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1、1、近年來發(fā)展起來的保藏菌種的理想且適用范圍最廣的是( ) 沙土管保藏法 斜面冰箱保藏法 石蠟油封存法 液氮超低溫保藏法2、保證種子質(zhì)量的控制措施,首先必須保證生產(chǎn)菌種的穩(wěn)定性,其次是保證( ) 無雜菌侵入 溫度恒定 通氣充分 接種量3、菌種斜面冰箱保藏法一般保存期為( ) 1周 1個(gè)月 36個(gè)月 1年以上4、原生質(zhì)體融合通常指在高滲條件下,將兩親本原生質(zhì)體混合,由()作為助融劑,使它們互相凝集發(fā)生細(xì)胞融合。 聚乙二醇 瓊脂糖 病毒粒子 半胱氨酸5、培養(yǎng)和分離放線菌,通常采用的培養(yǎng)基為( ) 牛肉膏蛋白胨瓊脂 查氏培養(yǎng)基 幾丁質(zhì)培養(yǎng)基 馬鈴薯培養(yǎng)基6、給混合菌群提供一些有利于某種菌株生長(zhǎng)或不利

2、于其他菌株生長(zhǎng)的條件,從而獲得所需菌種或某些特殊菌種的分離方法為( ) 隨機(jī)分離法 劃線分離法 富集培養(yǎng)分離法 平板分離法7、沙土管菌種保藏法是一種工業(yè)生產(chǎn)菌種常用的保藏方法,適合于產(chǎn)孢子或芽孢的微生物,一般保存期為( ) 半年左右 一年左右 二年左右 五年左右8、發(fā)酵過程中,為了提高青霉素的產(chǎn)量,通常在發(fā)酵中后期補(bǔ)充( )前體物質(zhì)。 苯乙酰胺 肌醇 甘氨酸 丙酸鹽1、下列不是次級(jí)代謝產(chǎn)物的是( ) 脂肪 抗生素 色素 毒素1、保證種子質(zhì)量的控制措施,首先必須保證生產(chǎn)菌種的穩(wěn)定性,其次是保證( ) 無雜菌侵入 溫度恒定 通氣充分 接種量2、影響種子質(zhì)量的主要因素是( ) 原材料質(zhì)量 培養(yǎng)條件

3、斜面冷藏時(shí)間 以上都是3、種子制備過程中,生產(chǎn)車間種子制備階段是( )固體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng) 種子罐擴(kuò)大培養(yǎng) 搖瓶液體種子培養(yǎng) 斜面種子培養(yǎng)1、發(fā)酵過程中,培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)過于豐富,菌體生長(zhǎng)旺盛,發(fā)酵液粘稠,對(duì)產(chǎn)物的合成( ) 有利 不利 無關(guān) 難以確定2、在微生物深層培養(yǎng)過程中由于通氣和攪拌、代謝氣體的逸出以及培養(yǎng)基中糖、蛋白質(zhì)等原因產(chǎn)生大量泡沫,給發(fā)酵帶來“逃液”及污染雜菌等現(xiàn)象。為了有效地控制泡沫的發(fā)生,生產(chǎn)上采用控制泡沫的方法有( ) 酸法消沫 空氣消沫 壓力消沫 機(jī)械消沫和消沫劑消沫3、種齡是指種子罐中培養(yǎng)的菌體開始移入發(fā)酵罐時(shí)的培養(yǎng)時(shí)間。適當(dāng)?shù)姆N齡有利于發(fā)酵,通常,接種齡以菌體的( )較為合

4、適。 延遲期 對(duì)數(shù)期 減速期 穩(wěn)定期2、酶是一種具有專一催化活性的生物催化劑,它的催化活性主要依賴于其具有特殊的( ) 活性中心 金屬離子 底物 輔基1、氨基酸發(fā)酵工業(yè)中,淀粉水解糖的制備一般采用( ) 堿水解法 酸酶水解法 酸水解法 酶水解法1、目前我們所發(fā)現(xiàn)的抗生素產(chǎn)生菌大多來自于( ) 細(xì)菌 絲狀真菌 放線菌 酵母菌1、誘變育種:用各種物理、化學(xué)的因素人工誘發(fā)基因突變進(jìn)行的篩選,稱為誘變育種2、自然選育:利用微生物在一定的條件下自發(fā)變異的原理,通過分離篩選的方法,排除衰變型菌株,從中選擇維持原菌生產(chǎn)水平的菌株,并得到純種。3、生理堿性物質(zhì):若菌體代謝后能產(chǎn)生堿性物質(zhì)的則此種無機(jī)氮源稱為生

5、理堿性物質(zhì),如硝酸鈉。正確使用生理酸堿性物質(zhì),對(duì)穩(wěn)定和調(diào)節(jié)發(fā)酵過程的pH有積極作用。 4、生理酸性物質(zhì):無機(jī)氮源被菌體作為氮源利用后,培養(yǎng)液中就留下了酸性或堿性物質(zhì),這種經(jīng)微生物生理作用(代謝)后能形成酸性物質(zhì)的無機(jī)氮源叫生理酸性物質(zhì)5、前體:前體指某些化合物加入到發(fā)酵培養(yǎng)基中,能直接被微生物在生物合成過程中合成到產(chǎn)物物分子中去,而其自身的結(jié)構(gòu)并沒有多大變化,但是產(chǎn)物的產(chǎn)量卻因加入前體而有較大的提高。7產(chǎn)物促進(jìn)劑:所謂產(chǎn)物促進(jìn)劑是指那些非細(xì)胞生長(zhǎng)所必須的營(yíng)養(yǎng)物,又非前體,但加入后卻能提高產(chǎn)量的添加劑8、代謝控制發(fā)酵:人為地改變微生物的代謝調(diào)控機(jī)制,是有用的中間代謝產(chǎn)物過量積累,這種發(fā)酵稱代謝控

6、制發(fā)酵。研究?jī)?nèi)容:研究微生物的生理代謝規(guī)律,即生物合成各種代謝產(chǎn)物的途徑和代謝調(diào)節(jié)機(jī)制,環(huán)境因素對(duì)代謝方向的影響以及改變微生物代謝方向的措施。9、巴斯德效應(yīng): 在好氣條件下,酵母菌發(fā)酵能力下降(細(xì)胞內(nèi)糖代謝降低,乙醇積累減少);不僅存在于酵母中,也存在于具有呼吸和發(fā)酵能力的其他細(xì)胞中。10、葡萄糖效應(yīng):又稱葡萄糖阻遏。葡萄糖或某些容易利用的碳源,其分解代謝產(chǎn)物阻遏某些誘導(dǎo)酶體系編碼的基因轉(zhuǎn)錄的現(xiàn)象。如大腸埃希氏菌培養(yǎng)在含葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基上,在葡萄糖沒有被利用完之前,乳糖操縱子就一直被阻遏,不能被利用。這是因?yàn)槠咸烟堑姆纸馕镆鸺?xì)胞內(nèi)cAMP含量降低,啟動(dòng)子釋放cAMPCAP蛋白質(zhì),RNA聚

7、合酶不能與乳糖的啟動(dòng)基因結(jié)合,以致轉(zhuǎn)錄不能發(fā)生,直到葡萄糖被利用完,乳糖操縱子才能被轉(zhuǎn)錄,形成利用乳糖的酶。10、發(fā)酵熱:發(fā)酵熱就是發(fā)酵過程中釋放出來的凈熱量。在發(fā)酵過程中產(chǎn)生菌分解基質(zhì)產(chǎn)生熱量,機(jī)械攪拌產(chǎn)生熱量,而罐壁散熱、水分蒸發(fā)、空氣排氣帶走熱量。這各種產(chǎn)生的熱量和各種散失的熱量的代數(shù)和就叫做凈熱量。12、臨界溶氧濃度:指不影響呼吸所允許的最低溶氧濃度。1、菌株分離:就是將一個(gè)混雜著各種 HYPERLINK /view/3736.htm t _blank 微生物的樣品通過分離技術(shù)區(qū)分開,并按照實(shí)際要求和菌株的特性采取迅速、準(zhǔn)確、有效的方法對(duì)他們進(jìn)行 HYPERLINK /view/351

