注射用輔料標準制定和安全性課件

注射用輔料標準制定和安全性中國食品藥品檢定研究院包裝材料與藥用輔料檢定所孫會敏01030204背景介紹.目錄注射級藥用輔料標準.注射級藥用輔料對注射劑安全性的影響致謝.“齊二藥事件”

65例病例，9人死亡?！棒~腥草事件”，中藥注射劑引起過敏反應等“刺五加注射液事件”，已知死4人“塑化劑”事件“地溝油代替大豆油制作抗生素中間體”“鉻超標膠囊事件”臺灣省違法添加工業(yè)級順丁烯二酸酐用以化制淀粉美國新英格蘭配制中心（NECC）事件，64名患者死亡一、背景介紹近年來發(fā)生的藥害事件說明了藥用輔料特別是注射用藥用輔料對藥品安全與質(zhì)量的重要性。一、新英格蘭配制中心（NECC）事件01020304未按照生產(chǎn)指令使用無菌的藥用輔料和原料無菌車間污染最終導致甲潑尼龍醋酸酯（MPA）被真菌污染滅菌柜污染事件回顧：2012年9月，美國爆發(fā)了嚴重的腦膜炎疫情，疫情導致9個州的64名患者死亡，疫情原因為新英格蘭配制中心生產(chǎn)甲潑尼龍醋酸酯（MPA）被真菌污染。2015年1月，美國司法部決定以二級謀殺罪起訴新英格蘭配制中心的14名員工。美國FDA的調(diào)查污染的主要原因是：擬實行許可管理的藥用輔料名單

（第一批）序號品種名稱給藥途徑12,6二叔丁基對甲酚注射、眼用2丙二醇供注射用3玻璃酸鈉注射、眼用4泊洛沙姆188注射5茶油（供注射用）注射6大豆磷脂（供注射用）注射7大豆油（供注射用）注射8膽固醇注射9蛋黃卵磷脂（供注射用）注射10甘油(供注射用)注射11精制玉米油注射12聚山梨酯80注射13聚乙二醇400注射14聚乙二醇600注射二、注射用藥用輔料對注射劑安全性的影響01040203注射用藥用輔料中的有毒有害雜質(zhì)注射用藥用輔料特殊毒性注射用藥用輔料被污染，而制劑又無終端滅菌工藝注射劑生產(chǎn)企業(yè)錯用藥用輔料ACB

1、注射用藥用輔料中的有毒有害雜質(zhì)注射用藥用輔料中的過敏性雜質(zhì)注射用藥用輔料中的溶血性雜質(zhì)注射用藥用輔料中的刺激性注射用藥用輔料中的過敏性雜質(zhì)——乳糖（殘留蛋白）序號生產(chǎn)廠家檢品編號批次氮含量（ppm）1AEC06012012065241062035219.12EC06012012089831060031516.73BEC060120120626364765343.64CEC0601201206515BU10001728.35EC06012012062431057810949.96EC06012012062651054937438.97EC06012012062721058794556.38DEC0601201206266L114218.99EC0601201206270L120159.410EC0601201207635L114520.411EC0601201207681L1134A400429.212EC0601201209464L114245.213EEC06012012065992011080238.014EC06012012066002011040552.415EC06012012076822012031841.116FEC0601201206521851110211417.817EC0601201206523851102271499.318EC0601201206526851110231450.919EC0601201208458851111161420.620GEC0601201207683120100222.721EC0601201207660120500612.222EC0601201207647120400211.723EC0601201208977120200425.624EC0601201207658120400514.125HEC06012012076452012030311.526EC06012012076742011121914.827EC06012012089822012052612.328EC06012012089812012050630.429EC06012012089802012052246.330EC06012012089792012050838.531EC06012012089782012052134.332EC06012012089842012060520.533EC06012012094552012013114.334IEC060120120764412031414.735EC06012012094532012060525.436EC06012012094542012052029.637JEC06012012062252012030225.838EC06012012062282012030123.339EC06012012062322012010120.8Y=-44.906+0.8405(r=0.9994)10ppm-500ppm39批乳糖中殘留蛋白氮含量在11.5ppm-99.3ppm之間，按照口服級標準，39批樣品都合格，由于本次抽樣39批乳糖樣品大多來自注射劑生產(chǎn)廠家，這些批次的乳糖用在注射劑中，則會有一定的風險。

