4%多聚甲醛固定微生物樣品的原理

4%多聚甲醛固定微生物樣品的原理4%多聚甲醛固定微生物樣品的原理4%多聚甲醛固定微生物樣品的原理V:1.0精細(xì)整理，僅供參考4%多聚甲醛固定微生物樣品的原理日期：20xx年X月4%多聚甲醛固定微生物樣品的原理標(biāo)本中大多數(shù)神經(jīng)激素、肽類物質(zhì),以及蛋白質(zhì)為水溶性，在用于研究之前，常需固定,即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能與蛋白質(zhì)的氨基反應(yīng)，使蛋白質(zhì)凝固，因此在醫(yī)藥上可做為檢驗(yàn)時(shí)的組織固定劑、以及防腐劑等。在固定劑中，最常用的是多聚甲醛。

常用固定液：固定劑品種很多，但大多屬于醛類和醇類。其固定原理不同，各有優(yōu)缺點(diǎn)。

醛類（常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛）

醇類（常用乙醇）

其它（丙酮）

(1)

醛類

甲醛(福爾馬林)應(yīng)用最廣

原理：形成分子間的交聯(lián)，影響蛋白構(gòu)型而使之固定。

優(yōu)點(diǎn)：形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好，且穿透性強(qiáng)，組織收縮少。

缺點(diǎn)：

甲醛放置過久可氧化為甲酸，使溶液pH降低，影響染色；

醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙；

分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露?？稍斐杉訇幮缘娜旧Y(jié)果。

注意事項(xiàng)：

縮短固定時(shí)間，降低固定溫度(4°C)，為此組織塊不宜過厚。

改用中性緩沖福爾馬林，以pH值7.2～7.40.01mol/L的磷酸鹽緩沖液配制成10％甲醛固定液，減少固定液pH的變化。

固定后充分水洗以減少分子間交聯(lián)。

切片在作免疫組化染色前，先經(jīng)預(yù)處理使抗原再現(xiàn)(抗原修復(fù))。

戊二醛：

穿透性強(qiáng)，微細(xì)結(jié)構(gòu)保存好，但對(duì)抗原有一定影響，常與其他固定劑聯(lián)合用作免疫電鏡固定液。

多聚甲醛(常用4%)：

可用于免疫電鏡；也可用于免疫熒光染色。

主要檢測(cè)組織內(nèi)一些性能嬌弱的抗原特別是細(xì)胞表面抗原，例如各類淋巴細(xì)胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等。

(2)

醇類

最常用的醇類固定劑是乙醇。

其固定作用：使細(xì)胞內(nèi)蛋白、糖類發(fā)生沉淀。

優(yōu)點(diǎn)：穿透性強(qiáng)、抗原性保存好。

缺點(diǎn)：

脫水性強(qiáng)，易引起組織收縮、變硬，影響切片質(zhì)量，因而乙醇固定時(shí)間不宜過長(zhǎng)(2h內(nèi))。

乙醇使蛋白變性的作用輕，固定后可再溶解；染色過程中，溫育時(shí)間長(zhǎng)，抗原可流失而減弱反應(yīng)強(qiáng)度

3)