安賀拉滴眼液治療兔干眼癥的免疫病理學研究

1、安賀拉滴眼液治療兔干眼癥的免疫病理學研究【摘要】目的觀察安賀拉滴眼液應用于兔干眼癥治療的免疫病理學變化，初步討論安賀拉滴眼液治療干眼癥的可能機制。方法新西蘭白兔20只，制作堿燒傷干眼模型，隨機分為對照組和安賀拉組，分別滴生理鹽水和安賀拉滴眼液。用藥周后應用印跡細胞學和免疫病理學方法檢測結膜杯狀細胞密度、U5A陽性細胞率和炎性細胞浸潤密度。結果對照組結膜炎性細胞浸潤密度高于安賀拉組，安賀拉組杯狀細胞密度和U5A陽性細胞率均大于對照組P0.05。結論安賀拉滴眼液可以降低兔眼表的炎癥反響，促進杯狀細胞增殖，在干眼癥治療方面具有一定的應用前景。【關鍵詞】安賀拉滴眼液；干眼癥；兔；免疫病理學Abstra

2、t:bjetiveTdisusstheehanisfketrlatrethineeyedrpsinrabbitsdryeyeithalkaliburnsinnjuntivabybservingtheiunpathlgipressafteritasused.ethdsTentyrabbitdelsereestablishedbyburningithalkaliinnjuntiva,andthendividedinttgrupsrandly:theexperientalgruptreatedithketrlatrethineeyedrpsandthentrlgruptreatedithsaline

3、.Byusingiunpathlgitehniquesandipressinytlgytest,densityfgbletell,psitiveratefU5Aanddensityfinflaatryellinnjuntivaerestudiedthe4theekafterdrugused.ResultThedensityfgbletell,andpsitiveratefU5AinexperientalgrupashigherthanthatfntrlgrupandlerinthedensityfinflaatryellP0.05.nlusinKetrlatrethineeyedrpsanre

4、dueularsurfaeinflaatinandinreasethenuberfgbletellsinrabbits,suggestingitisvaluabletdryeye.Keyrds:ketrlatrethine；dryeye；rabbit；iunpathlgy干眼是指任何原因引起的淚液質(zhì)或量及動力學的異常,導致淚膜不穩(wěn)定和(或)眼外表的異常,并伴有眼部不適病癥的一類疾玻干眼的主要病癥有眼部枯燥、異物感、視疲勞、畏光及視力下降等,輕者影響工作和生活,嚴重者可導致眼表尤其是角膜組織枯燥、融解、穿孔,嚴重危害視功能。干眼作為最常見眼表疾病有日趨增多的趨勢，其藥物治療方法多種：淚液替代療法

5、、黏液溶解藥、部分自家血清、抗生素等。隨著干眼發(fā)病機制的深化研究，現(xiàn)已認識到由炎癥介質(zhì)介導的炎癥反響參與幾乎所有類型干眼的病理生理過程。本研究采用新型藥物安賀拉滴眼液作用兔干眼模型，研究其療效及可能的作用機制。1材料與方法1.3實驗方法50g/2L鹽酸氯丙嗪100g/2L氯氨酮肌肉注射麻醉兔,切除右眼第三眼瞼，并用2張166的濾紙條蘸1l/L的NaH溶液置于距兔角膜緣上方2的結膜上，90s后立即用100L生理鹽水反復沖洗結膜囊。術后對照組部分應用生理鹽水滴眼，每日3次；實驗眼部分應用安賀拉滴眼液,每日3次。用藥4周后行結膜印跡細胞學檢查，并取病變區(qū)結膜行組織病理學檢查和免疫組化染色檢測特異性黏

6、蛋白U5A的表達。1.3.1印跡細胞學檢查及PAS染色將孔徑為0.2的醋酸纖維膜剪成33大小，浸入蒸餾水34h，以消除濾紙外表活性，取出晾干高壓消毒備用。檢查前結膜囊先滴1愛爾卡因1滴，5in后，濾紙吸去穹隆部淚液，將醋酸纖維膜的粗糙面貼于距上方角膜緣2的球結膜外表，輕輕加壓，35s之后撕下，然后于其左右相鄰的區(qū)域再各貼一張，=95乙醇固定1030in，然后依次用0.5高碘酸氧化，過碘酸希夫染色劑peridiaidShiffstaining，PAS染色，側(cè)重亞硫酸漂洗，蘇木素復染，二甲苯透明，中性樹脂封片，置于雙目光學顯微鏡下觀察上皮細胞的連接，胞核胞漿的顏色，核漿比例N/，上皮細胞角化以及杯

