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文檔簡介
1、第四章 微生物學質量控制實驗動物質量控制遺傳質量控制微生物質量控制營養(yǎng)質量控制環(huán)境質量控制實驗動物按微生物學控制的分類按對微生物學質量的控制,可將實驗動物分為四類:無菌動物(Germfree animal, GF)和悉生動物(Gnotobiotic animal, GN)無特定病原體動物(Specific pathogen free animal, SPF)清潔動物(Clean animal, CL)普通動物(Conventional animal, CV)實驗動物微生物等級2001版國家標準根據(jù)微生物和寄生蟲等級對實驗動物等級進行了重新設定。小鼠 清潔級 SPF級 無菌級大鼠 清潔級 SPF
2、級 無菌級地鼠 普通級 清潔級 SPF級 無菌級 豚鼠 普通級 清潔級 SPF級 無菌級家兔 普通級 清潔級 SPF級 無菌級犬 普通級 SPF級猴 普通級 SPF級第一節(jié) 無菌動物(Germfree animal,簡稱GF)定義:指用現(xiàn)有的實驗手段檢測,動物的體表體內不攜帶其它生命體(包括一切微生物和寄生蟲)的實驗動物。飼養(yǎng)條件:無菌隔離器內來源:第一代通過無菌剖腹產(chǎn)術,人工哺乳獲得;以后通過無菌動物雌雄交配繁殖或無菌剖腹產(chǎn)術,保姆鼠代奶擴群。種 類 培育者及育成時間小 鼠 Pleasants,1959大鼠 Reyniers1946;Gustafsson,1948豚鼠 Miyakawa195
3、8; Tanami,1959;兔 Wostmann1959; Luckey,1963狗 Glimsedt,1946貓 Bleby,1969山羊、綿羊 Smith,1961,1966豬 Whitenair,1960馬 Drummond等,1973猴 Reyniers,1942雞 Reyniers,1943鵪鶉 Woodard等,1965;Miles,1966無菌動物特點:1.微生物特點: 在動物體內外任何部位均檢不出任何活的微生物和寄生蟲。 “無菌”是個相對的概念,只是根據(jù)現(xiàn)有的科學知識和檢驗方法在一定時期內不能檢出病原體而已。隨著科學技術的發(fā)展,現(xiàn)在認為是無菌的動物或許將來可以檢出病原體而不是
4、無菌動物。2.形態(tài)學特點:消化系統(tǒng) (1)盲腸肥大, (2)腸道肌層薄,腸絨毛變細變短 (3)肝臟變小循環(huán)系統(tǒng) (1)心臟變小 (2)白細胞數(shù)變少,且數(shù)量波動范圍小免疫系統(tǒng)(1)胸腺,淋巴組織,網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)發(fā)育不良(2)脾臟小,無二級濾泡2.生理學特點: 免疫功能 (1)血清中IgG、IgM水平低,幾乎不存在丙種球蛋白和特異性抗體 (2)免疫應答速度慢,過敏反應、對異體移植物的排斥反應以及自身免疫現(xiàn)象消失或減弱生長率 (1)不同種屬不同 (2)無菌鳥類生長率高于同種普通鳥 (3)無菌大、小鼠與普通鼠差不多 (4)無菌豚鼠和無菌兔比普通的慢生殖(1)無菌大、小鼠略高于普通大小鼠(2)豚鼠和兔繁殖
5、能力比普通級低代謝和營養(yǎng) 無菌動物血中含氮量少,腸管對水的吸收率低,代謝周期比普通動物長 體內不能合成維生素B和K,易產(chǎn)生這兩種維生素的缺乏癥抗輻射能力 無菌動物抗輻射能力強,抗實驗性燙傷和抗休克死亡能力也強于普通動物壽命 無菌動物的壽命普遍長于普通動物第二節(jié) 悉生動物(Gnotobiotic animal,簡稱GN)定義:又稱已知菌動物,指動物體內帶有明確的微生物種類的動物。飼養(yǎng)條件:無菌隔離器內來源:人為將已知的微生物投給無菌動物,使其體內帶有已知菌 單菌動物 雙菌動物 多菌動物悉生動物特點:微生物特點體內攜帶有已知微生物來源無菌動物植入微生物飼養(yǎng)管理 必須飼養(yǎng)在溫濕度恒定的百級空氣凈化的