國內(nèi)外尚無注射級乳糖的法定標準，國外肺部給藥吸入級乳糖的殘留蛋白氮含量規(guī)定為32ppm，國家食品藥品監(jiān)督管理局在《新藥用輔料非臨床安全性評價指導原則》中將注射用輔料與肺部給藥輔料的安全性歸為一類，故本次抽驗注射級乳糖殘留蛋白氮含量限量定為32ppm,按此標準，39批樣品中有14批不合格，不合格率為36%，值得關注的是并不是所有國外產(chǎn)品的殘留蛋白氮含量都合格，提示企業(yè)不能完全迷信國外產(chǎn)品的質(zhì)量，如果乳糖是用于注射，買回原料后，企業(yè)應先提純降低殘留蛋白后再使用。部分容易引起過敏反應的藥用輔料目錄2、注射用藥用輔料中的溶血性雜質(zhì)——卵磷脂（溶血磷脂）

磷脂主要是從大豆和蛋黃中提取出來的，是一種混合物，其主要成分為磷脂酰膽堿，同時含有磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂等磷脂成分，目前藥用磷脂主要為大豆磷脂、蛋黃卵磷脂，磷脂一個重要的用途是制備注射用乳劑和脂質(zhì)體等。PCPELPELPCSPM其他PI注射用藥用輔料中的溶血性雜質(zhì)——卵磷脂（溶血磷脂）普通磷脂如磷脂酰膽堿（PC)溶血磷脂如溶血磷脂酰膽堿（LPC)棘皮紅細胞顯微鏡圖棘皮細胞與含有兩個脂肪酸酸鏈的具有高度親脂性的普通磷脂相比，溶血磷脂的親脂性和親水性是平衡的，這使得溶血磷脂加速了細胞膜與胞漿間交換的速度。低濃度時溶血磷脂就會讓紅細胞的形狀發(fā)生改變，形成棘皮細胞。當其濃度為2×10-4M時溶血磷脂就能使細胞膜溶解。注射用藥用輔料中的溶血性雜質(zhì)——卵磷脂（溶血磷脂）KetanHippalgaonkaret.al.,AAPSPharmSciTech,(2010)磷脂生產(chǎn)過程中水解生成LPC/LPE；在乳劑滅菌過程中磷脂水解而生成LPC/LPE15注射用藥用輔料中的溶血性雜質(zhì)——卵磷脂（溶血磷脂）ChristophWabel(1998),Ph.D.thesis經(jīng)檢驗，18批樣品中共有4批卵磷脂不符合規(guī)定，溶血磷脂酰乙醇胺的不合格率為85%

