中醫(yī)藥管理局標(biāo)書

1、附件3： 湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目申請(qǐng)書上冊(cè)（任務(wù)務(wù)書） 課題名稱： 二二甲雙胍胍聯(lián)合滋滋腎活血血湯對(duì)22型糖尿尿病大鼠CRRP、TTNF-a的影影響的實(shí)實(shí)驗(yàn)研究究 課題類別： 一般項(xiàng)項(xiàng)目 承擔(dān)單位： 湖湖南中醫(yī)醫(yī)藥大學(xué)學(xué) 課題負(fù)責(zé)人人： 顏國(guó)富富 聯(lián)系手機(jī)： 13660733066636 課題申請(qǐng)時(shí)時(shí)間： 220111.4.18 湖南省中中醫(yī)藥管管理局填寫說明一、請(qǐng)用AA4紙打打印，頁頁面不敷敷可另加加頁。二、所有欄欄目應(yīng)如如實(shí)填寫寫，確無無填寫內(nèi)內(nèi)容請(qǐng)?zhí)钐睢盁o”。三、課題研研究周期期一般設(shè)設(shè)計(jì)為二二年，最最長(zhǎng)不超超過四年年。共同條款簽約各方應(yīng)應(yīng)共同遵遵守以下下條款：一、湖南省省中醫(yī)藥藥管理

2、局局為甲方方，課題題牽頭單單位為乙乙方，牽牽頭單位位所在市市州衛(wèi)生生行政部部門或省省部直單單位為丙丙方。二、任務(wù)執(zhí)執(zhí)行過程程中，乙乙丙方如如需變更更任務(wù)書書內(nèi)容，應(yīng)應(yīng)向甲方方提出書書面說明明，經(jīng)批批準(zhǔn)后實(shí)實(shí)施。在在未接到到正式批批準(zhǔn)前，乙乙丙方須須按原任任務(wù)書履履行，否否則，后后果由乙乙丙雙方方負(fù)責(zé)。三、本任務(wù)務(wù)書為下下達(dá)湖南南省中醫(yī)醫(yī)藥管理理局科技技計(jì)劃項(xiàng)項(xiàng)目使用用，甲丙丙方對(duì)課課題研究究有監(jiān)督督權(quán)、處處置權(quán)。乙乙方因主主、客觀觀原因不不能按任任務(wù)書約約定內(nèi)容容執(zhí)行時(shí)時(shí)，甲方方有權(quán)終終止任務(wù)務(wù)，乙方方應(yīng)償還還已投入入的全部部經(jīng)費(fèi)。四、本任務(wù)務(wù)書由簽簽約方各各持一份份。一、基本情情況研究課題名

3、稱二甲雙胍聯(lián)聯(lián)合滋腎腎活血湯湯對(duì)2型糖尿尿病大鼠鼠CRPP、TNNF-aa的影響響的實(shí)驗(yàn)研究究所屬學(xué)科生物與醫(yī)藥藥研究工作總總經(jīng)費(fèi)3萬研究工作起起止年月月2011.620013.6預(yù)期成果本課題成果果預(yù)期達(dá)達(dá)到國(guó)內(nèi)內(nèi)領(lǐng)先水水平，尤尤其在糖糖尿病專專業(yè)領(lǐng)域域采用中中藥預(yù)防防與治療療糖尿病病血管并并發(fā)癥方方面起到到指導(dǎo)性性作用。課題組主要成員序號(hào)姓名身份證號(hào)職稱學(xué)歷所在單位工簽名1顏國(guó)富43060021996211124400116教授本科湖南中醫(yī)藥藥大學(xué)附附屬岳陽陽醫(yī)院全面負(fù)責(zé)指指導(dǎo)課題題全過程程的設(shè)計(jì)計(jì)實(shí)施2胡仙43018811998000810013882主治醫(yī)師碩士湖南中醫(yī)藥藥大學(xué)附附屬岳

4、陽陽醫(yī)院具體設(shè)計(jì)實(shí)實(shí)施方案案與資料料總結(jié)3李淑君43010031996900123315446教授碩士湖南中醫(yī)藥藥大學(xué)附附屬岳陽陽醫(yī)院具體設(shè)計(jì)實(shí)實(shí)施方案案與資料料總結(jié)4馮佩43062211998411025504669醫(yī)師碩士湖南中醫(yī)藥藥大學(xué)附附屬岳陽陽醫(yī)院實(shí)施設(shè)計(jì)方方案5承擔(dān)單位序號(hào)單位名稱地址及聯(lián)系系電話1湖南中醫(yī)藥藥大學(xué)附附屬岳陽陽醫(yī)院岳陽市楓橋橋湖路2269號(hào)號(hào)23二、研究目目標(biāo)本研究基于于多年臨臨床經(jīng)驗(yàn)驗(yàn)和前期期大量基基礎(chǔ)研究究工作，旨旨在進(jìn)一一步尋求求以中西西醫(yī)結(jié)合合為主，具具有良好好價(jià)效比比，適合合中國(guó)國(guó)國(guó)情的治治療和預(yù)預(yù)防糖尿尿病血管管病變的的有效方方藥。為為了進(jìn)一一步探討討該

