知識(shí)總結(jié)：基因工程的基本操作步驟難點(diǎn)剖析

1、PAGE4難點(diǎn)剖析：基因工程的基本操作步驟知識(shí)巧學(xué)一、目的基因的獲取基因操作的第一步，是取得人們所需要的特定基因，也就是目的基因。例如，前面提到的蘇云金芽孢桿菌中的抗蟲基因，還有植物的抗病（抗病毒、抗細(xì)菌）基因、種子的儲(chǔ)藏蛋白的基因，以及人的胰島素基因、干擾素基因等，都是目的基因。1從基因文庫中獲取目的基因要從浩瀚的“基因海洋”中獲得特定的目的基因，猶如大海撈針，是十分不易的?？茖W(xué)家們經(jīng)過不懈地探索，想出了許多辦法，概括地說，主要有兩條途徑：一條是從供體細(xì)胞的DNA中直接分離基因；另一條是人工合成基因。將某種生物體內(nèi)的DNA全部提取出來，選用適當(dāng)?shù)南拗泼?，將DNA切成一定范圍大小的DNA片段，

2、然后，將這些DNA片段分別與載體連接起來，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，每個(gè)受體菌都含有一段不同的DNA片段。這個(gè)群體包含了這種生物的所有基因，叫做這種生物的基因組文庫。如果用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA（也叫cDNA）片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群體就叫做這種生物的cDNA文庫。知識(shí)拓展直接分離基因最常用的方法是“鳥槍法”，又叫“散彈射擊法”。這種方法猶如用獵槍發(fā)射的散彈打鳥，無論哪一顆彈粒擊中目標(biāo)，都能把鳥打下來。鳥槍法的具體做法是：用限制酶將供體細(xì)胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運(yùn)載體，然后通過運(yùn)載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓供體細(xì)胞所提供的DN

3、A（外源DNA）的所有片段分別在各個(gè)受體細(xì)胞中大量復(fù)制（在遺傳學(xué)中叫做擴(kuò)增），從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法把帶有目的基因的DNA片段分離出來。如許多抗蟲、抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。用“鳥槍法”獲取目的基因的缺點(diǎn)是工作量大，具有一定的盲目性。又由于真核細(xì)胞的基因含有不表達(dá)的DNA片段，不能直接用于基因的擴(kuò)增和表達(dá)，因此，在獲取真核細(xì)胞中的目的基因時(shí)，一般是用人工合成基因的方法。技術(shù)擴(kuò)增目的基因20世紀(jì)80年代以后，隨著DNA核苷酸序列分析技術(shù)的發(fā)展，人們已經(jīng)可以通過DNA序列自動(dòng)測序儀對(duì)提取出來的基因進(jìn)行核苷酸序列分析，并且通過一種擴(kuò)增DNA的新技術(shù)（也叫RNA分子雜交技術(shù)

4、（DNA和mRNA之間是否成功顯示出雜交帶第三步目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)抗原抗體雜交是否成功顯示出雜交帶個(gè)體水平鑒定包括抗蟲、抗病的接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定功能是否相同等問題探究問題1構(gòu)建基因文庫是獲取目的基因的唯一方式嗎探究：構(gòu)建基因文庫是獲取目的基因的方法之一，并不是唯一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過RNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫。問題2為何要構(gòu)建基因表達(dá)載體探究：由于單獨(dú)的DNA片段目的基因是不能穩(wěn)定遺傳的，因此若要使目的基因在受體細(xì)胞中保持穩(wěn)定和表達(dá)，就需要將目的基因與相應(yīng)載體結(jié)合，形成重組結(jié)構(gòu)，即基因表達(dá)載體。以保證目的基因?qū)胂鄳?yīng)受