植物組織培養(yǎng)試題及答案總結(jié)

1、緒論復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空: 1、根據(jù)培養(yǎng)的材料，植物組織培養(yǎng)分：愈傷組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)等類型。2、植物組織培養(yǎng)的發(fā)展分為三個(gè)階段：萌芽階段、奠基階段和快速發(fā)展和應(yīng)用階段。3、 1902年，Haberlandt提出了植物細(xì)胞“全能性”學(xué)說(shuō)，1934年，White出版了植物組織培養(yǎng)手冊(cè)從而使植物組織培養(yǎng)為一門新興學(xué)科。二、名詞解釋：1、植物組織培養(yǎng)（plant tissue culture）：是指通過(guò)無(wú)菌和人工控制的環(huán)境條件下，利用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，對(duì)離體的植物 器官、組織、細(xì)胞及原生質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)，使其再生細(xì)胞或完整植株的技術(shù)。由于培養(yǎng)材料巳脫離了母體，又稱為植物

2、離體 培養(yǎng)（Plant culture in vitro）。2、脫分化（dedifferentiation）：由高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程，稱為植物細(xì)胞的脫分化。3、再分化（redifferentiation）：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)又可以重新分化成根或芽等器官，這一過(guò)程稱為植 物細(xì)胞的再分化。4、外植體（explant）：由活體（in vivo）植物體上切取下來(lái)的，用于組織培養(yǎng)的各種接種材料。包括各種器官、組織、細(xì) 胞或原生質(zhì)體等5、愈傷組織（callus）：原指植物在受傷之后于傷口表面形成的一團(tuán)薄壁細(xì)胞，在組培中則指在離體培養(yǎng)過(guò)程中形成的具 有分生能力的一團(tuán)

3、不規(guī)則的薄壁細(xì)胞，多在植物體切面上產(chǎn)生。三、問(wèn)答題：1、簡(jiǎn)述植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)？植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)是細(xì)胞全能性學(xué)說(shuō)，即植物體的每一個(gè)細(xì)胞都攜帶有一套完整的基因組，并具有發(fā)育成為完整 植株的潛在能力。2、植物組織培養(yǎng)有哪些特點(diǎn)？（1）培養(yǎng)條件可以人為控制（2）生長(zhǎng)周期短，繁殖率高：（3）管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制：3、植物組織培養(yǎng)的分類？（1）根據(jù)培養(yǎng)對(duì)象不同：組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等；（2）根據(jù)培養(yǎng)物培養(yǎng)過(guò)程：初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)；（3）根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)：固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)。4、植物組織培養(yǎng)主要應(yīng)用于哪些方面？（1）快速繁殖運(yùn)用組織培養(yǎng)的途徑，

4、一個(gè)單株一年可以繁殖幾萬(wàn)到幾百萬(wàn)個(gè)植株；（2）種苗脫毒針對(duì)病毒對(duì)農(nóng)作物造成的嚴(yán)重危害，通過(guò)組織培養(yǎng)可以有效地培育出大量的無(wú)病毒種苗；（3）培育和創(chuàng)制新品種利用組織培養(yǎng)可以使難度很大的遠(yuǎn)緣雜交取得成功，從而育成一些罕見(jiàn)的新物種；（4）大量生產(chǎn)次生代謝物質(zhì) 通過(guò)植物細(xì)胞培養(yǎng)獲得的生物堿、維生素、色素、抗生素以及抗腫瘤藥物不下50多個(gè)大類， 其中巳有30多種次生物質(zhì)的含量在人工培養(yǎng)時(shí)巳達(dá)到或超過(guò)親本植物的水平。植物細(xì)胞次生物質(zhì)的研制與生產(chǎn)碩果累累，后 來(lái)居上。（5）植物種質(zhì)資源的離體保存植物組織培養(yǎng)結(jié)合超低溫保存技術(shù)，可以給植物種質(zhì)保存帶來(lái)一次大的飛躍。因?yàn)楸４嬉粋€(gè) 細(xì)胞就相當(dāng)于保存一粒種子，但所占

5、的空間僅為原來(lái)的幾萬(wàn)分之一，而且在-193度的液氮中可以長(zhǎng)時(shí)間保存，不像種子那樣 需要年年更新或經(jīng)常更新。（6）人工種子 人工種子便于貯藏和運(yùn)輸，適合機(jī)械化播種；繁殖速度快，不受季節(jié)和環(huán)境限制，利于工廠化生產(chǎn)；體細(xì) 胞胚由無(wú)性繁殖體系產(chǎn)生，可以固定雜種優(yōu)勢(shì)。第1章 實(shí)驗(yàn)室及基本操作復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室必要的設(shè)備有超凈丁作臺(tái)、高壓滅菌器、空調(diào)機(jī)、天平、顯微鏡、蒸餾水發(fā)生器、酸度計(jì) 等。2、培養(yǎng)基成分主要包括無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分、 、碳水化合物、其它物質(zhì)。3、 培養(yǎng)基最常用的碳源是蔗糖，使用濃度在1%-5%常用3%。4、糖在植物組織培養(yǎng)中是不可缺少的，它不但作為離體組織賴以生長(zhǎng)的碳

6、源，而且還能維持培養(yǎng)基滲透壓。5、在固體培養(yǎng)時(shí)瓊脂是使用最方便、最好的凝固劑和支持物，一般用量為6-10g/L之間。6、馴化的目的：在于提高試管苗對(duì)外界環(huán)境條件的適應(yīng)性，提高其光合作用的能力，促使試健壯，提高苗的移裁成活率。7、生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素的高低決定著外植體的發(fā)育方向，其比值高：有利于一的形成；低：有利于的形成。8、培養(yǎng)基滅菌一般在口8iEa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121 ，維持 min。9、選擇外植體時(shí)應(yīng)選擇選擇優(yōu)良的種質(zhì)、選健壯的植株、選最適的時(shí)期和選取適宜的大小。10、 誘導(dǎo)胚狀體比誘導(dǎo)芽的優(yōu)點(diǎn)：(1)數(shù)量多、(2)速度快、(3)結(jié)構(gòu)完整。11、試管苗的生態(tài)環(huán)境：高溫且恒溫、高濕、弱光

