《中藥分析》2章中藥的一般質(zhì)量控制課件

1、中藥（天然藥物）分析第二章 中藥的一般質(zhì)量控制方法 第一節(jié) 中藥材及制劑的檢查項(xiàng)目 一檢查項(xiàng)目的類型1. 劑型要求類型 2. 污染控制類型 （1）異物污染：可分為鈍性異物和有害異物兩類 （2）微生物污染：系指非規(guī)定滅菌制劑及其原、輔料受到微生物污染程度的檢查法，包括染菌量及控制菌的檢查 （3）化學(xué)污染：來(lái)自土壤、化肥、農(nóng)藥和水源等的污染以及中藥材倉(cāng)貯過(guò)程中，為防止霉變、蟲(chóng)害和鼠害所使用的重金屬熏蒸劑的污染3. 質(zhì)量參數(shù)類型 是指與質(zhì)量直接有關(guān)的專項(xiàng)檢查項(xiàng)目，用以監(jiān)測(cè)偽品的摻入、保證藥物純度及安全性等，屬于特殊雜質(zhì)的檢查 二雜質(zhì)來(lái)源及限量檢查 雜質(zhì)檢查是指控制藥材或制劑中可能引入的雜質(zhì)或與藥品質(zhì)

2、量有關(guān)的項(xiàng)目。目的是保證藥物的安全、有效、均一和純度四個(gè)方面。 雜質(zhì)雖然是無(wú)效甚至是有害的，但藥物中仍然允許有少量的雜質(zhì)存在，這是因?yàn)橐耆羲幬镏械碾s質(zhì)，既不可能也沒(méi)必要。 所以在不影響療效和不發(fā)生毒性的前提下，對(duì)于藥物中可能存在的雜質(zhì)，允許含有一定的量。藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，為雜質(zhì)限量。藥物中雜質(zhì)的檢查一般不要求測(cè)定含量，而只檢查雜質(zhì)的量是否超過(guò)限量。這種雜質(zhì)檢查的方法為雜質(zhì)的限量檢查。 2001年4月我國(guó)實(shí)施的中華人民共和國(guó)外經(jīng)貿(mào)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)- 藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的限量指標(biāo)為： 重金屬總量20.0 mg/kg；鉛（Pb）5.0 mg/kg；鎘（Cd）0.3 mg/

3、kg；汞（Hg）0.2 mg/kg；銅（Cu）20.0 mg/kg；砷（As）2.0 mg/kg； 黃曲霉毒素B1（Aflatoxin）5g/kg（暫定）； 六六六（BHC）0.1 mg/kg；DDT0.1 mg/kg；五氯硝基苯（PCNB）0.1 mg/kg；第二節(jié) 檢查方法 一水分測(cè)定法 （一）烘干法 （二）甲苯法 （三）減壓干燥法（五）費(fèi)休法，收載于中國(guó)藥典（二部）中。 用于微量水測(cè)定，具有快速、靈敏、準(zhǔn)確等特點(diǎn)。 （3）供試品溶液的制備：取供試品適量（含水量約0.2g），粉碎或研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無(wú)水乙醇50ml，混勻，超聲處理20min，放置12h，再超聲處理20

4、min，離心，取上清液，即得。（4）測(cè)定法：無(wú)水乙醇、標(biāo)準(zhǔn)溶液及供試品溶液各5l，注入氣相色譜儀，計(jì)算，即得。2. 注意事項(xiàng) （1）本法適用于含揮發(fā)性成分或貴重藥品。中國(guó)藥典中辛夷中水分即采用此法，規(guī)定水分不得過(guò)18.0。 二灰分測(cè)定及熾灼殘?jiān)鼨z查 （一）灰分測(cè)定法（二）熾灼殘?jiān)鼨z查法 四浸出物測(cè)定法 浸出物包括有效成分浸出物和大類成分浸出物。由于中藥中的某一個(gè)成分不能代表其功能主治，或有效成分的含量太低，都可采用浸出物測(cè)定法，因此，該方法是非常有效的質(zhì)量控制檢查內(nèi)容。（一）水溶性浸出物測(cè)定法（二）醇溶性浸出物測(cè)定法 五pH值測(cè)定法六氯化物檢查法 七鐵鹽檢查法 八黃曲霉毒素測(cè)定 黃曲霉毒素（a

