DHA對(duì)MC增生的抑制作用

1、DHA對(duì)MC增生的抑制作用DHA對(duì)MC增生的抑制作用摘要目的:觀察二氫青蒿素(DHA)對(duì)大鼠系膜細(xì)胞(MC)增生的抑制作用.方法： 采用MTT摻入方法,觀察不同濃度DHA和不同作用時(shí)間各組體外培養(yǎng)的MC增生 水平.結(jié)果：DHA對(duì)MC增殖有顯著的抑制作用，代寫碩士論文其抑制作用呈濃度 依賴性和時(shí)間依賴性.LD50為197p mol/L. DHA作用72 h后，從0到 100mol/L濃度梯度，以100mol/L對(duì)MC增生的抑制作用最為顯著；DHA 30mol/L作用072 h,以72 h對(duì)MC增生的抑制作用最為顯著(P001).結(jié)論: DHA能夠抑制大鼠MC增生.關(guān)鍵詞 二氫青蒿素； 系膜細(xì)胞；

2、 MTT系膜細(xì)胞(mesangial cells, MC)是腎小球中主要固有細(xì)胞之一，MC增生及由 此引起的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)分泌增加最終導(dǎo)致腎小球硬化.因此MC的增生在腎小 球硬化的發(fā)生發(fā)展中起重要作用.二氫青蒿素(dihydroartemisinin, DHA)是中 草藥青蒿的提取物青蒿素及其衍生物在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物和有效成份.近年的研究 報(bào)道,青蒿素及其衍生物對(duì)腫瘤細(xì)胞在體外有殺傷作用,能顯著抑制體外培養(yǎng)腫 瘤細(xì)胞的異常增殖1,并對(duì)大鼠移植纖維肉瘤的生長(zhǎng)有抑制作用2.本實(shí)驗(yàn)觀 察DHA對(duì)MC增生的抑制作用，旨在初步探討DHA對(duì)腎臟疾病的治療作用.1. 材料與方法材料大鼠腎小球系膜細(xì)胞株由

3、上海第二軍醫(yī)大學(xué)梅長(zhǎng)林教授惠贈(zèng)；MTT購自美國 Sigma公司;酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(ELX-800)美國Bio-Tek公司制造;細(xì)胞培養(yǎng)箱(311 型)美國Thermo Forma公司制造；DHA購自重慶華立武陵山制藥有限公司.DHA 的配制：以少量二甲基亞硯(DMS0)溶解DHA配成濃度為02 mol/L的母液，超聲 波助溶，4C保存;實(shí)驗(yàn)前用培養(yǎng)基稀釋至所需濃度(DMSO終濃度小于01%).鼠MC培養(yǎng)從液氮罐內(nèi)取出凍存管,37C水浴5min后1 000 r/min離心5 min,棄上清，用 培養(yǎng)基吹懸后，移入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中靜置培養(yǎng).培養(yǎng)基由10%小牛血清、100 U/mL 青霉素、100 mg/

4、L鏈霉素和DMEM組成培養(yǎng)瓶置于5% CO2, 37C飽和濕度條件 下培養(yǎng)當(dāng)系膜細(xì)胞生長(zhǎng)至貼壁75%80%融合時(shí)，用025%胰蛋白酶與004%乙二 胺四乙酸二鈉(EDTA)等量混合,消化細(xì)胞傳代.第三代時(shí)，用RPMI1640代替DMEM, 其他成分相同.1.3大鼠MC增生水平測(cè)定將MC接種入96孔板中，每孔加入5X103個(gè)細(xì)胞含10%小牛血清的RPMI1640培 養(yǎng)基200L, 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱37C靜置培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁(一般為12h,顯微鏡 觀察確定)棄上清，每空加入無血清RPMI1640培養(yǎng)基200L同步化(24 h);棄 上清，加入含不同濃度DHA (0, 01, 03, 1, 3,

5、10,30, 100mol/L)的 RPIM1640完全培養(yǎng)基(每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔)分組，設(shè)對(duì)照組1組：DHA0mol/L;設(shè) 實(shí)驗(yàn)組7組,其濃度分別為01, 03,1, 3, 10, 30, 100mol/L于刺激結(jié)束前 4 h加入MTT (5g/L) 10L/孔，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱37C繼續(xù)培養(yǎng)4 h,棄上清，空 干，每孔加入DMSO 150L,90r/min搖浴10 min (室溫避光)，用酶聯(lián)免疫檢測(cè) 儀(ELX-800)測(cè)量，以波長(zhǎng)570 nm處的吸光度值(A570)表示.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所得數(shù)據(jù)以-X 土 s表示,采用單因素方差分析(One-way ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì).兩兩比 較,方差

6、齊者米用LDS檢驗(yàn)，方差不齊者米用Tamhane檢驗(yàn).米用Probit分析確 定 LD50.2結(jié)果2.1不同濃度DHA作用72 h對(duì)大鼠MC增生水平的影響經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，隨著DHA濃度增加，MC增生逐漸降低，并呈劑量依賴性關(guān)系.DHA (30mol/L)作用不同時(shí)間對(duì)大鼠MC增生水平的影響經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，隨著DHA作用時(shí)間的增加,MC增生水平逐漸減低,并呈時(shí)間依賴 關(guān)系。DHA對(duì)MC生長(zhǎng)的LD50MTT法測(cè)定DHA對(duì)MC生長(zhǎng)的LD50為197mol/L,表現(xiàn)有較強(qiáng)的抑制細(xì)胞增殖 的作用.LD50為抑制MC增殖達(dá)到50%時(shí)的DHA濃度.DHA對(duì)MC生長(zhǎng)的影響沒有DHA的作用時(shí)MC 72 h后生長(zhǎng)狀況

7、好，細(xì)胞融合生長(zhǎng)達(dá)95%以上,見圖3. DHA30P mol/L作用72 h后細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好，但細(xì)胞增殖受到抑制.3討論青蒿素于1972年從中草藥青蒿中提取出來,其作為抗瘧藥物,對(duì)抗奎寧的瘧疾有 極強(qiáng)的作用,而沒有嚴(yán)重的毒副作用.迄今,青蒿素及其衍生物已經(jīng)用于超過一百 萬的瘧疾病例.由于二氫青蒿素的安全性,其在東南亞、非洲等地被廣泛的運(yùn)用.Ilett 等人的研究中, 隨機(jī)選取數(shù)十名越南瘧疾患者, 給予二氫青蒿素 160 mg, 9 min后可達(dá)峰值血藥濃度14mol/L3.這一數(shù)值與本次研究所得LD50相接近, 說明二氫青蒿素在人體可能達(dá)到抑制系膜細(xì)胞增殖所需的血藥濃度,從而發(fā)揮治 療腎小球疾病的作用.近年來的研究表明,青蒿素及其衍生物能顯著的抑制腫瘤細(xì)胞的增殖.其機(jī)制是