體外放射配基結合分析及臨床應用課件

1、體外放射配基結合分析及臨床應用E-mail:體外放射配基結合分析及臨床應用1體外放射配基結合分析及臨床應用體外放射配基結合分析及臨床應用受體放射配基結合分析Radioligand Binding Assay of Receptor ,RBA 用放射性核素標記配基與相應的受體行特異性結合反應從而對受體進行定性和定量的方法。 分離配基受體復合物放射配基 + 受體分子分析受體數(shù)量和親和力體外放射配基結合分析及臨床應用2受體放射配基結合分析Radioligand BindingRBA的分類定性RBA：通過反應的量效關系及某些參數(shù)的變化等來判斷受體的類型、單位點或多位點系統(tǒng)、受體與配基相互作用的特點 (

2、可逆或不可逆，受體間的合作作用)。定量RBA：在已知反應性質的基礎上，通過結合反應分析組織或細胞中受體數(shù)目（binding site,結合位點數(shù)）。 體外放射配基結合分析及臨床應用3RBA的分類定性RBA：通過反應的量效關系及某些參數(shù)的變化等受體的免疫組織化學Immunohistochemistry優(yōu)點：強特異性（單個氨基酸水平）高敏感性高分辨力缺點：半定量無法測定親和力體外放射配基結合分析及臨床應用4受體的免疫組織化學Immunohistochemistry優(yōu)RBA相關的基本慨念 受體(receptor,R) 配基(ligand,L)： 激動劑、激動劑、內源性配基體外放射配基結合分析及臨床應

3、用5RBA相關的基本慨念 受體(receptor,R) 體外放射 受體與配基結合反應的質量作用定律 K1V1 R+L RL E K2V2 KD: 平衡解離常數(shù) RT: 受體初始濃度(總濃度) LT:配基初始濃度 RL2-RLRT+LT+Kd+RTLT=0 (Goldstein)體外放射配基結合分析及臨床應用6 受體與配基結合反應的質量作用定律 受體與配基結合反應的主要特點：可飽和性(Saturability) 可逆性(Reversibility) 特異性(Specifity)與生理效應一致性。體外放射配基結合分析及臨床應用7受體與配基結合反應的主要特點：可飽和性(Saturabil受體的分類四

4、級分類：類(class)亞類（subclass）型 (type)亞型 (subtype) 體外放射配基結合分析及臨床應用8受體的分類四級分類：體外放射配基結合分析及臨床應用8四大類膜受體示意圖體外放射配基結合分析及臨床應用9四大類膜受體示意圖體外放射配基結合分析及臨床應用9五類受體的名稱12345配基門控離子通道受體G蛋白偶聯(lián)7次跨膜受體有酶結構的單次跨膜受體無酶結構的單次跨膜受體核受體體外放射配基結合分析及臨床應用10五類受體的名稱1配基門控離子通道受體體外放射配基結合分析及體外放射配基結合分析及臨床應用11體外放射配基結合分析及臨床應用11RBA的基本原理 體外放射配基結合分析及臨床應用1

5、2RBA的基本原理 體外放射配基結合分析及臨床應用12飽和曲線體外放射配基結合分析及臨床應用13飽和曲線體外放射配基結合分析及臨床應用13體外放射配基結合分析及臨床應用14體外放射配基結合分析及臨床應用14受體最大結合容量的表示方式 體外放射配基結合分析及臨床應用15受體最大結合容量的表示方式 體外放射配基結合分析及臨床應用1RBA的基本方法 體外放射配基結合分析及臨床應用16RBA的基本方法 體外放射配基結合分析及臨床應用16配基的選擇標記配基： 高親和力、高特異性 高比活度 高放化純度（98%） 化學穩(wěn)定性。非標記配基 高親和力 高濃度體外放射配基結合分析及臨床應用17配基的選擇標記配基：

6、體外放射配基結合分析及臨床應用17受體顯像配基基本要求半衰期適中、發(fā)射正電子或單光子、 SA3.7TBq/mmol易穿透生物屏障代謝行為和作用機制清楚特異性高親和力高選擇性強標記后具完整的生物活性和藥理活性動態(tài)顯像時用生理數(shù)學模型可作受體密度的模擬定量分析體外放射配基結合分析及臨床應用18受體顯像配基基本要求半衰期適中、發(fā)射正電子或單光子、 SA體外放射配基結合分析及臨床應用19體外放射配基結合分析及臨床應用19體外放射配基結合分析及臨床應用20體外放射配基結合分析及臨床應用20體外放射配基結合分析及臨床應用21體外放射配基結合分析及臨床應用21體外放射配基結合分析及臨床應用22體外放射配基結