5、flatoxin）是黃曲霉和寄生曲霉的代謝產(chǎn)物。國(guó)內(nèi)外對(duì)黃曲霉毒素的研究已經(jīng)證實(shí)其有較強(qiáng)毒性，并且能在各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體上誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性肝癌，其中以黃曲霉毒素B1的致癌性最強(qiáng)。 黃曲霉毒素是一類結(jié)構(gòu)相似的化合物，其基本結(jié)構(gòu)都有二呋喃和香豆素（氧雜萘鄰?fù)Ｔ谧贤饩€照射下都能發(fā)出熒光，根據(jù)熒光顏色、Rf值及結(jié)構(gòu)等不同，分別命名為B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、GM等。目前，已明確其結(jié)構(gòu)的共有10多種，并認(rèn)為其毒性，致癌性與結(jié)構(gòu)有關(guān)， （一）微柱法 本法簡(jiǎn)便、快速，靈敏度為10g/kg。主要做中成藥中黃曲霉毒素篩選用，不能分辨黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2等。測(cè)得結(jié)果為黃曲霉毒素的總量。1

6、. 原理 將樣品提取液通過(guò)氧化鋁-硅鎂型吸附劑填充的微柱，樣品中的雜質(zhì)被氧化鋁吸附，黃曲霉毒素則被硅鎂型吸附劑吸附。在紫外光燈下觀察熒光環(huán)與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。2. 方法 （5）觀察結(jié)果與結(jié)論：將層析后的微柱置于365nm波長(zhǎng)的紫外燈下，觀察樣品柱的硅鎂型吸附劑層是否有熒光，并與空白柱比較定性，與標(biāo)準(zhǔn)各柱比較藍(lán)色熒光強(qiáng)度即測(cè)得黃曲霉毒素含量。例如：空白柱無(wú)藍(lán)色熒光，1.0ml樣品處理液（含樣品0.5g）產(chǎn)生的熒光與標(biāo)準(zhǔn)柱0.005g/ml產(chǎn)生的熒光相當(dāng)（強(qiáng)度），則樣品中黃曲霉毒素的含量為： 0.005 / 0.51000=10（g/kg） （2）薄層分析：吸取黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液 10l、供試品溶

7、液20l、供試品溶液20l +標(biāo)準(zhǔn)稀釋液10l、供試品溶液20l +標(biāo)準(zhǔn)稀釋液10l（共4點(diǎn)），分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以無(wú)水乙醚為展開(kāi)劑，展開(kāi)12cm時(shí)，取出，晾干，再以氯仿-丙酮（92：8）混合溶液展開(kāi)10cm，取出，晾干。置紫外光燈（365nm）下觀察，確定供試品溶液中黃曲霉毒素B1的位置與含量。 2. 雙向展開(kāi)法 用薄層色譜法單向展開(kāi)后，由于黃曲霉毒素B1含量低，受到雜質(zhì)干擾，無(wú)法觀察毒素B1的熒光時(shí)，需要改用雙向展開(kāi)法進(jìn)行分離。雙向展開(kāi)法由于比較有效的消除了雜質(zhì)干擾，因而能提高檢出靈敏度。 （1）方法 先用無(wú)水乙醚對(duì)薄層做橫向展開(kāi)，將干擾的雜質(zhì)推到樣品點(diǎn)的一側(cè)而黃曲霉毒素B1留在

8、原點(diǎn)處。然后再用氯仿-丙酮（98：2）混合液做縱向展開(kāi)，黃曲霉毒素B1所在位置的雜質(zhì)底色大大減少，因而有利于觀察。 （三）高效液相色譜法 1. 原理 黃曲霉毒素都具有紫外吸收，如黃曲霉毒素B1在苯-乙腈溶劑中的max為346nm，為19800，在紫外線照射下能產(chǎn)生熒光，但熒光較弱，常通過(guò)衍生使熒光增強(qiáng)?？捎弥叭宜嵫苌?、柱后碘衍生和柱后過(guò)溴化溴化吡啶（PBPB）衍生，用熒光監(jiān)測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，最小檢出量為0.2g/kg。 HPLC具有靈敏度高，特異性好，分離能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。 （6）色譜條件：流動(dòng)相為甲醇-0.01mol/L KH2PO4（4：8），流速0.4ml/min，熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)36

9、0nm，發(fā)射波長(zhǎng)425nm。 （7）分析測(cè)定：按以上條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為510l。本法的最低檢出濃度毒素B1為0.2g/kg，B2為1.2g/kg，G1為0.8g/kg，G2為0.8g/kg?；厥章蚀笥?7.0%。 （四）熒光分析法 （五）免疫化學(xué)分析法 九砷鹽檢查法 砷鹽為劇毒物質(zhì)。中藥材由于受除草劑、殺蟲(chóng)劑和化學(xué)肥料及地下水源的影響，容易引入砷元素。砷是原生質(zhì)毒，能與細(xì)胞系統(tǒng)的巰基（-SH）相結(jié)合，從而抑制巰基酶的活性，影響細(xì)胞的正常代謝，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，并引起一系列嚴(yán)重的中毒癥，如血小板減少，誘發(fā)肝腫瘤等。因此控制砷鹽的量是保證中藥安全的一個(gè)很重要的方面。 中國(guó)藥典一部收載的砷鹽檢查法有