5、方的的作用機(jī)機(jī)制，特特設(shè)計(jì)此此實(shí)驗(yàn)以以深入研研究，也也為其將將來的開開發(fā)提供供科學(xué)試試驗(yàn)依據(jù)據(jù)。主要研究?jī)?nèi)內(nèi)容和技技術(shù)方案案一研究?jī)?nèi)內(nèi)容糖尿病血管管病變?cè)缭缙陔A段段病理改改變的內(nèi)內(nèi)在機(jī)制制研究。2.中藥對(duì)對(duì)于糖尿尿病血管管病變的的預(yù)防和和治療作作用效果果評(píng)估。3.中藥對(duì)對(duì)于糖尿尿病血管管病變的的預(yù)防和和治療作作用的機(jī)機(jī)理研究究。4.中藥預(yù)預(yù)防和治治療糖尿尿病多系系統(tǒng)作用用途徑研研究。5.評(píng)價(jià)中中藥和化化學(xué)藥物物對(duì)于糖糖尿病血血管病變變的早期期預(yù)防和和治療的的效果差差異。6. 中西西醫(yī)結(jié)合合對(duì)于糖糖尿病血血管病變變的預(yù)防防和治療療作用效效果評(píng)估估。7.篩選預(yù)預(yù)防和治治療糖尿尿病血管管病變有有確切

6、作作用效果果的中藥藥二、技術(shù)方方案 、擬擬采取的的研究方方法、技技術(shù)路線線和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)方案1. 實(shí)實(shí)驗(yàn)對(duì)象象： 清清潔級(jí)近近交系雌雌性Wiisteer大鼠鼠42只，6月齡，重重約1550g-200 gg，由湖湖南省中中醫(yī)藥大大學(xué)動(dòng)物物實(shí)驗(yàn)中心心提供。2. 實(shí)實(shí)驗(yàn)材料料飼料及及飼養(yǎng)環(huán)環(huán)境： 空空白對(duì)照照組常規(guī)規(guī)飲食，造造模組喂喂給高糖糖高脂高高膽固醇醇飼料。此此飼料由由本院實(shí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物物中心自自配，其其中含110%蔗蔗糖，110%豬豬油，22.5%膽固醇醇。每籠籠10只只，自由由攝食、飲飲水。室室溫188-222C，空空氣流通通，相對(duì)對(duì)濕度555-770%，112小時(shí)時(shí)光照維維持，晝晝夜循環(huán)環(huán)。 藥藥

7、品及試試劑： 滋滋腎活血血湯為湖南省省中醫(yī)藥藥大學(xué)附附屬岳陽陽醫(yī)院中中藥房一一次性購(gòu)購(gòu)買。 二二甲雙胍胍：北京嘉嘉德制藥藥有限公公司生產(chǎn)產(chǎn)。 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)試劑NO試劑盒碧云天生物技術(shù)研究所INS放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所TNF-放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所ET放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所SABC免疫組化試劑盒博士德生物工程有限公司濃縮型DAB顯色試劑盒博士德生物工程有限公司 主主要儀器器：BIOMIIAS圖圖像分析析系統(tǒng)： 湖湖南中醫(yī)醫(yī)藥大學(xué)學(xué)基礎(chǔ)研研究院 日日本尼泰泰克ACCE9119型全全自動(dòng)生生化分析析儀。 法法國(guó)S-5000P半自自動(dòng)生化化分析儀儀。 光光鏡:OOLYMMPUS

8、S BXX50 日本產(chǎn)產(chǎn) 電電鏡:日日本JEEM-110100（HCC）1000KVV高襯度度透射電電子顯微微鏡3. 實(shí)實(shí)驗(yàn)方法法： 造造模方法法：造模模組高糖糖高脂高高膽固醇醇飼料喂喂養(yǎng)2個(gè)個(gè)月后，禁禁食122小時(shí)，斷斷尾取血血，血糖糖值為116.77mmool/ll-255mmool/ll者入選選。造模模成功后后，各組組恢復(fù)常常規(guī)飲食食。分組方法：動(dòng)物購(gòu)購(gòu)回，適適應(yīng)性喂喂養(yǎng)一周周后，隨隨機(jī)分成成空白對(duì)對(duì)照組、模型對(duì)照組、中藥組、二甲雙胍組、中藥+二甲雙胍組（n=6），除空白對(duì)照組外，其他動(dòng)物均用于造模。造模后，選擇符合模型標(biāo)準(zhǔn)的大鼠分別隨機(jī)分組如下：模型對(duì)照組、中藥組、二甲雙胍組、中藥+二

9、甲雙胍組，各組數(shù)量保持相等，每組均為6只。給藥方法：從造模模成功后后的第一一天開始始給藥，療療程為88周。灌灌胃情況況如下： eq oac(,1)中中藥組：每日灌灌胃量相相當(dāng)于臨臨床成人人用藥量量的100倍，即即6mll/kgg，每日日1次，共共8周； eq oac(,2)二二甲雙胍胍組：每每日灌胃胃量相當(dāng)當(dāng)于臨床床成人用用藥量的的10倍倍，即66ml/kg，每每日1次次，共88周； eq oac(,3)中中藥+二二甲雙胍胍組：每每日灌胃胃量相當(dāng)當(dāng)于臨床床成人用用藥量的的10倍倍，即66ml/kg，每每日2次次，共88周； eq oac(,4)模模型對(duì)照照組：每每日灌胃胃量相當(dāng)當(dāng)于臨床床成人用

