DB4115-T 078-2020息半夏組織培養(yǎng)及育苗技術(shù)規(guī)程-（高清現(xiàn)行）

ICS65.020.01CCSB05

4115信 陽(yáng) 市 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB4115/T078—2020息半夏組織培養(yǎng)及育苗技術(shù)規(guī)程20202020123020210330信陽(yáng)市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB4115/T078DB4115/T078—2020前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由息縣工業(yè)和信息化局提出。本文件由息縣工業(yè)和信息化局歸口。術(shù)研究中心、息縣市場(chǎng)監(jiān)督管理局。本文件主要起草人：李金平、陳瓊、劉振華、王金合、楊俊杰、李丹、趙斌、李曉斌。IIDB4115/T078DB4115/T078—2020DB4115/T078—2020玻璃化DB4115/T078—2020玻璃化調(diào)或生理病變，表現(xiàn)出分化能力低，難以增殖成芽，也難以生根成苗。增殖培養(yǎng)而使培養(yǎng)物得以成倍增殖的過(guò)程。息半夏組織培養(yǎng)及育苗技術(shù)規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了息半夏組織培養(yǎng)的生產(chǎn)技術(shù)流程和煉苗移栽操作規(guī)范。本標(biāo)準(zhǔn)適用于信陽(yáng)市行政區(qū)域內(nèi)息半夏組織培養(yǎng)及育苗。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB317白砂糖GB/T603化學(xué)試劑試驗(yàn)方法中所用制劑及制品的制備GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求HG/T3491化學(xué)試劑活性炭3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。植物組織培養(yǎng)HG/T3491化學(xué)試劑活性炭3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。植物組織培養(yǎng)在一定的光照和溫度條件下進(jìn)行培養(yǎng)，使之生長(zhǎng)、分化并發(fā)育成完整小植株的技術(shù)。外植體植物組織培養(yǎng)所用的材料。培養(yǎng)基由水、無(wú)機(jī)鹽類(lèi)、有機(jī)物質(zhì)、蔗糖、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及瓊脂等組成的培養(yǎng)基質(zhì)。組培苗管苗。褐化褐化是由于組織中的多酚氧化酶在氧氣的參與下，使酚類(lèi)物質(zhì)被氧化后產(chǎn)生褐色醌類(lèi)物質(zhì)。1培養(yǎng)代數(shù)同一外植體，經(jīng)繼代培養(yǎng)的次數(shù)。4息半夏組織培養(yǎng)技術(shù)流程實(shí)驗(yàn)室要求實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合GB19489和GB/T22278的要求。培養(yǎng)基及其配制母液的配制和保存將常用藥品配制成比所需濃度高50～100倍的母液，藥品配制嚴(yán)格按照GB/T603規(guī)定方法配制，所用水執(zhí)行分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)（所用水應(yīng)符合GB/T6682三級(jí)水的要求）。稱(chēng)量不同的藥品使用不同的湯匙，避免藥品的交叉污染與混雜。息半夏組織培養(yǎng)以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所用化學(xué)試劑應(yīng)符合國(guó)家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。配制好的母液分別貼上標(biāo)簽，注明母液號(hào)、配制倍數(shù)、日期。母液貯藏溫度2℃～10℃，貯藏時(shí)間≦3個(gè)月，如有霉菌和沉淀產(chǎn)生，則不得使用。不溶于水藥品的溶解方法2，4-D、NAA等不溶于水的藥品先用少量95%乙醇溶解，然后加水定容。6-BA先溶于少量0.1mol/L的鹽酸中，再加水定容。所用水應(yīng)符合GB/T6682三級(jí)水的要求。培養(yǎng)基配制基本培養(yǎng)基由藥品、蔗糖、瓊脂、水組成，蔗糖和水，應(yīng)分別符合GB317和GB5749規(guī)定。