7、、無(wú)菌。12、 培養(yǎng)基中加入活性炭的目的：利用其吸附能力，減少一些有害物質(zhì)的影響。13、篩選培養(yǎng)基的方法：?jiǎn)我蜃釉囼?yàn)法、多因子試驗(yàn)法、光譜實(shí)驗(yàn)法14、植物培養(yǎng)技術(shù)：滅菌、接種、培養(yǎng)、馴化四個(gè)環(huán)節(jié)15、試管苗的馴化注意：基質(zhì)、溫、光、水、肥、氣的綜合管理二、名詞解釋：1、MS培養(yǎng)基(MS culture medium)：它是1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。是目前應(yīng)用最廣泛的 培養(yǎng)基。特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽離子濃度較高，有高含量的N、K，硝酸鹽量大，營(yíng)養(yǎng)豐富。2、母液：是欲配制液的濃縮液。配成比所需濃度高10-100倍。母液配制時(shí)可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī) 物

8、和激素類等。好處：保證各物質(zhì)成分的準(zhǔn)確性配制時(shí)的快速移取便于低溫保藏。3、褐變：是指外植體在培養(yǎng)中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細(xì)胞里的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類物質(zhì)，有時(shí)使整個(gè)培養(yǎng)基 變褐，從而抑制其他酶的活性，影響材料的培養(yǎng)。4、玻璃化現(xiàn)象(vitrification phenomenon):在長(zhǎng)期的離體培養(yǎng)繁殖時(shí)，有些試管苗的嫩莖、葉片呈現(xiàn)半透明水漬狀，這種 現(xiàn)象稱為玻璃化。5、消毒：指殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再發(fā)生危害作用。6、滅菌：是指用物理或化學(xué)的方法，殺死物體表面和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質(zhì)全部殺死。7、接種：在無(wú)菌條件下，用灼燒過(guò)的鑷子將外植體放到

9、培養(yǎng)基上的操作過(guò)程。三、問(wèn)答題1、一般組織培養(yǎng)的操作工序：、培養(yǎng)器皿的清洗；、培養(yǎng)基的配制、分裝和高壓滅菌；、無(wú)菌操作材料的表面滅菌和接種；、將培養(yǎng)物放到培養(yǎng)室培養(yǎng)；、試管苗的馴化、移栽和初期管理。2、論述植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)在組織培養(yǎng)中的作用？并列舉常見(jiàn)的種類生長(zhǎng)素類：主要被用于誘導(dǎo)愈傷組織形成，促進(jìn)細(xì)胞脫分化；促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)；誘導(dǎo)根的分化，促進(jìn)生根。如：IAA (吲 哚乙酸)；NAA(萘乙酸)；IBA(吲哚丁酸)；2,4D(2,4二氯苯氧乙酸)細(xì)胞分裂素類：誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)。促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。抑制根的分化。抑制衰老，減少葉 綠素分解，有保鮮效果。如：包括6BA(6芐基腺嘌吟)、Kt

10、 (激動(dòng)素)、Zt (玉米素)等。3、常用的培養(yǎng)基有哪些？說(shuō)明其特點(diǎn)MS培養(yǎng)基：1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。是目前應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽離 子濃度較高white培養(yǎng)基：無(wú)機(jī)鹽濃度較低，適于生根培養(yǎng)。N6培養(yǎng)基：KNO3和(NH4) 2SO4含量高，不含鑰。廣泛應(yīng)用于禾谷類植物的花粉和花藥培養(yǎng)。B5培養(yǎng)基：主要特點(diǎn)是含有較低的銨鹽，較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素。適宜雙子葉植物特別是木本植物的培養(yǎng)4、如何配制MS培養(yǎng)基？配制母液：一般母液配成比所需濃度高10-100倍的濃縮液，配制時(shí)可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類等。(2)配制方法：將

11、母液按順序擺放取適量的蒸餾水加入配制容器中按需要量依次取母液及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)加入蔗糖(30g/L)溶解定容調(diào)pH值加瓊脂(6-10g/L)，完全融化后，分裝至培養(yǎng)瓶中，封口高壓滅菌5、如何對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒？將需要的材料用水洗干凈。表面滅菌：用70%酒精浸30-60S左右。滅菌劑處理：0.1%升汞10分鐘、或在2%次氯酸鈉液中浸泡20-25分鐘。用無(wú)菌水沖洗3-5次左右6、接種后離體培養(yǎng)物對(duì)光、溫、濕等環(huán)境條件的要求？光照：愈傷組織的誘導(dǎo)不需光照或弱光，器官分化需要光照，一般1216h/d，光照度1000-5000lxo溫度：一般 252C濕度：培養(yǎng)室內(nèi)的濕度要求保持70%80%的相對(duì)濕度。7

12、、論述離體培養(yǎng)污染產(chǎn)生的原因及防治措施。污染：污染原因從病源分面主要有細(xì)菌和真菌和兩大類。原因：(1)外植體材料消毒不徹底培養(yǎng)基滅菌不徹底操作環(huán)境不潔凈操作人員操作不規(guī)范、不熟練。預(yù)防措施：(1)減少或防止材料帶菌外植體滅菌要徹底培養(yǎng)基滅菌要徹底玻璃器皿和金屬器皿的滅菌要徹底無(wú)菌室的消毒操作人員一定要嚴(yán)格按照無(wú)菌操作的程序進(jìn)行接種。8、固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基相比有何特點(diǎn)？?jī)?yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便，通氣問(wèn)題易于解決，便于經(jīng)常觀察研究.缺點(diǎn):培養(yǎng)物與培養(yǎng)基的接觸(即吸收)面積小，各種養(yǎng)分在瓊脂中擴(kuò)散較慢，影響?zhàn)B分的充分利用，同時(shí)培養(yǎng)物排出的一些 代謝廢物，聚集在吸收表面，對(duì)組織產(chǎn)生毒害作用。9、在培養(yǎng)基中加

13、入活性炭有什么作用？主要是利用其吸附作用，減少一些有害物質(zhì)的影響活性炭使培養(yǎng)基變黑，有利于某些植物生根對(duì)形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好的效應(yīng)10、植物組織培養(yǎng)技術(shù)主要包括哪些環(huán)節(jié)？各環(huán)節(jié)的主要工作內(nèi)容？培養(yǎng)基的配制及滅菌外植體的選擇及滅菌外植體的接種及培養(yǎng)試管苗的馴化與移栽11、組織培養(yǎng)中常用的滅菌方法？分為物理的和化學(xué)的兩類，物理方法如干熱(烘燒和灼燒)、濕熱(常壓或高壓蒸煮)、射線處理(紫外線、超聲波、微波、過(guò)濾和大量無(wú)菌水沖洗等措施；化學(xué)方法是使用升汞、甲醛、過(guò)氧化氫、高錳酸鉀、來(lái)蘇兒、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理。12、怎樣進(jìn)行培養(yǎng)基的高壓濕熱滅菌？方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，

