CpGODN的免疫刺激作用課件

1、CpG-ODN的免疫刺激作用 CpGODN的免疫刺激作用課件CpG-ODN的免疫刺激作用 CpGODN的免疫刺激作用課件CPG概念為非甲基化的胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸重復序列，即CpG 基序。一種免疫佐劑作用靶點TLR9細胞免疫，體液免疫CpGODN的免疫刺激作用課件CPG概念CpGODN的免疫刺激作用課件Th1免疫應答慢性乙型肝炎患者細胞免疫低下HBV免疫耐受，持續(xù)感染腫瘤微小殘留病的清除CpGODN的免疫刺激作用課件Th1免疫應答慢性乙型肝炎患者細胞免疫低下CpGODN的免疫CPG提高PBMC中Th1細胞CpGODN的免疫刺激作用課件CPG提高PBMC中Th1細胞CpGODN的免疫刺激作用課件

2、Th1占淋巴細胞百分比CpGODN的免疫刺激作用課件Th1占淋巴細胞百分比CpGODN的免疫刺激作用課件CPG提高PBMC中Th1 、Tc1細胞百分率*：與對照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作用課件CPG提高PBMC中Th1 、Tc1細胞百分率*：與對照CPG刺激BPMC分泌細胞因子*：與對照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作用課件CPG刺激BPMC分泌細胞因子*：與對照組比較，P0.0CPG誘導PBMC殺傷靶細胞收集CPG活化的PBMC細胞毒性實驗：效應細胞為CPG活化的PBMC；靶細胞為CFSE預染的K562細胞。對照組效應細胞為未經(jīng)CPG活化的PBMC。效：靶20：

3、1，混合培養(yǎng)2h。流式細胞術檢測靶細胞死亡率。CpGODN的免疫刺激作用課件CPG誘導PBMC殺傷靶細胞收集CPG活化的PBMCCpGOCPG誘導PBMC殺傷靶細胞CpGODN的免疫刺激作用課件CPG誘導PBMC殺傷靶細胞CpGODN的免疫刺激作用課件CFSE染色靶細胞濃度為5mol/ L 的CFSE （2羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯）工作液取對數(shù)生長期的靶細胞濃度108/ L細胞懸液與等體積CFSE 工作液混合37 孵育10 min。離心洗滌兩次后懸浮細胞備用CpGODN的免疫刺激作用課件CFSE染色靶細胞濃度為5mol/ L 的CFSE （2羧CFSE染色靶細胞CpGODN的免疫刺激作用

4、課件CFSE染色靶細胞CpGODN的免疫刺激作用課件實驗結果 CpG活化PBMC對K562細胞的殺傷作用(N=5)CPG活化PBMC 16.855.14 %對照組8.622.83 %*：與對照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作用課件實驗結果 CpG活化PBMC對K562細胞的殺傷作用(CIK細胞殺傷靶細胞CpGODN的免疫刺激作用課件CIK細胞殺傷靶細胞CpGODN的免疫刺激作用課件CIK細胞殺傷靶細胞CpGODN的免疫刺激作用課件CIK細胞殺傷靶細胞CpGODN的免疫刺激作用課件研究背景 通過主動免疫、過繼特異性免疫、過繼非特異性免疫等方式，清除慢性乙肝患者體內殘存的HBV，達到治

5、療效果。CpGODN的免疫刺激作用課件研究背景 通過主動免疫、過繼特異性免疫、過繼非特研究背景 B淋巴細胞具有抗原遞呈細胞的性質，同時具有CpG-ODN受體：TLR-9。本研究探討CpG-ODN誘導B淋巴細胞成為高效APC，使之具有類似于樹突狀細胞功能的可行性。CpGODN的免疫刺激作用課件研究背景 B淋巴細胞具有抗原遞呈細胞的性質，同時具TOLL受體CpGODN的免疫刺激作用課件TOLL受體CpGODN的免疫刺激作用課件TOLL受體在血細胞中的表達CpGODN的免疫刺激作用課件TOLL受體在血細胞中的表達CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細胞負載核心抗原磁珠分選B淋巴細胞CPG活化B淋巴細

6、胞核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC流式細胞儀、熒光顯微鏡檢測抗原負載狀況CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細胞負載核心抗原磁珠分選B淋巴細胞CpGODN的免疫刺磁珠分選B細胞分選前B細胞 7.89% 分選后B細胞 89.6% CpGODN的免疫刺激作用課件磁珠分選B細胞分選前B細胞 7.89% 分選后B細胞 89.活化B細胞負載抗原肽CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細胞負載抗原肽CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細胞負載核心抗原熒光顯微鏡觀察B細胞負載HBcAg18-27肽 CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細胞負載核心抗原熒光顯微鏡觀察B細胞負載HBcAg18APC與T細

7、胞作用機制CpGODN的免疫刺激作用課件APC與T細胞作用機制CpGODN的免疫刺激作用課件CPG對B細胞抗原遞呈相關分子的作用研究CpG2006、2216由上海生物工程技術服務有限公司合成，全硫代化修飾對照組為含10%FCS的RPMI1640外周血PBMC，細胞量107/孔，37、5%CO2、48小時實驗組加入CpG2006或CpG2216，終濃度均為1umol/mL，余同上CpGODN的免疫刺激作用課件CPG對B細胞抗原遞呈相關分子的作用研究CpG2006、22CpG提高淋巴細胞CD69表達 T淋巴細胞 B淋巴細胞 CD69表達率（%）*：與對照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作

8、用課件CpG提高淋巴細胞CD69表達 T淋巴細胞 B細胞CD80、CD86表達對照組加CPG-ODN組加CPG-ODN組CpGODN的免疫刺激作用課件B細胞CD80、CD86表達對照組加CPG-ODN組加CPGCpG提高B細胞表面CD80、CD86的表達 CD80 CD86CD80、CD86表達率（%）*：與對照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作用課件CpG提高B細胞表面CD80、CD86的表達 B細胞MHC-、MHC-表達對照組加CPG-ODN組CpGODN的免疫刺激作用課件B細胞MHC-、MHC-表達對照組加CPG-ODN組CpCpG提高B細胞表面MHC-、MHC-的表達 MHC

9、-MHC-MHC表達量（MFI）*：與對照組比較，P0.05 CpGODN的免疫刺激作用課件CpG提高B細胞表面MHC-、MHC-的表達 活化B細胞誘導CTL負載了抗原的活化B細胞與淋巴細胞混合培養(yǎng)(含IL-2的RPMI1640培養(yǎng)液).收集細胞,以五聚體技術檢測HBV特異性CTL.實驗組特異性CTL為0.500.19%，對照組為0.200.10%。 CpGODN的免疫刺激作用課件活化B細胞誘導CTL負載了抗原的活化B細胞與淋巴細胞混合培養(yǎng)特異性CTL誘導Pro5TM MHC Pentamers檢測對照組和實驗組HBcAg18-27抗原特異性CTL（Q2-1區(qū)）。前者為對照組（未加APC），后者為實驗組（加APC）。CpGODN的免疫刺激作用課件特異性CTL誘導Pro5TM MHC Pentamers檢測結論CpG能夠活化B細胞，對T細胞無明顯的作用CpG能夠提高B細胞表面抗原遞呈相關分子的表達CPG誘導PBM