消毒產(chǎn)品中丙酸氯倍他索和鹽酸左氧氟沙星測定液相色譜

1、 PAGE 13消毒產(chǎn)品中丙酸氯倍他索和鹽酸左氧氟沙星測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法Determination of clobetasol propionate and levofloxacin hydrochloride in disinfection product LC-MS-MS method1 范圍圍本方法規(guī)定定了膏霜霜類消毒毒產(chǎn)品中中丙酸氯氯倍他索索和鹽酸酸左氧氟氟沙星殘殘留量液液相色譜譜-串聯(lián)聯(lián)質(zhì)譜測測定方法法。本方法適用用于膏霜霜類消毒毒產(chǎn)品中中丙酸氯氯倍他索索和鹽酸酸左氧氟氟沙星殘殘留量的的測定。 取樣量為00.1gg時，本本方法對對丙酸氯氯倍他索索和鹽酸酸左氧氟氟沙星的的檢出限限

2、見表11。表1 丙丙酸氯倍倍他索和和鹽酸左左氧氟沙沙星的檢檢出限、保保留時間間和特征征離子中文名稱英文名稱檢出限（g/gg）保留時間（min）特征離子(m/zz)丙酸氯倍他他索Clobeetassol proopioonatte0.00997.83467.00/3555.22/3773.44鹽酸左氧氟氟沙星Levoffloxxaciin hhydrrochhlorridee0.061.11362.00/2660.99/3118.222 規(guī)范范性引用用文件3 原理理試樣中丙酸酸氯倍他他索和鹽鹽酸左氧氧氟沙星星用甲醇醇提取，提提取液經(jīng)經(jīng)0.445mm濾膜過過濾，用用C188柱分離離后，用用液相色色

3、譜-串串聯(lián)質(zhì)譜譜儀測定定，正離離子掃描描，離子子對定性性，峰面面積定量量。4 試劑劑和材料料除另有說明明外，所所用試劑劑均為分分析純，水水為不含含有機物物的純水水，純水水中干擾擾物的濃濃度需低低于方法法中待測測物的檢檢出限。4.1甲醇醇：農(nóng)藥藥殘留級級。4.2乙腈腈：農(nóng)藥藥殘留級級。4.3甲酸酸：分析析純。4.4標準準品：丙丙酸氯倍倍他索和和鹽酸左左氧氟沙沙星均購購自中國國藥品生生物制品品檢定所所，純度度999.8%。4.5標準準溶液：準確稱稱取丙酸酸氯倍他他索適量量，用乙乙腈水水（1：1）配配制成1100g/mmL的標標準貯備備液。準準確稱取取鹽酸左左氧氟沙沙星適量量，用純純水配制制成100

4、0gg/mLL的標準準貯備液液。準確確量取上上述標準準貯備溶溶液適量量，用乙乙腈稀釋釋配制成成濃度為為10.0gg/mLL的混合合標準中中間溶液液，將標標準中間間溶液轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移到安安瓿瓶中中于4CC保存。臨臨用前，再再根據(jù)需需要用甲甲醇配制制成不同同濃度的的標準使使用溶液液。4.6甲酸酸溶液(0.22%，vv/v)：量取取2mLL甲酸，用用純水定定容至110000mL。4.7 00.455m濾濾膜。5 儀器器5.1 液液相色譜譜-串聯(lián)質(zhì)質(zhì)譜聯(lián)用用儀：HHP11100高高效液相相色譜儀儀(Aggileent) - APII 40000質(zhì)質(zhì)譜儀(Appplieed BBiossysttemss) ，電

5、電噴霧離離子化源源(ESSIMSS，NII/PII模式)。5.2 分分析天平平：感量量0.11mg和和0.0001gg。5.3實驗驗室純水水機：BBarnnsteead純純水機。5.4渦旋旋振蕩器器：Sccienntiffic Inddusttriees 渦渦旋振蕩器器。5.5 具具塞試管管：100mL。6 試樣樣的制備備與保存存6.1 試試樣的制制備取有代表性性樣品55g，攪攪拌均勻勻，制成成實驗室室樣品。6.2 試試樣保存存制備好的試試樣置于于室溫保保存。7 測定定步驟7.1樣品品前處理理稱取0.11g0.2g樣樣品 (精確到到0.0001 g) ，置于于10mmL試管管中，加加入3.00

6、mmL甲醇醇溶液，渦渦旋振搖搖使樣品品分散后后，超聲聲振蕩110miin。靜靜置，吸吸取上清清液經(jīng)濾濾膜（44.7）過濾濾后，供供液相色色譜-串聯(lián)質(zhì)質(zhì)譜測定定。7.2 測測定7.2.11液相色色譜條件件a）色譜柱柱：Waaterrs AAtlaantiisdC18，3m，2.111500mm；b）柱溫：25CC；c）流動相相：甲酸酸溶液（44.6）、水水和乙腈腈，洗脫脫梯度見見表2；d）流速：2500L /miin；e）進樣量量：100L。表2 分離離丙酸氯氯倍他索索和鹽酸酸左氧氟氟沙星的的洗脫梯梯度時間(miin)0.2%甲甲酸溶液液(%)純水(%)乙腈(%)0545501545503509

