GTC實(shí)驗(yàn)室工作程序

GTC實(shí)驗(yàn)室工作程序1.打開(kāi)電源打開(kāi)水浴鍋，光密度儀，采精杯預(yù)熱櫥，電子秤和顯微鏡的電源開(kāi)關(guān)。2，搖勻儲(chǔ)精*將儲(chǔ)存在精液保溫箱中的精液袋輕柔搖動(dòng)使之懸浮均勻，（早晚各一次）*清點(diǎn)并記錄儲(chǔ)存精液的種類和數(shù)目。*同時(shí)檢查并注意保持精液儲(chǔ)存箱的溫度在17oC.3.檢查儲(chǔ)精質(zhì)量*用移液器吸取待查精液，置于載玻片上，再恒溫加熱臺(tái)（調(diào)至37oC）預(yù)熱3分鐘。*在400X顯微鏡下評(píng)估儲(chǔ)存精子質(zhì)量，活力不得低于60%。形態(tài)異常率不得高于15%，判定使用與否，并做記錄。4．配置稀釋液*根據(jù)當(dāng)日精液稀釋配置計(jì)劃，稱取一定量的蒸餾水，放入37oC的水浴鍋中預(yù)熱*將稀釋劑按1：1（1袋稀釋劑對(duì)1升水）與蒸餾水充分混勻，放入37oC的水浴鍋中加熱。注：稀釋液應(yīng)在配置好30分鐘至24小時(shí)之間使用。5.采精前準(zhǔn)備*制備采精杯，放入預(yù)熱櫥。*預(yù)熱載玻片和蓋玻片到37oC，預(yù)熱稀釋液到37oC將光密度儀調(diào)至待讀樣狀態(tài)。*查看“公豬使用記錄表”結(jié)合配種計(jì)劃要求確定可使用的公豬及需稀釋的頭份。注：公豬每周需采精一次，但不得多于兩次，純種繁育需查看公母豬的系譜，防止近交。6.采精*準(zhǔn)備溫水和毛巾*根據(jù)公豬的體高，將假臺(tái)畜調(diào)至適當(dāng)高度*將采精公豬趕入采精欄，*用溫水洗凈公豬的下身并用毛巾擦干*將手洗凈擦干，戴上采精專用手套*誘使公豬爬上假臺(tái)畜。*待其將尿液和包皮積液排凈后，用手捏成空拳導(dǎo)入陰莖，讓其抽動(dòng)數(shù)次后用手鎖住陰莖頭順勢(shì)拉出**待其射精后，棄掉開(kāi)始部分的膠體和清亮的副性腺液，收集富含精子的部分。18注：公豬的射精時(shí)間一般為5-15分鐘，在其沒(méi)有結(jié)束射精時(shí)不放開(kāi)采精的手。7.原精處理*采精后去掉罩在采精杯上的濾紙和粘液，注意避免雜物掉入精液，*插入干凈的溫度計(jì)測(cè)量精液溫度，作記錄。*100X顯微鏡下檢查精子活力評(píng)分不得低于2分否則棄置不用。*用移液槍吸取定量的原精完全注入已用定量參比液調(diào)0的比色杯中并混勻*測(cè)得OD值通當(dāng)專用的“OD值與密度值轉(zhuǎn)化表”查到精子密度，作記錄。*電子秤上稱量精液的凈重（1克=1ML）得到所采精液的體積，注：鮮精鏡檢在精液采后10-15分鐘內(nèi)進(jìn)行，并注意避免日光直射精液。8.精液的稀釋*計(jì)算頭份稀釋=[體積（ML）×*濃度（1033/ML）×精子活率%]÷4*根據(jù)計(jì)劃稀釋頭份，計(jì)算稀釋液用量和精液需要量，并在電子秤上稱取所需體積的稀釋液（每頭份分裝體積為85-95ML）*調(diào)整稀釋液溫度，是其與原精溫度相差不超過(guò)±1oC。*將所需體積的精液與稀釋液混合均勻。*鏡檢稀釋后的精子活力不得低于60%，精子形態(tài)異常率不得高于15%，否則不可。9.包裝及儲(chǔ)存*用吸耳球?qū)⑾♂尩木何牒缥鼘?dǎo)管，并棄掉開(kāi)始部分的液體。*分裝需緩慢進(jìn)行，并注意檢查注入精液袋的精液量和分口質(zhì)量。*粘好寫(xiě)有公豬耳號(hào)和采精日期的標(biāo)簽。*分裝好的精液待其逐步冷卻至室溫后，放入17oC精液專用保溫箱中儲(chǔ)存。10.工作記錄*填寫(xiě)“公豬使用記錄表”和“公豬使用記錄卡”。*填寫(xiě)“采精記錄表”內(nèi)容包括：采精日期，采精者姓名，公豬耳號(hào)，收集類型（全部或部分），采精量，精液質(zhì)量和備注（公豬健康狀況和性欲等）11.設(shè)備儀器清洗及保養(yǎng)*及時(shí)清洗精液配置過(guò)程中使用的用具和儀器，并用蒸餾水過(guò)濾，將費(fèi)液，廢物及時(shí)處理，注意避免清洗劑與精液配置用具的接觸。*注意保持實(shí)驗(yàn)室的干燥和衛(wèi)生。集團(tuán)PIC擴(kuò)繁場(chǎng)2005.6.1