6、隔離系統(tǒng)中,實行嚴格的微生物控制。其他 與無菌動物比較。 悉生動物腸道內存在細菌可以合成維生素,不會像無菌動物一樣發(fā)生維生素缺乏癥。 抵抗力、生活力較強,易于飼養(yǎng)管理。無菌動物和悉生動物的應用 1、病因學的研究如:貓瘟、齲齒的形成 2、微生物學中的研究 (1)微生物間的拮抗作用 (2)微生物和宿主之間關系 (3)病毒學研究 3、免疫學研究中的應用 無菌動物體內既無抗原也無特異性抗體,處于一種“原始狀態(tài)”,很適合用于各種免疫功能的研究。 如,無菌動物暴露于微生物,先產(chǎn)生球蛋白,再產(chǎn)生球蛋白,最后產(chǎn)生球蛋白。 制備高效價,無交叉反應的特異性抗體 4、腫瘤學研究 如,制備人體腫瘤模型需要免疫抑制動物
7、,而普通動物給予免疫抑制劑后常繼發(fā)感染死亡,所以可以應用無菌動物。 研究垂直傳染的致癌病原,如白血病病毒。 某些微生物的代謝產(chǎn)物可以降解無害的蘇鐵素,使其致癌。5、老年病學研究 無菌動物普遍壽命比普通動物長,說明微生物和機體老化有關。 普通大鼠壽命2年,而無菌大鼠壽命34年。6、營養(yǎng)學的研究 無菌動物是研究營養(yǎng)的良好模型,很多營養(yǎng)成分是靠細菌產(chǎn)生的。如VB和VK是靠腸道細菌合成的,無菌動物體內不能合成VB和VK,所以可以用來研究哪些細菌合成了哪些維生素。7、放射醫(yī)學研究 無菌動物可以耐受大劑量的放射線照射??捎脜^(qū)別放射引起的癥狀和繼發(fā)感染的癥狀。8、毒理學研究 如:研究發(fā)現(xiàn)青霉素過敏是因為腸道
8、菌代謝引起,而非青霉素本身。豆類中毒也是由腸道細菌的代謝活動引起的。9、心血管病研究 實驗證實腸道微生物可以分解膽汁酸,降低血液中膽固醇水平。10、宇航中應用 可以用來攜帶地外微生物。第三節(jié) 無特定病原體動物(Specific pathogen free animal,簡稱SPF動物)定義:指不攜帶特定病原體(細菌、病毒、寄生蟲),但帶有未知的微生物群的動物。飼養(yǎng)條件:屏障系統(tǒng)內大規(guī)模生產(chǎn)/隔離器內保種最初來源:將無菌動物/悉生動物轉移到屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng)繁殖SPF動物特點:1、微生物特點 SPF動物除一、二級動物應排除的病原體外,不攜帶主要潛在感染或條件致病和對研究實驗干擾大的病原。2、來源 S
9、PF動物來源于無菌動物或剖腹產(chǎn)動物。3.飼養(yǎng)管理 SPF動物必須飼養(yǎng)在溫濕度恒定的萬級空氣凈化的屏障系統(tǒng)中,實行嚴格的微生物控制。SPF動物的應用: 目前國際上公認SPF動物適用于所有科研實驗,是國際標準級別的實驗動物。它的應用價值在于它無人畜共患病,無主要傳染病,無對實驗研究可能產(chǎn)生干擾的微生物。各種疫苗生產(chǎn)所采用的動物應為SPF動物。第四節(jié) 清潔動物(Clean animal,簡稱CL動物)定義:微生物控制級別介于SPF動物和普通動物之間的動物飼養(yǎng)條件:屏障系統(tǒng)大規(guī)模生產(chǎn)來源:SPF動物擴群應用:各種科研、教學用大小鼠清潔級動物特點:1、微生物特點 清潔級動物比普通級動物要求排除的微生物和
