生物醫(yī)學(xué)電鏡技術(shù)與細(xì)胞及組織超微結(jié)構(gòu)總論課件

1、生物醫(yī)學(xué)電鏡技術(shù)與細(xì)胞及組織超微結(jié)構(gòu)Biomedical Electron Microscopy and Cell & Tissue Ultrastructure重慶醫(yī)科大學(xué)電子顯微鏡室10/1/20221 電子顯微鏡（Electron Microscope , EM)簡稱電鏡，它是用電子束代替可見光的顯微裝置，一種高放大、高分辨的大型精密儀器。目前電鏡已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、農(nóng)業(yè)、工業(yè)、軍事等多個(gè)領(lǐng)域。 EM在光學(xué)顯微鏡基礎(chǔ)上使細(xì)胞學(xué)的概念更加完善，對疾病的認(rèn)識(shí),特別是對發(fā)病機(jī)理的研究做出了巨大貢獻(xiàn)。緒 論10/1/20222（一）、電鏡技術(shù)發(fā)展簡史、Robert Hooke(1665)

2、& Leeuwenhoek(1674)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞；、19世紀(jì)30年代,Schleiden(1938) & Schwann（1839）提出 細(xì)胞學(xué)說(cell theory)；、1932年，德國Knoll & Ruska建造第一臺(tái)電鏡(Electron Microscope,EM, 12);19331934年,電鏡的性能已達(dá)光鏡的分辨率0.2um, 10,000；1938-1939，第一批商品電鏡問世，分辨率達(dá)100A； 由于受到樣品制備技術(shù)的限制，20世紀(jì)50年代初，電鏡技術(shù)才開始運(yùn)用于生物醫(yī)學(xué)方面的研究。、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的分子細(xì)胞生物學(xué)的基礎(chǔ)。10/1/20223(二)、分辨率與形態(tài)研究的關(guān)系1

3、、分辨率（Resolution） 又稱分辯本領(lǐng)（Resolving power），是將鄰近兩點(diǎn)清晰區(qū)分、辯認(rèn)的能力，用能被辨認(rèn)的鄰近兩點(diǎn)的距離表示。 肉眼：在明視距離（25cm）時(shí)，為0.25mm； LM：可見光的平均波長為500nm，r=/2，LM的極限分辨率為0.25um; EM：電子波波長短,且波長隨加速電壓的增高而更短，目前較好的電鏡分辨率為0.2nm左右,比LM提高1000倍,比人眼提高100萬倍. (注)：由于電鏡存在各種像差（包括球差、像散等）,限制了分辨率,不能真正達(dá)到其波長的一半; 分辨率還受到許多因素的影響,如切片的厚度等，超薄切片較薄 時(shí),分辨率可達(dá)12.5nm,切片較厚

4、時(shí),實(shí)際分辨率為510nm. 10/1/202242、反差： 被觀察物與其背景在亮度（黑白對比度）上有所不同，這種差別稱為反差；透射電鏡的反差主要由樣品對電子的散射產(chǎn)生。3、空放大 不能提供更為清晰的圖像放大，稱為無效放大，也稱無效放大。4、不同分辨率的形態(tài)研究10/1/20225(三)、基本原理、構(gòu)造及電鏡的類型電鏡的基本構(gòu)造及原理、電子束主要特點(diǎn)： a、由電子組成，真空中直線前進(jìn)，具波動(dòng)特性； b、電子束受電力和磁力作用； c、電子束照射樣品時(shí)，能透過極薄樣品，得到透射電子，或產(chǎn)生二次電子，特征X射線，背散射電子等。10/1/20227、電鏡的基本構(gòu)造：以透射電鏡為例 10/1/20228