7、合分析及臨床應用22體外放射配基結合分析及臨床應用23體外放射配基結合分析及臨床應用23受體在醫(yī)學研究中的應用 疾病時受體的變化：受體數(shù)目的變化受體親和力的變化受體特異性的變化受體的自身抗體受體-效應器偶聯(lián)機理異常體外放射配基結合分析及臨床應用24受體在醫(yī)學研究中的應用 疾病時受體的變化：體外放射配基結受體理論在疾病研究中的應用探討疾病的發(fā)病機理受體的變化尋找疾病的病因根據(jù)受體測定結果選擇治療方案受體變化作為疾病預后指標尋找防治措施體外放射配基結合分析及臨床應用25受體理論在疾病研究中的應用探討疾病的發(fā)病機理體外放射配基結合選擇治療方案 344例乳腺癌內分泌治療效果與、的關系_ 受體狀態(tài) 治療

8、例數(shù) 有效例數(shù) 有效率%_ER+、PR- 91 12 13.2ER-、PR+ 10 3 30.0ER+、PR- 125 37 29.6ER-、PR+ 118 89 75.4_體外放射配基結合分析及臨床應用26選擇治療方案 344例乳腺癌內分泌治療效果與、 和與乳腺癌化療效果的關系(136例)_受體狀態(tài) 治療例數(shù) 有效例數(shù) 有效率%_ ER+ 25 3 12.0 PR+ 8 0 0 ER- 45 34 75.6 PR- 34 22 64.7 ER+、PR+ 24 21 87.5_體外放射配基結合分析及臨床應用27 和與乳腺癌化療效果的關系(136例)體外放 32例乳腺癌ER狀態(tài)與激素治療關系_c

9、ytosol/nuclear 治療例數(shù) 反應例數(shù) 無反應例數(shù)_ 22 18 4 6 1 5 3 0 3 1 0 1_體外放射配基結合分析及臨床應用28 32例乳腺癌ER狀態(tài)與激素治療關系體 乳腺癌胞漿不同水平與激素治療的關系_ ER含量(fmol/mg.Pro) 有效率%_ 100 81 3100 45 3 0_體外放射配基結合分析及臨床應用29 乳腺癌胞漿不同水平與激素治療的關系體外放射配基 乳腺癌狀態(tài)與內分泌治療效果的關系_ 有效例數(shù)/治療例數(shù) 藥 物 - ER+ ER-_ Tamoxifen 32/67 1/5 Nafoxidene 7/10 0/8 Stilboostrol 9/12

10、1/17 Dophrectomy 28/43 2/74 Adrenalectomy 15/22 1/9 Androgens 10/28 2/22 Glucocorticoids 15/32 0/19 Hypophsectomy 9/14 1/12 - 總有效率 128/235(54.5%) 7/176(4%)_體外放射配基結合分析及臨床應用30 乳腺癌狀態(tài)與內分泌治療效果的關系體外放Degenshein根據(jù)乳腺癌受體表達情況和癌轉移情況，提出如下治療方案，并得到臨床廣泛采用 ，腋下淋巴結無轉移，手術治療外可不用內分泌治療，要作定期復查；、腋下淋巴結有轉移，要加激素治療或預防性去勢、腋下淋巴結無

11、轉移、絕經前患者，術后加化療晚期癌或復發(fā)癌，內臟無轉移者，用激素治療；內臟有轉移者，用激素治療再加化療。體外放射配基結合分析及臨床應用31Degenshein根據(jù)乳腺癌受體表達情況和癌轉移情況，提出ER表達與內分泌治療不相符：腫瘤異質性腫瘤組織類固醇代謝酶的滅活作用受體本身缺陷 內存激素變化的影響雌抑素(estrocolyone)失活 受體陽性的標準不準確和不一致 檢測受體的標本的不均一性和代表性。腫瘤的病因的復雜性或多元體外放射配基結合分析及臨床應用32ER表達與內分泌治療不相符：腫瘤異質性體外放射配基結合分析及神經系統(tǒng)疾病與受體帕金森氏病亨廷頓氏病癲癇憂郁精神分裂癥體外放射配基結合分析及臨