10、寄生蟲多,但比SPF動物少。清潔級動物除肉眼觀察無病外,尸體解剖時,主要臟器、組織無論是肉眼觀看還是病理組織切片均應無病變。2、來源 清潔動物來源于SPF動物、無菌動物、悉生動物或剖腹產(chǎn)動物。3、飼養(yǎng)管理 清潔級動物飼養(yǎng)于溫濕度恒定的萬級空氣凈化的屏障系統(tǒng)中。 其所用的飼料、墊料、飲用水、籠器具等都經(jīng)過消毒滅菌處理。 工作人員需換滅菌工作服、鞋、帽、口罩等進入動物室進行操作。清潔級動物的應用: 清潔級動物是根據(jù)我國國情而設立的等級動物。 它較普通級動物健康,又較SPF級動物易達到質量標準,在動物實驗中可免受動物疾病的干擾,其敏感性與重復性亦較好。 目前在我國已成為適用于科研的標準級別的實驗物。
11、第五節(jié) 普通動物(Conventional animal,簡稱CV動物)定義:不帶有嚴重危害動物自身健康和人獸共患病病原體的動物。飼養(yǎng)條件:普通開放環(huán)境來源:經(jīng)微生物學檢查不帶有上述病原體的動物,或SPF動物降級。應用:豚鼠、兔、犬、猴等大動物的實驗研究。普通動物特點:1、微生物學特點 要求不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原和動物烈性傳染病的病原。2、飼養(yǎng)管理 飼養(yǎng)于開放系統(tǒng)。但仍然對溫度,濕度,飼料,墊料,飲水,衛(wèi)生等有一定控制。3、生理學特點 外觀健康,飲食排泄正常,無異常分泌物,無臨床癥狀,臟器無眼觀病灶。普通動物的應用:僅可作為生物醫(yī)學中教學示教之用,或作為某些科學研究為探索方法而從事的予試
12、驗之用,不可供科研、生產(chǎn)和檢定之用,由于普通級動物繁殖力強,生產(chǎn)量大,生產(chǎn)成本低,適宜作一般性的教學實驗和預實驗用。第六節(jié) 潔凈動物與普通動物的比較潔凈動物通常是指來源于剖腹產(chǎn)、實行嚴格的微生物控制、飼養(yǎng)于空氣凈化系統(tǒng)設施內的動物,包括清潔動物、SPF動物、悉生動物和無菌動物。潔凈動物與普通動物相比,在很多方面均存在一定差異。一、微生物控制比較種 類 飼育環(huán)境 說 明無菌動物 隔離系統(tǒng) 無法檢出任何生命體悉生動物 隔離系統(tǒng) 確知帶有的微生物SPF動物 屏障系統(tǒng) 確知不帶有的微生物清潔動物 屏障系統(tǒng) 確知不帶有的微生物普通動物 開放系統(tǒng) 微生物情況不明確二、對科研實驗結果影響的比較 GF SPF
13、 CL CV傳染病 無 無 無 未知寄生蟲 無 無 無 未知試驗結果 明確 明確 明確 有疑問用動物數(shù) 少 少 較少 多或大量統(tǒng)計價值 很好 可能好 較好 不準確長期實驗 好 好 可能好 困難死亡率 很少 少 較少 高長期實驗成活率100% 90% 80% 40%實驗標準設計 可能 可能 可能 不可能結果討論價值 很高 高 較高 有疑問總之,使用無菌動物、悉生動物、及SPF動物和清潔級動物,由于有明確的微生物背景和可控的飼育環(huán)境,可大大提高動物實驗的重復性和準確性,因而得到廣泛的應用。三、生物學特性的比較 潔凈動物與普通動物相比,在血液學、血液生化指標及主要臟器系數(shù)方面均產(chǎn)生一定變化。 如清潔
14、級大鼠與普通大鼠相比,白細胞較少,其中中性粒細胞少,淋巴細胞相對增加;血清堿性磷酸酶、膽紅素、膽固醇值較高;尿素氮、肌酐值比較低;空腸淋巴結、脾臟較輕;肺、腎組織形態(tài)比普通大鼠健康。第七節(jié) 潔凈動物的培育一、無菌動物的培育 無菌動物的理論基礎和實踐依據(jù):胎盤屏障和屏障觀念。1、無菌手術小哺乳動物動物:子宮切除術(剖腹產(chǎn))大哺乳動物動物:子宮切開術(剖腹產(chǎn))鳥類:消毒卵2、哺乳人工哺乳代乳注意:供胎動物:不攜帶垂直傳播的微生物手術時間的選擇手術速度無菌操作環(huán)境溫度防止羊水嗆入呼吸道手術后微生物的檢查代乳動物的準備3.放入隔離器進行飼養(yǎng)二、悉生動物的培育程序(1)獲取無菌動物(2)準備好特定的微生