14、待壓力上升到49kPa時(shí)，打開(kāi)放氣閥，放出空氣(注意完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部 是水蒸氣，滅菌才能徹底)，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。當(dāng)壓力表上升達(dá)到108kPa時(shí)，鍋內(nèi)溫度達(dá)121。(在 此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽抱)，維持20-30min。13、無(wú)菌操作時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？在接種4h前用甲醛熏蒸接種室；在接種前15-20min，打開(kāi)超凈工作臺(tái)的風(fēng)機(jī)以及臺(tái)上的紫外燈；接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實(shí)驗(yàn)服，并換穿拖鞋等；上工作臺(tái)后，用酒精棉球擦拭雙手，特別是指甲處。然后70%酒精噴霧降塵，并擦拭工作臺(tái)面；接種工具蘸95%酒精，灼燒；接種時(shí)將試管斜著，使試管口在

15、酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動(dòng)，灼燒數(shù)秒鐘。接完種后，將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒鐘。接種時(shí)，接種員雙手不能離開(kāi)工作臺(tái)，不能說(shuō)話、走動(dòng)和咳嗽等；接種完畢后要清理干凈并用酒精擦工作臺(tái)。14、在植物組織培養(yǎng)中，通過(guò)哪些途徑可以得到完整的植株？外植體一愈傷組織一根、芽一試管苗同時(shí)長(zhǎng)芽和根先長(zhǎng)芽，再長(zhǎng)根先長(zhǎng)根，再長(zhǎng)芽外植體一胚狀體一試管苗外植體一根、芽一試管苗。15、與常規(guī)苗相比，試管苗具有哪些特點(diǎn)？生長(zhǎng)細(xì)弱；光合作用差葉片氣孔數(shù)目少，活性差根的吸收功能弱對(duì)逆境的適應(yīng)和抵抗能力差16、如何提高試管苗移栽的成活率？試管苗的生理狀況 應(yīng)選擇壯苗，以提高移栽后的成活率加入植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)如生長(zhǎng)素降低無(wú)機(jī)鹽的濃度加入少量活性炭

16、，尤其是用酸、堿和有機(jī)溶劑洗過(guò)的活性炭環(huán)境因子適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件能提高移栽的成活率移栽過(guò)程中讓試管苗從無(wú)菌向有菌逐漸過(guò)渡17、接種程序：植物材料表面的消毒切割外植體將外植體移入培養(yǎng)基第2章基本原理復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、絕大多數(shù)培養(yǎng)植物再生植株時(shí)都先經(jīng)過(guò)愈傷組織階段。2、愈傷組織形成大致經(jīng)歷誘導(dǎo)期、分裂期和分化期 三個(gè)時(shí)期。3、使用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)時(shí)要注意：種類和濃度生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值4、愈傷組織的形態(tài)發(fā)生方式主要有不定芽方式和胚狀體方式。5、組織培養(yǎng)細(xì)胞再分化包括四個(gè)水平：細(xì)胞水平的再分化、組織水平的再分化、器官水平的再分化（器官發(fā)生）和植株水平 的分化二、名詞解釋：1、愈傷組織培養(yǎng)

17、（callus culture）:是指將母體植株上的外植體，接種到無(wú)菌的培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)、生長(zhǎng)和發(fā) 育的一門技術(shù)。2、繼代培養(yǎng)（subculture）:愈傷組織在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間以后，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積 累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)。這個(gè)過(guò)程叫做繼代培養(yǎng)3、體細(xì)胞胚（somatic embryo）又稱胚狀體（embryoid）:指在組織培養(yǎng)中，由一個(gè)非合子細(xì)胞（體細(xì)胞），經(jīng)過(guò)胚胎發(fā)生和 胚胎發(fā)育過(guò)程（經(jīng)過(guò)原胚、球形胚、心形胚、魚(yú)雷胚和子葉胚5個(gè)時(shí)期），形成的具有雙極性的胚狀結(jié)構(gòu)。4、體細(xì)胞胚胎發(fā)生：植物組織培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生胚狀體的過(guò)程，稱為體細(xì)胞胚胎發(fā)生。

18、5、細(xì)胞全能性（cell totipotency）：每一個(gè)植物細(xì)胞具有該植物的全部遺傳信息，在適當(dāng)條件下可表達(dá)出該細(xì)胞的所有遺傳信 息，分化出植物有機(jī)體所有不同類型細(xì)胞，形成不同類型的器官甚至胚狀體，直至形成完整再生植株6、形態(tài)建成：外植體細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下發(fā)生脫分化、再分化，產(chǎn)生芽和根，或者形成胚狀體，發(fā)育成苗或完整植株。三、問(wèn)答題1、愈傷組織細(xì)胞的分化一般分幾個(gè)時(shí)期？各有何特點(diǎn)？（1）誘導(dǎo)期（起動(dòng)期）：是細(xì)胞準(zhǔn)備分裂的時(shí)期。細(xì)胞大小幾不變，內(nèi)部發(fā)生生理生化變化，迅速合成蛋白質(zhì)和核酸。（2）分裂期：外層細(xì)胞分裂，中間細(xì)胞常不分裂，形成小芯。細(xì)胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，缺少結(jié)構(gòu)，淺而透明。在原培

19、養(yǎng)基上， 細(xì)胞必分化，及時(shí)轉(zhuǎn)移，其可無(wú)限制地進(jìn)行細(xì)胞分裂，維持不分化狀態(tài)。（3）分化期：細(xì)胞在形態(tài)和生理功能上的分化，出現(xiàn)形態(tài)和功能各異的細(xì)胞。2、優(yōu)良的愈傷組織必須具備哪4個(gè)特性？（1）高度的胚性或再分化能力，以便從這些愈傷組織得到再生植物（2）容易散碎，以便用這些愈傷組織建立優(yōu)良的懸浮系，并且在需要時(shí)能從中分離出全能性的原生質(zhì)體（3）旺盛的自我增殖能力，以便用這些愈傷組織建立大規(guī)模的愈傷組織無(wú)性系。（4）經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期繼代保存而不喪失胚性，便有可能對(duì)它們進(jìn)行各種遺傳操作。3、愈傷組織的形態(tài)發(fā)生有哪些情況？（1）愈傷組織僅有根或芽器官的分別形成，即無(wú)根的芽或無(wú)芽的根；（2）先形成芽，再在芽伸長(zhǎng)后，

