微生物實驗思考題

微生物實驗思考題微生物實驗思考題微生物實驗思考題V:1.0精細(xì)整理，僅供參考微生物實驗思考題日期：20xx年X月微生物實驗思考題用油鏡觀察時應(yīng)該注意哪些問題在載破片和鏡頭之間加滴什么油起什么作用答：應(yīng)該先用擦鏡紙將鏡頭擦干凈,以防上次實驗的污染.操作時,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加滴香柏油。作用：增加折光率,也就是增加了顯微鏡的分辨率.根據(jù)實驗體會，談?wù)剳?yīng)如何根據(jù)所觀察微生物的大小，選擇不同的物鏡進(jìn)行有效的觀察。答：細(xì)菌用油鏡,真菌用高倍鏡.都是先用低倍鏡找到目標(biāo)后,再用高倍鏡調(diào)到合適的視野和合適的清晰度.放線菌、酵母菌、多細(xì)胞真菌相對較大，用放大40倍的物鏡就可以看了，細(xì)菌小，要用放大1000倍的物鏡看，感覺還很小。病毒那就要用電子顯微鏡看了。哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么

答：涂片環(huán)節(jié)、加熱固定環(huán)節(jié)、脫色環(huán)節(jié)；其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是脫色環(huán)節(jié)。進(jìn)行革蘭氏染色時，為什么特別強(qiáng)調(diào)菌齡不能太老，用老齡細(xì)菌染色會出現(xiàn)什么問題？答：著色不均，染色效果不好。陰性陽性不明顯分不太清楚,問題是：不便于顯微鏡下觀察是陽性菌還是陰性菌。5、革蘭氏染色時，初染前能加碘液嗎乙醇脫色后復(fù)染之前，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌應(yīng)分別是什么顏色

答：不可以。因為碘與染料會結(jié)合成大分子，使得染料分子不能穿過細(xì)胞的細(xì)胞壁，對實驗結(jié)果造成影響。脫色后復(fù)染前，革蘭氏陽性菌呈紫色，陰性菌無色。6、不經(jīng)過復(fù)染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌？答：不行。在復(fù)染之前，革蘭氏陰性菌是無色透明的，在顯微鏡下很難觀察到；或者脫色過度，也會造成陽性菌脫色，不經(jīng)過復(fù)染，無法進(jìn)一步區(qū)別。7、你認(rèn)為制備細(xì)菌染色標(biāo)本時,應(yīng)該注意哪些環(huán)節(jié)?答:1制備適宜的培養(yǎng)基

2在超凈工作臺上進(jìn)行,保持無菌環(huán)境

3對培養(yǎng)基,接種環(huán)等物品的高溫高壓滅菌.

4倒置培養(yǎng)基,防止冷凝水內(nèi)流8.為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察答:1、若未完全干燥,載玻片上的液體會污染油鏡鏡頭。鏡頭非常精密,被污染后不利于下次觀察；2、若未完全干燥，水滴會影響油與玻璃之間折光率，造成視野不夠清晰。9.如果涂片未以熱固定,將會出現(xiàn)什么問題加熱溫度過高、時間太長，又會怎么樣呢

答:如果沒有加熱固定的話，水分蒸發(fā)太慢或者在染色時菌體會被沖洗掉；如果加熱時間過久，菌體變形或形態(tài)破壞，無法染色。10.制備培養(yǎng)基的一般程序是什么答：稱量——溶解—調(diào)PH值—融化瓊脂—過濾分裝—包扎標(biāo)記——滅菌——倒平板11.做過本次實驗后，你認(rèn)為在制備培養(yǎng)基時要注意些什么問題答：溶解配料的水要適量；PH要調(diào)到7.3左右；要小心手提式高壓鍋的使用；倒平板時要防止培養(yǎng)基被污染12.滅菌在微生物學(xué)實驗操作中有何重要意義？答：防止培養(yǎng)基被污染；防止雜菌影響實驗結(jié)果13.試述高壓蒸汽滅菌的操作方法和原理。答：高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。操作方法：加水——裝料、加蓋——排氣——升壓、保壓、和降壓——取料14.高壓蒸汽滅菌時應(yīng)注意哪些事項？答：第一，無菌包不宜過大，不宜過緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對流易滲透到包裹中央。第二，布類物品應(yīng)放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻礙蒸汽進(jìn)入包裹中央，嚴(yán)重影響滅菌效果。第三，定期檢查滅菌效果。15.試述如何在接種中，貫徹?zé)o菌操作的原則答：保持操作臺的無菌狀態(tài)與在無菌室操作；操作前，要進(jìn)行手的消毒；接種環(huán)要加熱滅菌；接種物品要標(biāo)記。16.以斜面上的菌種接種到新的斜面培養(yǎng)基為例說明操作方法和注意事項。答：在接種箱或者超凈工作臺上.將母種經(jīng)過消毒處理以后,在酒精燈火焰區(qū)上方打開棉塞.用接種針挑取一小塊菌絲體,接入新的試管培養(yǎng)基上即可.17.試設(shè)計一個實驗，從土壤中分離酵母菌并進(jìn)行計數(shù)。答：無標(biāo)準(zhǔn)答案。18.在酵母菌死活細(xì)胞的觀察中，使用美藍(lán)液有什么作用？答：區(qū)別死活細(xì)胞。19.為何要用乳酸-石碳酸溶液作霉菌水浸片？答：用乳酸-石炭酸的優(yōu)點是可使細(xì)胞不變形，具有殺菌、防腐作用；不易干燥，能保持較長時間；能防止孢子四處飛散。20.細(xì)菌與霉菌的菌落有何區(qū)別？答：細(xì)菌菌落光滑，易于基質(zhì)脫離；霉菌菌落較大、菌絲細(xì)長,菌落疏松,呈絨毛狀、蜘蛛網(wǎng)狀、棉絮狀,無固定大小,多有光澤,不易挑。21.如何區(qū)分霉菌與放線菌的菌落什么是擴(kuò)展性菌落