15、物材料(3)把上述材料轉入無菌飼育隔離器(4)在隔離器內給無菌動物授入微生物三、SPF動物和清潔動物 將無菌動物或悉生動物飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)使其自然感染特定微生物以外的微生物,但應嚴格防范特定病原體的污染,并需要定期檢查。第八節(jié) 衛(wèi)生防疫一、傳染病流行環(huán)節(jié)1、傳染源: 有癥狀或無癥狀的病原攜帶者2、傳播途徑:3、易感動物傳播途徑:水或食物傳播空氣飛沫傳播蟲媒傳播接觸傳播:直接或間接垂直傳播二、防疫與隔離措施1、小型實驗動物一旦染病,不可用藥治療和疫苗接種原因:干擾實驗結果成為潛在感染源經(jīng)濟上不合算2、應采取嚴格的飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生防疫制度預防和控制措施預防措施1)從有資質的實驗動物供應商處采購動物2)
16、制定科學的飼養(yǎng)管理和操作規(guī)程,嚴格按操作規(guī)程進行飼養(yǎng)管理和動物實驗3)定期進行微生物學監(jiān)測4)徹底消滅飼養(yǎng)室內外的野鼠5)大動物接種疫苗2. 控制措施1)重要傳染病感染要及時捕殺、消毒、隔離2)大動物隔離治療3)不明死亡原因要剖檢明確診斷傳染性疾病對實驗動物生產(chǎn)和動物實驗研究的影響引起動物死亡和質量下降(鼠痘、仙臺病毒感染、兔瘟、犬出血性腸炎等)人獸共患?。馨图毎}絡叢腦膜炎病毒感染、流行性出血熱、B病毒感染第九節(jié) 實驗動物常見的傳染性疾病易污染實驗動物組織培養(yǎng)的病毒 動物種類 病 毒 種 類猿猴犬兔豚鼠倉鼠大鼠小鼠雞SV40、腺病毒、皰疹病毒、腸道病毒、泡沫病毒腺病毒、皰疹病毒、副流感病毒
17、、呼腸孤病毒痘病毒、乳多空病毒、皰疹病毒皰疹病毒、副流感病毒、逆轉錄病毒微小病毒、淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒微小病毒、皰疹病毒、冠狀病毒淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒、呼腸孤病毒、乳多空病毒、白血病病毒、冠狀病毒白血病病毒、腺病毒、皰疹病毒、粘病毒一、常見人畜共患病毒性疾病 1. 流行性出血熱病毒感染(Epidemic hemorrhagic fever virus infection)病原:流行性出血熱病毒(Bunyaviridae, Hantavirus)流行病學: 傳染源:帶毒野鼠和實驗大鼠 傳播途徑:咬傷接觸傳播,氣溶膠吸入 易感動物:大小鼠及其它嚙齒類動物臨床癥狀:大小鼠無臨床癥狀,人感染后
18、得流行性出血熱,典型表現(xiàn)有發(fā)熱、出血和腎臟損害三類主要癥狀 診斷:血清學檢查,病毒分離預防和控制: 預防:飼養(yǎng)區(qū)內外捕殺野鼠,不從無生產(chǎn)許可證單位購買動物。 控制:捕殺血清學檢查陽性大小鼠鼠,消毒、隔離2. 淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒感染(Lymphocytic choriomeningitis virus infection)病原:LCMV(Arenaviridae, Lymphocytic choriomeningitis virus)流行病學: 傳染源:感染LCMV的野小鼠或實驗小鼠 傳播途徑:接觸傳播,垂直傳播 易感動物:小鼠、倉鼠、人臨床癥狀:小鼠無癥狀,人流感樣、腦膜炎LCMV is
19、 transmitted by the common house mouse, Mus musculus, which sheds the virus in its urine. Humans become infected by inhaling aerosolized particles of rodent excrement, by ingesting food contaminated with the virus or by direct contact of mucus membranes with infected fluids (lab and pets). Lymphocyt
