急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)培訓(xùn)課件

1、一、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、動物的稱重、編號、隨機(jī)分組；2、受試物的配制（等容量稀釋）；3、小鼠灌胃染毒操作技術(shù)；4、急性毒性反應(yīng)觀察；5、LD50（機(jī)率單位法）的計(jì)算和毒性分級。一、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、動物的稱重、編號、隨機(jī)分組；二、材料和試劑1、實(shí)驗(yàn)動物 選用健康成年小鼠（1822g）。試驗(yàn)前要對動物飼養(yǎng)觀察37天，以適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境，并淘汰不健康或體重不符合要求的動物；2、器材 動物秤，注射器，灌胃針，體重稱，吸管，吸球，容量瓶，燒杯，棉棒，試劑瓶；3、試劑 DDV（80g/100ml），苦味酸，蒸餾水。二、材料和試劑1、實(shí)驗(yàn)動物三、操作步驟（一）實(shí)驗(yàn)動物與分組首選健康成年小鼠(1822g)和大鼠(180220

2、g)，也可選用其它敏感動物。同性別實(shí)驗(yàn)動物個(gè)體間體重相差不得超過平均體重的10%。本次試驗(yàn)取體重1822g的小鼠，試驗(yàn)時(shí)，將小鼠稱體重、編號、按隨機(jī)分組原則，將實(shí)驗(yàn)動物分成5組，每組8只。三、操作步驟（一）實(shí)驗(yàn)動物與分組動物編號染色法126397854動物編號染色法126397854（二）劑量選擇首先了解受試化學(xué)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，查閱與受試化學(xué)物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)相近似的其它化學(xué)物毒性資料（LD50），以此值作為受試化學(xué)物的預(yù)期毒性中值，即中間劑量組。上下各推12個(gè)劑量組，進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。注意，動物種系和給藥途徑相同的毒性資料才可用作預(yù)期毒性中值。LD0 、 LD01 、 LD100 。（二）劑

3、量選擇首先了解受試化學(xué)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，查閱與各劑量組的間距可根據(jù)LD50計(jì)算方法要求按等比級數(shù)或等差級數(shù)安排。本實(shí)驗(yàn)用機(jī)率單位法計(jì)算LD50，要求按等比級數(shù)排列，常用1：0.8，如敵敵畏的最高劑量為125mg/kg，其次劑量組為125mg/kg0.8=100mg/kg，依次類推為80、64和51.2mg/kg五個(gè)劑量組。各劑量組的間距可根據(jù)LD50計(jì)算方法要求按等比級數(shù)或等差級數(shù)（三）受試化學(xué)物配制與稀釋1、溶劑 水溶性受試化學(xué)物以蒸餾水為溶劑配制成溶液，脂溶性受試化學(xué)物以吐溫-80、二甲基亞砜、植物油、淀粉等配制成混懸液。（三）受試化學(xué)物配制與稀釋1、溶劑2、受試物的配制 （等容量稀

4、釋） 根據(jù)計(jì)算結(jié)果精確量取需要的受試物的量，稀釋成需要的濃度。2、受試物的配制配制步驟取1.5625ml DDV，用水稀釋至100ml，濃度為12.5mg/ml，為（1）液；?。?）液80ml，稀釋至100ml，濃度為10mg/ml，為（2）液；?。?）液80ml，稀釋至100ml，濃度為8mg/ml，為（3）液；取（3）液80ml，稀釋至100ml，濃度為6.4mg/ml，為（4）液；?。?）液80ml，稀釋至100ml，濃度為5.12mg/ml。按10ml/kg體重經(jīng)口灌胃小鼠，則染毒劑量分別為125、100、80、64、51.2mg/kg。配制步驟取1.5625ml DDV，用水稀釋至1

5、00ml，濃（四）灌胃1、灌胃量實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)禁食（一般1216h），不限制飲水。然后對各組動物用經(jīng)口灌胃法一次染毒。一次灌胃液體積為小鼠0.21ml，大鼠14ml，豚鼠l5ml，染毒后繼續(xù)禁食34h。各劑量組動物給予受試物的體積均為10ml/kg。不同體重小鼠灌胃容量計(jì)算：小鼠灌胃容量V(ml)=體重(g)10(ml/kg) =體重(g)10ml/1000g（四）灌胃1、灌胃量2、灌胃操作小鼠、大鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠頭部兩耳后皮膚，無名指或小指將尾部緊壓在手上，使小鼠腹部向上，盡量使其體位垂直，注意使動物的上消化道固定成一直線。右手持連著灌胃針的注射器，將灌胃針由動物口腔側(cè)