10、古蔡氏法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法。 砷的毒性依下列順序而減少： 砷化氫 三氧化二砷（ As2O3 ） 亞砷酸（無(wú)機(jī)） 砷酸 砷的化合物（四個(gè)有機(jī)基團(tuán)帶正電荷的砷） 單質(zhì)砷砷化氫 是一種溶血?jiǎng)?，它阻斷紅血球過(guò)氧化氫酶，導(dǎo)致過(guò)氧化氫的累積和膜的破壞，其毒性至今還無(wú)有效的解毒藥。三氧化二砷（白砷、砒霜），它的毒性效果是急劇性的，潛伏一個(gè)時(shí)期后就衰退，中毒后立即使人休克、死亡。常用2，3-二巰基丙酮可成功急救砷的急性和慢性中毒。砷在自然界普遍存在。在所有的生物體中均可檢出低含量的砷。國(guó)外有規(guī)定食品中砷的限量為 1ppm；我國(guó)原糧衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定含砷量不超過(guò)0.7 ppm。砷的測(cè)定方法1. 容量法：碘量法

11、、溴酸鉀法、硫酸鈰法、重鉻酸鉀法、配位滴定法2. 分光光度法：鉬藍(lán)法、砷鉬黃法、砷-銻-鉬三元絡(luò)合物光度法、砷鉬酸結(jié)晶紫二元絡(luò)合物光度法、砷化氫-Ag-DDC光度法、砷化氫還原單質(zhì)銀分光光度法、N-苯甲酰苯胲法3. 電化學(xué)法：經(jīng)典極譜法、催化極譜法、微分脈沖極譜法、反向溶出伏安法、懸汞電極陰極溶出法、碘離子電極間接電位法、電位滴定法、電導(dǎo)法4. 原子吸收法：砷化氫揮發(fā)-火焰吸收法、氫氧化鋯共沉淀-無(wú)火焰原子吸收法、石墨爐原子化原子吸收法、間子原子吸收法、冷原子熒光間接測(cè)砷法5. 其它方法：中子活化法、微波發(fā)射光譜法、等離子電感偶合發(fā)射光譜法（ICT） 、放射分析法、離子光譜法、氣相色譜法、化學(xué)

12、發(fā)光法 五價(jià)砷在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為砷化氫，但生成砷化氫比三價(jià)砷慢。三價(jià)砷生成砷化氫在2h內(nèi)已反應(yīng)完全，而五價(jià)砷在同時(shí)間內(nèi)僅十分之二起反應(yīng)。為了防止五價(jià)砷存在，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，故必須加入碘化鉀、酸性氯化亞錫還原劑，將五價(jià)砷還原為三價(jià)砷。碘化鉀被氧化生成I2，以氧化亞錫來(lái)還原，使反應(yīng)液中維持有碘化鉀的還原劑存在。AsO432I2HAsO33I2H2OAsO43Sn22HAsO33Sn4H2OI2Sn22 ISn4 溶液中的碘離子，與反應(yīng)中產(chǎn)生的鋅離子能形成配合物，使生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行。4IZn2ZnI42 氯化亞錫與碘化鉀存在，還可抑制銻化氫生成，在實(shí)驗(yàn)條件下，100g銻存在

13、不至于干擾測(cè)定。同時(shí)氯化亞錫的作用可在鋅粒表面形成鋅錫齊（鋅錫的合金）起去極化作用，使鋅粒與鹽酸作用緩和，放出氫氣均勻，使產(chǎn)生的砷化氫氣體一致，有利于砷斑的形成，增加反應(yīng)的靈敏度與準(zhǔn)確度。Sn2ZnSnZn22. 檢查方法 （1）儀器裝置：如圖2-2所示。A為100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶；B為中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞，上連導(dǎo)氣管C（外徑8.0mm，內(nèi)徑6.0mm），全長(zhǎng)約180mm；D為具孔有機(jī)玻璃塞，其上部為圓形平面，中央有一圓孔，孔徑與導(dǎo)氣管C的內(nèi)徑一致，其下部孔徑與導(dǎo)氣管C的外徑相適應(yīng)，將導(dǎo)氣管C的頂端套入旋塞下部孔內(nèi)，并使管壁與旋塞的圓孔使相吻合，粘合固定；E為中央具有圓孔（孔徑6.0mm）的有機(jī)

