCArDN2DA9．如果試樣中組分的沸點(diǎn)范圍很寬，分離不理想，可采取的措施為:A.選擇合適的固定相；B.采用最佳載氣線速；C.程序升溫；D.降低柱溫C第23頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六1．試樣中各組分能夠被相互分離的基礎(chǔ)是各組分具有不同的熱導(dǎo)系數(shù)。2．組分的分配系數(shù)越大，表示其保留時(shí)間越長。3．分離溫度提高，保留時(shí)間縮短，峰面積不變。4．某試樣的色譜圖上出現(xiàn)三個(gè)色譜峰，該試樣中最多有三個(gè)組分。

第24頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六5．分析混合烷烴試樣時(shí)，可選擇極性固定相，按沸點(diǎn)大小順序出峰。6．組分在流動相和固定相兩相間分配系數(shù)的不同及兩相的相對運(yùn)動構(gòu)成了色譜分離的基礎(chǔ)。7．氣液色譜分離機(jī)理是基于組分在兩相間反復(fù)多次的吸附與脫附，氣固色譜分離是基于組分在兩相間反復(fù)多次的分配。第25頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六8．在色譜分離過程中，單位柱長內(nèi)，組分在兩相向的分配次數(shù)越多，分離效果越好。9．氣液色譜固定液通常是在使用溫度下具有較高熱穩(wěn)定性的大分子有機(jī)化合物。10．柱效隨載氣流速的增加而增加。11．控制載氣流速是調(diào)節(jié)分離度的重要手段，降低載氣流速，柱效增加，當(dāng)載氣流速降到最小時(shí)，柱效最高，但分析時(shí)間較長。第26頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六12．有人測試色譜柱效時(shí)，發(fā)現(xiàn)增加載氣流速，柱效下降，減小載氣流速，柱效增加，故得出結(jié)論：柱效與載氣流速成反比。13．當(dāng)用苯測定某分離柱的柱效能時(shí)，結(jié)果表明該柱有很高的柱效，用其分離混合醇試樣時(shí)，一定能分離完全。14．當(dāng)用一支極性色譜柱分離某烴類混合物時(shí)，經(jīng)多次重復(fù)分析，所得色譜圖上均顯示只有3個(gè)色譜峰，結(jié)論是該試樣只含有3個(gè)組分。第27頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六31．色譜外標(biāo)法的準(zhǔn)確性較高，但前提是儀器穩(wěn)定性高和操作重復(fù)性好。32．FID檢測器對所有的化合物均有響應(yīng)，故屬于廣譜型檢測器。

33．電子俘獲檢測器對含有S,P元素的化合物具有很高的靈敏度。第28頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六34．毛細(xì)管氣相色譜分離復(fù)雜試樣時(shí)，通常采用程序升溫的方法來改善分離效果。35．毛細(xì)管色譜的色譜柱前需要采取分流裝置是由于毛細(xì)管色譜柱對試樣負(fù)載量很??；柱后采用“尾吹”裝置是由于柱后流出物的流速太慢。第29頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六第30頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六第五節(jié)高效液相色譜儀第31頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六用高壓輸液泵將流動相泵入裝有固定相的色譜柱進(jìn)樣閥注入測定樣品，由流動相帶入柱內(nèi)在色譜柱內(nèi)分離各組分組分分離后依次進(jìn)入檢測器，記錄儀記錄色譜峰定性：色譜峰的位置定量：峰高(或峰面積)

一、高效液相色譜儀工作原理第32頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)框圖廢液分離柱檢測器數(shù)據(jù)處理進(jìn)樣裝置溫度控制流量控制梯度裝置高壓泵記錄儀脫氣裝置儲液槽第33頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六檢測器色譜柱（固定相）樣品組分1＋2＋3流動相流動相流動相流動相流動相流動相時(shí)間（t）響應(yīng)R圖5.1色譜分離原理示意圖進(jìn)樣峰123112223333第34頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)。

二、高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)第35頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（一）輸液系統(tǒng)

提供流動相

貯液器過濾器和脫氣裝置高壓輸液泵梯度洗脫裝置流量控制注意：高壓輸液泵是HPLC最重要的部件,其性能對分離及檢測均有十分明顯的影響。第36頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（二）進(jìn)樣系統(tǒng)注射器：

