羅氏試劑盒說明書 Troponin I

1、05199565001V1肌鈣蛋白I（Troponin I）試劑說明書 MODULAR ANALYTICS E170和cobas e601分析儀 5/5 2009-4，V1 中文 05094810 190 100測試本試劑盒適用的分析儀主要用途該免疫測定法適用于人血清和血漿中肌鈣蛋白I的體外定量檢測。Elecsys TnI檢測方法主要用于心肌梗死和心肌損傷的輔助診斷和治療。肌鈣蛋白I的檢測可以為不穩(wěn)定性心絞痛患者或非ST段抬高型急性冠狀動脈綜合征患者的危險分層（關(guān)于死亡相關(guān)危險、心肌梗死、或需要及時再灌注治療的缺血事件的可能性增加）提供幫助。Elecsys和cobas e免疫分析儀采用電化學(xué)發(fā)

2、光免疫法（ECLIA）。概述肌鈣蛋白I（TnI）是橫紋肌的一種關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白。盡管所有橫紋肌TnI的功能都相同，但心肌TnI（cTnI，分子質(zhì)量23.9kD）與骨骼肌TnI 明顯不同。 由于組織特異性高，心肌肌鈣蛋白I（cTnI）是心肌損傷的高敏感性標(biāo)志物1，2，3，4，5。cTnI還可用于鑒別骨骼肌損傷（如橫紋肌溶解、多發(fā)性損傷和非心臟手術(shù)）和心肌損傷6，7，8。在急性心肌梗死（AMI）的情況下，血清中cTnI會在心肌癥狀出現(xiàn)3-6小時后升高，12-16小時達(dá)峰值，且持續(xù)升高4-9天9，10。cTnI升高還可見于不穩(wěn)定性心絞痛（UAP）和充血性心力衰竭（CHF）11，12，13，14。cTnI

3、已經(jīng)明確是急性冠狀動脈綜合征（ACS）患者的預(yù)后標(biāo)志物，可以預(yù)測近期、中期甚至長期預(yù)后15，16，17，18。cTnI和cTnT已確定是預(yù)測ACS后果的最佳獨立標(biāo)志物，歐洲心臟病協(xié)會（ESC）和美國心臟病學(xué)會（ACC）聯(lián)合對心肌梗死（MI）進(jìn)行了重新定義。根據(jù)此定義，在臨床急性缺血的情況下，當(dāng)血中cTnI水平高于參考范圍（健康人群）99百分位值時，即可診斷為MI。同時要求肌鈣蛋白檢測方法的不精密度（變異系數(shù)）10%19，20，21。根據(jù)MI的重新定義，已經(jīng)發(fā)表了許多關(guān)于心肌肌鈣蛋白檢測在ACS患者中的作用的建議22，23，24。在UAP和非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）患者中，檢測到的心

4、肌肌鈣蛋白水平與高死亡率有關(guān)，因此，肌鈣蛋白的檢測對這些患者的危險分級非常有用，也是ACC/AHA（美國心臟病學(xué)會）對UAP和NSTEMI患者處理導(dǎo)則的一部分25，26?？傊?，肌鈣蛋白的升高可以說明心肌損傷，但并不能說明缺血的機(jī)制。MI這個術(shù)語應(yīng)當(dāng)用于有心臟損傷跡象，如心肌缺血同時也檢測到了蛋白標(biāo)志物。如果臨床情況表明沒有發(fā)生缺血，那么應(yīng)當(dāng)考慮其他原因?qū)е滦呐K損傷22。Elecsys TnI法采用了兩對針對人cTnI的特異性單克隆抗體。檢測原理抗體夾心法，總檢測時間：18分鐘第一次孵育：30l標(biāo)本、2個抗cTnI的生物素化單克隆抗體和2個釕（Ru）a標(biāo)記的cTnI單克隆抗體一起孵育，形成抗原抗