20、ic choriomeningitis (LCM) virus, a rodent-borne arenavirus, can infect humans throughout temperate regions of Europe and North America ,Moreover, clinicians may confuse congenital LCM virus infections of infancy with other congenital infections, especially CMV or toxoplasmosis, because of their clin
21、ical similarities. Wright, R. et al. Pediatrics 1997;100:e9診斷:血清學檢查,樣品腦內注射預防和控制:徹底消滅飼養(yǎng)室周圍的野鼠和家鼠,避免鼠類的排泄物污染的飲食,避免吸入被污染的塵埃。 3. 猴皰疹病毒感染(B-Virusinfection)病原:Cercopithecine Herpesvirus Type 1流行病學:傳染源:感染B病毒的非人靈長類動物 傳播途徑:接觸傳播(咬傷、抓傷) 易感動物:猴、人臨床癥狀:發(fā)熱、頭痛、器官壞死、出血性休克、嚴重致死診斷:血清學檢查預防和控制:對進入實驗室的猴做徹底的檢疫,避免接觸野生猴類4.
22、狂犬?。≧abies)病原:Rhabdovirus流行病學:傳染源:感染Rhabdovirus的犬、貓、狼和蝙蝠等 傳播途徑:接觸傳播(唾液) 易感動物:所有哺乳動物 臨床癥狀:潛伏期、前驅期、急性神經(jīng)癥狀期和麻痹期即昏迷死亡期 電鏡下的狂犬病病毒 狂犬病病毒的結構模式圖 診斷:1.狂犬病特異性抗原 2.在腦組織中存在Negri體(狂犬病病毒包涵體)3.在腦組織或唾液中用細胞培養(yǎng)分離到病毒預防和控制:禁止野犬進入動物房周圍,對實驗犬和實驗人員接種狂犬病疫苗二. 立克次體疾病立克次體是介于細胞與病毒之間的微生物,具有以下特點: 需在活細胞內生長,在代謝衰退的細胞內生長旺盛; 具典型的細胞壁、有D
23、NA和RNA,呈短小、多形性球桿狀,染色后光學顯微鏡可以查見 對抗生素敏感 人畜共患的實驗動物立克次體疾病疾病名稱病原感染媒介動物人類臨床癥狀傳染途徑昆士蘭熱:Q熱 (Q fever)Coxiella burnetii畜禽類(綿羊、山羊、牛、豬、犬、雞)發(fā)熱、發(fā)抖、頭痛、虛弱、不適、出汗,有些病例引發(fā)肺炎伴有咳嗽、胸痛等癥狀。另外也有急性或慢性肉芽腫型肝炎的報告空氣感染、消化道亦可感染、尿、糞便、乳汁污染均可感染貓抓熱 (Cat-Scratch fever)Bartonella henselae貓、犬、猴、豬傷口出現(xiàn)紅斑丘疹數(shù)日后形成皰痂、淋巴結炎,發(fā)熱、不適、厭食、頭痛、脾腫大咬傷、抓傷立克
24、次體痘或斑疹熱(Rickettsial pox)Rickettwsia akari小鼠、大鼠、田鼠皮膚有丘疹、發(fā)冷、發(fā)熱、頭痛、肌痛由螨蟲傳染三. 人畜共患常見細菌性疾病1. 沙門氏菌?。⊿almonella)病原:沙門氏菌流行病學: 傳染源:患病動物和無癥狀帶菌動物 傳播途徑:消化道 易感動物:嚙齒類、兔臨床癥狀:突然死亡,腹瀉診斷:臨床癥狀,病原菌分離Salmonella species are Gram-negative, flagellated facultatively anaerobic bacilli characterized by O, H, and Vi antigens.