7、狀細胞密度。1.3.2組織病理學檢查用藥4周取病變部位球結膜，生理鹽水沖洗干凈后放入10%甲醛固定液固定。流水沖洗固定組織過夜。依次進展乙醇梯度脫水，=70%乙醇15s，80%、90%、95%、100%乙醇各3h。二甲苯透明3次，每次10in。從低熔點石蠟到高熔點石蠟浸蠟共3次，每次1h。將浸蠟后的組織放入包埋盒內(nèi)，倒入熔化的高效切片石蠟，待凝固后取出石蠟塊。將石蠟塊安裝在切片機的組織固定架上用，調(diào)節(jié)切片厚度在46每個石蠟塊切23張切片。1.4結果斷定1.4.1印跡結膜杯狀細胞觀測分級根據(jù)NELSNs分級標準進展分級：0級：結膜上皮細胞形態(tài)正常，層次大小一致，胞漿藍綠色，N/為12，杯狀細胞密

8、集分布；1級：結膜上皮細胞輕度擴大，胞漿藍綠色，N/為13，杯狀細胞開場減少密度下降；2級：所有結膜上皮細胞均擴大，變扁平，胞漿藍綠色或粉紅色，N/為14或15，輕度角化。杯狀細胞明顯減少；3級：結膜上皮細胞漿內(nèi)出現(xiàn)顆粒狀物質(zhì)，核固縮崩解，上皮細胞胞漿呈粉紅色，N/為16或18，出現(xiàn)不同程度的角化，杯狀細胞完全喪失，視野下不見杯狀細胞。結膜杯狀細胞計數(shù)方法：計算每個動物所取3張標本中共10個高倍鏡400下杯狀細胞數(shù)目總數(shù)的平均值。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.1.4.2U5A陽性細胞檢測U5A陽性細胞內(nèi)有棕黃色顆粒，隨機統(tǒng)計100個結膜上皮細胞中陽性細胞數(shù)。1.4.3結膜炎性細胞浸潤程度斷定蘇木素復染

9、核顯示炎性細胞胞核，以每高倍視野下炎性細胞數(shù)目來斷定結膜結締組織中炎性細胞的浸潤密度。2結果用藥4周后，對照組結膜杯狀細胞為2級，安賀拉組為1級；對照組結膜炎性細胞浸潤密度高于安賀拉組，杯狀細胞密度、U5A陽性細胞率均小于安賀拉組見表1，圖1，圖2。表1兩組結膜病理學檢測指標比擬略Tab.1parisnfpathlgihangesinnjuntivabeteentgrups與對照組比擬：*P0.05;*P0.01圖1安賀拉組結膜杯狀細胞U5A免疫組織化學染色200略圖2對照組結膜杯狀細胞U5A免疫組織化學染色200略Fig.2U5Aiunhistheialstainingfgbletellin

10、thentrlgrup(200)3討論干眼癥患者因杯狀細胞減少，不能不斷地產(chǎn)生和分泌黏液，使結膜囊保持的光滑度下降，眼瞼與眼球間活動的摩擦力升高，淚膜的更新和穩(wěn)定下降，無法維持結膜和角膜的生理性潮濕和潤澤，從而出現(xiàn)一系列眼部不適的病癥和體征。長期在空調(diào)開放、空氣不流通的環(huán)境里工作或經(jīng)常從事注意力集中的工作或活動,如長時間使用電腦,在熒光屏前工作、閱讀的人容易引起干眼癥。研究說明，所有類型的干眼均與炎癥有關。干眼所促發(fā)的是一類非感染性、免疫相關性的炎癥反響，是在各種致炎因素的刺激下，眼部分出現(xiàn)的防疫性反響。安賀拉是一種新型非甾體抗炎藥，其通過抑制環(huán)氧化酶而阻斷花生四烯酸來抑制前列腺素的合成；穩(wěn)定肥大細胞，抑制組織胺、前列腺素等化學介質(zhì)的釋放；阻斷炎性介質(zhì)對眼部的刺激和損害，發(fā)揮較強的抗炎作用。本研究應用安賀拉滴眼液治療兔干眼模型，研究其療效及可能的作用機制。印跡細胞學檢查是一種簡便易行、無創(chuàng)傷、可重復性好的眼表細胞學檢查方法，間接反映杯狀細胞的分布和數(shù)量。通過印跡細胞學檢查，用藥4周后，安賀拉組結膜上皮細胞輕度擴大，N/為13，杯狀細胞為1級；而對照組結膜上皮細胞擴大變扁平