20、在其莖的基部長(zhǎng)出根而形成小植株，多數(shù)植物屬這種情況；（3）先產(chǎn)生根，再?gòu)母糠只鲅慷纬尚≈仓?。這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成，尤其對(duì)于單子葉植物；（4）先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結(jié)合起來(lái)形成一株小植株。少見(jiàn)。單子葉植物：與雙子葉植物誘導(dǎo)發(fā)生過(guò)程類似，只是在形態(tài)上無(wú)魚(yú)雷形胚等階段，成熟體胚上有盾片、胚芽鞘和胚根等 結(jié)構(gòu)。4、簡(jiǎn)述細(xì)胞脫分化過(guò)程。細(xì)胞的脫分化過(guò)程可分為3個(gè)階段：第一階段為啟動(dòng)階段，表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)增生，并開(kāi)始向細(xì)胞中央伸出細(xì)胞質(zhì)絲，液泡蛋白體出現(xiàn)；第二階段為演變階段，此時(shí)細(xì)胞核開(kāi)始向中央移動(dòng)，質(zhì)體演變成原質(zhì)體；5、影響植物離體形態(tài)發(fā)生的因素有哪些？（不是重點(diǎn)）（

21、1）植物種類和基因型（2）培養(yǎng)材料的生理狀態(tài)發(fā)育年齡：一般幼態(tài)比老態(tài)組織形態(tài)發(fā)生能力高；培養(yǎng)器官或組織類型：細(xì)胞分裂旺盛的器官較好；培養(yǎng)時(shí)間和細(xì)胞倍性：一般取處于旺盛生長(zhǎng)期的愈傷來(lái)誘導(dǎo)器官形成。（3）培養(yǎng)基a營(yíng)養(yǎng)成分： 一般認(rèn)為，培養(yǎng)基中的銨態(tài)氮和K+有利于胚狀體形成，提高無(wú)機(jī)磷的含量可促進(jìn)器官發(fā)生；莖尖培養(yǎng)和芽 誘導(dǎo)培養(yǎng)基主要是MS及其修改的培養(yǎng)和B5培養(yǎng)基；碳水化合物種類及濃度對(duì)胚狀體發(fā)育有重要作用，缺糖或低糖無(wú)法形成胚狀體。b植物激素及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（起主導(dǎo)作用，通過(guò)影響內(nèi)源激素的平衡起作用c培養(yǎng)基的性質(zhì)：愈傷組織誘導(dǎo)：在固體培養(yǎng)基上；細(xì)胞和胚狀體的誘導(dǎo)在液體培養(yǎng)基上（4）培養(yǎng)條件：光照；溫

22、度；氣體；濕度等6、分裂期愈傷組織的共同特征：細(xì)胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，缺少有組織的結(jié)構(gòu)，維持其不分化的狀態(tài)，顏色淺而透明。7、胚狀體發(fā)生途徑與器官發(fā)生途徑形成植株的區(qū)別：胚狀體具有兩極性，即在發(fā)育的早期階段，從其方向相反的兩端分化出莖端和根端；而不定芽和不定根都為單向 極性。胚狀體的維管組織與外植體的維管組織無(wú)解剖結(jié)構(gòu)上的聯(lián)系。而不定芽或不定根往往總是與愈傷組織的維管組織 相聯(lián)系。胚狀體維管組織的分布是獨(dú)立的“ Y”字形。而不定芽的維管組織無(wú)此現(xiàn)象。8、器官發(fā)生形成小苗的方式（1）愈傷組織僅有根或芽器官的分別形成，即無(wú)根的芽或無(wú)芽的根；（2）先長(zhǎng)芽，后長(zhǎng)根，多數(shù)情況；（3）先長(zhǎng)根，再?gòu)母幕块L(zhǎng)

23、芽。這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成，尤其對(duì)于單子葉植物；（4）先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結(jié)合起來(lái)形成一株植株。第3章 器官和組織培養(yǎng)復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、植物器官培養(yǎng)主要是指植物的根、莖、葉、花器和幼小果實(shí)的無(wú)菌培養(yǎng)。2、莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)目的和取材大小分為莖尖分生組織培養(yǎng)和普通莖尖培養(yǎng)兩種類型。前者主要是對(duì)莖尖長(zhǎng)度不超過(guò) 0.1mm，最小只有幾十微米的莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，目的是獲得無(wú)病毒植株；后者是對(duì)幾毫米乃至幾十毫米長(zhǎng)的莖尖、芽尖 及側(cè)芽的培養(yǎng)，目的是離體快繁。3、不定芽產(chǎn)生的途徑：一是從外植體上直接產(chǎn)生二是從由外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織上產(chǎn)生。4、離體葉培養(yǎng)是指包括葉原基

24、、葉柄、葉鞘、葉片、子葉等葉組織的無(wú)菌培養(yǎng)。5、在離體葉培養(yǎng)中，6-BA和KT利于芽的形成；2心利于愈傷組織的形成二、名詞解釋：1、植物器官培養(yǎng)（Organ Culture）：是指對(duì)植物某一器官的全部或部分或器官原基進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。分為營(yíng)養(yǎng)器 官（根、莖、葉）和繁殖器官（果實(shí)、種子、花器官）培養(yǎng)。2、花器官培養(yǎng)：是指對(duì)植物的整朵花或花的組成部分（包括花托、花瓣、花絲、花藥、子房、胚珠）進(jìn)行離體培養(yǎng)的技 術(shù)。三：?jiǎn)柎痤}：1、離體葉組織中再生植株發(fā)生途徑有哪些？在離體葉組織脫分化和再分化培養(yǎng)中，莖和芽分化的4個(gè)途徑：（1）直接產(chǎn)生不定芽（2） 離體葉愈傷組織不定芽（3） 離體葉愈傷組織胚狀體不

25、定芽（4）離體葉 -小鱗莖或球狀體愈傷組織/3、離體根培養(yǎng)的一般方法：（1）100ml三角瓶，裝4050ml培養(yǎng)液；液體培養(yǎng)，反復(fù)繼代培養(yǎng)，流動(dòng)式7、莖尖培養(yǎng)的類型：莖尖分生組織培養(yǎng)：對(duì)長(zhǎng)度0.1mm左右，含1-2個(gè)葉原基的莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，即微莖尖培養(yǎng)；目的是獲得無(wú)病毒精株普通莖尖培養(yǎng)：對(duì)幾毫米至幾十毫米長(zhǎng)的莖尖、芽尖及側(cè)芽的培養(yǎng)，目的是快速繁殖和用于植物開(kāi)花生理的研究。8、莖段的培養(yǎng)材料的選擇、處理和培養(yǎng)基的調(diào)整選擇：取生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲(chóng)的幼嫩枝條或鱗莖盤，若是木本，取當(dāng)年生嫩枝或一年生枝條，剪去葉片，剪成34cm的小 段。處理：在自來(lái)水中沖洗13h，在無(wú)菌條件下用75%酒精滅菌3060s，再用濃