8、036.htm t _blank 分離、篩選,進(jìn)而得到所需微生物的過程。2、篩選:是指一種以多數(shù)物質(zhì)中按預(yù)定目標(biāo)就某種具有特定性質(zhì)的物質(zhì)進(jìn)行精選的操作過程。3、工業(yè)菌種的育種:是運(yùn)用遺傳學(xué)原理和技術(shù)對(duì)某個(gè)用于特定生物技術(shù)目的的菌株進(jìn)行的多方位的改造。通過改造,可使現(xiàn)存的優(yōu)良性狀強(qiáng)化,或去除不良性質(zhì)或增加新的性狀。4、菌種的復(fù)壯:狹義的復(fù)壯是一 HYPERLINK /view/619409.htm t _blank 消極措施,一般指對(duì)已衰退的菌種進(jìn)行復(fù)壯;廣義的復(fù)壯是一積極的措施,即在菌種的生產(chǎn)性狀未衰退前就不斷進(jìn)行純種分離和生產(chǎn)性狀測(cè)定,以在群體中獲得生產(chǎn)性狀更好的自發(fā) HYPERLINK /

9、view/2099977.htm t _blank 突變株。5、種子擴(kuò)大培養(yǎng):指將保存在砂土管、冷凍干燥管中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后,再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及 HYPERLINK /view/3167927.htm t _blank 種子罐逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng),最終獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過程。6、培養(yǎng)基:是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、 HYPERLINK /view/151020.htm t _blank 無機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。8、生長(zhǎng)因子:凡是微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物質(zhì)都稱為生長(zhǎng)因子。9、分批培養(yǎng):是指在一個(gè)

10、密閉系統(tǒng)內(nèi)投入有限數(shù)量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)后,接入少量的微生物菌種進(jìn)行培養(yǎng),使微生物生長(zhǎng)繁殖,在特定的條件下只完成一個(gè)生長(zhǎng)周期的微生物培養(yǎng)方法。 10、補(bǔ)料分批培養(yǎng) :介于分批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)之間的培養(yǎng)方法。在微生物或動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)過程中,隨著營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗,間歇或連續(xù)地添加營(yíng)養(yǎng)成分或新鮮培養(yǎng)基,但不同時(shí)收獲培養(yǎng)液。11、連續(xù)培養(yǎng):又稱連續(xù)發(fā)酵,指在分批式液體深層培養(yǎng)至微生物對(duì)數(shù)后期時(shí),以一定的流速向發(fā)酵罐中連續(xù)添加滅菌的新鮮液體培養(yǎng)基,同時(shí)以相同的流速自發(fā)酵罐中排出發(fā)酵液的發(fā)酵方法。12、發(fā)酵熱:是發(fā)酵過程中釋放出來的凈熱量。各種產(chǎn)生的熱量和各種散失的熱量的代數(shù)和就叫做凈熱量。13、初級(jí)代謝產(chǎn)物:微生物從

11、外界吸收各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),通過分解代謝和合成代謝,生成維持生命活動(dòng)必需的物質(zhì)和能量。如蛋白質(zhì)、核酸等。14、次級(jí)代謝產(chǎn)物:是指 HYPERLINK /view/3736.htm t _blank 微生物生長(zhǎng)到一定階段才產(chǎn)生的化學(xué)結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜、對(duì)該生物無明顯生理功能,或并非是微生物 HYPERLINK /view/539997.htm t _blank 生長(zhǎng)和 HYPERLINK /view/258039.htm t _blank 繁殖所必需的物質(zhì),如 HYPERLINK /view/1325.htm t _blank 抗生素、 HYPERLINK /view/341068.htm t _blank

12、 毒素、 HYPERLINK /view/1322.htm t _blank 激素、 HYPERLINK /view/92530.htm t _blank 色素等。15、淀粉的液化:利用化學(xué)或生物催化劑,在具有一定量的水和一定的溫度條件下,使淀粉分子斷裂而變成較小分子,使淀粉糊的粘度顯著下降而成為流動(dòng)性較好的流體的過程。主要有酸法和酶法。16、代謝控制發(fā)酵:用人工誘變的方法,有意識(shí)地改變微生物的代謝途徑,最大限度地積累產(chǎn)物。18、熱原:是在生產(chǎn)過程中由于被污染后由雜菌所產(chǎn)生的一種內(nèi)毒素。熱原注入體內(nèi)引起惡寒高熱,嚴(yán)重的引起休克。19、前體:指加入到培養(yǎng)基中的某些化合物能被微生物直接結(jié)合到產(chǎn)物分

13、子中,而自身的結(jié)構(gòu)無多大變化,且具有促進(jìn)產(chǎn)物合成的作用。20、介質(zhì)過濾除菌:是使空氣通過經(jīng)高溫滅菌的介質(zhì)過濾層,將空氣中的微生物等顆粒阻截在介質(zhì)層中,而達(dá)到除菌的目的。一般是棉花、活性炭,也有采用玻璃纖維、焦炭等。21、同型發(fā)酵:是葡萄糖經(jīng)EMP途徑降解為丙酮酸,丙酮酸在丙酮酸脫氫酶的催化下還原為乳酸的過程。理論轉(zhuǎn)化率為100%,實(shí)際轉(zhuǎn)化率80%以上。22、異型發(fā)酵:是某些乳酸細(xì)菌利用HMP途徑,分解葡萄糖為5-磷酸核酮糖,再經(jīng)差向異構(gòu)酶作用變成5-磷酸木酮糖,然后經(jīng)磷酸酮解酶催化裂解,生成3-磷酸甘油醛和23.抗生素:是由微生物、動(dòng)物和植物細(xì)胞在生長(zhǎng)代謝過程中所產(chǎn)生的,能在低微濃度下有選擇性

14、地抑制或殺滅他種生物或腫瘤細(xì)胞的一類有機(jī)化合物。24.半合成抗生素:指用化學(xué)或生物化學(xué)的方法改變已知抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu),或引入特定的功能基團(tuán)而獲得的新抗生素或其衍生物的總稱。25.生物需氧量:在一定溫度、一定時(shí)間內(nèi)微生物利用有機(jī)物進(jìn)行生物氧化所需要氧的量。26.化學(xué)需氧量:指用強(qiáng)氧化劑氧化水中污染物時(shí)所需消耗的氧量。 27.種子擴(kuò)大培養(yǎng):是指將保存在沙土管、冷凍干燥管中處于休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后,再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)而獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過程。 28.反饋抑制:是一生物合成途徑中的最終代謝產(chǎn)物抑制那一途徑的前面第一個(gè)酶或第二個(gè)酶的作用。 29. 協(xié)同反饋抑制:指

15、只有一種酶受抑制,但要抑制或阻遏這種酶需要一個(gè)以上的終點(diǎn)產(chǎn)物過量存在。 30.反饋?zhàn)瓒簦菏且种泼傅男纬桑怯赏緩街械慕K點(diǎn)產(chǎn)物或其衍生物實(shí)行的。 31.自然突變 :是指某些微生物在沒有人工參與下所發(fā)生的那些突變。 32.雜交育種 : 是指將兩個(gè)基因型不同的菌株經(jīng)吻合使遺傳物質(zhì)重新組合,從中分離和篩選具有新性狀的菌株。 33.固定化酶:指在一定空間內(nèi)受到完全約束或者局部約束的酶。34.酶:指具有生物催化功能的蛋白質(zhì)。1、酶分子構(gòu)象的改變和載體屏障效應(yīng)、(分配效應(yīng) )和(擴(kuò)散阻力)是影響固定化酶動(dòng)力學(xué)的主要因素。1自然界分離微生物的一般操作是_土樣的采取_、_預(yù)處理_、_培養(yǎng)_、_菌落的選擇及鑒定_

16、2從環(huán)境中分離目的微生物時(shí),進(jìn)行富集的目的是_讓目的微生物在種群中占優(yōu)勢(shì),使篩選變得可能。3菌種選育分子改造的目的是_ 防止菌種退化、解決生產(chǎn)實(shí)際問題、_提高生產(chǎn)能力、_提高產(chǎn)品質(zhì)量、開發(fā)新產(chǎn)品。4培養(yǎng)基成分選擇的原則是_菌體的同化能力_、_代謝的阻遏與誘導(dǎo)_、_合適的C 、N比_、_PH的要求_5種子擴(kuò)大培養(yǎng)的目的是種子量的需要_、_菌種的馴化_、_縮短發(fā)酵時(shí)間、保證生產(chǎn)水平_與要求_總量與濃度能滿足要求_、_生理狀態(tài)穩(wěn)定_、_活力強(qiáng),移種至發(fā)酵后能迅速生長(zhǎng)_、_無雜菌污染_6種子擴(kuò)大培養(yǎng)的一般步驟_斜面菌種制備_、_一級(jí)種子培養(yǎng)、二級(jí)種子培養(yǎng)、發(fā)酵_。7在釀酒過程中影響雜醇油生成的原因是_

