兩種不同提取方法對赤芍中丹皮酚含量

1、兩種不同提取方法對赤芍中丹皮酚含量【摘要】目的建立以高效液相色譜法測定赤芍中丹皮酚含量的方法。方法采用超聲和回流兩種方法提取赤芍藥材中的丹皮酚,采用高效液相色譜法測定其含量。色譜柱為agilentzrbaxsb-18(stablebndanalytial4.6250,5),流動相為甲醇-水(4555),流速為1l/in,柱溫25,檢測波長274n。結(jié)果線性回歸方程為：y=1.01105x-9.84102,r=0.9999(n=5),在0.1040.52g范圍內(nèi)丹皮酚的峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。結(jié)論本法操作簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可用于赤芍藥材中丹皮酚含量的測定,同時可作為赤芍藥材在炮制前后

2、的質(zhì)量控制方法之一。【關(guān)鍵詞】赤芍;丹皮酚;高效液相色譜法;含量測定effetftextratingethdsnntentfpaenlinpaenialatiflrapall.byhplpengxia-xia,zhangzhen-ei,hidng,etal(gansullegeft,lanzhu730000,hina)abstrat：bjetivetestablishahplethdfrdeteriningthententfpaenlinpaenialatiflrapall.ethdsultrasundandrefluxethdsereusedtextratpaenlinpaenialatif

3、lrapall.,andthenthententfpaenlasdeterinedbyhpl.itasperfrednagilentlunzrbaxsb-18(stablebndanalytial4.6250,5),bilephaseasethanl-ater(4555),flrateas1l/in,lunteperatureas25,anddetetinavelengthas274n.resultstheregressinequatinasy=1.01105x-9.84102,r=0.9999(n=5).thestandardurveaslinearithintherangef0.1040.

4、52gfrpaenl.nlusintheethdissipleandaurateithgdreprduibility.itissuitablefrdeteriningthententfpaenlinpaenialatiflrapall.andntrlthequalityntrlfpaenialatiflrapall.inpress.keyrds：paenialatiflrapall.;paenl;hpl;ntentdeterinatin赤芍為毛茛科芍藥屬植物芍藥(paenialatiflrapall.)或川赤芍(paeniaveithiilynh)的枯燥根,其有效成分中含有丹皮酚1。丹皮酚易溶

5、于乙醇和甲醇,可溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳,稍溶于水,在熱水中溶解,不溶于冷水,能隨水蒸氣揮發(fā),呈白色針狀結(jié)晶,具有熔點低、易揮發(fā)及水溶性差的特性2。研究說明,丹皮酚具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解熱、解痙、抗炎等作用,并具有抗心律失常、抗動脈粥樣硬化、改善微循環(huán)、保護缺血組織、抗菌和抑制皮膚色素合成等作用。近年來還發(fā)現(xiàn)丹皮酚具有抗腫瘤作用,同時能進(jìn)步機體免疫力且無明顯不良反響。丹皮酚的提取方法主要有醇提法、水蒸氣蒸餾法、2超臨界流體萃取法等3。本試驗根據(jù)2022年版?中華人民共和國藥典?牡丹皮和徐長卿中丹皮酚的測定方法,采用超聲提取,根據(jù)有關(guān)報道采用乙醇回流提取4-5,以高效液相色譜法(hpl)測

6、定其含量,并比照兩種不同方法提取對其含量的影響,通過建立赤芍中丹皮酚的含量測定方法,多角度控制赤芍藥材的質(zhì)量。1儀器與試藥aters600高效液相色譜儀(aters600泵,aters2487雙波長檢測器,aterseper色譜工作站);超聲清洗儀(200,50hz,天津奧特賽恩斯儀器as7240b);混合纖維素酯微孔濾膜(孔徑：0.45);聚偏氟乙烯微孔濾膜(f型,孔徑：0.45);電子分析天平(sartriusbs224s);超級恒溫水浴(dkb-50常州榮冠實驗分析儀器廠)。丹皮酚對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號110708-202205,供含量測定使用);藥材赤芍(購于甘肅中醫(yī)