26、度為0.1%升汞浸泡38min，或用飽 和漂白粉浸泡1020min，因材料老嫩和蠟質(zhì)多少而定時(shí)間。最后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，以備接種。培養(yǎng)基的調(diào)整：最常用的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，加入3%蔗糖，用0.7%的瓊脂固化。9莖尖微繁過(guò)程有哪幾個(gè)階段莖尖微繁殖過(guò)程一般包括五個(gè)階段：1無(wú)菌培養(yǎng)的建立。2芽的增殖。3中間繁殖體的增殖。4誘導(dǎo)生提。5試萱苗的 移栽第4章胚胎培養(yǎng)及離體授粉復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、胚胎培養(yǎng)包括幼胚培養(yǎng)、成熟胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)以及子房培養(yǎng)。2、離體胚的培養(yǎng)分為二種類型：培養(yǎng)和培養(yǎng)。3、胚珠培養(yǎng)分二類：受精胚珠的培養(yǎng)和未受精胚珠的培養(yǎng)。受精胚珠培養(yǎng)目的一是打破種子的休眠;

27、 二是挽救胚的 發(fā)育,以獲得雜交種。未受精胚珠培養(yǎng)的目的是獲得單倍體植株。4、子房培養(yǎng)分授粉子房 培養(yǎng)和未授粉子房的培養(yǎng)。前者培養(yǎng)的目的是挽救雜種胚，后者培養(yǎng)的目的是獲得單倍體植株。6、離體胚培養(yǎng)方法：成熟胚和幼胚培養(yǎng)7、胚珠培養(yǎng)的培養(yǎng)基：Nitsch或N5典5,MS，子房培養(yǎng)的培養(yǎng)基：N6,MS二、名詞解釋：1、胚胎培養(yǎng)(embryo culture)：指對(duì)植物的胚、子房、胚珠和胚乳進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其發(fā)育成完整植物的技術(shù)。包括幼 胚培養(yǎng)、成熟胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)以及子房培養(yǎng)。2、胚培養(yǎng)(embryo culture)：采用人工的方法將胚從種子、子房或胚珠中分離出來(lái)，再放在無(wú)菌的條件下，

28、讓其進(jìn)一步 生長(zhǎng)發(fā)育，以至形成幼苗的過(guò)程。3、胚乳培養(yǎng)(endosperm culture)：是指將胚乳從母體上分離出來(lái)，放在無(wú)菌的人工環(huán)境條件下，讓其進(jìn)一步生長(zhǎng)發(fā)育， 以至形成幼苗的過(guò)程。4、胚珠培養(yǎng)(ovule culture)：是指將胚珠從母體上分離出來(lái)，在無(wú)菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)發(fā)育形成幼苗的過(guò) 程。5、子房培養(yǎng)(ovary culture)：是指將子房從母體上分離出來(lái)，在無(wú)菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)發(fā)育形成幼苗的過(guò) 程。6、植物離體授粉：指將未授粉的胚珠或子房從母體上分離下來(lái)，進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)，并以一定的方式授以無(wú)菌花粉，使之在試管 內(nèi)實(shí)現(xiàn)受精的技術(shù)。三、問(wèn)答題：1、胚培

29、養(yǎng)的作用有哪些？在遠(yuǎn)緣雜交育種中的應(yīng)用:克服雜種胚不能正常發(fā)育克服珠心胚的干擾,提高育種效率縮短育種周期測(cè)定休眠種子的萌發(fā)率5）理論研究中的應(yīng)用3、胚胎培養(yǎng)的操作步驟。取子房常規(guī)表面消毒解剖鏡下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。固體培養(yǎng)4、幼胚的發(fā)育方式：1）胚性發(fā)育：繼續(xù)進(jìn)行正常的胚胎發(fā)育2）早熟發(fā)育：迅速萌發(fā)成幼苗3）產(chǎn)生愈傷組織：再分化形成多個(gè)胚狀體或芽原基。5、胚胎培養(yǎng)的意義、克服遠(yuǎn)緣雜種的不育性、使胚胎發(fā)育不完全的植株獲得后代、縮短育種年限，提高育種效率6、胚乳培養(yǎng)過(guò)程胚乳外植體制備:種子消毒-取出胚乳培養(yǎng):White或MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基-加入2, 4-D或NAA0.52.0mg/L, B

30、A 0.11.0mg / L 25-27C-暗或弱光發(fā)育:約6lOd胚乳開(kāi)始膨大，再誘導(dǎo)形成愈傷組織-轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，分化培養(yǎng)基可加入0.53.0mg/L 的BA及少量的NAA。待愈傷組織長(zhǎng)出芽后，切下不定芽，插入生根培養(yǎng)基中，光下培養(yǎng)1015d，切口處可長(zhǎng)出 白色的不定根。8、胚珠培養(yǎng)的基本過(guò)程1）、首先從花中取出子房進(jìn)行表面消毒，2）、然后在無(wú)菌的條件下進(jìn)行解剖，取出胚珠，放在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，將胚珠培養(yǎng)成植株的關(guān)鍵是選擇胚的發(fā)育時(shí)期，實(shí)驗(yàn)證明發(fā)育到球形胚期的胚珠較易培養(yǎng)成功，另外為了培養(yǎng)成功，可 取用帶胎座甚至帶部分子房的胚珠進(jìn)行培養(yǎng)。9、子房培養(yǎng)的培養(yǎng)過(guò)程1、制備外植體：在開(kāi)花前

31、后適宜時(shí)期取子房或幼花，消毒2、子房培養(yǎng)：固體或液體培養(yǎng)均可10、子房的發(fā)育的發(fā)育途徑?？?性細(xì)胞（卵細(xì)胞、助細(xì)胞、極核、反足細(xì)胞）-胚狀體或愈傷組織-單倍體植株；口 體細(xì)胞（珠被、子房壁）-胚狀體或愈傷組織-二倍體植株；11、胚珠的發(fā)育途徑。1）、受精胚珠：一是形成種子；二是形成愈傷組織2）、未受精胚珠：形成單倍體植株。第5章 花藥和花粉培養(yǎng)復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、花藥和花粉培養(yǎng)的共同特點(diǎn)是利用花粉0孢子）染色體數(shù)目的單倍性，培育出單倍體植株。2、花藥和花粉培養(yǎng)時(shí)，花粉發(fā)育的最適宜時(shí)期是單核中、晚期（單核靠邊期）。3、MS和B培養(yǎng)基適合雙子葉植物花藥培養(yǎng)；q培養(yǎng)基適合豆科和十字花科花藥

