昆醫(yī)分生昆醫(yī)分生基因診斷2課件

1、第二部分：基因檢測(cè)與分子診斷基因組: 生命的藍(lán)圖未得病先吃藥基因組醫(yī)學(xué)家Venter博士從自己的基因組看未來(lái)發(fā)現(xiàn)有4.1 million DNA 變異,3,213,401 SNPs22% 基因拷貝數(shù)變異發(fā)現(xiàn)有3個(gè)心臟病高風(fēng)險(xiǎn)基因遺傳自他患病的父親意外發(fā)現(xiàn)還有老年癡呆癥基因 (并無(wú)家族史!)開始服用 statins以及其它降低血液中膽固醇的藥物, 以保護(hù)心臟和記憶力（目前的測(cè)序技術(shù)）1984： 30億美元測(cè)定一個(gè)人類基因組1994： 3億美元測(cè)定一個(gè)人類基因組(1:10)2004：3千萬(wàn)美元測(cè)定一個(gè)人類基因組(1:100)2007：1百萬(wàn)美元測(cè)定一個(gè)人類基因組(1:3000)未來(lái)目標(biāo)：1000

2、美元測(cè)定一個(gè)人類基因組(1:3x106)2009-新一代測(cè)序技術(shù) 基因診斷的基本原理: 是通過(guò)檢測(cè)DNA或RNA的結(jié)構(gòu)變化、量的多少及表達(dá)功能是否正常，以確定被檢查者是否存在基因水平的異常變化，以此作為疾病確診的依據(jù)?；蛟\斷的臨床意義： 在于可以對(duì)疾病作出早期、確切的診斷，可以確定個(gè)體對(duì)疾病的易感性以及疾病的分期分型、療效監(jiān)測(cè)、預(yù)后判斷等。 近十年來(lái)，基因診斷技術(shù)已逐步成為實(shí)驗(yàn)診斷的常規(guī)技術(shù)，基因診斷的原理和技術(shù)已廣泛應(yīng)用于臨床各個(gè)學(xué)科領(lǐng)域，包括遺傳學(xué)、傳染病學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)、免疫學(xué)以及法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域?；蛟\斷的基本原理基因診斷的基本方法 基因突變的診斷； 多態(tài)性分析； 基因表達(dá)的檢測(cè)； 外

3、源DNA的檢測(cè)。 遺傳性疾病基因診斷 1. 直接診斷 直接診斷的前提是被檢測(cè)基因必須已被克隆，基因的正常序列和結(jié)構(gòu)已闡明。采用基因突變的診斷方法，通過(guò)各種分子生物學(xué)技術(shù)直接檢測(cè)導(dǎo)致遺傳性疾病發(fā)生的各種基因突變。2. 間接診斷 在許多情況下，疾病的致病基因尚未被克隆而無(wú)法進(jìn)行直接診斷，但若致病位點(diǎn)已在基因組中被定位，則可以采用間接診斷策略。即采用多態(tài)性連鎖分析的方法，尋找具有基因缺陷的染色體，并判斷被檢者是否存在該條染色體的缺陷。間接診斷不是尋找DNA的遺傳缺陷，而是通過(guò)分析DNA的遺傳標(biāo)記的多態(tài)性來(lái)判斷被檢者是否具有帶致病基因的染色體，以判斷被檢者患病的可能性?；蛟\斷在遺傳性疾病中的臨床應(yīng)用

4、 血紅蛋白病:包括異常血紅蛋白病、-地中海貧血 和-地中海貧血； 杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥(DMD)； 甲型血友病等等。 感染性疾病的基因診斷 感染性疾病是感染了某種病原體而引起的一類疾病。不論病原體是病毒、細(xì)菌或寄生蟲，它們都具有特異的基因組。 對(duì)常見(jiàn)病原體的特異基因或DNA片段的組成特點(diǎn)現(xiàn)在可采用核酸分子雜交技術(shù)，針對(duì)病原體特異的核酸序列設(shè)計(jì)探針來(lái)進(jìn)行雜交；或應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增病原體基因的保守序列；或?qū)⒑怂岱肿与s交技術(shù)與PCR技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用。 這些方法能夠?qū)Υ蠖鄶?shù)感染性疾病作出明確的病原體診斷，及對(duì)潛伏感染或帶菌者作出診斷，并能對(duì)病原體進(jìn)行分類和分型鑒定?；驒z測(cè)與腫瘤分子靶向治療Ras 基因的研究

