微生物感染實驗室診斷

細菌和的?檢查的目的?檢查的原則標本與運送?檢查的程序與內(nèi)容檢查的目的確定病原指導用藥判斷療效檢查的原則醫(yī)師和檢驗師要密切配合：溝通交流。重視標本

和送檢：

成敗的關(guān)鍵。安全管理好菌(毒)種：按病原體的

等級分類，我國將微生物分為4類，Ⅰ類：對人和動物可造成嚴重的微生物，如類天花

、埃博拉Ⅱ類：可引起人和動物嚴重疾病的病原體如HIV、脊髓灰質(zhì)炎

、高致病性、炭疽芽孢桿菌、結(jié)核分枝桿菌等Ⅲ類：不會造成人和動物嚴重疾病，

的

性有限的細菌、Ⅳ類：用于

菌（

用的細菌、

減毒株5.病原學檢驗對Ⅰ、Ⅱ類細菌\level,BSL）3-4級一般細菌學和的要求:檢測要在生物安全水平（biosafety。學檢測在BSL1-2級

進行。培養(yǎng)均需在安裝有生物安全柜的2級以上

中進行。檢查的原則BSL-2生物安全柜標本、運送、分析和菌毒種管理全部過程要注意生物安全！標本

和運送Collection

and

transportation

of

specimen1、無菌取材：無菌操作，無菌器皿/無菌培養(yǎng)基2、區(qū)別取材：

部位，病程，檢測目的，抗生素3、貼好

：登記詳細患者信息4、妥善送檢：快速，保溫/低溫，安全檢查程序細菌的檢查程序的檢查程序細菌的檢查程序可疑細菌標本直接形態(tài)學檢查學檢查細菌成分檢測抗原核酸特異性抗體凝集試驗ELISA中和試驗凝集試驗免疫熒光

ELISAPCR方法核酸雜交細菌分離培養(yǎng)鑒定形態(tài)學鑒定生化反應抗原（毒力）檢測學鑒定動物實驗、藥敏試驗等的檢查程序病原學檢測的分離培養(yǎng)與鑒定形態(tài)學成分檢測核酸

蛋白質(zhì)檢測特異性抗體或抗原核酸（

血癥）學檢測可疑標本細菌和檢查內(nèi)容細菌檢查內(nèi)容檢查內(nèi)容形態(tài)學檢查：光鏡法病原學檢查：細菌分離、培養(yǎng)和鑒定方法特異性抗原和抗體檢測：免疫學試驗方法細菌特異性

：分子生物學方法細菌的檢查內(nèi)容細菌的形態(tài)學檢查檢查用儀器普通光學顯微鏡light

microscope暗視野顯微鏡dark-field

microscope熒光顯微鏡fluorescence

microscope細菌的形態(tài)學檢查方法、不染色方法：檢查細菌動力（壓滴法、懸滴法、穿刺暗視野顯微鏡法）染色方法：染色法（Gram’s

stain）抗酸染色法（Acid-fast

stain）特殊染色法（specialstain）熒光染色法（fluorescencestain）Bacillus

subtilisEscherichia

coliStaphylococcus

aureusYersinstisGram’s

stainSpore

stainMycobacterium

tuberculosisAcid-fast

stainFlagellaCapsule細菌的病原學檢測——分離培養(yǎng)與鑒定臨床標本分離培養(yǎng)接種純培養(yǎng)

挑取單菌落鑒定分離培養(yǎng)最重要的是得到單菌落！三劃

分離單菌落three

streaks細菌純培養(yǎng)物的鑒定兼性厭氧菌專性厭氧菌需氧菌鑒定形態(tài)和染色菌落特征生化試驗學試驗藥物敏感試驗毒力試驗IMViCAPI

TestExamples

of

Biochemical

Tests細菌成分檢測-蛋白（抗原）檢測原理：細菌或其抗原成分（未知）＋特異性抗體（已知）→肉眼可見結(jié)果或可檢測的信號適用于：細菌培養(yǎng)不易成功，患者使用了抗生素常用方法：凝集試驗（玻片、協(xié)同和乳膠等）免疫標記技術(shù)（酶、熒光素、同位素）細菌抗體的檢測(

