CpGODN的免疫刺激作用課件

1、CpG-ODN的免疫刺激作用 CpGODN的免疫刺激作用課件CpG-ODN的免疫刺激作用 CpGODN的免疫刺激作用課件CPG概念為非甲基化的胞嘧啶鳥(niǎo)嘌呤二核苷酸重復(fù)序列，即CpG 基序。一種免疫佐劑作用靶點(diǎn)TLR9細(xì)胞免疫，體液免疫CpGODN的免疫刺激作用課件CPG概念CpGODN的免疫刺激作用課件Th1免疫應(yīng)答慢性乙型肝炎患者細(xì)胞免疫低下HBV免疫耐受，持續(xù)感染腫瘤微小殘留病的清除CpGODN的免疫刺激作用課件Th1免疫應(yīng)答慢性乙型肝炎患者細(xì)胞免疫低下CpGODN的免疫CPG提高PBMC中Th1細(xì)胞CpGODN的免疫刺激作用課件CPG提高PBMC中Th1細(xì)胞CpGODN的免疫刺激作用課件

2、Th1占淋巴細(xì)胞百分比CpGODN的免疫刺激作用課件Th1占淋巴細(xì)胞百分比CpGODN的免疫刺激作用課件CPG提高PBMC中Th1 、Tc1細(xì)胞百分率*：與對(duì)照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作用課件CPG提高PBMC中Th1 、Tc1細(xì)胞百分率*：與對(duì)照CPG刺激BPMC分泌細(xì)胞因子*：與對(duì)照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作用課件CPG刺激BPMC分泌細(xì)胞因子*：與對(duì)照組比較，P0.0CPG誘導(dǎo)PBMC殺傷靶細(xì)胞收集CPG活化的PBMC細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：效應(yīng)細(xì)胞為CPG活化的PBMC；靶細(xì)胞為CFSE預(yù)染的K562細(xì)胞。對(duì)照組效應(yīng)細(xì)胞為未經(jīng)CPG活化的PBMC。效：靶20：

3、1，混合培養(yǎng)2h。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)靶細(xì)胞死亡率。CpGODN的免疫刺激作用課件CPG誘導(dǎo)PBMC殺傷靶細(xì)胞收集CPG活化的PBMCCpGOCPG誘導(dǎo)PBMC殺傷靶細(xì)胞CpGODN的免疫刺激作用課件CPG誘導(dǎo)PBMC殺傷靶細(xì)胞CpGODN的免疫刺激作用課件CFSE染色靶細(xì)胞濃度為5mol/ L 的CFSE （2羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯）工作液取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的靶細(xì)胞濃度108/ L細(xì)胞懸液與等體積CFSE 工作液混合37 孵育10 min。離心洗滌兩次后懸浮細(xì)胞備用CpGODN的免疫刺激作用課件CFSE染色靶細(xì)胞濃度為5mol/ L 的CFSE （2羧CFSE染色靶細(xì)胞CpGODN的免疫刺激作用

4、課件CFSE染色靶細(xì)胞CpGODN的免疫刺激作用課件實(shí)驗(yàn)結(jié)果 CpG活化PBMC對(duì)K562細(xì)胞的殺傷作用(N=5)CPG活化PBMC 16.855.14 %對(duì)照組8.622.83 %*：與對(duì)照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作用課件實(shí)驗(yàn)結(jié)果 CpG活化PBMC對(duì)K562細(xì)胞的殺傷作用(CIK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞CpGODN的免疫刺激作用課件CIK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞CpGODN的免疫刺激作用課件CIK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞CpGODN的免疫刺激作用課件CIK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞CpGODN的免疫刺激作用課件研究背景 通過(guò)主動(dòng)免疫、過(guò)繼特異性免疫、過(guò)繼非特異性免疫等方式，清除慢性乙肝患者體內(nèi)殘存的HBV，達(dá)到治

5、療效果。CpGODN的免疫刺激作用課件研究背景 通過(guò)主動(dòng)免疫、過(guò)繼特異性免疫、過(guò)繼非特研究背景 B淋巴細(xì)胞具有抗原遞呈細(xì)胞的性質(zhì)，同時(shí)具有CpG-ODN受體：TLR-9。本研究探討CpG-ODN誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞成為高效APC，使之具有類似于樹(shù)突狀細(xì)胞功能的可行性。CpGODN的免疫刺激作用課件研究背景 B淋巴細(xì)胞具有抗原遞呈細(xì)胞的性質(zhì)，同時(shí)具TOLL受體CpGODN的免疫刺激作用課件TOLL受體CpGODN的免疫刺激作用課件TOLL受體在血細(xì)胞中的表達(dá)CpGODN的免疫刺激作用課件TOLL受體在血細(xì)胞中的表達(dá)CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細(xì)胞負(fù)載核心抗原磁珠分選B淋巴細(xì)胞CPG活化B淋巴細(xì)

