實驗二細菌革蘭氏染色

1、關(guān)于實驗二細菌革蘭氏染色第1頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四一、實驗目的學習微生物制片、染色的基本技術(shù)掌握細菌革蘭氏染色及無菌操作技術(shù)進一步觀察細菌的基本形態(tài)第2頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四C.Gram（革蘭）于1884年發(fā)明的一種鑒別不同類型細菌的染色方法。二、實驗原理第3頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四 革蘭氏染色1、用堿性染料結(jié)晶紫對菌液涂片進行初染2、用碘溶液進行媒染，其作用是提高染料和細 胞間的相互作用從而使二者結(jié)合得更牢固。3、用乙醇或丙酮沖洗進行脫色。在經(jīng)歷脫色后 仍將結(jié)晶紫保留在細胞內(nèi)的為革蘭氏陽性細

2、菌，而革蘭氏陰性細菌的結(jié)晶紫被洗掉，細 胞呈無色。4、用一種與結(jié)晶紫具有不同顏色的堿性染料對 涂片進行復染。例如沙黃，它使原來無色的 革蘭氏陰性細菌最后呈現(xiàn)桃紅到紅色，而革 蘭氏陽性細菌繼續(xù)保持深紫色第4頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四第5頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四三、實驗材料1、菌種：大腸桿菌（E.C）、枯草桿菌（B.S）2、染料：結(jié)晶紫、復紅、碘液等3、材料：95%酒精等4、標本片：芽孢、莢膜、孢子絲第6頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四涂片風干固定初染水洗媒染水洗脫色水洗復染水洗干燥鏡檢四、實驗方法（一）革蘭氏染

3、色菌懸液涂片干燥滴加無菌水固定取菌苔涂片第7頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四Smear preparation 第8頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四 Heat fixing第9頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四crystal violet stain wash with water Staining第10頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四 Counterstain with Safranin 第11頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四第12頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四 注意事項：（1）在涂片時不可過厚，否則在染色脫色時，都不易均勻， 固定時，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。（2）嚴格掌握脫色程度，是革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟。如脫色 時間太長，陽性菌會誤為革蘭氏陰性菌，時間不足，革 蘭氏陰性菌會誤為革蘭氏陽性菌。（3）在鏡檢時，以分散開的菌體的革蘭氏染色反應為準。（4）設(shè)定陰性和陽性對照，確保實驗的可靠性。第13頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四（二）觀察細菌的特殊結(jié)構(gòu)1、莢膜第14頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四2、芽孢第15頁，共17頁，2022年，5月20日，0點52分，星期四3、孢子絲第16頁，