17、菌種_、_培養(yǎng)基_、_發(fā)酵條件。8谷氨酸發(fā)酵的三個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)是_檸檬酸合成酶_、_烏頭酸梅_異檸檬酸脫氫酶_。9發(fā)酵過程溫度選擇的依據(jù)有 根據(jù)菌種及生長(zhǎng)階段_、_根據(jù)培養(yǎng)條件_、_根據(jù)菌生長(zhǎng)情況10設(shè)備滲漏_、_空氣帶菌_、_種子帶菌_、_滅菌不徹底_、_技術(shù)管理部善_是引起雜菌污染的原因。11. 發(fā)酵中泡沫生成的原因是_通氣攪拌的強(qiáng)烈程度_、_培養(yǎng)基配比與原料的組成_、_菌種、種子質(zhì)量、接種量_和_滅菌質(zhì)量。12. 采用_輻射滅菌_、_加熱滅菌_、_靜電除菌_和_介質(zhì)過濾除菌 進(jìn)行空氣除菌。13. 發(fā)酵醪中獲得產(chǎn)物分為_菌體_、_酶_和_代謝產(chǎn)物_三大類。2、氨基酸生產(chǎn)過程中一般采用流加( 尿素

18、 )或(氨水 )的方法來控制pH值變化。1、目前施加選擇壓力的菌種分離方法有(富集液體培養(yǎng))和( 固體培養(yǎng)基的使用 )。2、目前菌種選育的方法有(自然選育)、(誘變選育)、抗噬菌體菌株的選育、(雜交育種)和原生質(zhì)體融合技術(shù)。3、放線菌染色體結(jié)構(gòu)決定其基因重組過程的特殊性,其重組過程大體上有異核現(xiàn)象、(接合現(xiàn)象)、異核系的形成和(重組體的形成)四種遺傳體系。4、含有重組DNA質(zhì)粒的基因工程菌在培養(yǎng)中與普通微生物的最大差別是表現(xiàn)出質(zhì)粒的不穩(wěn)定性。這種不穩(wěn)定性表現(xiàn)為(質(zhì)粒的不穩(wěn)定 )和(表達(dá)產(chǎn)物的不穩(wěn)定 )兩種形式。1、為了解除基質(zhì)過濃的抑制、產(chǎn)物的反饋抑制和葡萄糖分解阻遏效應(yīng),以及避免在分批發(fā)酵中

19、因一次性投糖過多造成細(xì)胞大量生長(zhǎng),耗氧過多而供氧不足的狀況,采用(中間補(bǔ)料 )是較為有效的。2、在Jacob-Monod模型中,(無)誘導(dǎo)物時(shí),調(diào)節(jié)基因編碼的阻遏物結(jié)合到操縱基因上,從而抑制結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄;(有)誘導(dǎo)物時(shí),誘導(dǎo)物與阻遏物結(jié)合,從而使結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄可以進(jìn)行。3、微生物代謝的反饋調(diào)節(jié)作用,目前已知的主要有(反饋抑制)和(反饋?zhàn)瓒簦﹥煞N類型。1、工業(yè)微生物絕大部分都是異養(yǎng)型微生物,其培養(yǎng)基通常包括(碳源)、( 氮源)、(無機(jī)鹽及微量元素)、(前體促進(jìn)劑)等。2、發(fā)酵工業(yè)上,培養(yǎng)基按其用途可分為( 孢子培養(yǎng)基)、(種子培養(yǎng)基)和(發(fā)酵培養(yǎng)基)三種。4、種子制備的工藝過程大致可以分為(實(shí)驗(yàn)

20、室種子制備)和(生產(chǎn)車間種子制備)兩個(gè)階段。5、種子制備的工藝過程大致可以分為實(shí)驗(yàn)室種子制備和生產(chǎn)車間種子制備兩個(gè)階段,其中實(shí)驗(yàn)室種子制備階段包括(瓊脂斜面)、( 固體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng))或(搖瓶液體培養(yǎng))。5、分批培養(yǎng)中,細(xì)胞一般經(jīng)歷( 延滯期 )、( 對(duì)數(shù)期 )、減速期、( 穩(wěn)定期 )和衰亡期五個(gè)時(shí)期。3、酶和細(xì)胞的固定化方法主要有(吸附法)、( 包埋法 )、( 交聯(lián)法 )、化學(xué)共價(jià)法和逆膠束酶反應(yīng)系統(tǒng)。1、體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞,根據(jù)其生長(zhǎng)性質(zhì),可分為(貼壁依賴型 )和(懸浮型 )兩類,通常淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞屬于(懸浮型)。2、采用液體培養(yǎng)方式大量培養(yǎng)植物細(xì)胞的流程為(外植體的選擇和培養(yǎng))、( 愈

21、傷化)、搖瓶培養(yǎng)和(大量懸浮培養(yǎng))。1、污水處理的基本方法按處理原理可分為( 物理法 )、( 化學(xué)法 )和(生化法 )三大類。3、目前我們所發(fā)現(xiàn)的抗生素產(chǎn)生菌大多來自于(放線菌)綱,其中80%-90%源自于( 鏈霉菌)屬。1、生物反應(yīng)器設(shè)計(jì)和操作的限制因素除傳質(zhì)和傳熱外,還受(酶)或(微生物)等生物催化劑因素的限制。2、按照能量輸入的方式,發(fā)酵罐可以分為(內(nèi)部機(jī)械攪拌式發(fā)酵罐)、(外部液體循環(huán)式發(fā)酵罐 )和空氣噴射提升式發(fā)酵罐。四、簡(jiǎn)答題16. 種子擴(kuò)大培養(yǎng)的目的與要求? 目的:接種量的需要 菌種的馴化 縮短發(fā)酵時(shí)間、保證生產(chǎn)水平 要求:1總量及濃度能滿足要求2生理狀況穩(wěn)定,個(gè)體與群體3活力強(qiáng)

22、,移種至發(fā)酵后,能夠迅速生長(zhǎng)4無雜菌污染17. 種子擴(kuò)大培養(yǎng)的一般步驟?休眠孢子母斜面活化搖瓶種子或茄子瓶斜面或固體培養(yǎng)基孢子一級(jí)種子罐二級(jí)種子罐發(fā)酵罐18. 在大規(guī)模發(fā)酵的種子制備過程中,實(shí)驗(yàn)室階段和生產(chǎn)車間階段在培養(yǎng)基和培養(yǎng)物選擇上各有何特點(diǎn)? 實(shí)驗(yàn)室階段 在原料方面,實(shí)驗(yàn)室種子培養(yǎng)階段,規(guī)模一般比較小,因此為了保證培養(yǎng)基的質(zhì)量,培養(yǎng)基的原料一般都比較精細(xì)。 生產(chǎn)車間階段 在原料方面:不如實(shí)驗(yàn)室階段那么精細(xì),而是基本接近于發(fā)酵培養(yǎng)基,這有兩個(gè)方面的原因: 1)成本 2)馴化9. 常用的碳源有哪些?常用的糖類有哪些,各自有何特點(diǎn)? 碳源: 葡萄糖 糖蜜 淀粉 糊精 糖類:碳源:糖類(淀粉、葡

23、萄糖、蔗糖等)、油脂(動(dòng)、植物油)、有機(jī)酸(琥珀酸、檸檬酸、乳酸、乙酸等)和低碳醇(甲醇、乙醇等)。葡萄糖,所有的微生物都能利用葡萄糖,但是會(huì)引起葡萄糖效應(yīng)糖蜜,是制糖生產(chǎn)時(shí)的結(jié)晶母液,它是制糖工業(yè)的副產(chǎn)物。主要含有蔗糖,總糖可達(dá)50%75%。一般糖蜜分甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜葡萄糖蜜。除糖份外,含有較多的雜質(zhì),其中有些是有用的,但是許多都會(huì)對(duì)發(fā)酵產(chǎn)生不利的影響,需要進(jìn)行預(yù)處理。淀粉、糊精,缺點(diǎn):難利用、發(fā)酵液比較稠、一般2.0%時(shí)加入一定的-淀粉酶。成分比較復(fù)雜,有直鏈淀粉和支鏈淀粉等等。優(yōu)點(diǎn):來源廣泛、價(jià)格低,可以解除葡萄糖效應(yīng)。8. 什么是培養(yǎng)基?發(fā)酵培養(yǎng)基的特點(diǎn)和要求?培養(yǎng)基:廣義上講培養(yǎng)基