二甘醇丙二醇2006年中國發(fā)生“齊二藥事件”齊齊哈爾第二制藥有限公司購入實為二甘醇的“假冒丙二醇”，制備“亮菌甲素注射液”，導致十余人死亡。3、注射劑生產(chǎn)企業(yè)錯用藥用輔料色譜條件：極性彈性石英毛細管柱，固定液為聚乙二醇(PEG-20M)；初始溫度為50℃，保持5分鐘；以每分鐘5℃的速度升至220℃。進樣口溫度為220℃，檢測器溫度為250℃。1.異丙醇；2.正丙醇；3.二甲基甲酰胺；4.乳酸乙酯；5.二甲基乙酰胺；6.二甲基亞砜；7.1,2-丙二醇；8.1,3-丁二醇；9.1,3-丙二醇；10.苯甲醇；11.二甘醇；12.肉豆寇酸異丙酯；13.三乙酸甘油酯；14.甘油；15.油酸乙酯；16.苯甲酸芐酯國家藥典委員會發(fā)布了“注射劑中16種常用輔料及相關雜質(zhì)測定方法”丙二醇二甘醇2、注射劑生產(chǎn)企業(yè)錯用藥用輔料4、注射用藥用輔料特殊毒性苯甲醇：常用作注射劑的溶媒、防腐劑和止痛劑。毒副作用：易引起嬰兒的腦室內(nèi)出血，溶血、低血壓、局部刺激和臀肌攣縮癥等。1、含有苯甲醇的注射液,必須在說明書上明確標注“本品含苯甲醇,禁止用于兒童肌肉注射”;2、并要求凡使用苯甲醇作為溶媒的注射劑,其說明書必須明確標注“本品使用苯甲醇作為溶媒,禁止用于兒童肌肉注射”。苯甲醇3、注射用藥用輔料特殊毒性（其它醇類藥用輔料注射用后的毒副反應）中國藥用輔料行業(yè)現(xiàn)狀2011年行業(yè)領先的十家企業(yè)的市場占有率只有15.20%藥用輔料生產(chǎn)企業(yè)管理制度無證生產(chǎn)010302魚龍混雜；散、小、亂、差持有藥品生產(chǎn)許可證和具有批準文號的藥用輔料生產(chǎn)企業(yè)不多.我國藥用輔料管理制度還不健全三、符合注射用要求的藥用輔料藥典標準較少11132015版2010版2005版2000版1995版1990版甘油（供注射用）甘油（供注射用）PLGA（注射級）PEG系列（注射級）大豆磷脂（注射級）蛋黃卵磷脂（注射級）活性炭（注射級）丙二醇（注射級）氯化鈉（注射級）……輔料名稱結構式分子式[CAS]號來源與制法性狀鑒別檢查含量類別儲藏細菌內(nèi)毒素（熱原）、無菌降壓物質(zhì)或升壓物質(zhì)溶血或凝集刺激性物質(zhì)檢查過敏性物質(zhì)異常毒性…………

注射級藥用輔料標準中應關注的項目藥用輔料檢驗項目三、注射用藥用輔料藥典標準吐溫80（注射用標準）吐溫系列表面活性劑定義和結構式吐溫名稱R

吐溫20月桂酸吐溫40棕櫚酸吐溫60硬脂酸吐溫80油酸藥用輔料手冊第四版（鄭俊民譯）吐溫80（注射用標準）吐溫-60（文獻報道HLB值14.9）吐溫-80文獻報道HLB值15.0吐溫-20（文獻報道HLB值16.7）吐溫-40（文獻報道HLB值15.6）月桂酸棕櫚酸油酸（雙鍵）硬脂酸不同的脂肪酸鏈的長度對不同型號的吐溫親水親油平衡值有影響，脂肪酸鏈長則親酯性強,親水親油平衡值（HLB)值低。序號樣品批號廠家

2010版藥典與2005版不同的項目過氧化值≤10砷鹽≤2ppm環(huán)氧乙烷≤1ppm二氧六環(huán)≤10ppm120091108LY符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定220091207符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定320100305符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定420100305EL符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定520100406符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定620100504符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定7100412MSN11符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定8100413M符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定9100414M符合規(guī)定符合規(guī)定1.3符合規(guī)定1020100402QM69(7倍)符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定112010050115符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定1220100403GH符合規(guī)定符合規(guī)定3.4(3倍)11.01320100404符合規(guī)定符合規(guī)定2.0(2倍)12.41420100405符合規(guī)定符合規(guī)定2.8(3倍)符合規(guī)定1520100402EK62(6倍)符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定162010040359(6倍)符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定172010040461(6倍)符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定18FL100311010AK68(6倍)符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定按照2010版藥典標準檢驗結果