6、插入，避牙齒，沿咽后壁緩緩滑入食管。若遇阻力，可輕輕上下滑動探索，一旦感覺阻力消失，即深入至胃部，隨后將受試物溶液注入。如遇動物掙扎，應(yīng)停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬觯f不能強(qiáng)行插入，以免穿破食管，甚至誤入氣管，導(dǎo)致動物立即死亡。一般進(jìn)針深度小鼠2.54cm，大鼠或豚鼠46cm。2、灌胃操作小鼠、大鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠頭部兩耳急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)培訓(xùn)課件急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)培訓(xùn)課件（五）實(shí)驗(yàn)觀察實(shí)驗(yàn)動物灌胃后應(yīng)詳細(xì)觀察并記錄染毒過程和觀察期內(nèi)的動物的中毒和死亡情況。高劑量組動物的死亡常很快發(fā)生，染毒后應(yīng)即刻密切觀察。觀察和記錄中毒體征及出現(xiàn)的時(shí)間、死亡時(shí)間及死亡前的特征。根據(jù)觀察情況分析中毒特點(diǎn)和毒

7、作用靶器官。觀察期（14天）結(jié)束后，處死存活動物并進(jìn)行大體解剖，如有必要，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。（五）實(shí)驗(yàn)觀察實(shí)驗(yàn)動物灌胃后應(yīng)詳細(xì)觀察并記錄染毒過程和觀察期三、LD50計(jì)算可采用多種方法測定LD50，有機(jī)率單位法、霍恩氏法、寇氏法等，機(jī)率單位法數(shù)字基礎(chǔ)較好，能計(jì)算出任何反應(yīng)率水平的劑量，且實(shí)驗(yàn)2-5組均可。機(jī)率單位法要求：1、劑量按等比級數(shù)排列，相鄰兩劑量組間的比值常用0.8；2、各實(shí)驗(yàn)組動物數(shù)相等。三、LD50計(jì)算可采用多種方法測定LD50，有機(jī)率單位法、霍機(jī)率單位法計(jì)算公式（五個(gè)劑量組時(shí)）X3-為第三個(gè)組的劑量對數(shù)(X3=log80，80mg/kg)i-為相鄰兩組劑量比值（以高劑量組為分子）

8、的對數(shù)(i=log(1/0.8)y-為死亡率相應(yīng)的機(jī)率單位（查表）1、2、3、4、5為小劑量組到大劑量組的順序。yK-為50%死亡率時(shí)所相當(dāng)?shù)姆磻?yīng)率的機(jī)率單位，計(jì)算LD50時(shí)，yK=5.0LD50=log-110i(yk-y)2(y5-y1)+(y4-y2)+X3機(jī)率單位法計(jì)算公式（五個(gè)劑量組時(shí)）X3-為第三個(gè)組的劑急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)培訓(xùn)課件四、結(jié)果評價(jià)根據(jù)實(shí)驗(yàn)動物中毒體征、死亡時(shí)間和特征、LD50，按受試物種類急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評定，判斷該受試物的毒性大小及毒性特征。四、結(jié)果評價(jià)根據(jù)實(shí)驗(yàn)動物中毒體征、死亡時(shí)間和特征、LD50，急性經(jīng)口毒性分級標(biāo)準(zhǔn)（WHO）級別經(jīng)口LD50（mg/kg）劇毒5高毒550中毒50500低毒5005000微毒5000急性經(jīng)口毒性分級標(biāo)準(zhǔn)（WHO）級別經(jīng)口LD50（mg/kg）五、作業(yè)實(shí)驗(yàn)報(bào)告五、作業(yè)實(shí)驗(yàn)報(bào)告六、注意事項(xiàng)1、灌胃時(shí)操作要熟練，以免損傷食道或誤入氣管2、正確捉拿動物，防止咬傷且避免動物損傷3、灌入量計(jì)算和操作要準(zhǔn)確，否則影響結(jié)果4、防止操作者中毒。注意通風(fēng)，不要把藥品撒到手、臉部皮