24、是指一切可供微生物細(xì)胞生長(zhǎng) 繁殖所需的一組營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和原料。同時(shí)培養(yǎng)基也為微生物培養(yǎng)提供除營(yíng)養(yǎng)外的其它所必須的條件。 發(fā)酵培養(yǎng)基的要求 培養(yǎng)基能夠滿足產(chǎn)物最經(jīng)濟(jì)的合成 發(fā)酵后所形成的副產(chǎn)物盡可能的少 培養(yǎng)基的原料應(yīng)因地制宜,價(jià)格低廉;且性能穩(wěn)定,資源豐富,便于采購運(yùn)輸,適合大規(guī)模儲(chǔ)藏,能保證生產(chǎn)上的供應(yīng)。 所選用的培養(yǎng)基應(yīng)能滿足總體工藝的要求,如不應(yīng)該影響通氣、提取、純化及廢物處理等。19什么是代謝控制發(fā)酵?代謝控制發(fā)酵的研究?jī)?nèi)容是什么?人為地改變微生物的代謝調(diào)控機(jī)制,是有用的中間代謝產(chǎn)物過量積累,這種發(fā)酵稱代謝控制發(fā)酵。研究?jī)?nèi)容:研究微生物的生理代謝規(guī)律,即生物合成各種代謝產(chǎn)物的途徑和代謝調(diào)節(jié)

25、機(jī)制,環(huán)境因素對(duì)代謝方向的影響以及改變微生物代謝方向的措施。20簡(jiǎn)述糖酵解的調(diào)節(jié)機(jī)制21什么是巴斯德效應(yīng)?巴斯德效應(yīng)的機(jī)制是什么?在好氣條件下,酵母菌發(fā)酵能力下降(細(xì)胞內(nèi)糖代謝降低,乙醇積累減少);不僅存在于酵母中,也存在于具有呼吸和發(fā)酵能力的其他細(xì)胞中。 機(jī)制;第一個(gè)調(diào)節(jié)點(diǎn)是磷酸果糖激酶,此酶是變構(gòu)酶,受ATP,檸檬酸及其他的高能化合物抑制,被AMP,ATP,激活。22在釀酒過程中影響雜醇油生成的原因是什么? 1,酵母菌種,2培養(yǎng)及組成,3發(fā)酵條件44. pH對(duì)發(fā)酵的影響表現(xiàn)在哪些方面?(1)pH影響酶的活性。當(dāng)pH值抑制菌體某些酶的活性時(shí)使菌的新陳代謝受阻。(2)pH影響微生物細(xì)胞膜所帶電

26、荷。從而改變細(xì)胞膜的透性,影響微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收及代謝物的排泄,因此影響新陳代謝的進(jìn)行。(3)pH值影響培養(yǎng)基某些成分和中間代謝物的解離,從而影響微生物對(duì)這些物質(zhì)的利用。(4)pH值影響代謝方向。pH不同,往往引起菌體代謝過程不同,使代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和比例發(fā)生改變。例如黑曲霉在pH23時(shí)發(fā)酵產(chǎn)生檸檬酸,在pH近中性時(shí),則產(chǎn)生草酸。谷氨酸發(fā)酵,在中性和微堿性條件下積累谷氨酸,在酸性條件下則容易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺。(5)pH在微生物培養(yǎng)的不同階段有不同的影響。45. 發(fā)酵過程的pH控制可以采取哪些措施?基礎(chǔ)培養(yǎng)基調(diào)節(jié)pH在基礎(chǔ)料中加入維持pH的物質(zhì)通過補(bǔ)料調(diào)節(jié)pH 當(dāng)補(bǔ)料與調(diào)pH發(fā)生

27、矛盾時(shí),加酸堿調(diào)pH 選擇合適的pH調(diào)節(jié)劑發(fā)酵的不同階段采取不同的pH值46. 泡沫對(duì)發(fā)酵有哪些有益之處,哪些有害之處?有利之處:氣體分散、增加氣液接觸面積有害之處:降低生產(chǎn)能力;引起原料浪費(fèi);影響菌的呼吸;引起染菌47. 發(fā)酵中泡沫形成的原因是什么?通氣攪拌;培養(yǎng)基配比與原料組成;菌種、種子質(zhì)量和接種量;滅菌質(zhì)量48. 羅氏假說對(duì)泡沫穩(wěn)定的條件作了如何假釋?在溶液中,溶解狀態(tài)的溶質(zhì)是穩(wěn)泡劑;不溶狀態(tài)的溶質(zhì),當(dāng)浸入系數(shù)與鋪展系數(shù)均為正值時(shí)即是消泡劑。49. 植物油的消泡機(jī)理是什么?當(dāng)其溶入泡沫液,會(huì)顯著降低該處的表面張力。 因?yàn)檫@些物質(zhì)一般對(duì)水的溶解度較小,表面張力的降低僅限于泡沫的局部,而泡

28、沫周圍的表面張力幾乎沒有變化。表面張力降低的部分被強(qiáng)烈地向四周牽引、延伸,最后破裂。50. 對(duì)消泡劑有哪些要求?(1)在起泡液中不溶或難溶(2)表面張力低于起泡液(3)與起泡液有一定程度的親和性 (4)與起泡液不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)(5)揮發(fā)性小,作用時(shí)間長(zhǎng)51 染菌對(duì)發(fā)酵有什么危害,對(duì)提煉有什么危害?染菌對(duì)發(fā)酵的危害: eq oac(,1)干擾生產(chǎn)菌的正常代謝,降低產(chǎn)量 eq oac(,2)改變pH,降解某些產(chǎn)物 eq oac(,3)污染不同的微生物,不同 eq oac(,4)階段染菌危害 eq oac(,5)染菌對(duì)提煉的危害: eq oac(,6)過濾困難而大幅度降低過濾收率 eq oac(,7)

29、有機(jī)溶劑萃取時(shí)發(fā)生乳化52 有哪些原因會(huì)引起染菌?1設(shè)備滲漏2空氣帶菌3種子帶菌4滅菌不徹底5技術(shù)管理不善53 染菌以后應(yīng)采取什么措施? 1發(fā)酵液必須滅菌后才可放下水道2尋找染菌的原因3染菌厲害時(shí),車間環(huán)境要用石灰消毒為什么會(huì)感染噬菌體?感染了噬菌體后應(yīng)采取哪些措施?產(chǎn)生噬菌體的原因1活菌體隨意排放,造成噬菌體的感染源2建立工廠環(huán)境清潔衛(wèi)生制度3感染噬菌體的培養(yǎng)物不得帶入菌種室、搖瓶間4發(fā)現(xiàn)噬菌體停攪拌、小通風(fēng),將發(fā)酵液加熱到70800C殺死噬菌體,才可排放。5環(huán)境用漂白粉消毒6選育抗噬菌體的菌種56. 空氣除菌方法有哪些? 1高溫除菌2 輻射除菌3 靜電除菌4介質(zhì)過濾除菌57. 介質(zhì)過濾的機(jī)

30、理是什么? 以棉花,玻璃纖維,尼龍等,纖維類或活性炭作為介質(zhì)填充呈一定厚度的過濾層,或者將玻璃纖維,聚乙烯醇,聚四氟乙烯,金屬燒結(jié)材料制成過濾層,其介質(zhì)間的空隙大于被濾出的微生物或塵埃,空氣流過這種介質(zhì)過濾層是,借助慣性碰撞,阻截,靜電吸附,擴(kuò)散特作用,將其微生物或塵埃截留在介質(zhì)層內(nèi),達(dá)到過濾的目的。58. 影響介質(zhì)過濾效率的因素有哪些? 1,介質(zhì)填充厚度與過濾之間的關(guān)系2,介質(zhì)填充密度與過濾之間的關(guān)系3,空氣流速與過濾效率之間的關(guān)系35. 為何氧容易成為好氧發(fā)酵的限制性因素?氧是需氧微生物生長(zhǎng)所必需的。氧往往容易成為控制因素,是因?yàn)檠踉谒械娜芙舛群艿停囵B(yǎng)基因含有大量的有機(jī)和無機(jī)物質(zhì),氧的