5、、超高壓電鏡（High Voltage Electron Microscope, HVEM）； 常規(guī)電鏡加速電壓一般在200KV以下，如果加速電壓在500KV以上，則稱為HVEM。 特點(diǎn):觀察厚切片(0.5-3um)，提高分辨率。觀察到原子水平，期望觀察生活標(biāo)本（含水份）、分析電鏡（ Electron Microscope Microanalyser， EMMA）； I、波譜儀（wavelength-dispersive spectrometer ， WDS） II、能譜儀（energy-dispersive spectrometer ，EDS） 、掃描探針顯微鏡(Scanning probe

6、 microscope,SPM): 原子力顯微鏡(atomic force microscope,AFM)； 掃描隧道顯微鏡(scanning tunneling microscope,STM)。10/1/20221010/1/20221110/1/20221210/1/20221410/1/202215、掃描電鏡的二次成像原理 掃描電鏡一般可分為四個(gè)重要的組成部分： a、形成電子探針的電子光學(xué)系統(tǒng)； b、探針的電子束打擊樣品表面形成信息信號； c、檢測系統(tǒng)； d、電子偏轉(zhuǎn)系統(tǒng)（是電子探針在樣品表面按一定順序掃描，并且使這一掃描過程與陰極射線管的電子束在熒光屏上移動(dòng)同步）。10/1/20221

7、710/1/202218掃描電鏡的結(jié)構(gòu)示意圖：10/1/20221910/1/20222010/1/20222110/1/20222210/1/20222410/1/202225(四)、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)研究的展望、二維 三維，如三維重建技術(shù)；、從單純的形態(tài)觀察,深入到對其功能、代謝、化學(xué)組成、分子結(jié)構(gòu)及元素分布的研究。如X線顯微分析(electron probe x-ray microanalysis)；、定性描述 定量測定方向發(fā)展，如電鏡形態(tài)測量技術(shù)（morphometry）；、從經(jīng)化學(xué)固定的結(jié)構(gòu)向活細(xì)胞整體方向發(fā)展，如超高壓電鏡技術(shù)的應(yīng)用；、儀器設(shè)備向小型化方向發(fā)展。10/1/202227本課

8、程的重點(diǎn)內(nèi)容電鏡生物樣品制備常規(guī)技術(shù)及應(yīng)用范圍;電鏡圖片的分析要領(lǐng);正常細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)理論和超微病理內(nèi)容的基本掌握。學(xué)習(xí)要點(diǎn)重視圖像的分析和識(shí)別；注意LM和EM結(jié)合；形態(tài)與功能的聯(lián)系；正常超微結(jié)構(gòu)與超微病理的聯(lián)系；建立整體的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能概念。主要參考文獻(xiàn)電子顯微鏡術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)的應(yīng)用,杭振鑣 蔡文琴主編,重慶出版社,1988年8月,第一版；醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué),宋今丹主編,人民衛(wèi)生出版社,1997年5月,第一版；醫(yī)用電子顯微學(xué)，薄愛華主編,人民衛(wèi)生出版社,2000年11月,第一版；超微病理學(xué)基礎(chǔ),武忠弼主編,人民衛(wèi)生出版社,1990年9月,第一版；Ultrastructural Pathology o

9、f the Cell and Matrix . Third Edition Vol.1 Feroce N,Ghadially Butterworths 198810/1/202228電鏡生物樣品制備技術(shù) 樣品制備是電鏡技術(shù)中一個(gè)很重要的組成部分，是電鏡工作中最繁重的環(huán)節(jié)。要學(xué)習(xí)掌握好細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)知識(shí)及應(yīng)用電鏡技術(shù)進(jìn)行研究工作，都必須首先了解電鏡的標(biāo)本制備技術(shù)，故屬于本課程的重點(diǎn)內(nèi)容。10/1/202229（一）、超薄切片及其染色技術(shù)超薄切片（ultrathin-section）制備過程示意圖：10/1/2022301、取材的基本原則： 快：1min 小：1mm3 利： 靜： 冷：4 取材部位要