32、培養(yǎng)；*培養(yǎng)基適合禾谷類作物的花藥 培養(yǎng)。4、花藥培養(yǎng)前的預(yù)處理:低溫冷藏是最常用的方法。5、壓片染色法是檢測(cè)花粉發(fā)育時(shí)期的簡(jiǎn)便有效方法，常用染色劑為醋酸洋紅。6、花藥培養(yǎng)包括：選擇材料-消毒-接種培養(yǎng)-愈合組織生成-分化出單倍體植株.7、花粉的四大發(fā)育途徑包括：營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育、生殖細(xì)胞發(fā)育、營(yíng)養(yǎng)和生殖細(xì)胞同時(shí)發(fā)育及花粉均等分裂發(fā)育8、花粉培養(yǎng)大致過(guò)程包括：花粉的分離-預(yù)處理-培養(yǎng)過(guò)程9、花藥培養(yǎng)一般選擇花粉的單核期進(jìn)行接種10、花藥培養(yǎng)是器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)屬細(xì)胞培養(yǎng)11、就濃度蔗糖可誘導(dǎo)花粉形成愈傷組織；較低濃度蔗糖可使愈傷組織分化成苗二、名詞解釋：1、花藥培養(yǎng)（anther culture）

33、:是將花粉發(fā)育至一定階段的花藥接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷 組織進(jìn)而分化成植株的技術(shù)。2、花粉培養(yǎng)（pollen culture）:是將花粉從花藥中分離出來(lái)進(jìn)行離體培養(yǎng)的過(guò)程。三、問(wèn)答題：2、比較花粉培養(yǎng)與花藥培養(yǎng)相同點(diǎn)：（1）利用小抱子染色體數(shù)目的單倍性，培育出單倍體植株。（2）成苗途徑相同，即有 胚狀體成苗和 愈傷組織再分化成苗兩條途徑。不同點(diǎn)：（1）花藥培養(yǎng)屬于器官培養(yǎng)；而花粉培養(yǎng)屬于細(xì)胞培養(yǎng)。（2）花粉培養(yǎng)沒(méi)有藥壁組織干擾；可計(jì)數(shù)小抱子產(chǎn)胚率；可觀察雄核發(fā)育的全過(guò)程；單倍體產(chǎn)量高。但技術(shù)更復(fù)雜。3、簡(jiǎn)述花粉分離方法（1） 自然散落法（漂浮培養(yǎng)散落小抱子收集法）將花藥接

34、種在預(yù)處理液或液體培養(yǎng)基上，待花粉自動(dòng)散落后，收集 培養(yǎng)。（2）擠壓法 在燒杯或研缽中擠壓花藥，將花粉擠出后收集培養(yǎng)。（3）機(jī)械游離A磁攪拌法用磁力攪拌器攪拌培養(yǎng)液中的花藥，使花粉游離出來(lái)；B超速旋切法通過(guò)攪拌器中的高速旋轉(zhuǎn)刀具破碎花蕾、穗子、花藥，使小抱子游離出來(lái)4、花藥培養(yǎng)的大致過(guò)程1）預(yù)處理:低溫冷藏是最常用的方法，另有離心、低劑量輻射、化學(xué)試劑處理2）表面消毒：因?yàn)槲撮_(kāi)放的花蕾中的花藥為花被包裹，本身處于無(wú)菌狀態(tài)，可僅用70%酒精棉球?qū)⒒ǖ谋砻娌料醇纯?。?可按對(duì)其他器官消毒處理方法進(jìn)行，先用70%的酒精浸一下后，在飽和漂白粉溶液中浸1020min，或用0.1%升汞液消毒7 lOmin

35、，然后用無(wú)菌水洗35次。將花蕾剪下放入水中，在冰箱45C下保持34d。3）接種：接種時(shí)把花蕾用解剖刀、鑷子小心剝開(kāi)花蕾，取出花藥，注意去掉花絲，然后散落接種到培養(yǎng)基上，一個(gè)10ml的 試管可接種20個(gè)花藥。培養(yǎng)溫度在2328C左右，每天1116h的光照，光照強(qiáng)度20004000Lx。脫分化培養(yǎng)時(shí)，可用 MS + 2,4-D的培養(yǎng)基，或N6+2,4-D的培養(yǎng)基，經(jīng)1030d，可誘導(dǎo)生成愈傷組織，或少數(shù)生成胚狀體。4）培養(yǎng)：一種植物的花藥可以在一種培養(yǎng)基上長(zhǎng)幼苗，而在另一種培養(yǎng)基上則形成愈傷組織。如水稻通常在含有生長(zhǎng)素的培 養(yǎng)基上誘導(dǎo)出愈傷組織，而在不含任何激素的N6培養(yǎng)基上長(zhǎng)出胚狀體。但在辣椒的

36、花藥培養(yǎng)中，只要培養(yǎng)基合適，甚至可 以在同一花藥上一部分花粉形成胚狀體，而另一部分只形成愈傷組織。5）植株的誘導(dǎo)誘導(dǎo)愈傷組織分化芽或根，需將其轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基花粉-愈傷組織-苗花粉-胚狀體-苗第6章 細(xì)胞培養(yǎng)復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、一般平板培養(yǎng)要求細(xì)胞密度每毫升為1X103S 100 x103個(gè)。2、條件培養(yǎng)基是懸浮培養(yǎng)過(guò)一段時(shí)間組織或細(xì)胞的液體培養(yǎng)基。3、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)主要應(yīng)用于植物有用物質(zhì)的生產(chǎn)、誘發(fā)和篩選突變體、原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞器分離、食品生產(chǎn)等。4、由植物葉片分離單細(xì)胞的方法有機(jī)械法和酶解法。5、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法：成批培養(yǎng)；連續(xù)培養(yǎng)6、連續(xù)培養(yǎng)的種類：（1）半連續(xù)培養(yǎng)；

37、（2）連續(xù)培養(yǎng)7、連續(xù)培養(yǎng)的方法：（1）濁度恒定法；（2）化學(xué)恒定法二、名詞：1、看護(hù)培養(yǎng)法（nurse culture）:是指用一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織塊來(lái)看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，并使其生長(zhǎng)和增殖的方法。2、平板培養(yǎng)法（plante culture）:是把單細(xì)胞懸浮液與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合，平鋪一薄層在培養(yǎng)基底上的培養(yǎng) 方法。3、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)（suspension culture）：是指將單個(gè)游離細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)增殖的技術(shù)。4、初始植板密度（inital planting density）：?jiǎn)渭?xì)胞固體平板培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞懸浮液接種到瓊脂培養(yǎng)基上最初細(xì)胞密度。5、臨界密度（critic