不合格率為62%，不合格項目包括：過氧化值（7批）、環(huán)氧乙烷（4批）、二氧六環(huán)（2批）、酸值（1批）、粘度（1批）共有11批樣品不合格吐溫80（注射用標準）Q1.殘留溶劑Q2.紫外吸收結論：

國內(nèi)吐溫80老工藝產(chǎn)品在234nm波長處有較強的吸收，而進口、新工藝產(chǎn)品在234nm沒有吸收峰。

而此處的吸收峰也并非原料油酸、山梨醇、雙氧水、乙二醇、二甘醇或雙氧水氧化原料而得，故認為此峰可能是老工藝的副產(chǎn)物峰或原料中的雜質(zhì)。234nm日本NOF新工藝老工藝Q3.分子量分布Q4.脂肪酸組成Q4.脂肪酸組成——注射級產(chǎn)品數(shù)據(jù)批號廠家脂肪酸組成（2015版藥典注射級聚山梨酯80公示稿標準）肉豆蔻酸酸≤0.5%棕櫚酸≤0.5%棕櫚油酸≤0.5%硬脂酸≤0.5%油酸≥98.0%亞油酸≤0.5%亞麻酸≤0.5%20140501南京威爾0.10.30.10.199.10.2未檢出201406010.10.30.10.199.10.2未檢出201406020.10.30.1099.20.2未檢出309363日本NOF0.10.30.20.199.10.2未檢出20141114

遼寧奧克未檢出0.2未檢出0.199.0未檢出未檢出國產(chǎn)注射級聚山梨酯80能夠達到2015版藥典公示稿的要求。根據(jù)藥典委員會《關于聚山梨酯80（供注射用）質(zhì)量標準起草情況說明的復函》（國藥典綜發(fā)[2014]351號，對三個廠家的5批注射級樣品進行了檢測

。與安全性密切相關的質(zhì)量問題雜質(zhì)質(zhì)量純度廠家非法添加過氧化氫吐溫80本身成分復雜過氧化氫含量測定組分分離，并確證結構過氧化氫含量測定過氧化氫滴定方法硫酸鈰法間接碘量法高錳酸鉀法滴定終點顏色顯示不明顯碘淀粉過氧化氫含量測定A50mL水+樣品37℃水浴5分鐘加入3mol·L-1硫酸溶液30mL加入鄰二氮菲指示液200uL硫酸鈰滴定液（0.001mol·L-1）滴定測定聚山梨酯80中過氧化氫+其他還原性物質(zhì)B50mL水+樣品+0.1%過氧化氫酶1mL37℃水浴5分鐘加入3mol·L-1硫酸溶液30mL加入鄰二氮菲指示液200uL硫酸鈰滴定液（0.001mol·L-1）滴定測定除去過氧化氫后聚山梨酯80中其他還原性物質(zhì)過氧化氫含量測定結果組分分離及結構確證x+y+z+w=20圖1-1聚山梨酯80理論結構式

組分復雜性：①母核差異（山梨醇酐、異山梨醇酐）②脂肪酸種類差異（油酸、亞油酸、棕櫚酸、硬脂酸等）③油酸酯化程度差異（單、二、三、四酯）④環(huán)氧乙烷聚合度差異組分分離及結構確證改進液相條件文獻報道方法：進一步分析方法：吐溫80色譜條件：色譜柱：AgilentSB-C8(250x4.6mm,5um)；