10、準(zhǔn)確； 成批取材，部位一致、； 標(biāo)本的編號和標(biāo)簽。10/1/2022312、固定：、幾種常用的固定劑的理化特性和使用原則： a、四氧化鋨（Osmium tetroxide，OsO4）； 又稱鋨酸，是電鏡生物樣品使用最廣泛的固定劑，兼有電子染色作用，可作單固定，一般不用于電鏡細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)的固定。對糖原和核酸的保護(hù)作用差。多用于后固定。 b、戊二醛（glutaraldehyde，C5H8O2）； 不能單獨(dú)作為電鏡樣品固定液，對脂肪的保護(hù)作用差。沒有“電子染色”的作用，通常用于前固定。 c、甲醛（formaldehyde）。 電鏡多用多聚甲醛，對酶活性保存好，可與戊二醛混合或單獨(dú)用于細(xì)胞化學(xué)灌流固定

11、或作為前固定液。、固定方法： a、雙重固定法； b、體內(nèi)原位固定法； c、灌流固定法。 10/1/2022323、脫水：應(yīng)遞增濃度進(jìn)行4、浸透：半浸透 純浸透5、包埋、聚合：環(huán)氧樹脂（epoxy resin）618#，Epon8126、切片：修塊 光切（半薄切片，0.5-1um） 定位 超切(超薄切片,50-70nm) 超薄切片機(jī)(ultramicrotome)，玻璃刀，鉆石刀，復(fù)有支持膜的載網(wǎng)（grid）（銅、鎳、金網(wǎng)）。10/1/2022337、電子染色：利用重金屬離子對不同細(xì)胞結(jié)構(gòu)的結(jié)合能力不同，使各細(xì)胞結(jié)構(gòu)對電子產(chǎn)生不同散射程度，以增強(qiáng)明暗之比（反差）。 常用的電子染色劑有以下幾種 a

12、、醋酸鈾（Uranyl acetate），即醋酸雙氧鈾，多用于塊染； b、枸櫞酸鉛（Lead citrate），用于片染，易被空氣中的CO2污染。 電子密度（electron density）的概念：10/1/202234（二）、負(fù)染技術(shù) 利用高密度無結(jié)構(gòu)的重金屬物質(zhì)把生物標(biāo)本包繞起來。這種反差是負(fù)像（與正染色的超薄切片相比較）。最常用的染色劑是磷鎢酸鈉（phosphotungstic acid，PTA），此法常用于病毒、蛋白分子或細(xì)胞亞單位的分子結(jié)構(gòu)研究，制樣簡單，可作快速診斷。10/1/202235（三）、電鏡細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（electron microscopic cytochemistr

13、y） 在保持細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)完整的條件下，借助細(xì)胞中的化學(xué)反應(yīng)，研究細(xì)胞乃至細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，是與化學(xué)、生物化學(xué)及免疫學(xué)有密切聯(lián)系的一門學(xué)科。廣義的電鏡細(xì)胞化學(xué)研究方法主要有細(xì)胞超微標(biāo)記示蹤技術(shù)、電鏡酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（簡稱免疫電鏡技術(shù)）等幾種。10/1/202236 1、電鏡酶細(xì)胞化學(xué)術(shù)(electron microscopic cytochemistry of enzyme or ultracytochemistry of enzyme)基本原理及內(nèi)容: 酶細(xì)胞化學(xué)術(shù)（enzyme cytochemistry）是利用酶催化反應(yīng)特點(diǎn)，從亞微結(jié)構(gòu)上研究酶的分布和活性。按其