5、體夾心復(fù)合物。第二次孵育：加入包被鏈霉親和素的磁珠微粒進(jìn)行孵育，通過生物素和鏈霉素的相互作用，復(fù)合物與磁珠結(jié)合。將反應(yīng)液吸入測量池中，通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復(fù)合物化學(xué)發(fā)光，并通過光電倍增器測量發(fā)光強(qiáng)度。儀器自動通過2點校正定標(biāo)曲線計算獲得檢測結(jié)果，試劑條碼提供標(biāo)準(zhǔn)曲線（6點校正）。試劑工作溶液M 包被鏈霉親和素的磁珠微粒（透明瓶蓋），每瓶6.5ml；包被鏈霉親和素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐劑。R1 生物素化的抗cTnI單克隆抗體（灰蓋），每瓶10ml；2個生物素化抗cTnI抗體（小鼠），濃度均為0.8 m

6、g/ml，磷酸緩沖液 100mmol/L，PH 7.4；防腐劑；抑制劑。R2 Ru(bpy)32+ 標(biāo)記的抗cTnI單克隆抗體（黑蓋），每瓶10ml，2個釕標(biāo)記的cTnI單克隆抗體（小鼠），濃度分別為0.8 mg/ml和0.005 mg/ml，磷酸緩沖液 100mmol/L，PH 7.4；防腐劑；抑制劑。警告和注意事項僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時必須遵循所有試驗室試劑操作的注意事項。所有廢棄物必需按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進(jìn)行處置。根據(jù)客戶需要提供安全資料表。避免試劑和樣本（樣本、定標(biāo)液和質(zhì)控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理該試劑盒為即用型，請勿分開使用。試劑相關(guān)信息可以通過試劑條形碼獲取。儲存及穩(wěn)定性存放于28

7、。請垂直擺放Elecsys TnI試劑盒，確保使用前儀器自動混勻過程中磁珠微粒的完整可用性。穩(wěn)定性：未開封試劑，28有效期內(nèi)均可使用開封試劑，284周分析儀上2周樣本的采集和準(zhǔn)備僅以下所列樣本可用于檢驗。血清樣本須用標(biāo)準(zhǔn)試管或含有分離膠的真空管收集。K2-EDTA、K3-EDTA血漿。標(biāo)準(zhǔn)：斜率0.8-1.2，相關(guān)系數(shù)0.95。穩(wěn)定性： 20-25可保存2小時；-20可保存12個月。僅能選擇合適的試管進(jìn)行不同類型樣本的采集，并非所有廠商的試管均可用于檢測。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會影響檢測結(jié)果。如果使用原始管進(jìn)行檢測（樣本前處理系統(tǒng)）時，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。有

8、沉淀的樣本在檢測前必須先作離心處理。避免使用熱滅活的樣本。不能使用添加疊氮化合物的樣本和質(zhì)控品。檢測前，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品須在室溫下(20-25)平衡。提供的物品參閱“試劑工作溶液”章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號05094828190，TnI CalSet 4 x1 ml貨號05095107190，PreciControl Troponin，2 x2 ml，分別為PreciControl Troponin 1和2 貨號03609987190，Diluent MultiAssay，216 ml 樣本稀釋液。實驗室基礎(chǔ)設(shè)備MODULAR ANALYTICS E170或cobas e 601分析儀

9、貨號04880340190,ProCell M, 2 x 2 L 系統(tǒng)緩沖液貨號04880293190, CleanCell M, 2 x 2 L測量池洗液 貨號03023141001, PC/CC-杯, 12個用于在檢測前預(yù)熱Procell M及Cleancell M。貨號03005712190, ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在檢測完畢后或更換試劑時清洗試劑針。貨號12102137001,反應(yīng)杯/吸頭 組合裝M /48盒84反應(yīng)管或移液管吸頭,廢物袋 貨號03023150001, WasteLiner,廢物袋 貨號11298500316, Elecsys Sy

10、sClean, 5 x 100 mL 系統(tǒng)清洗液 貨號03027651001,系統(tǒng)清洗適配器 M檢測要達(dá)到最佳檢測性能，請遵照本說明書中有關(guān)分析儀的相關(guān)指導(dǎo)說明。具體的分析儀檢測說明參見操作手冊。使用前，分析儀會自動攪拌磁珠微粒，使其處于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過條形碼自動讀取，不需要人工輸入。特殊情況下，分析儀無法自動讀取條碼信息時，請輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170和cobas e601分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20C左右，放置分析儀的試劑盤（20C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。分析儀系統(tǒng)會自動調(diào)節(jié)試劑溫度和各試劑盒瓶蓋開、關(guān)。定標(biāo)溯源性：Elecsy