優(yōu)點(diǎn)：簡單、方便

缺點(diǎn)：重現(xiàn)性差、耐壓力差（高壓下溶液漏液）自動進(jìn)樣：

優(yōu)點(diǎn)：簡單、方便、重現(xiàn)性好閥進(jìn)樣：第37頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六六通閥

六通閥進(jìn)樣裝置進(jìn)樣量可由樣品管控制，進(jìn)樣準(zhǔn)確，重復(fù)性好。第38頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（三）分離系統(tǒng)

分離系統(tǒng)是高效液相色譜儀的重要部件，其核心是色譜柱。

第39頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（四）檢測系統(tǒng)1.紫外-可見光檢測器固定波長檢測器可變波長檢測器（190nm-800nm）光電二極管陣列檢測器1.低壓汞燈；2.透鏡；3與6.遮光板；4.參比池；5.測量池；7.紫外濾光片；8.雙子外光敏電阻56782.熒光檢測器3.電化學(xué)檢測器第40頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（五）數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)

記錄儀、積分儀或色譜工作站

記錄儀記錄色譜流出曲線積分儀的作用主要用于求色譜峰的面積（定量）。

第41頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六（一）高效液相色譜儀的使用三、高效液相色譜儀的使用與維護(hù)第42頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六裝柱開機(jī)參數(shù)設(shè)置基線調(diào)節(jié)樣品測定關(guān)機(jī)結(jié)果分析裝好實(shí)驗(yàn)所需柱子，保證連接部分要不漏液依次打開電腦、儀器各模塊電源，待自檢完成后，啟動工作站并聯(lián)機(jī)，打開“Purge”閥趕走管內(nèi)氣泡進(jìn)入菜單，設(shè)置實(shí)驗(yàn)所需的各種參數(shù)按已設(shè)定的參數(shù)和程序，使基線走平根據(jù)要求給儀器進(jìn)樣，按開始鍵，儀器自動檢測根據(jù)實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果進(jìn)行分析，獲得相關(guān)的信息，產(chǎn)生報(bào)告先關(guān)燈，用相應(yīng)溶劑充分沖洗系統(tǒng)。退出工作站，依提示關(guān)泵及其他窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)和儀器各模塊電源開關(guān)高效液相色譜儀的操作流程第43頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六四、日常維護(hù)與常見故障處理1.輸液泵腐蝕溶劑：不可過夜；沖洗時(shí)用水→水-甲醇→甲醇流動相：使用前脫氣；避免揮發(fā)性大的溶劑用保護(hù)柱（尤其是血樣、生物制品）長時(shí)間不用檢測器可以關(guān)掉燈，以4小時(shí)為限不要讓緩沖液長期停滯在檢測室內(nèi)，用純水沖洗2.進(jìn)樣閥3.色譜柱4.檢測器（一）維護(hù)第44頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六保護(hù)柱位置：在進(jìn)樣器和分析柱之間作用：保護(hù)并延長分析柱使用壽命填料：一般和分析柱相同長度：一般1-2cm清洗：首先要拆下分析柱，以免洗脫物進(jìn)入分析柱；然后選擇適當(dāng)?shù)牧鲃酉噙M(jìn)行沖洗。第45頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六1.異常峰和噪聲2.基線漂移3.紫外吸收響應(yīng)值出現(xiàn)負(fù)峰（二）檢測器常見故障第46頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六(三）色譜柱性能下降的癥狀HPLC等級流動相，濾膜過濾，超聲脫氣用在線過濾器用保護(hù)柱（尤其是血樣、生物制品）色譜柱反壓升高色譜峰拖尾保留值降低第47頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六思考題氣相色譜儀的工作原理和基本結(jié)構(gòu)是什么？高效液相色譜儀的工作原理和基本結(jié)構(gòu)是什么？？第48頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六491.高效液相色譜儀中高壓輸液系統(tǒng)不包括A、貯液器

B、高壓輸液泵

C、過濾器

D、梯度洗脫裝置

E、進(jìn)樣器

2.在高效液相色譜儀中保證流動相以穩(wěn)定的速度流過色譜柱的部件是

A、貯液器B、輸液泵C、檢測器D、溫控裝置E

B第49頁，共57頁，2022年，5月20日，7點(diǎn)16分，星期六503.高效液相色譜儀與氣相色譜儀比較增加了A、恒溫箱

B、進(jìn)樣裝置

C、程序升溫

D、梯度淋洗裝置4.在液相色譜中,某組分的保留值大小實(shí)際反映了哪些部分的分子間作用力A、組分與流動相B、組分與固定相