5、背景 自1982年Dr. Robert A. Weinberg等人發(fā)現(xiàn)人的膀胱癌細(xì)胞中有活化的H-ras基因后，引起了人們對(duì)ras癌基因在人類腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中所起的作用的極大關(guān)注。Ras基因?qū)儆贕Tase超家族，它包括三個(gè)功能基因：H-ras、K-ras和N-ras， K-ras基因位于人類染色體12p，編碼一種具有GTP酶活性的小G蛋白，分子大小約35kb，是表皮生長(zhǎng)因子受EGFR功能信號(hào)的下游分子，在膜受體到腺苷環(huán)化酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。ras蛋白通常在以活性的ras-GTP和無(wú)活性的ras-GDP兩種結(jié)合狀態(tài)間轉(zhuǎn)化。 90%的K-ras基因突變位于2號(hào)外顯子的第12和13密碼子位點(diǎn)，

6、 1%-4%為61和146密碼子突變。 Distribution and frequency of k-ras Mutations samplediseaseNo. of Patients(N _ 517)mutation rate%blood preparation（N:83）positive family cancer history400negative family history320Tumor patient110Benign lesion preparation（N:21）chronic atrophic gastritis170Other benign lesion40tumo

7、r tissue(N:413）cancer of colon303115（37.95）lung carcinoma312（6.5）gastric carcinoma262（7.7）carcinoma of gallbladder111 （9）pancreatic carcinoma2240%Others201（5）2008年6月,CRYSTAL、OPUS等研究在美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)(ASCO)年會(huì)上報(bào)道,KRAS基因狀態(tài)與表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)抑制劑療效有直接的關(guān)系,目前KRAS基因檢測(cè)被寫入最新版(2008年第3版)美國(guó)國(guó)立癌癥綜合網(wǎng)絡(luò)(NCCN)結(jié)直腸癌臨床實(shí)踐指南。 新指南傳遞給廣大醫(yī)

8、師和患者這樣兩條重要的信息,一是所有轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者都應(yīng)檢測(cè)KRAS基因狀態(tài),二是只有KRAS野生型患者才建議接受EGFR抑制劑如西妥昔單抗和帕尼單抗(包括單藥或與化療聯(lián)合)治療。 美國(guó)喬治敦大學(xué)馬歇爾(Marshall):在結(jié)直腸癌的治療中,“KRAS改變了一切(KRAS Changes Everything)!”相關(guān)基因檢測(cè)進(jìn)展亮點(diǎn)APEC-Kras-中國(guó)區(qū)中心實(shí)驗(yàn)室北京：第三屆亞洲會(huì)議 2010.3.28K-ras基因檢測(cè)的臨床意義2009年NCCN結(jié)腸癌臨床實(shí)踐指南和2009年NCCN直腸癌臨床實(shí)踐指南明確指出兩點(diǎn)：一是所有轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者都應(yīng)檢測(cè) K-ras基因狀態(tài)；二是只有K-ras野生型患者才建議接受 EGFR抑制劑（如西妥昔單抗和帕尼單抗）治療。 結(jié)直腸癌從此“一分為二” K-ras基因是野生型還是突變型,使傳統(tǒng)意義上的一種疾病被分成兩種獨(dú)立的疾病。 K-ras突變型結(jié)直腸癌患者約占40%,這類患者不能從抗EGFR治療中獲益,反而徒增不良反應(yīng)危險(xiǎn)和治療費(fèi)用。而其余60%左右的 K-ras野生型患者就很有可能從這類藥物治