10、用藥量的的10倍倍，即66ml/kg，每每日1次次，共88周； eq oac(,5)空空白對(duì)照照組：每每日灌相相當(dāng)于臨臨床成人人用藥量量的100倍的生生理鹽水水，即66ml/kg，每每日1次次，共88周；測(cè)試指標(biāo)及及取材 動(dòng)動(dòng)物給藥藥8周后，處處死前112h禁禁食，股股動(dòng)脈取取血約445mml，其其中1.5mll于EDDTA+抑肽酶酶的抗凝凝試管內(nèi)內(nèi)，用做做ET的的檢測(cè)。余余血放置置于試管管內(nèi)，離離心取血血清，備備做NOO、INNS、TTNF-、TTG、BBUN、CCREAA、UAA的檢測(cè)測(cè)。立即即取胰腺腺、肝臟臟、腎臟臟病理切切片：HHE 染染色；股股動(dòng)脈、腹腹主動(dòng)脈脈病理切切片：MMASS

11、SON 染色4.統(tǒng)計(jì)方方法： 所所有數(shù)據(jù)據(jù)均采用用SPSSS統(tǒng)計(jì)計(jì)軟件進(jìn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)分析。計(jì)計(jì)量資料料以均數(shù)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)差（S）表表示。兩兩樣本均均數(shù)比較較采用成成組t檢檢驗(yàn)（OOne- Saamplle TT Teest），多多樣本均均數(shù)的兩兩兩比較較采用單單因素方方差分析析（onne-wway ANOOVA）。以以P00.055作為有有顯著性性差異。5.技術(shù)路路線：（附附圖于后后） 實(shí)實(shí)驗(yàn)開始始前，隨隨機(jī)抽取取6只大鼠鼠作為空空白組對(duì)對(duì)照組，并并立即斷斷頭處死死，取血血標(biāo)本測(cè)測(cè)定生化化指標(biāo)。然然后迅速速剝離取取出雙側(cè)側(cè)髂股動(dòng)動(dòng)脈、腹腹主動(dòng)脈脈、胰腺腺、腎臟臟用生理理鹽水沖沖洗，110%福福爾馬林

12、林原位固固定244h，常常規(guī)制片片，動(dòng)脈脈用MAASSOON染色色，內(nèi)臟臟用HEE染色，做做光鏡、電電鏡檢查查。造模模成功后后，選取取成模大大鼠，隨隨機(jī)分成成模型對(duì)對(duì)照組、中中藥組、二甲甲雙胍組組、中藥藥+二甲甲雙胍組組。除模模型對(duì)照照組外，余余組均給給藥。治治療8周周后，將將全部大大鼠處死死，收集集上述生生化、放放免及病病理切片片等各項(xiàng)項(xiàng)指標(biāo)。各各組為66只算入入統(tǒng)計(jì)，認(rèn)認(rèn)真詳細(xì)細(xì)記錄所所有數(shù)據(jù)據(jù)。技術(shù)路線附附圖如下下：取血生化指標(biāo)：取血生化指標(biāo)：FPG、TG、HDL、TC。取6取6只斷頭處死 作為空白對(duì)照組購(gòu)入清潔級(jí)Wistar大鼠40只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。取肝、胰、腎、股動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈做病

13、理切片，準(zhǔn)備光鏡和電鏡檢查。取肝、胰、腎、股動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈做病理切片，準(zhǔn)備光鏡和電鏡檢查。34只大鼠喂高糖高脂高膽固醇飼料（34只大鼠喂高糖高脂高膽固醇飼料（10%蔗糖，10%豬油，2.5%膽固醇），共8周。8周后取6只大鼠做上述指標(biāo)模型對(duì)照組模型對(duì)照組用藥用藥8周后各組分別處死，測(cè)所有指標(biāo)。中藥組中藥組二甲雙胍組二甲雙胍組中藥中藥+二甲雙胍組組C3統(tǒng)計(jì)指標(biāo)，評(píng)估標(biāo)本，發(fā)表論文，實(shí)驗(yàn)結(jié)束。統(tǒng)計(jì)指標(biāo)，評(píng)估標(biāo)本，發(fā)表論文，實(shí)驗(yàn)結(jié)束。四、實(shí)施計(jì)計(jì)劃和考考核指標(biāo)標(biāo)工作起止年年月研究?jī)?nèi)容考核指標(biāo)經(jīng)費(fèi)預(yù)算（萬萬元）2012年年1月-20112年33月 檢索資料，開開題2012年年4月-20112年66月購(gòu)