31、溶解度比水中還要更低。在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期即使發(fā)酵液中的氧濃度達(dá)到飽和,若此時(shí)終止供氧,發(fā)酵液中的溶氧可在幾分鐘內(nèi)全部耗盡,使溶氧成為控制因素。36. 比耗氧速度和呼吸強(qiáng)度的概念?比耗氧速度或呼吸強(qiáng)度(QO2):?jiǎn)挝粫r(shí)間內(nèi)單位重量的細(xì)胞所消耗的氧氣,mmol O2g菌-1h-119什么是代謝控制發(fā)酵?代謝控制發(fā)酵的研究?jī)?nèi)容是什么?人為地改變微生物的代謝調(diào)控機(jī)制,是有用的中間代謝產(chǎn)物過量積累,這種發(fā)酵稱代謝控制發(fā)酵。研究?jī)?nèi)容:研究微生物的生理代謝規(guī)律,即生物合成各種代謝產(chǎn)物的途徑和代謝調(diào)節(jié)機(jī)制,環(huán)境因素對(duì)代謝方向的影響以及改變微生物代謝方向的措施。21什么是巴斯德效應(yīng)?巴斯德效應(yīng)的機(jī)制是什么?在好氣條件

32、下,酵母菌發(fā)酵能力下降(細(xì)胞內(nèi)糖代謝降低,乙醇積累減少);不僅存在于酵母中,也存在于具有呼吸和發(fā)酵能力的其他細(xì)胞中。 機(jī)制;第一個(gè)調(diào)節(jié)點(diǎn)是磷酸果糖激酶,此酶是變構(gòu)酶,受ATP,檸檬酸及其他的高能化合物抑制,被AMP,ATP,激活。1、發(fā)酵工業(yè)對(duì)菌種的要求?答:能在廉價(jià)原料制成的培養(yǎng)基上生長(zhǎng),且生成目的產(chǎn)物產(chǎn)量高、易于回收;生長(zhǎng)較快,發(fā)酵周期短;培養(yǎng)條件易于控制;抗噬菌體及雜菌污染的能力強(qiáng);菌種不易變異退化,以保證發(fā)酵生產(chǎn)和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定;對(duì)放大設(shè)備的適應(yīng)性強(qiáng);菌種不是病原菌,不產(chǎn)生任何有害的生物活性物質(zhì)和毒素。2、誘變育種步驟答:出發(fā)菌株的選擇;處理菌懸液的制備;誘變處理;中間培養(yǎng);分離和篩選

33、。3、調(diào)節(jié)溶氧速率的方法?答: 調(diào)節(jié)通氣量;調(diào)節(jié)氧的分壓:富氧,增加空氣壓力; 調(diào)節(jié)氣液接觸時(shí)間:增加液位高度,增設(shè)擋板;調(diào)節(jié)氣液接觸面積:提高攪拌速率,空氣分布管及其直徑; 調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的特性:粘度、表面張力、菌體濃度,離子濃度。4、簡(jiǎn)述種子培養(yǎng)基的目的及其特點(diǎn)?答:培養(yǎng)種子的目的:擴(kuò)大培養(yǎng),增加細(xì)胞數(shù)量;同時(shí)也必須培養(yǎng)出強(qiáng)壯、健康、活性高的細(xì)胞,為了使細(xì)胞迅速進(jìn)行分裂或菌絲快速生長(zhǎng)。種子培養(yǎng)基特點(diǎn):必須有較完全和豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),特別需要充足的氮源和生長(zhǎng)因子;種子培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度不必太高。供孢子發(fā)芽生長(zhǎng)用的種子培養(yǎng)基,可添加一些易被吸收利用的碳源和氮源;種子培養(yǎng)基成分還應(yīng)考慮與發(fā)酵培

34、養(yǎng)基的主要成分相近。5、培養(yǎng)基中微量元素的主要作用是什么?答:微量元素(無機(jī)鹽類)是微生物生命活動(dòng)所不可缺少的物質(zhì)。主要作用是:構(gòu)成菌體成分;作為酶活性基的組成部分或維持酶的活性;調(diào)節(jié)滲透壓、pH值、氧化還原電位等;作為自養(yǎng)菌的能源。8、引起發(fā)酵液pH上升或者下降的因素有那些?答:(1)引起pH下降的因素: EQ oac(,1)培養(yǎng)基中碳氮比例不當(dāng),碳源過多,特別是葡萄糖過量,或者中間補(bǔ)糖過多加之溶解氧不足,致使有機(jī)酸大量積累。 EQ oac(,2)消泡油加的過多。 EQ oac(,3)生理酸性物質(zhì)的存在,氨被利用,pH下降。(2)引起pH上升的因素: EQ oac(,1)培養(yǎng)基中碳氮比例不當(dāng)

35、,氮源過多,氨基氮釋放,使pH上升 EQ oac(,2)生理堿性物質(zhì)的存在。 EQ oac(,3)中間補(bǔ)料中氨水或尿素等堿性物質(zhì)加入過多使pH上升。11、化學(xué)消泡的原理?答:化學(xué)消泡劑是表面活性劑,消泡劑本身的表面張力相對(duì)于發(fā)酵液來說是比較低的,一旦接觸到氣泡的表面,將會(huì)使氣泡膜局部的表面張力降低,力的平衡受到破壞,因而使氣泡破裂或合并,最后導(dǎo)致泡沫破裂。當(dāng)泡沫表面層存在著極性的表面活性物質(zhì)而形成雙電層時(shí),加入帶相反電荷的表面活性劑,可以降低膜的彈性(機(jī)械強(qiáng)度),或加入某些具有強(qiáng)極性的物質(zhì)與起泡劑爭(zhēng)奪液膜上的空間,并使液膜的機(jī)械強(qiáng)度降低,進(jìn)而促使泡沫破裂。當(dāng)泡沫的液膜具有較大的表面黏度時(shí),加入

36、某些分子內(nèi)聚力較弱的物質(zhì),可降低膜的表面黏度,從而促使液膜的液體流失而使泡沫破裂。26、簡(jiǎn)述抗生素的作用機(jī)制有哪幾類?答:抑制細(xì)胞壁合成的抗生素;影響細(xì)胞膜功能的抗生素;抑制核酸合成的抗生素;抑制蛋白質(zhì)合成的抗生素;抑制生物能作用的抗生素。青霉素發(fā)酵中造成異常溶氧可能原因?答:異常溶氧可能原因:(1)染菌:溶氧迅速下降,鏡檢。(2)染噬菌體:溶氧上升,C下降,發(fā)酵液迅速轉(zhuǎn)稀,應(yīng)及早處理,嚴(yán)防擴(kuò)大;(3)代謝異常:可能是有機(jī)酸大量積累,溶氧不足引起泡沫:27、青霉素和頭孢菌素合成的代謝調(diào)控?答:碳源分解代謝物阻遏;賴氨酸的反饋調(diào)節(jié);L甲硫氨酸(調(diào)節(jié)物)對(duì)頭孢菌素C形成的促進(jìn)作用;在頭孢菌素C的合

37、成過程中,擴(kuò)環(huán)和羥化是其中的關(guān)鍵反應(yīng)和限速階段 。纈氨酸是青霉素生物合成的前體物。28、青霉素發(fā)酵中造成異常溶氧可能原因?答:染菌:溶氧迅速下降,鏡檢。染噬菌體:溶氧上升,C下降,發(fā)酵液迅速轉(zhuǎn)稀,應(yīng)及早處理,嚴(yán)防擴(kuò)大;代謝異常:可能是有機(jī)酸大量積累,溶氧不足引起泡沫:29、青霉素提煉工藝中采用了哪些單元操作,為什么?答: 預(yù)處理:發(fā)酵液加少量絮凝劑沉淀蛋白。原因:濃度較低,含有大量雜質(zhì)。目的在于濃縮目的產(chǎn)物,去除大部分雜質(zhì),改變發(fā)酵液的流變學(xué)特征,利于后續(xù)的分離純化過程。過濾:去除蛋白、菌體及其它雜質(zhì)萃?。赫噍腿。簭臑V液萃取到乙酸丁酯;反相萃?。簭囊宜岫□シ摧腿〉剿嘀小7磸?fù)萃取23次,達(dá)到