14、催化反應(yīng)的性質(zhì)可分為水解酶、氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、裂解酶、合成酶和異構(gòu)酶六大類，應(yīng)用較多的有水解酶和氧化還原酶?，F(xiàn)以水解酶為例，介紹此技術(shù)的主要過程和基本原理。初級反應(yīng)：底物被磷酸水解酶作用后分解產(chǎn)生磷酸。 底物 磷酸水解酶 H3PO4 最終反應(yīng)：磷酸與金屬捕捉劑結(jié)合形成反應(yīng)產(chǎn)物。 H3PO4 捕捉劑（如Pb2+） Pb3(PO4)2 反應(yīng)產(chǎn)物為電子致密的沉淀物，電鏡下易于觀察并顯示出酶的定位。近年來常用鈰（ Ce3+）作為捕捉劑。10/1/20223710/1/202238 應(yīng)用 一般說透射電鏡已能分辨出超微結(jié)構(gòu)和某些化學(xué)成份，如糖原顆粒、核糖體、染色質(zhì)和脂類等。電鏡酶細(xì)胞化學(xué)則著重顯示各超微

15、結(jié)構(gòu)的酶特別是標(biāo)志酶，研究細(xì)胞器的化學(xué)、功能及其動(dòng)態(tài)變化，由于電鏡方法的限制，迄今所能顯示的酶為數(shù)尚少。 酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)主要用于：（1）酶在超微結(jié)構(gòu)上的定位，（2）標(biāo)記和鑒定某些細(xì)胞和細(xì)胞器，（3）通過顯示過氧化物酶，定位示蹤HRP,（4）利用免疫酶技術(shù)，電鏡下顯示特異性標(biāo)記物的定位。 目前應(yīng)用電鏡技術(shù)常顯示的標(biāo)志酶有：各種細(xì)胞器的標(biāo)志酶細(xì)胞器標(biāo)志酶內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核苷二磷酸酶，葡萄糖-6-磷酸酶高爾基體焦磷酸硫胺素酶（Trans膜囊）、煙酸胺腺嘌呤二核苷磷酸酶（中間膜囊）溶酶體酸性磷酸酶微體過氧化氫酶線粒體細(xì)胞色素氧化酶、琥珀酸脫氨酶細(xì)胞膜核糖核苷磷酸酶（如ATP酶）、堿性磷酸酶10/1/202239

16、Figure 10 G-6-Pase reaction products were rich in Leydig cell of the control group rats. 20 000Figure 11 G-6-Pase reaction products decreased markedly after 3 d of cadium treatment. 20 000Figure 12 Showing intense G-6-Pase reaction products of Leydig cell after 3 d of cadium add zinc treatment. 20 0

17、0010/1/20224010/1/202241RER,G-6-PasePlasmalemma , AlPMito., SDH10/1/2022422、 免疫電鏡技術(shù)(immunoelectronmicroscopy) 免疫細(xì)胞化學(xué)術(shù)（immunocytochemistry）是用標(biāo)記特異性抗體對組織內(nèi)抗原分布進(jìn)行形態(tài)學(xué)研究的一門分支學(xué)科。60年代，Nakane建立了酶標(biāo)記抗體技術(shù)，70年代，Sternberger在此基礎(chǔ)上改良并建立了非標(biāo)記過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）技術(shù)，80年代Hsu建立了抗生物素-生物素（ABC）法之后，膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫金銀染色和親和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)等相繼問世，

18、使免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)成為當(dāng)今生物醫(yī)學(xué)中形態(tài)、功能、代謝綜合研究的一項(xiàng)有力工具。目前免疫細(xì)胞化學(xué)正在向定量和分子水平發(fā)展。10/1/202243 常用免疫電鏡方法的原理及步驟PAP法 基本原理： PAP（peroxidase-antiperoxidase）法，又稱可溶性酶-抗酶法。特點(diǎn)為參加反應(yīng)的抗體都不被酶直接標(biāo)記。包括以下步驟：用第一抗體（Ab1）與組織中特異性抗原（Ag）相結(jié)合形成抗原抗體（AgAb1）復(fù)合物；用第二抗體（Ab2）的一個(gè)Fab段與第一抗體結(jié)合，另一個(gè)Fab段游離，形成抗原-第一抗體-第二抗體（Ag-Ab1-Ab2）復(fù)合物；用過氧化物酶-抗過氧化物酶復(fù)合物（PAP，與Ab1同種