25、 There are over 1800 known serovars which current classification considers to be separate species. 豚鼠的脾臟病變小鼠肝臟病變預防和控制:對動物的食物和飲水進行嚴格消毒,一旦發(fā)現(xiàn)有動物染病,立即撲殺并對環(huán)境徹底消毒。1. 布氏桿菌?。˙rucellosis)病原:Brucella suis流行病學: 傳染源:患病犬、牛、豬、羊 傳播途徑:接觸感染(口、皮膚、黏膜) 易感動物:犬、牛、豬、羊臨床癥狀:體重減輕、睪丸炎、不育診斷:臨床癥狀,病原菌分離四. 常見的影響實驗動物生產(chǎn)的疾病1. 鼠痘(Mou
26、se pox, Infectious ectromelia)病原學:鼠痘病毒(Poxviridae, mouse poxvirus)流行病學: 傳染源:病鼠,野生小鼠很少發(fā)生 傳播途徑:接觸傳播、消化道傳播 易感動物:小鼠(某些品系易感,某些品系抵抗)臨床癥狀:痘斑、脫腳、斷尾診斷:流行病學,臨床癥狀,病毒分離,實驗室檢查預防和控制: 預防:嚴格執(zhí)行規(guī)章制度,不從無生產(chǎn)許可證單位購買動物。 控制:捕殺病鼠,消毒飼養(yǎng)室2. 仙臺病毒感染(Sendai virus infection)病原學:仙臺病毒(Paramyxoviridae, Sendai virus)流行病學: 傳染源:病鼠 傳播途徑:
27、呼吸道 易感動物:所有實驗動物臨床癥狀:肺炎Sendai virus is a member of the paramyxoviridae. It is a single-stranded RNA virus which is able to transfect both dividing and non-dividing cells. Its method of entering cells involves sialic acid and cholesterol which are common to many cell types. Sendai viral gene expressio
28、n and replication are localized in the cytoplasm in contrast to most viruses that need to enter the nucleus. Sendai virus is non-integrating so gene expression following gene transfer is short-lived.仙臺病毒感染肺病變對麻醉實驗和吸入毒理學研究等產(chǎn)生嚴重干擾診斷:流行病學,臨床癥狀、實驗室檢查預防和控制:引進動物時執(zhí)行嚴格的檢疫制度,發(fā)現(xiàn)感染鼠后及時撲殺,剖腹產(chǎn)重建鼠群3. 鼠肝炎(Mouse hepatitis)病原:鼠肝炎病毒(Coronaviridae, Mouse hepatitis virus)流行病學: 傳染源:隱性感染鼠、病鼠 傳播途徑:消化道,接觸傳播 易感動物:小鼠臨床癥狀:乳鼠死亡,裸鼠“waste syndrome”感染鼠肝炎的裸鼠waste syndrome裸鼠的肝臟病變診斷:流行病學,臨床癥狀、實驗室檢查預防和控制:引進動物時執(zhí)行嚴格的檢疫制度,發(fā)現(xiàn)感染鼠后及時撲殺,剖腹產(chǎn)重建鼠群4. 犬細小病毒?。–anine Parvovirus
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