14、玻璃旋塞蓋，與D緊密吻合。 測(cè)試時(shí)，于導(dǎo)氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度為60mm 80mm）， 再于旋塞D的頂端平面上放一片溴化汞試紙（試紙大小以能覆蓋孔徑而不露出平面外為宜），蓋上旋塞蓋E并旋緊，即得。 （2）標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備：精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10min后，加鋅粒2g，立即將照上法裝妥的導(dǎo)氣管C密塞于A瓶上，并將A瓶置2540水浴中，反應(yīng)45min，取出溴化汞試紙，即得。（3）檢查法：取按各藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試品溶液，置A瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備，自“再加碘化鉀試液5ml”起，依法

15、操作。將生成的砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，不得更深。 （二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法（銀鹽法） 1. 原理 利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥品中的微量亞砷酸鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，用二乙基二硫代氨基甲酸銀溶液吸收，使之還原生成紅色膠態(tài)銀，與同條件下一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所產(chǎn)生的紅色膠態(tài)銀在510nm處測(cè)吸光度，進(jìn)行比較，以判定砷鹽的限量或含量。 其反應(yīng)式如下：（以Ag-DDC代表 ）AsH3 +6Ag(DDC)AsAg3 3Ag(DDC)+3HDDCAsAg3 3Ag(DDC)+ +3HDDCAs(DDC)3 + 6Ag+ 32. 方法 （1）儀器裝置：如圖2-3所示。A為100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形

16、瓶；B為中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞，上連導(dǎo)氣管 C（一端的外徑為8mm，內(nèi)徑為6mm；另一端長(zhǎng)180mm，外徑4mm，內(nèi)徑1.6mm，尖端內(nèi)徑為1mm）。D為平底玻璃管（長(zhǎng)180mm，內(nèi)徑10mm，于5.0 mm處有一刻度）。 測(cè)試時(shí)，于導(dǎo)氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度80mm），并于D管中精密加入二乙基二硫代氨基甲酸銀試液5ml。 （2） 標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液的制備：精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液5ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10min后，加鋅粒2g，立即將導(dǎo)氣管C與A瓶密塞，使生成的砷化氫氣體導(dǎo)入D管中，并將A瓶置2540水浴中反應(yīng)45min

17、，取出D管，添加氯仿至刻度，混勻，即得 （3）檢查法：取照各藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試品溶液，置A瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液的制備方法，自“再加碘化鉀試液5ml”起，依法操作。將所得溶液與標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液同置白色背景下，從D管上方向下觀察、比較，所得溶液的顏色不得比標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液更深。必要時(shí)，可將所得溶液轉(zhuǎn)移至1cm吸收池中，用適宜的分光光度計(jì)或比色計(jì)在510nm波長(zhǎng)處以二乙基二硫代氨基甲酸銀試液作空白，測(cè)定吸收度，與標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液按同法測(cè)得的吸收度比較，即得。 （三） 石墨爐原子吸收光譜法1. 原理 樣品經(jīng)消化后，待測(cè)元素砷被轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)離子狀態(tài)。從光源輻射出待測(cè)元素特征光譜通過(guò)樣品的蒸氣時(shí)，被蒸氣中砷元素

18、的基態(tài)原子所吸收，由發(fā)射光譜被消弱的程度，進(jìn)而求得樣品中砷元素的含量。（3）測(cè)定條件：檢測(cè)波長(zhǎng)193.7nm；石墨爐操作條件為120干燥30s；600灰化30s；2700原子化8s（可根據(jù)儀器型號(hào)，調(diào)至最佳條件）。 （四）氫化物原子吸收光譜法 1. 原理 樣品經(jīng)消化后，加入硼氫化鈉-酸體系還原劑，使砷元素產(chǎn)生氫化物，通過(guò)加熱發(fā)生化學(xué)反應(yīng)形成自由基態(tài)原子，用原子吸收分光光度法檢測(cè)，測(cè)得的吸收度與處于給定的光軸上單位橫截面內(nèi)金屬自由原子數(shù)成正比。（2）測(cè)定條件 檢測(cè)波長(zhǎng)：193.7nm；反應(yīng)時(shí)間20s；進(jìn)樣量：2ml/次，硼氫化鈉溶液加入量（視各種儀器設(shè)計(jì)規(guī)定，選擇樣品制備液和還原劑的加入量）。

