河北醫(yī)大口腔組織病理學實驗指導02石蠟包埋牙體組織切片的制作_第1頁
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文檔簡介

實驗二

石蠟包埋牙體組織切片的制作[目的要求]通過實驗了解此方法的制作過程，學會\t"/kecheng/2013/_blank"蘇木精、伊紅染色法。教學用的切片制作法，通常為蘇木精、伊紅染色法，一般用10%\t"/kecheng/2013/_blank"甲醛溶液固定新鮮牙齒，其脫鈣劑的選擇以及包埋方法的采用，則因設備、技術的不同有異。以下只談我室應用的方法。[操作步驟]1.標本固定：將得到的新鮮牙齒，立即放入10%甲醛溶液中，固定數(shù)月。2.分切與脫鈣：將選好的固定后牙齒，可以切割處一個包埋面，然后放入脫鈣液內，牙標本與脫鈣液之比一般為7：30。脫鈣液最好每天更換一次，持續(xù)脫改七天左右，牙標本變得柔軟、富有彈性時，即完成脫鈣步驟。3.流水沖洗48小時或更長些。4.梯度脫水：用30%、50%、70%、80%、90%、95%酒精、正丁醇與95%酒精等兩混合液，再用正丁醇脫水，每級停留1-2天，或自定。5.浸蠟：宜用低熔點52-54℃的包埋石蠟，浸蠟4小時或更長時間。6.石蠟包埋：將熔蠟倒入自制的長方形紙盒中，然后將浸蠟牙，切面向下放入蠟液中。最好將牙齒放在長方形包埋盒的對角線上。待蠟稍冷卻即移入涼水盆中，以促其迅速并均勻地凝固。7.石蠟切片：使用西德產(chǎn)1140形萬能自動切片機。切片厚度6或7微米。8．貼蠟切片：將切片放出稍低于蠟熔點溫度的水槽中，使蠟切片展平而不溶，將其貼附在載玻片上，放入溫度接近蠟熔點的烤箱中5-10小時或自定時間。9．染牙切片步驟（1)二甲苯脫蠟（2)梯度酒精水化（3)木精、伊紅染色（4)酒精脫水（5)二甲苯透明（6)光學樹脂封固注：（1)鈣液配制：生理鹽水70毫升甲酸20毫升鹽酸10毫升(1)脫凈鈣的檢測法：將最后一次用過的脫鈣液，取出5毫升放入純凈的試管中，滴入濃氨水使其中和，再加入4%草酸銨溶液1毫升，靜置約1小時，若無沉淀物出現(xiàn)，即表示脫鈣完全。脫鈣的時間長短，是由溫度，液量多少、脫鈣液更新頻率、組織塊大小、搖動容器與否以及標本的鈣化程度的高低等因素所決定。(2)正丁醇微溶于水，故脫水能力較弱，但能與水、酒精和石蠟溶合，所以用它脫水的組織塊可直接浸蠟包埋。利用正丁醇脫水兼透明的優(yōu)點是：基本上不引起組織塊收縮和變脆，避免了無水酒精和二甲苯

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