14、買大鼠、聯(lián)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室，準(zhǔn)準(zhǔn)備預(yù)試試驗(yàn)2012年年7月-20112年99 月 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，初初評(píng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)2012年年10月月-20012年年12 月 正式實(shí)驗(yàn)2013年年1月-20113年33 月 掃尾工作，形形態(tài)學(xué)觀觀察。2013年年4月-20113年66 月相關(guān)指標(biāo)檢檢測(cè)2013年年7月-20113年99月數(shù)據(jù)收集，匯匯總分析析2013年年10月月-20013年年12月月統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，總總結(jié)課題題，發(fā)表表文章，申申請(qǐng)成果果鑒定。其他說明注：時(shí)間安安排以33個(gè)月為為單位填填寫。五、經(jīng)費(fèi)預(yù)預(yù)算分類類細(xì)目科目細(xì)目規(guī)格數(shù)量單價(jià)經(jīng)費(fèi)預(yù)算（元元）備注實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)費(fèi)試劑藥品、動(dòng)動(dòng)物采購(gòu)購(gòu)、耗材材Wistaar大鼠

15、鼠預(yù)實(shí)驗(yàn)100只+正正式實(shí)驗(yàn)驗(yàn)40只只350.9萬小型專用儀儀器設(shè)備備費(fèi)實(shí)驗(yàn)觀察和和資料收收集儀器器購(gòu)買費(fèi)費(fèi)用0.4萬業(yè)務(wù)費(fèi)資料查新和和收集0.1萬協(xié)作費(fèi)科研協(xié)作費(fèi)費(fèi)、設(shè)備備租賃使使用費(fèi)0.4萬差旅費(fèi)管理費(fèi)參加會(huì)議和和科研協(xié)協(xié)作，管理和協(xié)調(diào)調(diào)0.2萬經(jīng)費(fèi)合計(jì)2萬六、簽約一、甲方：湖南省省中醫(yī)藥藥管理局局同意將本課課題列為為湖南省省中醫(yī)藥藥科研計(jì)計(jì)劃項(xiàng)目目。課題資助金金額： 萬萬元課題編號(hào)： 科技主管： 湖南南省中醫(yī)醫(yī)藥管理理局（蓋蓋章） 年 月 日二、乙方：課題牽牽頭單位位匹配研究經(jīng)經(jīng)費(fèi)： 萬元課題組第一一負(fù)責(zé)人人：財(cái)務(wù)負(fù)責(zé)人人：開戶名、行行及帳號(hào)號(hào)：同意按任務(wù)務(wù)書約定定內(nèi)容執(zhí)執(zhí)行。科技主管：

16、 單位位（蓋章章） 年 月 日其他單位科科技主管管：?jiǎn)挝唬ㄉw章章）其他單位科科技主管管： 單位位（蓋章章）三、丙方：課題牽牽頭單位位所在市市州衛(wèi)生生行政部部門（或或省部直直單位等等）同意按要求求進(jìn)行日日常管理理。 科技主管： 單單位（蓋蓋章） 年年 月月 日日注：請(qǐng)?jiān)谠斣敿?xì)了解解共同條條款之后后簽署。湖南省中醫(yī)醫(yī)藥科研研計(jì)劃項(xiàng)項(xiàng)目申請(qǐng)請(qǐng)書下冊(cè)課題名稱： 二甲甲雙胍聯(lián)聯(lián)合滋腎腎活血湯湯對(duì)2型糖尿尿病大鼠CRRP、TTNF-a的影影響的實(shí)實(shí)驗(yàn)研究究 申請(qǐng)時(shí)間： 20111-44-222 湖南省中醫(yī)醫(yī)藥管理理局一、研究本本課題的的科學(xué)依依據(jù)（包包括本領(lǐng)領(lǐng)域研究究現(xiàn)狀、水水平、發(fā)發(fā)展趨勢(shì)勢(shì)、存在在問題

17、、本本課題特特色、創(chuàng)創(chuàng)新之處處等）隨著人們生生活水平平的提高高和生活活方式的的改變，糖糖尿病患患病率逐逐年增加加。根據(jù)據(jù)國(guó)際糖糖尿病聯(lián)聯(lián)盟(IInteernaatioonall DiiabeetessFedderaatioon IIDF)統(tǒng)計(jì)，目目前全球球有糖尿尿病患者者233億，預(yù)預(yù)計(jì)到220255年全球球?qū)⒂?380億人人罹患糖糖尿病。糖糖尿病可可導(dǎo)致多多種大血血管及微微血管病病變，其其中心血血管疾病病、腦血血管疾病病以及糖糖尿病腎腎病為糖糖尿病患患者的主主要死亡亡原因。近近年來，糖糖尿病與與炎癥的的關(guān)系備備受關(guān)注注，有學(xué)學(xué)者提出出，糖尿尿病是一一種炎癥癥性疾病病，諸多多炎癥因因子與糖糖尿