6、胞核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡檢測(cè)抗原負(fù)載狀況CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細(xì)胞負(fù)載核心抗原磁珠分選B淋巴細(xì)胞CpGODN的免疫刺磁珠分選B細(xì)胞分選前B細(xì)胞 7.89% 分選后B細(xì)胞 89.6% CpGODN的免疫刺激作用課件磁珠分選B細(xì)胞分選前B細(xì)胞 7.89% 分選后B細(xì)胞 89.活化B細(xì)胞負(fù)載抗原肽CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細(xì)胞負(fù)載抗原肽CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細(xì)胞負(fù)載核心抗原熒光顯微鏡觀察B細(xì)胞負(fù)載HBcAg18-27肽 CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細(xì)胞負(fù)載核心抗原熒光顯微鏡觀察B細(xì)胞負(fù)載HBcAg18APC與T細(xì)

7、胞作用機(jī)制CpGODN的免疫刺激作用課件APC與T細(xì)胞作用機(jī)制CpGODN的免疫刺激作用課件CPG對(duì)B細(xì)胞抗原遞呈相關(guān)分子的作用研究CpG2006、2216由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，全硫代化修飾對(duì)照組為含10%FCS的RPMI1640外周血PBMC，細(xì)胞量107/孔，37、5%CO2、48小時(shí)實(shí)驗(yàn)組加入CpG2006或CpG2216，終濃度均為1umol/mL，余同上CpGODN的免疫刺激作用課件CPG對(duì)B細(xì)胞抗原遞呈相關(guān)分子的作用研究CpG2006、22CpG提高淋巴細(xì)胞CD69表達(dá) T淋巴細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞 CD69表達(dá)率（%）*：與對(duì)照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作

8、用課件CpG提高淋巴細(xì)胞CD69表達(dá) T淋巴細(xì)胞 B細(xì)胞CD80、CD86表達(dá)對(duì)照組加CPG-ODN組加CPG-ODN組CpGODN的免疫刺激作用課件B細(xì)胞CD80、CD86表達(dá)對(duì)照組加CPG-ODN組加CPGCpG提高B細(xì)胞表面CD80、CD86的表達(dá) CD80 CD86CD80、CD86表達(dá)率（%）*：與對(duì)照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作用課件CpG提高B細(xì)胞表面CD80、CD86的表達(dá) B細(xì)胞MHC-、MHC-表達(dá)對(duì)照組加CPG-ODN組CpGODN的免疫刺激作用課件B細(xì)胞MHC-、MHC-表達(dá)對(duì)照組加CPG-ODN組CpCpG提高B細(xì)胞表面MHC-、MHC-的表達(dá) MHC

9、-MHC-MHC表達(dá)量（MFI）*：與對(duì)照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作用課件CpG提高B細(xì)胞表面MHC-、MHC-的表達(dá) 活化B細(xì)胞誘導(dǎo)CTL負(fù)載了抗原的活化B細(xì)胞與淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)(含IL-2的RPMI1640培養(yǎng)液).收集細(xì)胞,以五聚體技術(shù)檢測(cè)HBV特異性CTL.實(shí)驗(yàn)組特異性CTL為0.500.19%，對(duì)照組為0.200.10%。 CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細(xì)胞誘導(dǎo)CTL負(fù)載了抗原的活化B細(xì)胞與淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)特異性CTL誘導(dǎo)Pro5TM MHC Pentamers檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組HBcAg18-27抗原特異性CTL（Q2-1區(qū)）。前者為對(duì)照組（未加APC），后者為實(shí)驗(yàn)組（加APC）。CpGODN的免疫刺激作用課件特異性CTL誘導(dǎo)Pro5TM MHC Pentamers檢測(cè)結(jié)論CpG能夠活化B細(xì)胞，對(duì)T細(xì)胞無(wú)明顯的作用CpG能夠提高B細(xì)胞表面抗原遞呈相關(guān)分子的表達(dá)CPG誘導(dǎo)PBM