19、（五）氫化物的發(fā)生- 原子熒光光譜法 1. 原理 樣品經(jīng)酸消化后，加入硼氫化鈉-酸體系還原劑，使砷元素反應(yīng)生成氫化物，氫化物被引入石英爐內(nèi)，受光源（熒光法用空心陰極燈）的光能激發(fā)，砷原子處于基態(tài)的外層電子躍遷到較高能級(jí)，并在回到較低能級(jí)的過(guò)程中輻射出原子熒光。熒光的強(qiáng)度與原子的濃度（即溶液中被測(cè)元素的濃度）成正比。 （2）測(cè)定條件：砷燈電流60mA，負(fù)高壓360380V，原子化爐溫度800，載氣氬氣，流量600ml/min，屏蔽氣 1000ml/min。 十特殊雜質(zhì)檢查 （一）檢查的目的與意義 由于各種藥品的來(lái)源不同、制備方法不同、劑型不同，即使同一個(gè)品種也可以采取不同的工藝路線，而且藥品在儲(chǔ)

20、存過(guò)程中也可能有不同分解變化的產(chǎn)物。因此藥品的檢查，仍應(yīng)按照該制劑的生產(chǎn)和貯存過(guò)程中，依據(jù)其來(lái)源、生產(chǎn)工藝及藥品的性質(zhì)有可能引入的雜質(zhì)進(jìn)行檢查，即特殊雜質(zhì)的檢驗(yàn)。 該項(xiàng)檢查在中國(guó)藥典中一般列在各藥品的檢查項(xiàng)下。特殊雜質(zhì)的檢查一般是利用藥品和雜質(zhì)的理化性質(zhì)及生理作用的差異，采用物理、化學(xué)、藥理、微生物方法來(lái)進(jìn)行。 （二）特殊雜質(zhì)的檢查 1西洋參中人參的檢查2大黃中土大黃苷的檢查 3烏頭酯型生物堿的檢查 第三節(jié) 重金屬檢查法 一樣品前處理（消化） （一） 植物藥材、中成藥樣品的消化 將植物藥材、中成藥樣品前處理，使待測(cè)元素基本完全轉(zhuǎn)為無(wú)機(jī)離子狀態(tài)。常用方法有四種：即干法消化、濕法消化、水解消化和U

21、V輻射低溫消化。1干法消化 （1）高溫灰化消化法 是破壞植物藥材、中成藥中有機(jī)物的十分有效的手段之一。此法適用于中藥材及中成藥中鉛、銅、鉻、鎘等重金屬元素的測(cè)定。（2）低溫灰化法 2. 濕法消化 （1）原理：濕法消化屬于氧化分解法，是常用的一種消化方式。即用液體或液體的混合物作氧化劑，在一定溫度下分解樣品中的有機(jī)物，使其形成二氧化碳和水，使待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)離子狀態(tài)。濕法與高溫干法消化區(qū)別在于干法消化主要靠增高溫度或增加氧的氧化能力來(lái)進(jìn)行分解樣品的有機(jī)物。濕法消化需要加氧化劑來(lái)分解有機(jī)物，常用的氧化劑有：硝酸、硫酸、高氯酸、過(guò)氧化氫、高錳酸鉀等。 3. 水解法- 酸消解彈法 （1）原理：利用某

22、些有機(jī)物在酸堿作用下水解成簡(jiǎn)單的化合物來(lái)破壞有機(jī)物的方法為水解法。一般采用聚四氟乙烯作襯里的消解彈（內(nèi)套），可以用氫氟酸、氧化性混合酸來(lái)消解難以處理的樣品。 （2）方法：將樣品粉碎過(guò)40目篩（特殊樣品可剪碎），稱取0.2000g，置聚四氟乙烯的坩堝內(nèi)，加入經(jīng)選擇適合的混合酸510ml（視內(nèi)坩堝大小，樣品多少）放置12h，然后將坩堝密閉置于不銹鋼彈內(nèi)，擰緊蓋，整套罐置于120150烘箱內(nèi)加熱12h，取出，冷卻至室溫后再啟開(kāi)。把坩堝內(nèi)的溶解物轉(zhuǎn)移至量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，備用?？晒┕R、錫和鉍等元素的測(cè)定。 4UV輻射低溫消化法 （1）原理：利用紫外光作能源輻射試樣，破壞其有機(jī)物，使原來(lái)與