18、病及及糖尿病病并發(fā)癥癥發(fā)生與與發(fā)展密密切相關(guān)關(guān)。糖尿尿病患者者在血糖糖升高的的同時(shí)，體體內(nèi)炎癥癥因子如如C一反應(yīng)應(yīng)蛋白(CRPP)、腫腫瘤壞死死因子-a(TTNFa)、白白細(xì)胞介介素6(IL一一6)等也也明顯升升高。近年研究表表明，胰胰島素抵抵抗、肥肥胖、高高血壓患患者血清清炎癥因因子包括括C一反應(yīng)應(yīng)蛋白(CRPP)、腫瘤瘤壞死因因子一aa(TNNF-a)、白白細(xì)胞介介素一66(ILL一6)、血血漿纖溶溶酶原激激活物抑抑制因子子一l(PAJJ一1)等升升高。炎炎癥反應(yīng)應(yīng)與糖尿尿病的發(fā)發(fā)生發(fā)展展以及血血管并發(fā)發(fā)癥的關(guān)關(guān)系受到到關(guān)注，目目前認(rèn)為為2型糖尿尿病可能能是細(xì)胞胞因子介介導(dǎo)的炎炎癥反應(yīng)應(yīng)，

19、是一一種免疫疫性疾病病，炎癥癥在糖尿尿病的發(fā)發(fā)病機(jī)制制中起媒媒介作用用【1】。因因此，在在控制糖糖尿病患患者血糖糖的同時(shí)時(shí)，應(yīng)該該設(shè)法減減輕患者者體內(nèi)的的慢性炎炎癥反應(yīng)應(yīng)，尤其其需要降降低循環(huán)環(huán)中CRRP等代代表機(jī)體體炎癥反反應(yīng)的指指標(biāo)，以以改變糖糖尿病及及其慢性性血管并并發(fā)癥的的進(jìn)程，延延緩動(dòng)脈脈粥樣硬硬化的發(fā)發(fā)生與發(fā)發(fā)展。CRP是由由肝臟產(chǎn)產(chǎn)生的一一種急性性期反應(yīng)應(yīng)蛋白。在在正常人人體含量量甚微，急性炎炎癥階段段可迅速速升高，是臨床床上最有有效的炎炎癥標(biāo)志志物。近年來來多項(xiàng)研研究結(jié)果果提示，體內(nèi)CRRP水平平升高可可能參與與了IRR和胰島島細(xì)胞的的損害。CRPP主要受受血循環(huán)環(huán)IL-6、T

20、TNF-調(diào)節(jié)節(jié)，尤其ILL-6是是促進(jìn)肝肝臟合成成CRPP的主要要炎癥因因子,反過來來CRPP也可以以刺激單單核細(xì)胞胞釋放IIL-66、IL-1、TTNF-介導(dǎo)導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)細(xì)胞產(chǎn)生生單核細(xì)細(xì)胞趨化化蛋白-1和內(nèi)內(nèi)皮細(xì)胞胞黏附分分子等,發(fā)揮致致炎作用用。TNF-是一種種主要由由單核EE巨噬細(xì)細(xì)胞產(chǎn)生生的具有有廣泛生生物活性性的細(xì)胞胞因子，可誘導(dǎo)導(dǎo)IL-6、IL-1、CCRP的的合成。TTNF-通過過多種途途徑導(dǎo)致致糖尿病病的發(fā)生生：（11）直接接作用于于胰島細(xì)胞，生成環(huán)環(huán)磷酸鳥鳥苷，損傷細(xì)細(xì)胞DNNA；（22）與其其他細(xì)胞胞因子協(xié)協(xié)同作用用，誘導(dǎo)NOO的形成成,并抑制制葡萄糖糖誘導(dǎo)的的胰島素素分泌；

21、（3）抑制胰島素受體和胰島素受體底物1（IRS-1）的酪氨酸殘基磷酸化,影響胰島素信號(hào)傳導(dǎo)；（4）抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)因子4（GLUT4）基因轉(zhuǎn)錄,并使GLUT4mRNA降解加速；（5）激活I(lǐng)KK進(jìn)而促進(jìn)TNF-轉(zhuǎn)錄，形成低度炎癥的正反饋環(huán)，加重IR；（6）抑制其他脂肪細(xì)胞因子如脂聯(lián)素的合成及增加游離脂肪酸的釋放等。近年來炎癥癥學(xué)說備備受關(guān)注注，認(rèn)為為糖尿病病是一種種自然免免疫和低低度炎癥癥性疾病病，炎癥癥在2型糖尿尿病的發(fā)發(fā)病機(jī)制制中起媒媒介作用用。炎癥癥反應(yīng)程程度的高高低和22型糖尿尿病中糖糖、脂代代謝紊亂亂以及后后期各種種并發(fā)癥癥的出現(xiàn)現(xiàn)關(guān)系密密切。炎炎癥學(xué)說說的提出出為糖尿尿病的發(fā)發(fā)病機(jī)制制