學

)Serological

identification抗體效價病菌或其抗原（已知）+（未知抗體）－常用于病程長和抗原性較強的病原體引起的－雙份

IgG抗體效價4倍升高，具有

價值IgM：出現(xiàn)早，

快，可用于早期

，但試劑盒質(zhì)量往往不過關(guān)，易出現(xiàn)假陽性。IgG：出現(xiàn)晚，持續(xù)時間長，不能用于早期

。細菌成分檢測–核酸的檢測核酸雜交

hybridizationdot

blot

hybridizationSouthern

blot

hybridizationNorthern

blot

hybridizationin

situhybridization核酸擴增

amplification

of

nucleic

acid聚合酶鏈反應PCR核酸序列分析

sequencing抗生素敏感性試驗Antimicrobial

susceptibilitytestSusceptible Not

susceptibleBacteriallawnGrowthNogrowthAntibiotic

diskAntimicrobial

susceptibility

test細菌毒力的測定LD50ID50小鼠豚鼠家兔檢查內(nèi)容的形態(tài)學檢查的分離培養(yǎng)與鑒定的成分檢測的學檢測體的形態(tài)學檢測細胞學檢查：病變組織→切片→染色→光學顯微鏡→細胞病變電鏡檢查：直接電鏡法免疫電鏡法（immune

electronmicroscope）免疫凝集電鏡和免疫電鏡定位分離培養(yǎng)與鑒定Isolation

and

identification

of動物接種:利用已知或建立新動物模型雞胚接種:適用多種

接種組織培養(yǎng):

培養(yǎng),組織培養(yǎng),細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng):*原代細胞系

（2~3代）*二倍體細胞系

（40~50代，vaccine

preparation）*傳代細胞系（Henrietta

Lacks

cells-HeLa

cells）卵黃囊接種嗜神經(jīng)羊膜腔接種（流感初次分離）絨毛接種痘單純皰疹尿囊腔接種（流感、腮腺炎>氣室在培養(yǎng)細胞中增殖的指標致細胞病變效應（CPE）紅細胞吸附（hemadsorption）紅細胞凝集（hemagglutination）空斑形成

（plaque

formation）干擾作用（viralinterference）中和試驗（neutralization

test）red

bloodcell紅細胞吸附hemadsorption+susceptiblecells+viral

proteinsexpressedon

the

cell

membraneredbloodcell紅細胞凝集hemagglutination+susceptiblecells+esreleasedfrom

the

cells空斑plaque由

細胞后在培養(yǎng)瓶的瓊脂層上形成的一個壞死病灶空斑形成單位PFU(plaque

formation

unit)一個

細胞形成的空斑Viral

dilutionAdded

to

cellmonolayer&

incubated37oC

1hour1%

agar

over

addedallowed

to

set

andinverted,

incubatedat

37oC

for

3-7

days1%

agar

with

neutral

red

added

over

existing

agar

layer,allowed

to

set

and

inverted,incubated

at

37oC

overnightplaque

formationA+susceptiblecellsB+CPE

(-)CPE

(-)B+CPE

(+)susceptiblecells干擾作用viral

interference+knownantiserum

blockedCPE

?……susceptiblecells+中和試驗neutralization

test蛋白電泳(PAGE)免疫熒光技術(shù)(IFA)酶免疫技術(shù)(EIA)固相免疫技術(shù)(ELISA/RIA)蛋白印跡分析(Western

blot)成分檢測-蛋白檢測PAGEEnzyme

Immuno

Assay

(EIA)Ex.

Sandwich

immunoassayAgAb核酸雜交技術(shù)（hybridizationDot

blothybridizationSouthern

blot

hybridizationNorthern

blot

hybridization In

situhybridization核酸擴增技術(shù)（amplification

of

nucleic

acidPCR核酸序列分析（sequencing）成分檢測

-

核酸的檢測PCRReal-time

PCR>抗體的檢測（

學Serological

identification補體結(jié)合試驗免疫熒光試驗放射免疫試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體效價+或其抗原（已知）凝集試驗沉淀試驗（未知抗體）大顆粒（細胞或乳膠微球）Ag+（Ab）凝凝集試驗

agglutinationtestAgAbPrecipitationring沉淀試驗precipitationtestSerological

identification。－常用于病程長和抗原性較強的病原體引起的－雙份

IgG抗體效價4倍升高，具有

價值IgG抗體：出現(xiàn)晚，持續(xù)時間長，不能用于早期IgM抗體：出現(xiàn)早，

快，可用于