38、al density）：?jiǎn)渭?xì)胞培養(yǎng)時(shí)，初始植板密度低于某值培養(yǎng)細(xì)胞就不能進(jìn)行分裂和發(fā)育成細(xì)胞團(tuán)，則該值 就是臨界密度。（課件沒(méi)有）6、植物細(xì)胞培養(yǎng)（plant cell culture）：是指對(duì)植物器官或愈傷組織上分離出的單細(xì)胞（或小細(xì)胞團(tuán)）進(jìn)行離體培養(yǎng)，形 成單細(xì)胞無(wú)性系或再生植株的技術(shù)。7、條件培養(yǎng)基：曾懸浮培養(yǎng)過(guò)一段時(shí)間組織或細(xì)胞的液體培養(yǎng)基。8、植板率：是指巳形成細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞與接種總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)三、問(wèn)答題：1、如何得到單細(xì)胞無(wú)性系？在細(xì)胞培養(yǎng)中，常由分散性較好的愈傷組織或懸浮培養(yǎng)物來(lái)制備單細(xì)胞，也可以用機(jī)械法和酶解法從植物器官直接制備單 細(xì)胞。由分離的單細(xì)胞經(jīng)看護(hù)培養(yǎng)法、微室培養(yǎng)法

39、或平板培養(yǎng)法，即可得到單細(xì)胞無(wú)性系2、單細(xì)胞培養(yǎng)有哪些方法？各有何含義及特點(diǎn)單細(xì)胞培養(yǎng)：看護(hù)培養(yǎng)；微室培養(yǎng)；平板培養(yǎng)（1）看護(hù)培養(yǎng)法：指用一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織塊來(lái)看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，并使其生長(zhǎng)和增殖的方法。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便易行。效果好，易于成功。缺點(diǎn)：不能在顯微鏡下直接觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程。用途：誘導(dǎo)形成單細(xì)胞系。（2）微室培養(yǎng)：即將細(xì)胞培養(yǎng)在很少量的培養(yǎng)基中。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：在培養(yǎng)過(guò)程中，可以連續(xù)進(jìn)行顯微觀察一個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂和形成細(xì)胞團(tuán)的全部過(guò)程缺點(diǎn)：培養(yǎng)時(shí)間較短用途:主要用來(lái)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂、形成細(xì)胞團(tuán)的過(guò)程。（3）平板培養(yǎng)法：把單細(xì)胞懸浮液與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合，平鋪一薄層在培養(yǎng)基底上的

40、培養(yǎng)方法。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：可以定點(diǎn)觀察；分離單細(xì)胞系容易；缺點(diǎn)：培養(yǎng)細(xì)胞氣體交換不暢。用途:分離單細(xì)胞無(wú)性系，研究其生理、生化、遺傳上的差異而設(shè)計(jì)的一種單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞、原生質(zhì) 體及融合產(chǎn)物的培養(yǎng)。3、什么是植板率？小細(xì)胞團(tuán)的計(jì)數(shù)方法有哪幾種？植板率是指巳形成細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞與接種總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)。小細(xì)胞團(tuán)計(jì)數(shù)方法：低倍顯微鏡直接計(jì)算；細(xì)胞團(tuán)顯影法4、什么是細(xì)胞懸浮培養(yǎng)？簡(jiǎn)述成批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)的的特點(diǎn)？細(xì)胞懸浮培養(yǎng)：是使離體的植物細(xì)胞懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行的無(wú)菌培養(yǎng)。（1）成批培養(yǎng)的特點(diǎn)：細(xì)胞生長(zhǎng)在固定體積的培養(yǎng)基上，直至養(yǎng)分耗盡用攪拌的方法使細(xì)胞團(tuán)和細(xì)胞均勻分布細(xì)胞數(shù)目呈現(xiàn)慢一快一慢

41、一停止生長(zhǎng)的變化，但必須更換新鮮培養(yǎng)基才能進(jìn)行下一批培養(yǎng)（2）連續(xù)培養(yǎng)的特點(diǎn)：由于不斷加入新鮮培養(yǎng)基，保證了養(yǎng)分的充分供應(yīng)，不會(huì)出現(xiàn)懸浮培養(yǎng)物發(fā)生營(yíng)養(yǎng)不足的現(xiàn)象可在培養(yǎng)期間使細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中。細(xì)胞增殖速度快適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)5、影響單細(xì)胞培養(yǎng)的因子/ 1、條件培養(yǎng)基：條件培養(yǎng)基可有利于單細(xì)胞的生長(zhǎng)與分裂/ 2、細(xì)胞密度（臨界密度）：臨界密度：?jiǎn)渭?xì)胞培養(yǎng)時(shí)，初始植板密度低于某值培養(yǎng)細(xì)胞就不能進(jìn)行分裂和發(fā)育成細(xì) 胞團(tuán)，則該值就是臨界密度。初始植板密度應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)狀況而改變，培養(yǎng)基越復(fù)雜則植板細(xì)胞的臨界密度越低，反之則相反。一般要求每毫升在 1000個(gè)細(xì)胞以上。/ 3、生長(zhǎng)激素：生長(zhǎng)激

42、素加1種細(xì)胞分裂素和幾種氨基酸（如：丙氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺）。臨界密度只 需25-30細(xì)胞/毫升。/ 4、pH：偏酸。/ 5、CO2:可誘導(dǎo)細(xì)胞分裂。6、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)主要應(yīng)用1）、植物有用物質(zhì)的生產(chǎn)：在植物組織培養(yǎng)研究中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)胞中含有各種特殊的代謝產(chǎn)物。2）、誘發(fā)和篩選突變體：在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一些突變體，常采用不同培養(yǎng)基來(lái)進(jìn)行選擇，也就是把懸浮細(xì)胞培養(yǎng) 于缺少某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或生長(zhǎng)因子，或是添加某種抑制劑的培養(yǎng)基里，使突變細(xì)胞和正常細(xì)胞區(qū)別開(kāi)來(lái)3）、原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞分離：利用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法，對(duì)細(xì)胞原生質(zhì)進(jìn)行分離，在適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，使之生 成完整植株，或?qū)υw的

43、生理特性進(jìn)行觀察、研究。4）、食品生產(chǎn)：通過(guò)對(duì)許多食用植物培養(yǎng)組織的細(xì)胞團(tuán)生產(chǎn)的研究。7、平板培養(yǎng)的基本技術(shù)a （1）單細(xì)胞懸浮液的制備枝（2）懸浮細(xì)胞密度的調(diào)制晏 （3）瓊脂培養(yǎng)基配制:0.7 %瓊脂條件培養(yǎng)基。朝 （4）平板制作枝（5）培養(yǎng)第7章原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞融合復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空： 1、原生質(zhì)體的分離方法有機(jī)械分離法和酶如分離法。2、原生質(zhì)體培養(yǎng)基常用的滲透劑是甘露醇和山梨醇。3、原生質(zhì)體的純化方法有：沉降法、漂浮法和界面法4、原生質(zhì)體活力的測(cè)定：形態(tài)識(shí)別；染色識(shí)別。5、原生質(zhì)體培養(yǎng)方法：液體淺層培養(yǎng)；平板法培養(yǎng)；懸滴法培養(yǎng)；雙層培養(yǎng)法；飼喂層培養(yǎng)6、原生質(zhì)體融合的方法：無(wú)機(jī)鹽