12、床應用33神經系統(tǒng)疾病與受體帕金森氏病體外放射配基結合分析及臨床應用3體外放射配基結合分析及臨床應用34體外放射配基結合分析及臨床應用34帕金森氏病 帕金森氏病患者腦中受體的變化 受體的種類 紋狀體 黑質 多巴胺D1受體 多巴胺D2受體 未治療例 左旋多巴治療 mACh受體 5-HT受體 GABA受體 腦啡肽受體 （只有被殼） 阿片(納洛酮)受體 神經加壓索受體 體外放射配基結合分析及臨床應用35帕金森氏病 帕金森氏病患者腦中受體的變化體外放射配基結亨廷頓氏病 亨廷頓氏病患者死后腦中受體的變化 大腦皮質 尾狀核 被殼 蒼白球 黑質GABA-R BDZ-R / DA-R D1-R D2-R mA

13、Ch-R Glu-R ：明顯減少，：減少，：不變，：增加GABA-R=-氨基丁酸受體，BDZ-R=苯二氯卓受體，DA-R多巴胺受體，D1D1受體，D2D2受體， mACh-R蕈毒堿樣乙酰膽堿受體， Glu-R谷氨酸受體體外放射配基結合分析及臨床應用36亨廷頓氏病 亨廷頓氏病患者死后腦癲癇癲癇患者的病灶組織、脊髓液中神經遞質及受體的變化 病灶組織 脊髓液 多巴胺(DA) 高香草酸(HVA) 去甲腎上腺素(NA) 神 3-甲氧基-4-羥基苯乙二醇(MHPG) 5-羥基吲哚醋酸(5-HIAA) 經 乙酰膽堿(Ach) y-氨基丁酸(GABA) 遞 谷氨酸脫羧酶(GAD) GABA轉氨酶 質 ?；撬?

14、甘氨酸 生長激素抑制素 3HGABA受體 受 1-腎上腺素受體 體 苯二氮卓受體 PET研究 苯二氮卓受體 ：減少， ：增加， ：不變。 PET電子發(fā)射斷層掃描體外放射配基結合分析及臨床應用37癲癇癲癇患者的病灶組織、脊髓液中神經遞質及受體的變化體外放射憂郁體外放射配基結合分析及臨床應用38憂郁體外放射配基結合分析及臨床應用38精神分裂癥 精神分裂癥患者死后腦內多巴胺受體的變化 配體 配體濃度 腦部位 癥例數(shù) 置換濃度 結果 3H-螺環(huán) O.8nM 尾狀核 19 丁克嗎 哌丁苯 (其中不服藥5) (1uM) 被殼 側坐核 O.5nM 側坐核 26 ADTN* (10uM) 肉桂硫胺 (1uM)

15、 O.5nM 尾狀核 服藥21 丁克嗎 Bmax，Kd 不服藥7 (1uM) Bmax，Kd 側坐核 服藥13 ADTN Bmax，Kd 不服藥4 (10uM) Bmax，Kd 尾狀核 服藥12 丁克嗎 Bmax，Kd 不服藥4 (1uM) Bmax，Kd 側坐核 服藥9 ADTN Bmax，Kd 不服藥13 (10uM) Bmax，Kd 體外放射配基結合分析及臨床應用39精神分裂癥體外放射配基結合分析及臨床應用39 精神分裂癥患者死后腦內多巴胺受體的變化 配體 配體濃度 腦部位 癥例數(shù) 置換濃度 結果 0.1nM 尾狀核 11 丁克嗎 被殼 (1uM) Bmax，Kd 顳皮質 O.1nM 尾

16、狀核 6 丁克嗎 被殼 5 (1uM) Bmax，Kd 前部扣帶圓 6 1nM 尾狀核 9 丁克嗎 被殼 (1uM) 1nM 尾狀核 27 丁克嗎 被殼 37 (1uM) Bmax，Kd3H氟哌 1.7nM 尾狀核 18 丁克嗎 啶醇 被殼 (100nM) 2nM 尾狀核 29 丁克嗎 被殼 (100nM) 3H-阿樸 3.2nM 尾狀核 7 丁克嗎 被殼 (1uM) 側坐核 3 顳皮質 ADTN2-氨-6,7-二羥基-1,2,3,4-四氫萘體外放射配基結合分析及臨床應用40 精神分裂癥患者死后腦內多巴胺受體PET腦受體研究多巴胺受體 11C-N-甲基螺環(huán)哌丁苯、11C-Nomifensine、11C-SCH233905-HT受體 11C-氟哌喹11C-5羥色胺酸阿片受體 11C-carfent