22、、探討討防治的的新方法法和開發(fā)發(fā)新藥物物提供了了一個(gè)新新的研究究方向。英國(guó)前瞻性糖尿病研究證實(shí)，二甲雙胍是唯一能減少糖尿病大血管并發(fā)癥的口服降糖藥。二甲雙胍抗炎機(jī)制可能與下列作用有關(guān)：抑制炎癥因子的形成：降低血漿纖溶酶原激活物抑制物一1、CRP的水平，減少氧化應(yīng)激，改善內(nèi)皮功能，從而延緩動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍能夠抑制核因子活性，進(jìn)而抑制炎癥因子的形成。DM屬中醫(yī)醫(yī)學(xué)“消消渴”范范疇。其其發(fā)生多多由以下下病因：先天天稟賦不不足。靈靈樞五五變說說“五臟臟皆柔弱弱者，善善病消癉癉。”長(zhǎng)期過過食肥甘甘、醇酒酒厚味等等損傷脾脾胃，釀釀生內(nèi)熱熱，消食食耗液而而發(fā)。素素問奇奇病論說說：“此此

23、肥美之之所發(fā)也也，此人人必?cái)?shù)食食甘美而而多肥，甘甘者令人人中滿，故故其氣上上溢，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)為消渴渴?！遍L(zhǎng)期過過度精神神刺激，肝肝氣郁結(jié)結(jié)，郁而而化火；或勞心心竭慮，營(yíng)營(yíng)謀強(qiáng)思思等，以以致郁久久化火，火火熱內(nèi)燔燔，消灼灼陰津而而發(fā)。正正如臨臨證指南南醫(yī)案三消說說：“心心境愁郁郁，內(nèi)火火白燃，乃乃消癥大大病?！狈渴虏徊还?jié)，勞勞欲過度度，腎精精虧虛，虛虛火內(nèi)生生，則“火火因水竭竭而益烈烈，水因因火烈而而益干”，終終致腎虛虛肺燥胃胃熱，發(fā)發(fā)為消渴渴。歷代代認(rèn)為，陰陰津虧損損，燥熱熱偏勝，即即陰虛為為本，燥燥熱為標(biāo)標(biāo)是消渴渴的主要要病機(jī)。但但由于燥燥熱傷津津耗氣，因因此，消消渴的病病機(jī)不唯唯是陰虛虛，病程程日

24、久，也也可導(dǎo)致致氣陰兩兩虛【22】。正正如明代代證治治要訣三消日日：“三三消得之之，氣之之實(shí)，血血之虛也也，久久久不治，氣氣盡虛”。在在近年的的消渴證證型研究究中也發(fā)發(fā)現(xiàn)，氣氣陰兩虛虛是臨床床最常見見的證型型【3-6】。多多數(shù)文獻(xiàn)獻(xiàn)認(rèn)為，DM在病程初期、年齡較輕時(shí)，以陰虛為主；隨著年齡增大，病程延長(zhǎng)，病情發(fā)展，其病機(jī)則由陰虛轉(zhuǎn)向氣陰兩虛以致陰陽兩虛，氣陰兩虛是病機(jī)轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵。2002舨中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)將DM分為陰虛熱盛、濕熱困脾、氣陰兩虛、陰陽兩虛血瘀水停和血瘀脈絡(luò)五型【7】。中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)糖尿病專業(yè)委員會(huì)制定的中西醫(yī)結(jié)合糖尿病診療標(biāo)準(zhǔn)(草案)中將DM分為陰虛熱盛、氣陰兩虛

25、及陰陽兩虛三型【8】?？梢?，氣陰兩虛是消渴的主要病機(jī)。近年DM的瘀血病機(jī)倍受關(guān)注，并日益受到重視，認(rèn)為瘀血為貫穿DM病程始終的重要病機(jī)。DM及其并發(fā)癥患者，多表現(xiàn)為舌質(zhì)紫暗，或有瘀斑，或舌下靜脈曲張，或心胸憋悶、刺痛，或肢體疼痛，或眼底出血及血管瘤，屬于中醫(yī)瘀血證。近來，許多學(xué)者從血液流變學(xué)、甲皺微循環(huán)、血小板粘附聚集及纖溶系統(tǒng)等方面證明DM患者確有瘀血存在，并認(rèn)為瘀血是形成DM血管和神經(jīng)并發(fā)癥的重要因素【9】。綜合起來，氣陰兩虛，燥熱津傷，瘀血阻滯為消渴的主要病機(jī)，因此益氣養(yǎng)陰、清熱生滓、活血化瘀，為治療消渴的基本治法。滋腎活血湯湯以六味味地黃湯湯為基礎(chǔ)礎(chǔ)方，肝肝、脾、腎腎三陰并并補(bǔ)，重重補(bǔ)

26、腎陰陰，其中中熟地滋滋腎陰、益益精髓，山山藥滋脾脾補(bǔ)腎，山山茱萸滋滋養(yǎng)肝腎腎，工程程三陰并并補(bǔ)之功功；茯苓苓、澤瀉瀉健脾利利水消腫腫；丹皮皮活血化化瘀清虛虛熱；黃黃芪、丹丹參益氣氣活血。本研究從低低度炎癥癥的病因因角度探探討中西西結(jié)合防防治T22DM及及血管病病變的作作用機(jī)理理，屬于于一種全全新的探探索和嘗嘗試。參考文獻(xiàn)：1.阮丹杰杰，王偉偉炎性性因子與與胰島素素抵抗的的研究進(jìn)進(jìn)展JJ醫(yī)醫(yī)學(xué)綜述述，20009，15(4)：508851 l。2.張發(fā)榮榮主編中西醫(yī)醫(yī)結(jié)合糖糖尿病治治療學(xué)【M】北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，1998年(第一版)：3.陳澤奇奇，劉英英哲，陳陳大舜，等等14490例例2型糖尿