44、誘導(dǎo)融合；高pH高鈣離子法；PEG法；聚乙一醇與高pH高鈣相結(jié)合的誘導(dǎo)融合；電融 合技術(shù)7、雜種細(xì)胞的篩選與鑒定：互補(bǔ)選擇；機(jī)械分離雜種細(xì)胞法；雙熒光標(biāo)記選擇法8、雜種植株的鑒定：形態(tài)學(xué)鑒定；細(xì)胞學(xué)觀察;DNA內(nèi)切圖譜分析；同工酶分析二、名詞解釋：1、原生質(zhì)體融合（protoplast fusion）:也稱體細(xì)胞雜交（somatic hybridization），就是使分離下來(lái)的不同親本的原生 質(zhì)體，在離體條件下通過(guò)誘導(dǎo)發(fā)生的質(zhì)膜融合進(jìn)而細(xì)胞核融合，像性細(xì)胞受精作用那樣互相融合成一體的現(xiàn)象。2、原生質(zhì)體（protoplast）：是指除去了細(xì)胞壁后的裸露的植物細(xì)胞。三、問(wèn)答題:1、簡(jiǎn)述原生質(zhì)體作

45、為遺傳操作和生理生化研究的材料有何特點(diǎn)？沒(méi)有細(xì)胞壁，有利于體細(xì)胞融合、體細(xì)胞雜交、基因轉(zhuǎn)移和單細(xì)胞培養(yǎng)。原生質(zhì)體能比較容易攝取外來(lái)的遺傳物質(zhì)。2、酶法分離原生質(zhì)體時(shí)使用的酶的種類有哪些？纖維素酶類半纖維素酶類果膠酶類崩潰酶3、簡(jiǎn)述一步酶法分離原生質(zhì)體的方法一步分離法：把一定量纖維素酶和果膠酶組成混合酶液，對(duì)材料進(jìn)行一次性處理而分離出原生質(zhì)體。處理溫度25-30C, 處理的時(shí)間根據(jù)材料及酶濃度的不同而不同，可為2-24h。4、如何純化分離的植物原生質(zhì)體并鑒定其活力？原生質(zhì)體的純化沉降法：應(yīng)用原生質(zhì)體的比重大于溶液的性質(zhì)而使原生質(zhì)體沉于底部。漂浮法：應(yīng)用滲透劑含量較高的洗滌液使原生質(zhì)體漂浮于液體表

46、面。梯度離心法：選兩種不同滲透濃度的溶液，其中一種溶液密度大于原生質(zhì)體的密度，另一種溶液小于原生質(zhì)體的密度。原生質(zhì)體活力的測(cè)定形態(tài)識(shí)別：形態(tài)上完整，呈圓形，含有飽滿的細(xì)胞質(zhì)，顏色鮮艷的即為存活的原生質(zhì)體。染色識(shí)別0.1%酚番紅或Evans藍(lán)染色：有活力的不被染色，死亡的被染上色。雙醋酸鹽熒光素(FDA)染色法：在熒光顯微鏡下有熒光的即為有活性的原生質(zhì)體。5、原生質(zhì)體培養(yǎng)的方法有哪些？液體淺層培養(yǎng)平板法培養(yǎng)微懸滴法培養(yǎng)雙層培養(yǎng)法飼養(yǎng)層培養(yǎng)6、原生質(zhì)體融合有哪幾種主要方法？(1)化學(xué)法誘導(dǎo)融合；(2)高PH-高鈣離子法；(3) PEG法；(4) PEG結(jié)合高鈣-高pH誘導(dǎo)法；(3)電融合技術(shù)7、原

47、生質(zhì)體培養(yǎng)的意義8、酶的種類及特點(diǎn)。纖維素酶類(Cellulase)：纖維素酶是從綠色木霉中提取的一種復(fù)合酶制劑，可降解纖維素，得到裸露的原生質(zhì)體。果膠酶類(Pectolyase)：果膠酶是從根霉中提取的，使細(xì)胞間的果膠質(zhì)降解，把細(xì)胞從組織內(nèi)分離出來(lái)。半纖維素酶類(Hemicellulase)：降解半纖維素為單糖或單糖衍生物。崩潰酶：一種粗制酶。蝸牛酶：主要用于分離小抱子(花粉母細(xì)胞和四分體細(xì)胞)的原生質(zhì)體第8章植物離體快繁和人工種子復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、原球莖發(fā)生型是蘭科植物特有的一種快繁方式。2、離體快繁商業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)注意的問(wèn)題是快繁苗的污染、玻璃化、褐化和黃化。3、根據(jù)繁殖體的類型

48、人工種子可分為兩類：一類是體細(xì)胞胚人工種子；另一類是非體細(xì)胞胚人工種子。4、人工種子包裹方法離子交換法；干燥法；冷卻法.二、名詞解釋：1、離體繁殖(in vitipropagation)：微型繁殖(micropropagation)，指利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其在 短期內(nèi)獲得遺傳性一致的大量再生植株的方法。是工廠化育苗的技術(shù)基礎(chǔ)。2、人工種子（artificial seeds）：亦稱體細(xì)胞種子，任何一種經(jīng)人工種皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖體均可 稱之為人工種子。三、問(wèn)答題：1、植物快繁的器官再生主要類型？短枝發(fā)生型；叢生芽發(fā)生型；不定芽發(fā)生型；胚狀體發(fā)生型；原球莖發(fā)生型2、植物快繁的程序。（1）無(wú)菌（或初代）培養(yǎng)的建立（2）繁殖體增殖（3）芽苗生根（4）小植株的移栽馴化3、人工種子的優(yōu)點(diǎn)。（1）使自然條件下不易結(jié)實(shí)或種子昂貴的材料能快速繁殖和保存；（2）繁殖速度快；（3）為基因工程技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)提供橋梁；（4）固定雜種優(yōu)勢(shì)；（5）提高植物抗逆性；（6）取代天然種子，節(jié)約糧食。三、問(wèn)答題：1、植物脫毒的主要方法有哪些？其主要原理是什么？（1）莖尖培養(yǎng)脫毒：病毒在植物體內(nèi)的分布并不均勻