流動相A：2%甲酸水；流動相B：2%甲酸異丙醇ACBDEFG色譜柱：AiglentEclipseXDB-C18（4.6x150mm，5μm）；柱溫：30℃；流速：1mL/min；進樣體積：20μL；檢測器：Alltech蒸發(fā)光散射檢測器，Impactor“off”模式，漂移管溫度：100℃，N2流速1.0L/min；流動相：A=甲醇B=四氫呋喃；梯度洗脫：0~4.9min:100%B過渡到90%B;5.0~18.9min:90%B過渡到20%B;19~19.1:20%B過渡到100%B。藥用輔料手冊：山梨醇與約20摩爾環(huán)氧乙烷共聚而成的混合物：①母核差異（山梨醇酐、異山梨醇酐）②油酸酯化程度差異（單、二、三、四酯）③環(huán)氧乙烷聚合度差異。組分分離及結構確證聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯PSM組分分離及結構確證色譜峰編號組分數(shù)峰歸屬A1聚氧乙烯山梨醇酐PS2聚氧乙烯異山梨醇酐PI3聚乙二醇PEGB4聚氧乙烯山梨醇酐一油酸酯PSMC5聚氧乙烯異山梨醇酐一油酸酯PIMD6聚氧乙烯山梨醇酐二油酸酯PSDE7聚氧乙烯異山梨醇酐二油酸酯PIDF8聚氧乙烯山梨醇酐三油酸酯PSTriG9聚氧乙烯山梨醇酐四油酸酯PSTetraACBDEFG雜質(zhì)峰未酯化的極性成分不同母核和酯化程度的油酸酯組分分離及結構確證組分名稱分子式環(huán)氧乙烷聚合度/n組分個數(shù)聚氧乙烯山梨醇酐（PS）C6H12O5(OC2H4)n19～3012聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯（PSM）C24H44O6(OC2H4)n15～3319聚氧乙烯山梨醇酐二油酸酯（PSD）C42H76O7(OC2H4)n11～3525聚氧乙烯山梨醇酐三油酸酯（PSTri）C60H108O8(OC2H4)n17～3519聚氧乙烯山梨醇酐四油酸酯（PSTetra）C78H140O9(OC2H4)n28～358聚氧乙烯異山梨醇酐（PI）C6H10O4(OC2H4)n11～2515聚氧乙烯異山梨醇酐單油酸酯（PIM）C24H42O5(OC2H4)n5～2723聚氧乙烯異山梨醇酐二油酸酯（PID）C42H74O6(OC2H4)n6～2520聚乙二醇（PEG）H(OCH2CH2)nOH5～18149類組分的155個物質(zhì)組分分離及結構確證聚山梨酯80組分結構聚氧乙烯山梨醇酐一油酸酯，（PSM）聚氧乙烯山梨醇酐二油酸酯（PSD）聚氧乙烯山梨醇酐三油酸酯（PSTri）聚氧乙烯山梨醇酐四油酸酯（PSTetra）聚氧乙烯山梨醇酐（PS）聚氧乙烯異山梨醇酐（PI）聚氧乙烯異山梨醇酐一油酸酯（PIM）聚氧乙烯異山梨醇酐二油酸酯（PID）聚乙二醇（PEG）H(OCH2CH2)nOH聚山梨酯80的功能性（即有效性）——親水親油性X+Y+Z+W=20斑馬魚模型急性毒性考察編號廠家類型批號致死率/%1國產(chǎn)WE供注射用2012102326.72國產(chǎn)WE供注射用2013070110.03國外NOF注射級807367E30.04國外NOF注射級90636526.75國外SEPPIC普通L0801356.76國外SEPPIC普通L1031336.77國產(chǎn)EK普通2010040490.08國產(chǎn)QM普通2010050193.39國產(chǎn)SY普通100414M46.610國產(chǎn)WE普通2013010140.0Beagle犬急性毒性試驗廠家批號采用工藝Beagle犬靜脈注射吐溫80后的過敏反應癥狀Beagle犬靜脈注射30min后血液中組胺濃度升高值（nM）A20100404舊工藝高65.11±20.14B20100501舊工藝高39.87±31.04C100414M舊工藝高71.14±15.28D20100112新工藝低3.58±11.09E20091019新工藝低0.73±1.76Beagle犬急性毒性試驗廠家批號采用工藝Beagle犬靜脈注射吐溫80后的過敏反應癥狀Beagle犬靜脈注射30min后血液中組胺濃度升高值（nM）A20100112新工藝低3.588±11.09B20091019新工藝低0.