27、尿病臨床床辨證分分型調(diào)查查分析ll耳湖南南中醫(yī)學(xué)學(xué)院學(xué)報(bào)報(bào)，20004，24(5)：33364.張萍，諶諶劍飛糖尿病病中醫(yī)證證型的分分布及動(dòng)動(dòng)態(tài)資料料對(duì)比分分析JJ遼遼寧中醫(yī)醫(yī)學(xué)院學(xué)學(xué)報(bào)，119999， 1(4)： 221721885.于青云云，張德德憲，楊楊浚憲，等等糖尿尿病證群群調(diào)查及及證型研研究JJ】山山東中醫(yī)醫(yī)藥大學(xué)學(xué)學(xué)報(bào)，2001，25(3)：1851886.劉曉華華，于春春光不不同中醫(yī)醫(yī)證型辨辨治糖尿尿病研究究述評(píng)【J】中醫(yī)藥信息，2003，20(4)：19207.鄭筱萸萸主編中藥新新藥臨床床研究指指導(dǎo)原則則(試行)【M】北北京：中中國(guó)醫(yī)藥藥科技出出版社，2002年(第一版)：11

28、08.中國(guó)中中西醫(yī)結(jié)結(jié)合學(xué)會(huì)會(huì)糖尿病病專業(yè)委委員會(huì)中西醫(yī)醫(yī)結(jié)合糖糖尿病診診療標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)(草案)J】中國(guó)中中西醫(yī)結(jié)結(jié)合雜志志，20005，25(1)：94959.戴萬亨亨主編中西醫(yī)醫(yī)臨床內(nèi)內(nèi)科學(xué)【M】北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2003年(第一版)：656二、研究?jī)?nèi)內(nèi)容（包包括研究究的具體體方案、內(nèi)內(nèi)容、方方法等）研究?jī)?nèi)容1.糖尿病血管病變?cè)缙陔A段病理改變的內(nèi)在機(jī)制研究。2.中藥對(duì)于糖尿病血管病變的預(yù)防和治療作用效果評(píng)估。中藥對(duì)于糖尿病血管病變的預(yù)防和治療作用的機(jī)理研究。4.中藥預(yù)防和治療糖尿病多系統(tǒng)作用途徑研究。5.評(píng)價(jià)中藥和化學(xué)藥物對(duì)于糖尿病血管病變的早期預(yù)防和治療的效果差異。6. 中西醫(yī)結(jié)合對(duì)于

29、糖尿病血管病變的預(yù)防和治療作用效果評(píng)估。7.篩選預(yù)防和治療糖尿病血管病變有確切作用效果的中藥二、技術(shù)方案、擬采取的研究方法、技術(shù)路線和實(shí)驗(yàn)方案1. 實(shí)驗(yàn)對(duì)象： 清潔級(jí)近交系雌性Wister大鼠42只，6月齡，重約150g-200 g，由湖南省中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。2. 實(shí)驗(yàn)材料飼料及飼養(yǎng)環(huán)境： 空白對(duì)照組常規(guī)飲食，造模組喂給高糖高脂高膽固醇飼料。此飼料由本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心自配，其中含10%蔗糖，10%豬油，2.5%膽固醇。每籠10只，自由攝食、飲水。室溫18-22C，空氣流通，相對(duì)濕度55-70%，12小時(shí)光照維持，晝夜循環(huán)。 藥品及試劑： 滋腎活血湯為湖南省中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽醫(yī)院中藥房一

30、次性購(gòu)買。 二甲雙胍：北京嘉德制藥有限公司生產(chǎn)。 實(shí)驗(yàn)試劑NO試劑盒碧云天生物技術(shù)研究所INS放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所TNF-放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所ET放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所SABC免疫組化試劑盒博士德生物工程有限公司濃縮型DAB顯色試劑盒博士德生物工程有限公司 主要儀器：BIOMIAS圖像分析系統(tǒng)： 湖南中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)研究院 日本尼泰克ACE919型全自動(dòng)生化分析儀。 法國(guó)S-500P半自動(dòng)生化分析儀。 光鏡:OLYMPUS BX50 日本產(chǎn) 電鏡:日本JEM-1010（HC）100KV高襯度透射電子顯微鏡3. 實(shí)驗(yàn)方法： 造模方法：造模組高糖高脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)

31、2個(gè)月后，禁食12小時(shí)，斷尾取血，血糖值為16.7mmol/l-25mmol/l者入選。造模成功后，各組恢復(fù)常規(guī)飲食。分組方法：動(dòng)物購(gòu)回，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分成空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、中藥組、二甲雙胍組、中藥+二甲雙胍組（n=6），除空白對(duì)照組外，其他動(dòng)物均用于造模。造模后，選擇符合模型標(biāo)準(zhǔn)的大鼠分別隨機(jī)分組如下：模型對(duì)照組、中藥組、二甲雙胍組、中藥+二甲雙胍組，各組數(shù)量保持相等，每組均為6只。給藥方法：從造模成功后的第一天開始給藥，療程為8周。灌胃情況如下： eq oac(,1)中藥組：每日灌胃量相當(dāng)于臨床成人用藥量的10倍，即6ml/kg，每日1次，共8周； eq oac(,2)二甲雙