19、動(dòng)物的血清）與第二抗體的游離Fab段結(jié)合，形成Ag-Ab1-Ab2PAP復(fù)合物；用過氧化氫和二氨基聯(lián)苯胺（DAB）使PAP的過氧化物酶形成不溶的、暗棕色的嗜鋨化合物。 優(yōu)點(diǎn)： 保存抗體活性好；PAP復(fù)合物穩(wěn)定；敏感性高，比間接免疫熒光抗體法敏感性高1001000倍；由于敏感性高,節(jié)約了抗體用量,也減少了非特異性背景染色。 缺點(diǎn)：反應(yīng)產(chǎn)物顆粒較大，遮蓋背景；DAB有致癌作用，操作中需格外小心；內(nèi)源性氧化酶對此法有干擾。10/1/20224410/1/202245 ABC法 基本原理： 抗生物素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物技術(shù)（Avidin-Biotin-Peroxidase Complex Tec

20、hnique）簡稱 ABC技術(shù)，是目前常用的免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)之一。1979年Guessdon首先把生物素-卵白素技術(shù)用于免疫組織化學(xué)，先后設(shè)計(jì)出橋式卵白素-生物素（BAB）技術(shù)和標(biāo)記式卵白素一生物素（LAB）技術(shù)，1981年Hsu和許世明在BAB法和LAB法基礎(chǔ)上改良而建立了ABC法，其基本原理與PAP法相似，特點(diǎn)是利用抗生物素分別連接生物素標(biāo)記的第二抗體和生物素標(biāo)記的過氧化物酶，形成抗原-第一抗體-生物素標(biāo)記的第二抗體-抗生物素過氧化物酶復(fù)合體（AgAb1Ab2ABC）?？股锼赜址Q卵白素（Avidin），它有四個(gè)活動(dòng)結(jié)合點(diǎn)，并與生物素有特別高的親和力，一旦和生物素結(jié)合就極為穩(wěn)定。當(dāng)生物素和

21、第二抗體共價(jià)偶聯(lián)后，就使第二抗體獲得與抗生物素相結(jié)合的能力。10/1/20224610/1/202247 膠體金標(biāo)記技術(shù) 優(yōu)點(diǎn)：（l）膠體金可標(biāo)記各種不同的生物大分子(如免疫球蛋白、葡萄球菌A蛋白、植物凝集素、刀豆球蛋白A等)，并使其保持原有的生物學(xué)活性。（2）膠體金標(biāo)記技術(shù)可適用于光鏡、透射及掃描電鏡、X射線能譜分析、熒光顯微鏡等。（3）膠體金非特異性吸附作用小、特異性強(qiáng)。（4）金顆粒電子密度大，電鏡下檢出率遠(yuǎn)比DAB反應(yīng)產(chǎn)物高，敏感性比PAP法高20200倍、比ABC法亦高數(shù)倍。（5）膠體金標(biāo)記物是顆粒狀物，電鏡下易于計(jì)數(shù)，可直接定量檢測抗原。（6）膠體金標(biāo)記不受內(nèi)源性物質(zhì)影響。（7）膠體

22、金顆粒直徑可根據(jù)需要控制，將不同直徑的肢體金分別標(biāo)記不同抗體或抗原，可在同一張切片上同時(shí)區(qū)分兩種或兩種以上的抗原或抗體，特別適合于電鏡水平的雙標(biāo)記或多標(biāo)記。（8）膠體金標(biāo)記和IGSS特別有利于回顧性研究,如過去病理外檢的石蠟切片和電鏡包埋塊,需要時(shí)可進(jìn)行膠體金標(biāo)記研究。膠體金的顆粒較大,穿透性弱,是它的主要缺點(diǎn)。 電鏡水平的免疫金技術(shù)，同PAP和ABC法免疫電鏡一樣，關(guān)鍵在于抗原的保存。用L.R.White 和 Lowicryl K4M包埋，其保存抗原優(yōu)于Epon812，用冷凍超薄切片作IGS，由于抗原性保存很好，更易成功。目前多采用包埋后染色。包埋前染色，免疫金試劑對細(xì)胞膜的穿透性差,一般只