11、s TnI法是商品化TnI法的標(biāo)準(zhǔn)化形式。每個Elecsys TnI試劑都有一個條形碼包含了各批號試劑定標(biāo)的具體信息。使用Elecsys TnI CalSet可以調(diào)整預(yù)設(shè)置的定標(biāo)曲線。定校頻率：使用新批號試劑時必須進(jìn)行定標(biāo)（新試劑盒在分析儀上放置不能超過24小時）。建議以下情況重新定標(biāo)：MODULAR ANALYTICS E170,和cobas e 601分析儀:使用同一批號試劑，1月后（28天）7天后（分析儀上使用同一試劑盒）根據(jù)需要：如失控。質(zhì)控使用Elecsys PreciControl Troponin1和2進(jìn)行質(zhì)控。其他合適的質(zhì)控品也可使用。各濃度質(zhì)控至少每24小時內(nèi)檢測一次，每次更

12、換試劑盒或定標(biāo)后也須進(jìn)行質(zhì)控。各實驗室可根據(jù)需求制定各自的質(zhì)控限和質(zhì)控周期。質(zhì)控值必須處于規(guī)定的質(zhì)控限內(nèi)。各實驗室必須建立應(yīng)對失控的相應(yīng)糾正措施。請遵循政府法規(guī)和當(dāng)?shù)匦袠I(yè)導(dǎo)則進(jìn)行質(zhì)量控制。計算儀器會自動計算每個樣本中的分析物濃度，單位：g/L或ng/mL。干擾因素以下情況下，檢測結(jié)果不受干擾：黃疸（膽紅素428mol/L或25 mg/dL）, 溶血（血紅蛋白0.063mmol/L或 0.4g/dL，當(dāng)樣本中的血紅蛋白濃度很高時，檢測結(jié)果可能會假性降低），脂血(脂肪乳劑 1500mg/dL)和生物素123nmol/L或30ng/mL。標(biāo)準(zhǔn)：回收率在預(yù)期值15之內(nèi)。對于接受高劑量生物素治療的患者（

13、5mg/天），須在末次生物素治療8小時后采集樣本。類風(fēng)濕因子1500 IU/ml時，檢測結(jié)果不受影響。肌鈣蛋白I1000g/L（ng/ml）時，無高劑量虎克效應(yīng)。對52種常用藥物進(jìn)行體外檢測未發(fā)現(xiàn)會影響檢測結(jié)果。少數(shù)病例中，高滴度的分析物抗體（如HAMA），鏈霉素抗體或釕抗體會影響檢測結(jié)果。恰當(dāng)?shù)膶嶒炘O(shè)計可將影響程度降到最低。以診斷為目的時，對檢測結(jié)果的評價，必須結(jié)合患者病史，臨床檢查和其他臨床資料。檢測范圍0.16-50g/L（ng/ml）（通過最低檢測限和廠商定標(biāo)曲線的最高值確定）。檢測值低于檢出限則報告0.1g/L（ng/ml）。該儀器對空白限和檢測限之間的檢測值沒有標(biāo)記。檢測值高于檢測

14、上限時則報告50g/L或ng/ml（10倍稀釋的樣本則報告至500g/L或ng/ml）稀釋TnI濃度高于檢測上限的樣本可采用Elecsys Diluent MultiAssay稀釋后再檢測。推薦采用1：10的比例稀釋（MODULAR ANALYTICS E170或cobas e 601分析儀可自動稀釋，或采用手工稀釋）。稀釋后，樣本cTnI濃度必須3g/L（ng/ml）。如用手工稀釋，結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)。如果是分析儀自動稀釋，MODULAR ANALYTICS E170或cobas e 601軟件在計算樣本濃度時會考慮稀釋倍數(shù)。期望值通過4個US和2個EU中心的839例健康志愿者對Elecsys