32、胍組：每日灌胃量相當(dāng)于臨床成人用藥量的10倍，即6ml/kg，每日1次，共8周； eq oac(,3)中藥+二甲雙胍組：每日灌胃量相當(dāng)于臨床成人用藥量的10倍，即6ml/kg，每日2次，共8周； eq oac(,4)模型對(duì)照組：每日灌胃量相當(dāng)于臨床成人用藥量的10倍，即6ml/kg，每日1次，共8周； eq oac(,5)空白對(duì)照組：每日灌相當(dāng)于臨床成人用藥量的10倍的生理鹽水，即6ml/kg，每日1次，共8周；測(cè)試指標(biāo)及取材 動(dòng)物給藥8周后，處死前12h禁食，股動(dòng)脈取血約45ml，其中1.5ml于EDTA+抑肽酶的抗凝試管內(nèi)，用做ET的檢測(cè)。余血放置于試管內(nèi)，離心取血清，備做NO、INS、T

33、NF-、TG、BUN、CREA、UA的檢測(cè)。立即取胰腺、肝臟、腎臟病理切片：HE 染色；股動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈病理切片：MASSON 染色4.統(tǒng)計(jì)方法： 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（S）表示。兩樣本均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)（One- Sample T Test），多樣本均數(shù)的兩兩比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）。以P0.05作為有顯著性差異。5.技術(shù)路線：（附圖于后） 實(shí)驗(yàn)開始前，隨機(jī)抽取6只大鼠作為空白組對(duì)照組，并立即斷頭處死，取血標(biāo)本測(cè)定生化指標(biāo)。然后迅速剝離取出雙側(cè)髂股動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈、胰腺、腎臟用生理鹽水沖洗，10%福爾馬林原位固定24h

34、，常規(guī)制片，動(dòng)脈用MASSON染色，內(nèi)臟用HE染色，做光鏡、電鏡檢查。造模成功后，選取成模大鼠，隨機(jī)分成模型對(duì)照組、中藥組、二甲雙胍組、中藥+二甲雙胍組。除模型對(duì)照組外，余組均給藥。治療8周后，將全部大鼠處死，收集上述生化、放免及病理切片等各項(xiàng)指標(biāo)。各組為6只算入統(tǒng)計(jì)，認(rèn)真詳細(xì)記錄所有數(shù)據(jù)。技術(shù)路線附圖如下： 取血生化指標(biāo)：FPG、取血生化指標(biāo)：FPG、TG、HDL、TC。取6只斷頭處死 作為空白對(duì)照組購(gòu)入清潔級(jí)Wistar大鼠40只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。取肝、胰、腎、股動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈做病理切片，準(zhǔn)備光鏡和電鏡檢查。取肝、胰、腎、股動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈做病理切片，準(zhǔn)備光鏡和電鏡檢查。8周后取8周后取6只

35、大鼠做上述指標(biāo)34只大鼠喂高糖高脂高膽固醇飼料（10%蔗糖，10%豬油，2.5%膽固醇），共8周。模型對(duì)照組模型對(duì)照組用藥8周后各組分別處死，測(cè)所有指標(biāo)。用藥8周后各組分別處死，測(cè)所有指標(biāo)。中藥組二甲雙胍組二甲雙胍組中藥中藥+二甲雙胍組組C3統(tǒng)計(jì)指標(biāo)，評(píng)估標(biāo)本，發(fā)表論文，實(shí)驗(yàn)結(jié)束。統(tǒng)計(jì)指標(biāo)，評(píng)估標(biāo)本，發(fā)表論文，實(shí)驗(yàn)結(jié)束。三、研究目目的與意意義（包括研究究目標(biāo)、預(yù)預(yù)期成果果及水平平、社會(huì)會(huì)經(jīng)濟(jì)效效益及推推廣前景景）本研究基于于多年臨臨床經(jīng)驗(yàn)驗(yàn)和前期期大量基基礎(chǔ)研究究工作，旨旨在進(jìn)一一步尋求求以中醫(yī)醫(yī)藥為主主，具有有良好價(jià)價(jià)效比，適適合中國(guó)國(guó)國(guó)情的的治療和和預(yù)防糖糖尿病血血管病變變的有效效方藥。為為了進(jìn)一一步探討討該方的的作用機(jī)機(jī)制，特特設(shè)計(jì)此此實(shí)驗(yàn)以以深入研研究，也也為其將將來的開開發(fā)提供供科學(xué)試試驗(yàn)依據(jù)據(jù)。成果預(yù)期水水平：本課題成果果預(yù)期達(dá)達(dá)到國(guó)內(nèi)內(nèi)領(lǐng)先水水平，尤尤其在糖糖