38、結(jié)晶要求。脫色:萃取液中添加活性炭,除去色素、熱源,過濾,除去活性炭。在提取液中加活性炭150-300g/10億單位。結(jié)晶:萃取液用0.5 M NaOH萃取得pH6.4-6.8鈉鹽水濃縮液。加2.5倍體積丁醇,1626,0.67-1.3KPa下真空蒸餾。水和丁醇形成共沸物而蒸出。蒸出餾分中含水達(dá)2-4%時(shí),停止蒸餾。鈉鹽結(jié)晶析出。結(jié)晶經(jīng)過洗滌(丁醇4-6L/10億)、干燥后,得到青霉素產(chǎn)品。 青霉素游離酸在有機(jī)溶劑中的溶解度很大,當(dāng)它與某些金屬離子或有機(jī)胺結(jié)合后,由于極性增大,溶解度大大降低而自有機(jī)溶劑中析出。30、菌種篩選的方法?答:透明圈法:在平板培養(yǎng)基中加入溶解性較差的底物,使培養(yǎng)基混濁

39、。能分解底物的微生物便會(huì)在菌落周圍產(chǎn)生透明圈,圈的大小初步反應(yīng)該菌株利用底物的能力。變色圈法:對(duì)于一些不易產(chǎn)生透明圈產(chǎn)物的產(chǎn)生菌,可在底物平板中加入指示劑或顯色劑,使所需微生物能被快速鑒別出來。生長(zhǎng)圈法:生長(zhǎng)圈法通常用于分離篩選氨基酸、核苷酸和維生素的產(chǎn)生菌。抑菌圈法:常用于抗生素產(chǎn)生菌的分離篩選。抑菌圈法是常用的初篩方法,工具菌采用抗生素的敏感菌。21、簡(jiǎn)述賴氨酸的代謝控制發(fā)酵的方法?答:優(yōu)先合成的轉(zhuǎn)換滲漏缺陷型的選育;切斷支路代謝營(yíng)養(yǎng)缺陷型的選育;選育結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株;解除代謝互鎖;增加前體物的合成和阻塞副產(chǎn)物生成;6、用工藝流程圖表述發(fā)酵生產(chǎn)中制備無菌空氣的過程?答:空氣高空取氣管除

40、塵器空氣壓縮機(jī)貯氣罐一級(jí)冷卻器油水分離器二級(jí)分離器除霧器加熱器總過濾器分過濾器無菌空氣1、微生物誘變育種的基本步驟有哪些?并列舉1-2種常用的誘變劑及其作用機(jī)制出發(fā)菌株的選擇 斜面活化 單孢子懸液制備 誘變處理 平板涂布 初篩 復(fù)篩 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件篩選 中試 大試 菌種保藏。常用誘變劑:如 紫外線:機(jī)理為:使染色體上相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體,從而導(dǎo)致發(fā)生錯(cuò)譯,而使微生物發(fā)生變異。亞硝酸:機(jī)理為脫去堿基上的氨基。2、簡(jiǎn)述工業(yè)微生物菌種保藏的原理和意義。原理:根據(jù)菌種的生理生化特點(diǎn),人為地創(chuàng)造條件,使孢子或菌體的生長(zhǎng)代謝活動(dòng)盡量降低,以減少其變異。意義:菌種保藏是進(jìn)行微生物學(xué)研究和微生物育種工作

41、的重要組成部分,為微生物產(chǎn)品的生產(chǎn)、科研提供菌種,并便于菌種交換,保證菌種不死亡、不污染、不變異。3、在分離篩選規(guī)?;a(chǎn)的工業(yè)微生物菌種時(shí),需考慮哪些重要的指標(biāo)?(1)菌種能利用廉價(jià)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并來源豐富;(2)菌種的生長(zhǎng)溫度應(yīng)高于40,可以降低生產(chǎn)成本;(3)菌對(duì)所采用的設(shè)備和生產(chǎn)過程的適應(yīng)性;(4)菌的穩(wěn)定性;(5)菌的產(chǎn)物得率和產(chǎn)物在培養(yǎng)液中的濃度;(6)容易從培養(yǎng)液中回收產(chǎn)物。4、利用原生質(zhì)體融合技術(shù)可以大大提高重組頻率,擴(kuò)大重組幅度,因而已廣泛應(yīng)用于工業(yè)新菌株的培育。請(qǐng)簡(jiǎn)述原生質(zhì)體融合技術(shù)的主要優(yōu)點(diǎn)。(1)去除了原生質(zhì)體的障礙,親株基因組直接融合、交換,實(shí)現(xiàn)重組;(2)原生質(zhì)體融合

42、后兩親株的基因組之間有機(jī)會(huì)發(fā)生多次交換,產(chǎn)生各種各樣的基因組合而得到多種類型的重組子;(3)重組頻率高;(4)可以和其他育種方法相結(jié)合;(5)可以用溫度、紫外線等處理、鈍化親株的一方或雙方,然后使之融合,再在再生菌落中篩選重組子。5、簡(jiǎn)述DNA重組技術(shù)的基本操作過程。(1)含目的基因DNA片斷的獲得;(2)載體的選擇;(3)含目的基因DNA片斷與載體的連接;(4)將重組分子送入受體細(xì)胞,并于其中復(fù)制、擴(kuò)增;(5)篩選出帶有重組DNA分子的轉(zhuǎn)化細(xì)胞;(6)鑒定外源基因的表達(dá)產(chǎn)物。6、試簡(jiǎn)單說明防止或降低基因工程菌表達(dá)不穩(wěn)定性的主要措施。(1)組建合適載體;(2)選擇適當(dāng)宿主;(3)施加選擇壓力;

43、(4)控制基因過量表達(dá);(5)控制培養(yǎng)條件。7、土壤是微生物生活的大本營(yíng),生活著各種各樣的微生物。目前工業(yè)上所利用的微生物大多是從土壤中分離獲得的。請(qǐng)你設(shè)計(jì)一種從土壤中分離固氮菌的分離方法。(1)培養(yǎng)基的選擇:配制完全無氮的培養(yǎng)基作為分離固氮菌的選擇性培養(yǎng)基。(2)取樣:選擇比較肥沃的菜園土作為分離固氮菌的土樣。(3)土壤懸浮液的制備:稱取10克土樣置于100mL帶有玻璃珠的無菌水中,充分搖勻。(4)稀釋:按照10倍稀釋法將土壤懸浮液稀釋到一定的稀釋度。(5)涂布:分別取最后三個(gè)不同的稀釋度的稀釋液于完全無氮的選擇性培養(yǎng)基平板中央,用滅菌的涂布器涂布均勻,置于37恒溫箱中培養(yǎng)至長(zhǎng)出單菌落。(6

44、)分離純化:挑取單菌落于完全無氮選擇性培養(yǎng)基平板用劃線的方法劃線純化,直到菌體形態(tài)完全一致為止,接種于斜面保藏。8、利用微生物生產(chǎn)抗生素、氨基酸、釀造等都離不開菌種,因而菌種保藏是微生物研究和育種工作的重要組成部分。要讓菌種不致死亡,同時(shí)還要盡可能將其優(yōu)良特性保持下來。試說明菌種保藏的原理,根據(jù)不同的生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)條件,闡述12種常用的菌種保藏方法。原理:根據(jù)菌種的生理生化特點(diǎn),人為地創(chuàng)造條件,使孢子或菌體的生長(zhǎng)代謝活動(dòng)盡量降低,以減少其變異。1.斜面低溫保藏法將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上,待菌充分生長(zhǎng)后,棉塞部分用油紙包扎好,移至28的冰箱中保藏。保藏時(shí)間依微生物的種類而有不同,霉菌、放線

45、菌及有芽孢的細(xì)菌保存24個(gè)月,移種一次。酵母菌兩個(gè)月,細(xì)菌最好每月移種一次。此法為實(shí)驗(yàn)室和工廠菌種室常用的保藏法,優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單,使用方便,不需特殊設(shè)備,能隨時(shí)檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點(diǎn)是容易變異,因?yàn)榕囵B(yǎng)基的物理、化學(xué)特性不是嚴(yán)格恒定的,屢次傳代會(huì)使微生物的代謝改變,而影響微生物的性狀;污染雜菌的機(jī)會(huì)亦較多。2沙土保藏法 (1)取河沙加入10稀鹽酸,加熱煮沸30分鐘,以去除其中的有機(jī)質(zhì)。 (2)倒去酸水,用自來水沖洗至中性。 (3)烘干,用40目篩子過篩,以去掉粗顆粒,備用。 (4)另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土,加自來水浸泡洗滌數(shù)次,直至中性。 (5)烘干,碾