23、用于細(xì)胞表面抗原的標(biāo)記。10/1/20224810/1/202249（四）、真空噴鍍和離子濺射技術(shù)真空噴鍍： 真空條件下金屬加熱至一定溫度后，將以細(xì)顆粒向四周發(fā)射，在樣品面對噴鍍源的一面形成一層重金屬薄膜。又稱金屬投影法（metal shadowing）。離子濺射： 與真空噴鍍的區(qū)別在于：真空度不同，重金屬離子運(yùn)動(dòng)的方向不同，鍍膜效果較前者好，金屬用量可少10倍，鍍膜更為均勻。10/1/202250（五）、冷凍蝕刻技術(shù)（freeze etching）及冷凍割斷技術(shù)（freeze fracture） 冷凍蝕刻技術(shù)又稱冷凍蝕刻復(fù)型法（freeze etching replica），該技術(shù)主要用于生

24、物膜內(nèi)部及細(xì)胞內(nèi)部三維結(jié)構(gòu)的研究，如核孔復(fù)合體、細(xì)胞連接等。10/1/20225110/1/20225210/1/202253（六）、掃描電鏡樣品制備技術(shù) 10/1/202254（七）、電鏡X線顯微分析術(shù)（electron microscopic X-ray microanalysis） 又稱電子探針X線顯微分析（electron probe X-ray microanalysis）或簡稱X線微區(qū)分析（X-ray MA），是電鏡技術(shù)與X線分析技術(shù)相結(jié)合的一種方法。 基本原理： 當(dāng)高速電子束轟擊固體標(biāo)本表面的微小區(qū)域，使該區(qū)域所含的元素發(fā)射X線，各種元素都能發(fā)射自己的特征X線，通過檢測發(fā)射的X線

25、的波長和強(qiáng)度，便可了解該微小區(qū)域所含元素的種類及含量。 分析儀器包括： a、電子探針顯微分析儀； b、掃描電境與X線檢測器的結(jié)合； c、掃描透射電境與X線檢測器的結(jié)合； d、專用分析電鏡（electron microscope microanlyser，EMMA）； e、透射電鏡與X線檢測器的結(jié)合。10/1/202255優(yōu)點(diǎn)： 、分析過程不破壞樣品結(jié)構(gòu)，在保持各元素原有分布情況下對生物細(xì)胞內(nèi)各種元素同時(shí)進(jìn)行分析； 、結(jié)合拍攝透射或掃描電鏡圖像，可在形態(tài)觀察的同時(shí)對一定結(jié)構(gòu)內(nèi)的元素進(jìn)行測量，從而獲知超微結(jié)構(gòu)變化與其組成元素變化的關(guān)系。 、靈敏度高，可辨別1um3區(qū)域內(nèi)質(zhì)量小于10-14g的元素。

26、應(yīng)用： 中藥研究，鈣庫研究，重金屬中毒（如鎘）研究等。10/1/202256(八)、電鏡細(xì)胞立體形態(tài)計(jì)量技術(shù) 用立體學(xué)方法來分析形態(tài)結(jié)構(gòu)，稱為形態(tài)計(jì)量學(xué)（morphometry）或體視學(xué)，形態(tài)定量分析目的是從二維圖像推導(dǎo)出三維結(jié)構(gòu)參數(shù)。 人工法； 生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（九）、掃描血管鑄型（casting）技術(shù) 觀察和研究腔隙性器官，特別是器官內(nèi)的血管立體構(gòu)筑和分布情況。 鑄型劑-甲基丙烯酸酯 樣品經(jīng)腐蝕，清洗，鍍膜后在SEM下觀察。（十）、特殊樣品制備甲醛固定石蠟包埋樣品；培養(yǎng)細(xì)胞及游離細(xì)胞；血液（白細(xì)胞、血小板），精液等液體標(biāo)本； 骨組織。 10/1/20225710/1/202258電鏡技