答：霉菌的菌落形態(tài)較大,質(zhì)地一般比放線菌疏松,細(xì)胞分化明顯菌絲粗壯有核菌落邊緣有粗絲狀細(xì)胞生長快有霉味。而霉菌往往形成復(fù)雜的孢子囊孢子梗等結(jié)構(gòu)。

放線菌菌落小菌絲細(xì)而均勻菌落邊緣可見細(xì)絲狀細(xì)胞有泥腥味，放線菌的分生孢子形態(tài)結(jié)構(gòu)簡單。擴(kuò)展性菌落：就是原本培養(yǎng)的細(xì)菌由于發(fā)生擴(kuò)散,形成的一些非預(yù)期的菌落,通常這些菌落會影響正常實驗觀察,可以用藥物抑制.22.能否用血球計數(shù)板在油鏡下進(jìn)行計數(shù)為什么

答：不能。計數(shù)時滴在血球計數(shù)板上的是菌懸液，相當(dāng)于在鏡頭和計數(shù)板直接加了一層水。水層會降低視野的亮度和顯微鏡的分辨率，造成菌體和網(wǎng)格線不清晰。23.根據(jù)自己體會，說明血球計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自那些方面如何減少誤差

答：誤差主要來自試劑誤差、方法誤差、儀器誤差；減少誤差有保持樣品的純凈、細(xì)胞溶液必須震蕩均勻、樣品濃度要適中、血球計數(shù)板要整潔清晰。24.菌種保藏中，石蠟油的作用是什么答：作用是密封。防止空氣進(jìn)入，降低菌種的生理活性。25.經(jīng)常使用的細(xì)菌菌株，使用哪種保藏方法比較好答：用甘油冷凍保藏方法保存，在液體培養(yǎng)基中加入百分子十五的甘油，然后低溫冷凍（-7度）左右。26.食品檢驗為什么要測定細(xì)菌菌落總數(shù)答：測定細(xì)菌菌落總數(shù)是檢驗食品純度程度的指標(biāo)。也是判斷其保存能力的指標(biāo)。27.實驗操作如何使數(shù)據(jù)可靠答：1、向平皿傾注液體時,平皿僅微微開啟即可；2、檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用時間不宜超過20min.

3、培養(yǎng)液和檢液在培養(yǎng)皿內(nèi)要搖勻；

4、培養(yǎng)液傾注培養(yǎng)皿時溫度要在45攝氏度,以免燙死菌落.28.食品中檢出的菌落總數(shù)是否代表該食品上的所有細(xì)菌數(shù)為什么

答：不能代表該食品上所有細(xì)菌數(shù)。因為在實驗過程中會造成細(xì)菌的損失或死亡、食品上的細(xì)菌包括了各種各樣的微生物。29.為什么營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基在使用前要保持在（46±1）℃的溫度？答：營養(yǎng)瓊脂是用來做菌落總數(shù)項目的,如果太熱就會將細(xì)菌燙死,而太冷則瓊脂還沒倒就凝固了（凝固點大約在40度）。30.大腸菌群檢驗中為什么首先要用乳糖膽鹽發(fā)酵管答：因為乳糖膽鹽發(fā)酵管中的成分有溴甲酚紫，中性時呈藍(lán)紫色，酸性時呈黃色，如果顏色不變（呈藍(lán)紫色），說明無產(chǎn)酸的大腸菌群；如果顏色變黃色，說明可能出現(xiàn)能分解乳糖產(chǎn)酸的大腸菌群；膽鹽可以抑制其它細(xì)菌生長繁殖；看杜氏小管中是否有氣體，判斷是否為分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群。31.做空白對照實驗的目的答：目的是檢驗培養(yǎng)基是否受到污染，驗證無菌操作。32.為什么大腸菌群的檢驗要經(jīng)過復(fù)發(fā)酵才能證實答：