46、碎,通過100目篩子過篩,以去除粗顆粒。 (6)按一份黃土、三份沙的比例(或根據(jù)需要而用其他比例,甚至可全部用沙或全部用土)摻合均勻,裝入10100mm的小試管或安瓿管中,每管裝1g左右,塞上棉塞,進(jìn)行滅菌,烘干。 (7)抽樣進(jìn)行無菌檢查,每10支沙土管抽一支,將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中,37培養(yǎng)48小時(shí),若仍有雜菌,則需全部重新滅菌,再作無菌試驗(yàn),直至證明無菌,方可備用。 (8)選擇培養(yǎng)成熟的(一般指孢子層生長(zhǎng)豐滿的,營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞用此法效果不好)優(yōu)良菌種,以無菌水洗下,制成孢子懸液。 (9)于每支沙土管中加入約05ml(一般以剛剛使沙土潤(rùn)濕為宜)孢子懸液,以接種針拌勻。 (10)放入真空干燥器內(nèi),用

47、真空泵抽干水分,抽干時(shí)間越短越好,務(wù)使在12小時(shí)內(nèi)抽干。 (11)每10支抽取一支,用接種環(huán)取出少數(shù)沙粒,接種于斜面培養(yǎng)基上,進(jìn)行培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況和有無雜菌生長(zhǎng),如出現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或根本不長(zhǎng),則說明制作的沙土管有問題,尚須進(jìn)一步抽樣檢查。(12)若經(jīng)檢查沒有問題,用火焰熔封管口,放冰箱或室內(nèi)干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。(13)需要使用菌種,復(fù)活培養(yǎng)時(shí),取沙土少許移入液體培養(yǎng)基內(nèi),置溫箱中培養(yǎng)。 此法多用于能產(chǎn)生孢子的微生物如霉菌、放線菌,因此在抗生素工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用最廣,效果亦好,可保存2年左右,但應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞效果不佳。菌種保藏的方法有那些?答:冷凍保藏(液氮-196或低溫

48、冰箱-70) 干燥保藏(沙土管保藏,冷凍真空保藏) 低溫保藏(4短時(shí)間) 傳代保藏 懸液保藏發(fā) 對(duì)于重要的菌種,應(yīng)該選用不同的保藏方法保藏,以避免菌種丟失,其主要保藏原理降低微生物的代謝水平或使其處于休克狀態(tài),所以低溫,少水環(huán)境均可或者兩者兼用.3、什么是選擇性培養(yǎng)基?它在工業(yè)生產(chǎn)中有何重要性?試舉一例說明。(1)選擇性培養(yǎng)基:指適合于某種微生物或某類微生物生長(zhǎng),但不適合于其他微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。(2)重要性:利用選擇性培養(yǎng)基可以分離采用常規(guī)方法分離不到的工業(yè)微生物菌種。(1)培養(yǎng)基的選擇:配制完全無氮的培養(yǎng)基作為分離固氮菌的選擇性培養(yǎng)基。(2)取樣:選擇比較肥沃的菜園土作為分離固氮菌的土樣。

49、(3)土壤懸浮液的制備:稱取10克土樣置于100mL帶有玻璃珠的無菌水中,充分搖勻。(4)稀釋:按照10倍稀釋法將土壤懸浮液稀釋到一定的稀釋度。(5)涂布:分別取最后三個(gè)不同的稀釋度的稀釋液于完全無氮的選擇性培養(yǎng)基平板中央,用滅菌的涂布器涂布均勻,置于37恒溫箱中培養(yǎng)至長(zhǎng)出單菌落。(6)分離純化:挑取單菌落于完全無氮選擇性培養(yǎng)基平板用劃線的方法劃線純化,直到菌體形態(tài)完全一致為止,接種于斜面保藏。6、簡(jiǎn)述作為發(fā)酵種子的主要準(zhǔn)則。(1)菌種生活力強(qiáng),移種至發(fā)酵罐后能迅速生長(zhǎng),延滯期縮短。(2)生理性狀穩(wěn)定。(3)菌體總量濃度能滿足大容量發(fā)酵罐的要求。(4)無雜菌污染。(5)保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力。1、

50、簡(jiǎn)述發(fā)酵過程中引起發(fā)酵液pH值上升的因素。(1)培養(yǎng)基中碳氮比例不當(dāng),氮源過高,氨基氮釋放,使pH上升。(2)生理堿性物質(zhì)的存在。(3)中間補(bǔ)料中氨水或尿素等堿性物質(zhì)加入過多,使pH上升。2、簡(jiǎn)述發(fā)酵過程中引起發(fā)酵液pH值下降的因素。(1)培養(yǎng)基中碳氮比例不當(dāng),碳源過多,特別是葡萄糖過量,或者中間補(bǔ)糖過多,加之溶解氧不足,致使有機(jī)酸大量積累,使pH下降。(2)消沫油加量過多。(3)生理酸性物質(zhì)的存在,NH3被利用,使pH下降。3、試論溫度對(duì)發(fā)酵的影響。(1)從酶的動(dòng)力學(xué)來看,溫度升高,反應(yīng)速率加大,生長(zhǎng)代謝加快,生產(chǎn)周期提前,但因酶本身很容易因熱而失去活性,溫度越高,酶的失活也越快,表現(xiàn)為菌體

51、容易衰老,發(fā)酵周期縮短,影響產(chǎn)物的最終產(chǎn)量。(2)溫度除直接影響反應(yīng)速率外,還通過改變發(fā)酵液的物理性質(zhì)間接影響菌的生物合成。(3)溫度影響生物合成方向。如四環(huán)素發(fā)酵中,金色鏈霉菌能同時(shí)產(chǎn)生金霉素。溫度小于30,合成金霉素能力較強(qiáng),溫度大于30,則合成四環(huán)素的能力較強(qiáng)。4、發(fā)酵要求在沒有雜菌污染的情況下進(jìn)行,因而滅菌是微生物工業(yè)生產(chǎn)的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。試論述生產(chǎn)過程中被雜菌污染后產(chǎn)生的不良后果和采取哪些措施來防止雜菌污染。不良后果(1)由于雜菌的污染,使生物化學(xué)反應(yīng)的基質(zhì)或產(chǎn)物消耗,造成產(chǎn)率下降。(2)由于雜菌所產(chǎn)生的某些代謝產(chǎn)物,或染菌后發(fā)酵液的某些理化性質(zhì)的改變,使產(chǎn)物的提取變得困難。(3)污染

52、的雜菌可能會(huì)分解產(chǎn)物而使生產(chǎn)失敗。(4)污染的雜菌大量繁殖,會(huì)改變反應(yīng)介質(zhì)的pH值,從而使生物化學(xué)反應(yīng)發(fā)生異常變化。(5)發(fā)生噬菌體污染,微生物細(xì)胞被裂解而使生產(chǎn)失敗。措施:(1)設(shè)備滅菌并確保無泄露。(2)所用培養(yǎng)基必須滅菌。(3)通入的氣體應(yīng)經(jīng)除菌處理。(4)種子無污染,確保純種。(5)培養(yǎng)過程中加入的物料應(yīng)經(jīng)滅菌處理。3、應(yīng)用植物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物的優(yōu)點(diǎn)有哪些?(1)動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)周期長(zhǎng),生長(zhǎng)緩慢,生產(chǎn)率低;而微生物細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)速度快,周期短,生產(chǎn)率高。(2)動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)營(yíng)養(yǎng)要求高,而微生物細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)要求相對(duì)較低。(3)動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)液有效成分濃度低,而微生物細(xì)胞培養(yǎng)液中有效成分

53、濃度相對(duì)較高。(4)動(dòng)植物細(xì)胞大量培養(yǎng)時(shí)相對(duì)困難,而微生物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)相對(duì)容易。(5)動(dòng)物細(xì)胞對(duì)外界因素敏感,而微生物細(xì)胞要好得多。4、簡(jiǎn)述動(dòng)、植物細(xì)胞培養(yǎng)與微生物培養(yǎng)的區(qū)別(1)次生物質(zhì)的生產(chǎn)可在可控條件下進(jìn)行,并不受地域和季節(jié)的影響。(2)在無菌條件下生長(zhǎng),可排除雜菌和蟲害的侵襲。(3)可進(jìn)行特定的生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)而得到均一的有效成分。(4)可以探索新的合成路線和獲得新的有用物質(zhì)。2、以青霉素生產(chǎn)工藝為例,簡(jiǎn)要說明抗生素發(fā)酵工藝流程。冷凍管 斜面母瓶 大米孢子 一級(jí)種子罐 二級(jí)種子罐 發(fā)酵罐 放罐 提取3、單細(xì)胞蛋白(Single-Cell-Protein)是通過培養(yǎng)單細(xì)胞生物而獲得的菌體蛋白質(zhì)