7、學(xué)院附屬醫(yī)院)經(jīng)中藥鑒定教研室主任楊扶德教授鑒定為毛茛科植物芍藥paenialatiflrapall.的枯燥根。甲醇(色譜純,山東禹王,批號20220315112),乙醇(分析純,批號20220827093),水為娃哈哈純潔水。2方法與結(jié)果2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性agilentzrbaxsb-18(stablebndanalytial4.6250,5)色譜柱;流動相：甲醇-水(4555);流速：1l/in;柱溫25;檢測波長274n。在此色譜條件下,理論塔板數(shù)大于13000,別離度大于1.5。2.2對照品溶液的制備精細(xì)稱取丹皮酚對照品2.6g置25l量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得

8、每1l對照品溶液含丹皮酚104g。2.3供試品溶液的制備取樣品粗粉(過40目)約1.0g,精細(xì)稱定,置具塞錐形瓶中,精細(xì)參加甲醇50l,密塞,搖勻,稱定重量,超聲處理(功率200,頻率50hz)30in,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻濾過。精細(xì)取續(xù)濾液1l,置10l量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻即得,備用。取樣品粗粉(過40目)約1.0g,精細(xì)稱定,置圓底燒瓶中,參加8倍量75%乙醇,于80回流30in,低溫?fù)]干乙醇,加甲醇溶解,精細(xì)取續(xù)濾液1l,置10l量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻即得,備用。2.4線性關(guān)系考察分別精細(xì)吸勸2.2項下的丹皮酚對照品溶液0.5、1.0、1.5、2

9、.0、2.5l置10l量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻即得,制成一系列濃度的對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精細(xì)汲取20l進(jìn)樣,注入液相色譜儀,記錄色譜,以峰面積為縱坐標(biāo),丹皮酚濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)展回歸計算,得線性回歸方程為：y=1.01105x-9.84102,r=0.9999(n=5),結(jié)果說明,在0.1040.52g范圍內(nèi)丹皮酚的峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。2.5精細(xì)度試驗精細(xì)汲取對照品溶液(104g/l)20l,重復(fù)進(jìn)樣5次,并進(jìn)展測定,測定其rsd=0.75%,說明精細(xì)度良好。2.6穩(wěn)定性試驗按“2.3項下方法制備供試品溶液,精細(xì)汲取供試品溶液20l,分別于0、4、8、16、24h進(jìn)樣,測定其rs

10、d=0.83%(n=5),結(jié)果說明,供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.7重復(fù)性試驗按“2.3項下方法制備供試品溶液5份,精細(xì)汲取供試品溶液20l進(jìn)展測定,丹皮酚平均含量為6.705g/g,rsd=0.91%(n=5),說明供試品溶液重復(fù)性良好。2.8加樣回收率試驗精細(xì)稱取丹皮酚含量的供試品1g,每3份為一組,參加對照品溶液,分別精細(xì)參加5.2g/l對照品溶液0.5、1.0l,按“2.3項下方法制備供試品溶液,并進(jìn)展測定,記錄色譜,計算其rsd=0.81%,說明回收率符合規(guī)定。結(jié)果見表1。表1加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)2.9丹皮酚的含量測定按“2.3項下方法制備供試品溶液,分別進(jìn)樣20l,測

11、定(n=3),取3次測定平均值。結(jié)果見表2,色譜圖見圖1。由表2可知,采用甲醇超聲提獲得到丹皮酚的含量普遍偏高,采用75%乙醇回流得到的含量較低。由于采用回流提取時用到的乙醇溶劑較少,在回流時隨著時間延長,乙醇不斷揮發(fā),故給藥材成分提取帶來損失,有可能使提取量較少。表2不同提取方法的赤芍中丹皮酚含量測定結(jié)果3討論赤芍中主要有效成分為芍藥苷,本試驗選取其含量較低的丹皮酚作為參考指標(biāo),目的是對赤芍中丹皮酚做一定量,以到達(dá)綜合控制赤芍藥材質(zhì)量的目的。本試驗在進(jìn)展乙醇回流提取的過程中,采用75%乙醇,只回流30in,目的在于盡量防止丹皮酚的損失。但由于丹皮酚為揮發(fā)性成分,在加熱回流時難免對其造成損失,故測定結(jié)果顯示,乙醇回流提取后成分的含量普遍低于甲醇超聲提齲在2022年版?中華人民共和國藥典?中,赤芍以所含成分芍藥苷作為質(zhì)量控制的指標(biāo),丹皮酚在藥材中含量較低,在枯燥和加工等炮制過程中,受到溫度的影響導(dǎo)致其含量降低,因此,在炮制的過程中應(yīng)適當(dāng)控制溫度以防止丹皮酚的損失?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)s.北京：化學(xué)工業(yè)出版社,