23、有機(jī)物結(jié)合的無(wú)機(jī)元素從絡(luò)合狀態(tài)中解離出來(lái)，形成可溶于水的無(wú)機(jī)鹽類，為有利于此過(guò)程的進(jìn)行，可將樣品先進(jìn)行酸化并加入少量氧化劑，如硝酸-過(guò)氧化氫，硝酸-高氯酸或高氯酸-過(guò)氧化氫。 （2）方法：用本法處理植物藥類，精密稱取樣品粉末約100mg，置消化管中，加混合酸（硝酸-高氯酸3：1）1ml，加蓋后，置于UV低溫消化反應(yīng)器中，開(kāi)機(jī)消化4h，取出消化管，加適量溶液稀釋后，用于測(cè)定。 （二）礦物藥材的消化 礦物類中藥是中藥的重要組成部分，主要包括天然礦物、礦物加工品和動(dòng)物化石。此類藥物主要含無(wú)機(jī)成分和微量元素以及有害元素和稀土元素、放射性元素等。對(duì)礦物類藥進(jìn)行分析，首先就是分解樣品，將待測(cè)組分轉(zhuǎn)入離子狀

24、態(tài)。礦物藥常用的分解方法可分為溶解和熔融兩大類。1.溶解法 常用的溶劑有水、酸和堿等。遵循從稀到濃、從冷到熱、從少到多的原則，對(duì)樣品有選擇地進(jìn)行消解。2. 熔融法 對(duì)于濕法難以分解的試樣，須采用熔融法，將試樣用固體熔劑覆蓋或混合，然后在高溫下加熱至全熔或半熔，使待測(cè)組分轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苡谒蛩岬幕衔铩?二樣品預(yù)處理前的準(zhǔn)備 1. 水的純化 2. 試劑的純度 3. 容器清洗 三重金屬總量的檢查 重金屬（比重5）是指在實(shí)驗(yàn)條件下（一般為弱酸性，pH33.5）能與H2S（S2-）作用顯色的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、鉻、錫、銻等，在藥品的生產(chǎn)過(guò)程中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，鉛在體內(nèi)又易蓄積中毒，故檢查時(shí)以鉛為代表。

25、 測(cè)定時(shí)，溶液的pH值對(duì)金屬離子與硫化氫呈色影響較大，在pH33.5時(shí)，硫化鉛的沉淀較完全。若酸度較大，重金屬離子與硫化氫呈色變淺，酸度太大時(shí)甚至不呈色。故供試品用強(qiáng)酸溶解或有機(jī)破壞后，在加硫化氫試液前應(yīng)加氨水調(diào)節(jié)pH值。 重金屬檢查法使用的顯色劑有硫化氫試液、硫代乙酰胺試液和硫化鈉試液等。 中國(guó)藥典（1990年版）以前歷版藥典均用硫化氫試液為顯色劑，但試液有惡臭，不夠穩(wěn)定，濃度也難以控制。故在1990年版以后改用硫代乙酰胺試液顯色。 BP（1993）也采用此試液。USP（23）仍使用硫化氫試液，JP（13）使用硫化鈉試液。 本法對(duì)硫化鈉的純度要求很高，否則放置時(shí)易析出硫，影響比色。（一）第一

26、法 用于在實(shí)驗(yàn)條件下供試液澄清、無(wú)色，對(duì)檢查無(wú)干擾或經(jīng)處理后檢查無(wú)干擾的藥物。1. 原理 在弱酸（pH3.5醋酸鹽緩沖液）條件下，硫代乙酰胺發(fā)生水解，產(chǎn)生硫化氫，可與微量重金屬離子生成黃色至棕黑色的硫化物的均勻混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較，顏色不得更深。 pH3.5CH3CSNH2H2O CH3CONH2H2S Pb2H2S PbS2H（二）第二法 適用于在水、乙醇中難溶，或能與重金屬離子形成配位化合物的藥物。1. 原理 將供試品熾灼破壞后，加硝酸加熱處理，使有機(jī)物分解破壞完全后，在按一法進(jìn)行檢查。（ 三）第三法 適用于難溶于稀酸但能溶解于堿性水溶液的藥物。1. 原理 在

27、堿性介質(zhì)中，以硫化鈉為顯色劑，使Pb2生成PbS微粒的混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較，顏色不得更深。 （四）第四法 為微孔濾膜法。適用于重金屬限量低的藥物。1. 原理 使重金屬生成硫化物富集于微孔濾膜上，比較供試品和一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所產(chǎn)生的色斑深淺，確定重金屬是否超過(guò)限量。 四鉛元素的測(cè)定方法 （一）雙硫腙比色法 1. 原理 樣品經(jīng)消化后，在pH 8.59.0時(shí)，鉛離子與雙硫腙生成紅色絡(luò)合物，此絡(luò)合物溶于氯仿，向反應(yīng)液中加入檸檬酸銨、氰化鉀和鹽酸羥胺等，防止鐵、銅、鋅等離子干擾，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。 （二）原子吸收分光光度法 1. 原理 樣品經(jīng)消化后，導(dǎo)入原子吸