54、。以流程圖形式,試說明單細(xì)胞蛋白生產(chǎn)的一般工藝過程。 培養(yǎng)基、水斜面菌種 種子擴(kuò)大培養(yǎng) 發(fā)酵培養(yǎng) 培養(yǎng)液 分離 菌體 水解 分離 蛋白質(zhì)抽提洗滌 純化 干燥 干燥 動(dòng)物飼料 食品判斷題次級(jí)代謝產(chǎn)物的大量分泌通常是在細(xì)胞迅速生長(zhǎng)階段內(nèi)形成。( )次級(jí)代謝產(chǎn)物是某些微生物生長(zhǎng)所必需的。( )在分離產(chǎn)生透明圈的微生物時(shí),透明圈的大小完全可以作為選擇高產(chǎn)菌的依據(jù)。()適合菌體生長(zhǎng)的溫度不一定是產(chǎn)物合成的溫度。( )磷是細(xì)胞核酸和蛋白質(zhì)的重要組成成分,為了保證微生物的正常生長(zhǎng)和代謝,可以在培養(yǎng)基中加入大量的磷元素。( )通常采用正交實(shí)驗(yàn)來確定培養(yǎng)基的各組分和濃度。( )7、當(dāng)培養(yǎng)基中碳源含量過多,加上供

55、氧不足或中間補(bǔ)糖過多,則發(fā)酵液的pH值上升。( )8、溫度對(duì)發(fā)酵的影響除了直接影響發(fā)酵過程中各種反應(yīng)速率外,還通過改變發(fā)酵液的物理性質(zhì),間接影響菌的生物合成。( )9、自然選育可以達(dá)到純化菌種,防止菌種衰退,提高產(chǎn)量的目的,但最大缺點(diǎn)是效率低,進(jìn)展慢( )10、分批發(fā)酵在整個(gè)發(fā)酵過程中,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度不發(fā)生變化。( )11、自然選育可以達(dá)到純化菌種,防止菌種衰退,提高產(chǎn)量的目的,但最大缺點(diǎn)是效率低,進(jìn)展慢。( )12、生物合成最適氧濃度與臨界氧濃度是相同的。( )13、培養(yǎng)基過于豐富,菌體生長(zhǎng)旺盛,發(fā)酵液稠度增加,對(duì)產(chǎn)物合成有利。( )14、工業(yè)微生物各種菌均不存在最適的pH值范圍。( )15

56、、用海藻酸鹽固定酶或細(xì)胞是利用包埋法的原理。( )16、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中以葡萄糖和谷氨酰胺為主要碳源和能源,代謝的主要副產(chǎn)物是乳酸和氨。( )17、在生物反應(yīng)器中,如有足夠的生物催化劑,就一定能達(dá)到很高的生產(chǎn)速率。( )18、分批發(fā)酵在整個(gè)發(fā)酵過程中,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度不發(fā)生變化。( )19、將配制好的培養(yǎng)基在向發(fā)酵罐輸送的同時(shí)加熱、保溫和冷卻,進(jìn)行滅菌的過程,稱為連續(xù)滅菌。( )20、氮芥是一種極易揮發(fā)的油狀物,其誘變作用機(jī)制是引起細(xì)胞染色體畸變。( )21、將配制好的培養(yǎng)基放在發(fā)酵罐或其它裝置中,通入蒸汽將培養(yǎng)基和所用設(shè)備一起進(jìn)行滅菌的操作過程,稱為培養(yǎng)基的分批滅菌。( )22、在培養(yǎng)過程中,為

57、了解除培養(yǎng)液里積累的細(xì)胞代謝產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用而影響產(chǎn)物的生產(chǎn),可以采用透析的培養(yǎng)方法來提高產(chǎn)物的生產(chǎn)率。( )23、亞硝酸是一種常用的有效誘變劑,其誘變作用主要是脫去堿基中的氨基。( )24、將酶包裹于凝膠格子或聚合物半透膜膠囊中的方法稱為包埋法。( )25、在培養(yǎng)過程中,為了解除培養(yǎng)液里積累的細(xì)胞代謝產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用而影響產(chǎn)物的生產(chǎn),可以采用透析的培養(yǎng)方法來提高產(chǎn)物的生產(chǎn)率。( )26、在生物反應(yīng)器中,如有足夠的生物催化劑,就一定能達(dá)到很高的生產(chǎn)速率。( )27、紫外線的誘變作用機(jī)制主要是引發(fā)形成高反應(yīng)性的離子。( )附錄資料:不需要的可以自行刪除煤礦礦井機(jī)電設(shè)備完好標(biāo)準(zhǔn)一、

58、通用部分1、 緊固件1.1 緊固用的螺栓、螺母、墊圈等齊全、緊固、無銹蝕。1.2 同一部位的螺母、螺栓規(guī)格一致。平墊、彈簧墊圈的規(guī)格應(yīng)與螺栓直徑相符合。緊固的螺栓、螺母應(yīng)有防松裝置。1.3 用螺栓緊固不透明螺孔的部件,緊固后螺孔須留有大于2倍防松墊圈的厚度的螺紋余量。螺栓擰入螺孔長(zhǎng)度應(yīng)不小于螺栓直徑,但鑄鐵、銅、鋁件應(yīng)不小于螺栓直徑的1.5倍。1.4 螺母緊固后,螺栓螺紋應(yīng)露出螺母13個(gè)螺距,不得在螺母下面加多余墊圈減少螺栓的伸出長(zhǎng)度。1.5 緊固在護(hù)圈內(nèi)的螺栓或螺母,其上端平面不得超出護(hù)圈高度,并需用專用工具才能松、緊。2、 隔爆性能2.1 隔爆結(jié)合面(I類)的間隙、直徑差或最小有效長(zhǎng)度(寬

59、度)必須符合表4-1-1的規(guī)定。表中 L 靜止隔爆接合面的最小有效長(zhǎng)度;L1 螺栓通孔邊緣至隔爆接合面邊緣的最小有效長(zhǎng)度;W 靜止隔爆接合面及操縱桿與桿孔隔爆接合面最大間隙或直徑差;轉(zhuǎn)軸與軸孔隔爆接合面最大直徑差。但快動(dòng)式門或蓋的隔爆接合面的最小有效長(zhǎng)度須不小于25mm。 表4-1-1I類隔爆接合面結(jié)構(gòu)參數(shù)mm接合面型 式LL1W外殼容積V(t)V0.1V0.1平面、止口或圓筒結(jié)構(gòu)6.012.525.040.06.08.09.015.00.300.400.500.400.500.60帶有滾動(dòng)軸承的圓筒結(jié)構(gòu)6.012.525.040.00.400.500.600.400.500.600.802.

60、2 操縱桿直徑(d)與隔爆接合面長(zhǎng)度(L)應(yīng)符合表4-1-2的規(guī)定。表4-1-2操縱桿直徑或圓筒直徑與隔爆接合面的結(jié)構(gòu)參數(shù)mm操縱桿直徑隔爆接合面長(zhǎng)度d66d2525dL6LdL252.3 隔爆電動(dòng)機(jī)軸與軸孔的隔爆接合面在正常工作狀態(tài)下不應(yīng)產(chǎn)生摩擦。用圓筒隔爆接合面時(shí),軸與軸孔配合的最小單邊間隙須不小于0.075mm;用滾動(dòng)軸承結(jié)構(gòu)時(shí),軸與軸孔的最大單邊間隙須不大于表4-1-1規(guī)定W值的。2.4 隔爆接合面的表面粗糙度不大于;操縱桿的表面粗糙度不大于。2.5 螺紋隔爆結(jié)構(gòu):螺紋精度不低于3級(jí);螺距不小于0.7mm;螺紋的最少嚙合扣數(shù)、最小擰入深度應(yīng)符合表4-1-3的規(guī)定。表4-1-3螺紋的最少

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