所需蔗糖的濃度是20g/L，瓊脂粉的濃度是5.5g/L。成苗培養(yǎng)階段，加入0.25%符合HG/T3491規(guī)定的活性炭，減少組織培養(yǎng)的褐化和玻璃化，同時(shí)有利于息半夏壯苗。培養(yǎng)基的配制程序如下：2誘導(dǎo)培養(yǎng)基配制配方為MS+2,4-D（0.2mg/L）+6-BA（4mg/L），按照培養(yǎng)基配制程序配制。成苗培養(yǎng)基配制配方為1/2MS+2,4-D（1mg/L）+6-BA（0.5mg/L），按照培養(yǎng)基配制程序配制。葉片培養(yǎng)基配制配方為MS+6-BA（1mg/L）+NAA（0.1mg/L），按照培養(yǎng)基配制程序配制。葉柄培養(yǎng)基配制配方為MS+6-BA（1mg/L）+NAA（0.2mg/L），按照培養(yǎng)基配制程序配制。pH息半夏培養(yǎng)基最適宜pH值為5.5～6.5。息半夏培養(yǎng)基最適宜pH值為5.5～6.5。4.2.5培養(yǎng)基的分裝和滅菌配制好的培養(yǎng)基趁熱分裝，分裝量以占培養(yǎng)容器的1/4～1/3為宜。滅菌20min～30min。消毒工作環(huán)境保持組培室清潔衛(wèi)生。接種室與培養(yǎng)室每隔3個(gè)月密閉門(mén)窗用高錳酸鉀—甲醛（3:5）熏蒸10h～12h，然后打開(kāi)門(mén)窗通風(fēng)換氣。操作要求超凈工作臺(tái)臺(tái)面用75%20min整個(gè)接種工作在近火焰處進(jìn)行。接種完成后迅速封口。接種工具的消毒接種工具采用熱壓滅菌或其他方式滅菌，接種時(shí)在超凈工作臺(tái)內(nèi)取出。使用的消毒液要每周更換。外植體的消毒3DB4115/T078DB4115/T078—2020DB4115/T078DB4115/T078—2020將清洗干凈的息半夏塊莖剝?nèi)ケ砥ぃㄐ⌒谋Ｗo(hù)好芽尖），用流動(dòng)飲用水沖洗30min后，在超凈工作臺(tái)上用75%乙醇浸泡20.1%升汞消毒8min～105～6次后即可接種。培養(yǎng)材料及接種培養(yǎng)材料的選擇外植體選擇無(wú)病蟲(chóng)傷害的野生健壯息半夏塊莖，個(gè)頭中等，表面光滑、皺褶少。材料的接種將消毒好的直徑約1cm～4cm息半夏中等塊莖接種到MS試管苗初代培養(yǎng)保證外植體和培養(yǎng)基的無(wú)菌狀態(tài)及培養(yǎng)室良好清潔環(huán)境條件。息半夏最適宜的培養(yǎng)溫度25℃21500Lx2000Lx1hd1hd。1cm用。50d25d～30d，形成完整的試管苗。試管苗的增殖培養(yǎng)4葉片培養(yǎng)葉片培養(yǎng)將試管苗濃綠厚大的葉片切成0.5cm×0.5cm60d。葉柄培養(yǎng)將試管苗生長(zhǎng)健壯的葉柄切成0.5cm～1cm長(zhǎng)的段，接種于葉柄培養(yǎng)基，培養(yǎng)周期45d～55d。小塊莖培養(yǎng)將剪掉葉片和葉柄的無(wú)菌小塊莖轉(zhuǎn)接到成苗培養(yǎng)基上，培養(yǎng)周期25d～30d。從生芽和愈傷組織培養(yǎng)將葉片與葉柄培養(yǎng)形成的叢生芽和愈傷組織轉(zhuǎn)接至成苗培養(yǎng)基上，培養(yǎng)周期25d～30d。5煉苗移栽操作規(guī)范5光培煉苗選擇生長(zhǎng)健壯的試管苗，打開(kāi)瓶蓋，在自然光、室溫下煉苗3d～5d后移栽。馴化移栽75%的遮陽(yáng)網(wǎng)遮陽(yáng)，在溫度25℃左右，相對(duì)濕度85%條件下生長(zhǎng)5d～7d。苗期管理肥水管理。每隔7d，用與MS培養(yǎng)基濃度相當(dāng)?shù)奈⒘吭嘏渲茽I(yíng)養(yǎng)液，稀釋10倍進(jìn)行噴施，保證苗床的肥力。使用溫控設(shè)施，動(dòng)態(tài)監(jiān)控溫度變化，整個(gè)生長(zhǎng)期間保持溫度25℃左右，遮陽(yáng)率75%左右，使組培苗健康生長(zhǎng)。病蟲(chóng)草害管理主要病害及防治葉斑病用1∶1∶100的波爾多液和40%多菌靈可濕性粉劑300倍液交替噴防3～5次。根腐病根腐病及時(shí)拔除病株燒毀，并用10%的石灰水對(duì)病穴消毒，發(fā)病初期用50%多菌靈或70%甲基托布津可濕性粉劑1000倍液淋穴或澆灌病株根部。葉柄腐爛病(猝倒病)發(fā)現(xiàn)病株及時(shí)拔除，用95%惡霉靈可濕性粉劑4000～5000倍液，或50%多菌靈可濕性粉劑800倍液噴霧，7d～10d噴1次，連噴3次以上。主要蟲(chóng)害及防治蟲(chóng)害種類(lèi)紅天蛾幼蟲(chóng)和菜青蟲(chóng)幼蟲(chóng)。防治方法天敵防治：利用小花椿、中華躍蛛、赤眼蜂等天敵來(lái)防治。800～10001億孢子/ml噴灑；或畝用20幼蟲(chóng)單位菜粉蝶顆粒體病毒；或選用葉面肥20%滅幼脲懸浮劑800倍液噴灑。草害防治整個(gè)生育期及時(shí)除草，嚴(yán)防草荒。