7、55509575455011545507.2.22 質(zhì)譜譜條件a）離子化化方式：熱噴霧霧電離(TSII)；b）掃描方方式：正正離子掃掃描；c）檢測方方式：多多反應(yīng)監(jiān)監(jiān)測（MMRM）；d）碰撞氣氣(CAAD)：7.00 pssi；e）氣簾氣氣(CUUR)：15.0 ppsi；f）霧化氣氣(GSS1)：30.0 ppsi；g）加熱氣氣(GSS2)：35.0 ppsi；h）噴霧電電壓(IIS)：40000V；i）去溶劑劑溫度(TEMM)：4450CC；j）碰撞室室射出電電壓（CCXP）：16VV；k）定性離離子對、定定量離子子對、掃掃描時間間、碰撞撞氣能量量和去簇簇電壓，見見表3。表3 丙酸酸氯倍他

8、他索和鹽鹽酸左氧氧氟沙星星的定性性離子對對、定量量離子對對、掃描描時間、碰碰撞氣能能量和去去簇電壓壓化合物定性離子對對（m/z）定量離子對對（m/z）掃描時間Dwelll tiime（mms）碰撞氣能量量CE（eVV）去簇電壓DDP（VV）丙酸氯倍他他索467.00/3555.22467.00/3773.44467.00/3555.221002555鹽酸左氧氟氟沙星362.99/2660.99362.99/3118.22362.99/2660.9910035877.2.33 液相相色譜-串聯(lián)質(zhì)質(zhì)譜測定定7.2.33.1 定性測測定用丙酸氯倍倍他索和和鹽酸左左氧氟沙沙星的定定性離子子對（見見表3

9、）進進行定性性。7.2.33.2 定量測測定將混合標準準中間溶溶液用甲甲醇稀釋釋配制成成045000ngg/mLL的標準準使用溶溶液，分分別從標標準溶液液中取一一定量的的標準溶溶液加入入到空白白樣品中中，配制制成05500nng/mmL的標標準系列列。經(jīng)前前處理后后進樣分分析，以以使用溶溶液濃度度為橫坐坐標，峰峰面積為為縱坐標標，繪制制標準工工作曲線線。采用用外標法法進行定定量測定定。樣品品溶液中中丙酸氯氯倍他索索和鹽酸酸左氧氟氟沙星的的響應(yīng)值值應(yīng)在標標準工作作曲線線線性范圍圍內(nèi)。在在上述色色譜條件件和質(zhì)譜譜條件下下，丙酸酸氯倍他他索和鹽鹽酸左氧氧氟沙星星標準物物質(zhì)液相相色譜-串聯(lián)質(zhì)質(zhì)譜的多多

10、反應(yīng)監(jiān)監(jiān)測（MMRM）色色譜圖參參見圖AA.1。7.3 平平行試驗驗按以上步驟驟，對同同一試樣樣進行平平行試驗驗測定，丙丙酸氯倍倍他索和和鹽酸左左氧氟沙沙星的平平行測定定相對偏偏差應(yīng)小小于200%。7.4 空空白試驗驗除不稱取試試樣外，均均按上述述步驟同同時完成成空白試試驗。8 結(jié)果果計算樣品中丙酸酸氯倍他他索和鹽鹽酸左氧氧氟沙星星的質(zhì)量量分數(shù)可可按式（11-1）計計算： 式中， 消毒產(chǎn)產(chǎn)品中丙丙酸氯倍倍他索和和鹽酸左左氧氟沙沙星的質(zhì)質(zhì)量分數(shù)數(shù)，g/gg；1從回歸方方程中查查出測試試溶液中中丙酸氯氯倍他索索和鹽酸酸左氧氟氟沙星的的質(zhì)量濃濃度，nng/mmL；V1 提取取溶液體體積，mmL； 稱

11、樣量，gg。精密度和準準確度同一實驗室室對加標標樣品重重復測定定，丙酸酸氯倍他他索和鹽鹽酸左氧氧氟沙星星的相對對標準偏偏差和平平均回收收率數(shù)據(jù)據(jù)參見附附錄C。附錄A (資料性附附錄)丙酸氯倍他他索和鹽鹽酸左氧氧氟沙星星標準物物質(zhì)多反反應(yīng)監(jiān)測測(MRRM)色色譜圖丙酸氯倍他他索和鹽鹽酸左氧氧氟沙星星標準物物質(zhì)多反反應(yīng)監(jiān)測測(MRRM)色色譜圖，見見圖A.1。圖A.1 丙酸氯氯倍他索索和鹽酸酸左氧氟氟沙星標標準物質(zhì)質(zhì)多反應(yīng)應(yīng)監(jiān)測(MRMM)色譜譜圖附錄B (資料性附附錄)標準曲線消毒產(chǎn)品中中丙酸氯氯倍他索索和鹽酸酸左氧氟氟沙星的的線性回回歸方程程，見表表B.11。表B.1 消毒產(chǎn)產(chǎn)品中兩兩種抗生生素的線線性回歸歸方程化合物線性范圍（nng/mmL）abr丙酸氯倍他他索050001.0911044.2811040.99991鹽酸左氧氟氟沙星050001.821104-2.9221040.99995附錄C (資料性附附錄)回收率和重重復性消毒產(chǎn)品中中丙酸氯氯倍他索索和鹽