實驗題目血紅蛋白測定與紅細胞計數(shù)教學課件

1、 實驗題目：血紅蛋白測定與紅細胞計數(shù)檢驗診斷學教研室 張群智 教授1 1實驗?zāi)康囊螅?通過血紅蛋白測定、紅細胞計數(shù)實驗要求：1、掌握紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定的原理、方法及注意事項。2、掌握血細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)2實驗?zāi)康囊螅? 一、血紅蛋白測定(Hemoglobin簡稱Hb) （氰化高鐵血紅蛋白法）3 一、血紅蛋白測定(Hemoglobin簡稱Hb)3 【原理】 血紅蛋白中的亞鐵離子（Fe2+）被高鐵氰化鉀氧化成高離子（Fe3+），血紅蛋白轉(zhuǎn)化成高鐵血紅蛋白，高鐵血紅蛋白與氰離子（CN-）結(jié)合，生成穩(wěn)定的氰化高鐵血紅蛋白。用光電比色計在540nm波長比色。從HicN參考液制作的標準曲線上讀取血

2、紅蛋白克數(shù)。4 【原理】4【操作】 取試劑5毫升加入血液20ul混勻置5分鐘后用721光電比色儀，540nm波長，試劑為空白調(diào)0點比色，讀取光密度，查標準曲線得結(jié)果。5【操作】 5紅細胞計數(shù)(red blood cell簡稱RBC)顯微鏡直接計數(shù)(試管法)6紅細胞計數(shù)(red blood cell簡稱RBC)6【原理】 一定量的血液經(jīng)一定量等滲性稀釋液稀釋后，充入血細胞計數(shù)池中顯微鏡下計數(shù)一定容積內(nèi)的細胞，再換算成每升標本的細胞數(shù)報告。7【原理】7 【操作方法】 l、取紅細胞稀釋液2.0ml毫升，放入一小試管內(nèi)。 2、用血紅蛋白吸管吸血至l0ul處。 3、擦去管尖外部余血將血液迅速輕輕吹入盛有

3、紅細胞稀釋液的試管內(nèi)，吸上清液嗽洗吸管2-3次，立即搖勻。 8 【操作方法】8 4、用玻棒取混懸液少量，充入計數(shù)池內(nèi)。 5、待23分鐘，讓紅細胞完全下沉后，將計數(shù)板平放在顯微鏡臺上，用低倍鏡觀察，如紅細胞分布均勻即可換高倍鏡進行計數(shù)。9 4、用玻棒取混懸液少量，充入計數(shù)池內(nèi)。9 紅細胞計數(shù)的區(qū)域: 中心大方格中的5個中方格(正中一個和四角各一個)。 10 紅細胞計數(shù)的區(qū)域:10 計數(shù)原則: 數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的計數(shù)原則即凡壓在中方格邊線(雙線)上的紅細胞，只計上側(cè)與左側(cè)線上的細胞，而壓在下側(cè)與右側(cè)線上者不計入。11 計數(shù)原則:11【計算】 紅細胞數(shù)/L=5個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)51020110

4、6或 紅細胞數(shù)/L=5個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)1001012 式中5 5個中方格換算成1個大方格 10 1個大方格容積為0.1ul，換算成1.0 uL。 201 血液的稀釋倍數(shù) 106 由u1換算成L12【計算】1213131414151516161717【注意事項】 1、吸管、試管要注意清潔、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血凝塊應(yīng)重新采血。 同時做血紅蛋白測定，白細胞計數(shù)和分類計數(shù)，在采血時應(yīng)先做血膜再做紅細胞，然后做白細胞，血紅蛋白檢驗，避免紅細胞破壞。 18【注意事項】18 2、充液： 充液前，紅細胞復(fù)液要充分搖勻，紅細胞懸液注入計數(shù)池內(nèi)要求分布均勻，不可有氣泡，亦不可有多余液體外溢。 19 2、充液：19 3、質(zhì)量控制： 中方格內(nèi)紅細胞分布應(yīng)均勻，健康成人每中方格紅細胞數(shù)約為80100個，各中方格內(nèi)之紅細胞相近，如懸殊過大(超過10個細胞以上的)應(yīng)重混勻再充填。20 3