28、收分光光度計(jì)中，原子化后，于波長(zhǎng)283.3nm處測(cè)其吸收度。 五、汞元素的測(cè)定方法 （一）測(cè)汞儀法1. 原理 樣品經(jīng)消化使汞轉(zhuǎn)為離子狀態(tài)。汞離子被氯化亞錫定量地還原為金屬汞。利用汞蒸氣對(duì)253.7nm波長(zhǎng)的紫外光具有強(qiáng)烈的吸收作用，從而測(cè)定汞的含量。（二）冷原子吸收分光光度法1. 原理 樣品經(jīng)消化使汞轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)離子狀態(tài)。用氯化亞錫將其還原為金屬汞，通過(guò)氫化物發(fā)生器裝置再轉(zhuǎn)換為蒸氣，載氣將汞蒸氣導(dǎo)入原子吸收分光光度計(jì)，進(jìn)行高靈敏度的測(cè)定。 六其他元素的測(cè)定法 （一） 銅元素的測(cè)定方法 （二） 鎘元素的測(cè)定方法 （三）錫元素的測(cè)定方法 （四）銻元素的測(cè)定方法 （五）鉻元素的測(cè)定方法 第四節(jié) 農(nóng)藥殘

29、留量的測(cè)定 一農(nóng)藥的分類及其危害 （一）農(nóng)藥的分類 1按防治對(duì)象分類 2按作用或效用分類 3按化學(xué)成分分類 （二）農(nóng)藥的危害 大氣、水及土壤中殘留的農(nóng)藥可以通過(guò)直接和間接的方式進(jìn)入人體，對(duì)健康造成危害。對(duì)不同農(nóng)藥作用于人體的方式和特點(diǎn)進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹1有機(jī)氯類農(nóng)藥 有機(jī)氯類農(nóng)藥包括六六六、DDT、五氯硝基苯、艾氏劑等。該類農(nóng)藥化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、脂溶性好、殘效期長(zhǎng)，易在脂肪中蓄積，造成慢性中毒，嚴(yán)重危害人體健康。我國(guó)已在1983年禁止使用有機(jī)氯農(nóng)藥，但由于其半衰期長(zhǎng)，至今在土壤、地下水等環(huán)境中仍有殘存。且由于中藥材的種植期較長(zhǎng)，尤其是多年生的根類藥材，易吸收環(huán)境中有機(jī)氯農(nóng)藥造成污染。 2有機(jī)磷類農(nóng)藥 有

30、機(jī)磷類農(nóng)藥是一些含有C-P鍵或C-O-P、C-S-P、C-N-P鍵的有機(jī)化合物。目前，正式商品有幾十種，可分為磷酸酯類（敵敵畏、敵百蟲(chóng)）、硫代磷酸酯類（對(duì)硫磷、馬拉硫磷）、磷酰胺及硫代磷酰胺（甲胺磷）。有機(jī)磷類農(nóng)藥的毒性主要是通過(guò)抑制生物體內(nèi)的膽堿脂酶的酶活性，導(dǎo)致傳導(dǎo)介質(zhì)代謝紊亂，產(chǎn)生遲發(fā)性神經(jīng)毒性，引起運(yùn)動(dòng)失調(diào)、昏迷、呼吸中樞麻痹、癱瘓甚至死亡。此類農(nóng)藥可以通過(guò)消化道、皮膚、黏膜、呼吸道等途徑進(jìn)入體內(nèi)而引發(fā)中毒。 3氨基甲酸酯類農(nóng)藥 二十世紀(jì)七十年代以來(lái)，由于有機(jī)氯類農(nóng)藥受到禁用或限用，以及耐有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑的昆蟲(chóng)品種日益增多，使氨基甲酸酯類農(nóng)藥被廣泛用于農(nóng)作物的保護(hù)，其用量也逐年增加，此類農(nóng)