27、術(shù)在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用基礎(chǔ)研究方面： 在病毒學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)、分子生物學(xué)及分子病理學(xué)上均做出了卓有成效的貢獻(xiàn)。如核蛋白體超微結(jié)構(gòu)的研究；核蛋白體與mRNA關(guān)系的闡明；核小體的發(fā)現(xiàn)；DNA復(fù)制及RNA轉(zhuǎn)錄的分子形態(tài)觀察；線粒體內(nèi)膜的ATP合成酶顆粒的發(fā)現(xiàn)；電鏡是直接觀察病毒的唯一工具。臨床醫(yī)學(xué)方面： 電鏡在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用近10多年來已從醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)性理論研究逐漸擴(kuò)大到臨床醫(yī)學(xué)的實(shí)際應(yīng)用方面。對疾病的病情、病因的鑒定，對腫瘤、血液病及腎臟病等的分型診斷上都取得顯著成效。由于內(nèi)窺鏡的應(yīng)用和穿刺技術(shù)的發(fā)展，使得臨床上獲得如心臟、肝、腎、胃等臟器的標(biāo)本變得較容易。10/1/20225910/1/2

28、02260正確評價(jià)電鏡的使用： 電鏡是一種先進(jìn)的科學(xué)儀器，其主要特點(diǎn)是分辨率高，能觀察細(xì)微結(jié)構(gòu)。但正是由于其高放大，使得觀察范圍較小，且制樣復(fù)雜。而光鏡則有制樣簡單，觀察面大，能動(dòng)態(tài)觀察活細(xì)胞等優(yōu)點(diǎn)。因此電鏡不能取代光鏡，二者應(yīng)配合使用，取長補(bǔ)短。在科學(xué)研究中，電鏡所起作用具體表現(xiàn)為： a、探查作用：觀察很早期的改變，功能活動(dòng)的提示，因復(fù)雜的代謝過程中的定位往往是光鏡看不見的；病毒學(xué)、病因?qū)W、免疫損傷等病因的探討； b、依據(jù)作用：“眼見為實(shí)”的重要性，在機(jī)理研究中從形態(tài)學(xué)上證實(shí)了許多理論假說； C、輔助作用：電鏡結(jié)果注意與光鏡的關(guān)系，與宏觀的關(guān)系，因其本身有較大的局限性，如取材小，觀察范圍亦小，特別是在病理診斷上應(yīng)與其他方法結(jié)合進(jìn)行研究。 10/1/202261觀察要領(lǐng)1、正確判斷和應(yīng)用放大倍率： 原則：從低倍到高倍，以利于判斷細(xì)胞組織種類，醫(yī)學(xué)生物學(xué)范圍內(nèi)多用1-2萬倍，多數(shù)問題在5萬倍以下就能解決。 電子放大，光學(xué)放大，總放大的概念。2、具有全局的觀點(diǎn)： 注意宏觀提示，光鏡和其他檢查結(jié)果，防止片面性；電鏡觀察時(shí)注意連續(xù)追蹤，仔細(xì)全面，一定要有嚴(yán)格的正常對照；提倡2人以上同時(shí)觀察。3、及時(shí)作好拍片記錄和觀察小結(jié)；4、重視基礎(chǔ)理論指導(dǎo)： 良好的認(rèn)識(shí)水平來自于堅(jiān)實(shí)的專業(yè)理論知識(shí)和豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。電鏡觀察如果缺少必要的認(rèn)識(shí)基礎(chǔ)，其結(jié)果是視而不見，見而不知其義。因此必須做好文獻(xiàn)準(zhǔn)