15、 TnI法進(jìn)行性能評價，cTnI參考上限（99百分位值）0.16g/L（ng/ml）（95%可信區(qū)間為0.12-0.60）。CV10%的最低濃度為0.3g/L（ng/ml）。由于cTnI的釋放動力學(xué)，在癥狀出現(xiàn)的1小時內(nèi)，低于檢測限的結(jié)果也不能肯定排除心肌梗死。如果仍然有心肌梗死的可能，要以合適的時間間隔進(jìn)行重復(fù)檢測。檢測值升高相關(guān)因素臨床研究表明心肌損傷的患者cTnI會升高，也可見于不穩(wěn)定性心絞痛、心臟挫傷和心臟移植。各實驗室應(yīng)當(dāng)進(jìn)行自身人群參考值調(diào)查，如有必要，可建立自己的參考范圍特殊的性能指標(biāo)試劑在分析儀上的性能試驗數(shù)據(jù)如下。由于具體情況不同，各實驗室所得出的數(shù)據(jù)可能會稍有差異。精密度根

16、據(jù)CLSI（臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會）中EP5-A準(zhǔn)則，采用Elecsys試劑、人血清和質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)性檢測：每個樣本檢測42輪，（21天，每天兩輪，每輪兩次），n=84下面是所得結(jié)果：分析靈敏度空白限（LoB），檢測限（LoD），定量限（LoQ）LoB0.1g/L(ng/mL)LoD0.16g/L(ng/mL)LoQ0.3g/L(ng/mL)空白限和檢出限是依照CLSI的EP17-A要求確定的，定量限通過功能靈敏度檢測所確定?？瞻紫奘?0個以上不含分析物樣本經(jīng)過多個獨立連續(xù)檢測所得第95百分位值，是指低于零濃度分析物概率為95%時的濃度值。檢出限是建立在低濃度樣本的空白限和標(biāo)準(zhǔn)差的基礎(chǔ)上，是指

17、所能檢測出的最低分析物濃度（高于空白限概率為95%時的濃度值）。定量限（功能靈敏度）是指在批間變異系數(shù)10%（每次10個獨立樣本，每天一次）時能重復(fù)測定的最低分析物濃度。注意：在美國，當(dāng)報告值0.3g/L（ng/ml）時，應(yīng)當(dāng)備注以下信息“批間變異系數(shù)10%時，不能檢測到0.3g/L（ng/ml）的濃度值”。方法學(xué)比較采用臨床標(biāo)本對Elecsys Troponin I法（MODULAR ANALYTICS E170分析儀，y）和Elecsys Troponin I STAT法（Elecsys 2010分析儀，x）進(jìn)行方法學(xué)比較，相關(guān)性如下（g/L或ng/ml）：樣本數(shù)n=133樣本濃度范圍:0

18、.197-47.3g/L（ng/ml）分析特異性Elecsys TnI法在下列分析物的條件下(檢測時，TnI濃度約為0.4 ng/mL和3ng/mL）檢測不會出現(xiàn)明顯的交叉反應(yīng)：h-骨骼肌肌鈣蛋白I ,0.03%;h-心肌肌鈣蛋白T,0.05%；h-骨骼肌肌鈣蛋白T, 0.0%(未檢測到)；人肌鈣蛋白C，0.0%（未檢測到）。診斷敏感性和特異性歐洲和美國的臨床中心對急診間出現(xiàn)胸痛癥狀的患者進(jìn)行了前瞻性研究。358例符合以下標(biāo)準(zhǔn)的患者參與敏感性和特異性的計算：入院前24小時內(nèi)發(fā)生胸痛，胸痛20分鐘，心電圖評估，年齡大于20歲，未懷孕，入院前3周未發(fā)生心肌梗死并至少抽血兩次。另一個標(biāo)準(zhǔn)是：采用商品化cTnI法并行檢測的一個可用的檢測結(jié)果。計算時，要排除沒有心血管疾病的患者。根據(jù)目前急性心肌梗死評估導(dǎo)則（包括常規(guī)肌鈣蛋白檢測結(jié)果）對患者做出診斷15，16。69例患者被診斷為STEMI或NSTEMI，80例為不穩(wěn)定性心絞痛，209例非心臟損傷導(dǎo)致胸痛。ROC曲線是根據(jù)肌鈣蛋白峰值計算繪制的。ROC曲線的曲線下面積（AUC）為0.96（95%可信區(qū)間0.91-0.98）。根據(jù)ROC分析，AMI的最佳判斷值為0.3g/L（ng/ml）。在ROC最佳判斷值（0.3g/L（ng/ml）計算的敏感性和特異性見下表：商品化cTnI法計算峰值，ROC最佳判