31、藥的殘留情況也引起了廣泛關(guān)注。大多數(shù)的氨基甲酸酯類農(nóng)藥在施用后很短的時(shí)間內(nèi)就可被降解成相應(yīng)的代謝產(chǎn)物，這些降解產(chǎn)物通常與母體化合物具有相同或更強(qiáng)的活性。例如，涕滅威亞砜比涕滅威本身具有更有效的抗膽堿酯酶作用，必須考慮此類氨基甲酸酯農(nóng)藥代謝產(chǎn)物的作用。氨基甲酸酯類農(nóng)藥的毒性部位的立體結(jié)構(gòu)與乙酰膽堿相似，進(jìn)入體內(nèi)后與膽堿酯酶活性中心的陰離子部位和酶解部位的絲氨酸羥基結(jié)合，進(jìn)而生成氨基甲?；?，使膽堿酯酶喪失對(duì)乙酰膽堿的水解能力，造成乙酰膽堿蓄積而引起一系列中毒癥狀。 4擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥 擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥是一類由人工合成的模擬天然除蟲(chóng)菊素的廣譜殺蟲(chóng)劑，常用的有丙烯菊酯、氯菊酯、氯戊菊酯、氯氰菊酯、溴

32、氰菊酯、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氯菊酯等。擬除蟲(chóng)菊酯類殺蟲(chóng)劑具有用量低，藥效好，殺蟲(chóng)譜廣，毒性小等優(yōu)點(diǎn)，目前廣泛用于防治農(nóng)業(yè)及衛(wèi)生害蟲(chóng)。擬除蟲(chóng)菊酯在化學(xué)結(jié)構(gòu)上具有共同的特點(diǎn)是其分子結(jié)構(gòu)中含有數(shù)個(gè)不對(duì)稱碳原子，由多個(gè)光學(xué)和立體異構(gòu)體組成。這些異構(gòu)體具有不同的生物活性，殺蟲(chóng)效果也大不相同。因此在擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的生產(chǎn)、質(zhì)量控制、藥效檢驗(yàn)以及施藥后的生物代謝農(nóng)藥殘留調(diào)查中，都要求提供準(zhǔn)確、快速地測(cè)定樣品中的總酯和最具生物活性的異構(gòu)體含量的方法。擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥能影響細(xì)胞色素C和電子傳遞系統(tǒng)，使感覺(jué)神經(jīng)不斷傳入向心性沖動(dòng)，導(dǎo)致肌肉持續(xù)性收縮，引起震顫與抽搐；還可直接作用于神經(jīng)末梢和腎上腺髓質(zhì)，使血糖、

33、乳酸和腎上腺素水平升高。 二農(nóng)藥的污染途徑及污染特點(diǎn) 農(nóng)藥的污染主要有以下三種途徑：1. 環(huán)境對(duì)藥材的農(nóng)藥污染 2. 中藥栽培中的農(nóng)藥污染 3. 采收、加工、貯存、運(yùn)輸過(guò)程中的農(nóng)藥污染 （二）農(nóng)藥的污染特點(diǎn) 1. 中藥材農(nóng)藥殘留污染具有普遍性，幾乎在所有樣品中都有檢出 2. 種植藥材中農(nóng)藥殘留量較高，而野生藥材中僅有痕量檢出 3. 中成藥農(nóng)藥殘留量一般較低 4. 農(nóng)藥在藥用植物中的分布隨產(chǎn)地、藥用部位及農(nóng)藥種類的不同而異 5. 不易發(fā)生急性中毒事6. 有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥檢出率較低，殘留量也低 7. 藥材炮制前后農(nóng)藥殘留量無(wú)顯著差異 三中藥中殘留農(nóng)藥的提取與純化 （一）中藥中殘留農(nóng)藥的提取

34、方法 殘留農(nóng)藥提取溶劑的選擇主要考慮：（1）提取溶劑的純度：農(nóng)藥殘留分析中應(yīng)用的提取溶劑必須保證在色譜條件下檢驗(yàn)不含雜質(zhì)峰，通常采用重蒸法提高溶劑的純度。（2）提取溶劑的極性：采用相似相溶原理來(lái)選擇溶劑。通常情況下，極性小的農(nóng)藥應(yīng)選擇低極性提取溶劑，如六六六、DDT等應(yīng)選用石油醚、正己烷等；極性較強(qiáng)的農(nóng)藥如有機(jī)磷、擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥應(yīng)選擇二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮等極性較大的溶劑，可以采用單一或混合溶劑進(jìn)行殘留農(nóng)藥提取。 1. 索氏提取法 2. 固相萃取技術(shù) 3. 微波輔助提取法 4. 吹掃蒸餾技術(shù) 5. 超臨界流體提取技術(shù) （二）中藥中殘留農(nóng)藥的純化方法 1. 磺化法 2. Florisil小柱法 四殘留農(nóng)藥的分析方法 （一）總氯量的測(cè)定 取供試品細(xì)粉適量，加約10倍量的乙腈- 水（65：35），高速攪拌后過(guò)濾，取濾液用石油醚（30-60）萃取出農(nóng)藥，濃縮萃取液后滴加于不含氯元素的濾紙上，待溶劑揮干，