細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用品準(zhǔn)備方案

1、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用品準(zhǔn)備方案.種類：細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用品均為無(wú)菌，除了玻璃容器與pasteur pipet外，其它均為塑料 無(wú)菌制品。TC級(jí)培養(yǎng)盤(pán)外表均有coating高分子物質(zhì)以讓細(xì)胞吸附，培養(yǎng)容器種類有 Tflask, plates, dishes, roller bottle ,依實(shí)驗(yàn)需要使用。plastic sterile pipet: 1 ml, 2 ml,5 ml, 10 ml, 25 ml塑料離心管：15 ml, 50 ml,均有2種不同材質(zhì)，其中polypropylene (PP)為不透 明材質(zhì)，polystyrene (PS)為透明材質(zhì)，可依實(shí)驗(yàn)需要而選擇適合材質(zhì)之離心管。glass

2、 pastucr pipet: 9 inch,用以抽掉廢棄培養(yǎng)液等。玻璃血清瓶(Pyrex or Duran glassware)： 100 ml, 250 ml,50() ml, 1000ml.清洗：新購(gòu)玻璃血清瓶先以().1().()5 NHC1浸泡數(shù)小時(shí)，洗凈后才開(kāi)始使用。用過(guò)之玻璃血清瓶，以高壓蒸汽滅菌，洗凈后分別用一次與二次去離子水沖洗 干凈，勿加清潔劑清洗。.滅菌：實(shí)驗(yàn)用玻璃血清瓶以鋁箔紙包覆瓶蓋，高壓蒸汽滅菌121c, 15 1b, 20分鐘，置 于oven中烘干。實(shí)驗(yàn)用玻璃pasteur pipet以干熱滅菌170,4小時(shí)。液體或是固體廢棄物可用10%hypochloride溶

3、液(次氯酸，即漂白水)或是蒸汽 高壓滅菌121 , 151b,20分鐘處理。無(wú)菌室的滅菌：.定期清掃無(wú)菌室：每周清掃一次，先用自來(lái)水拖地、擦桌子、超凈工作臺(tái)等，然后 用3%。來(lái)蘇爾或者新潔爾火或者0.5%過(guò)氧乙酸擦拭。.CO2孵箱(培養(yǎng)箱)滅菌：先用3%。新潔爾滅擦拭，然后用75%酒精擦拭或者0.5% 過(guò)氧乙酸，再用紫外燈照射.實(shí)驗(yàn)前滅菌：翻開(kāi)紫外燈、三氧殺菌機(jī)、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘.實(shí)驗(yàn)后滅菌：用75%酒精(3%。新潔爾滅)擦拭超凈臺(tái)、邊臺(tái)、倒置顯微鏡的載物臺(tái)。實(shí)驗(yàn)人員的無(wú)菌準(zhǔn)備：.肥皂洗手。.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋.用75 %酒精棉球擦凈雙手。無(wú)菌操作的演示：.但

4、凡帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦 拭瓶子的外外表.靠近酒精燈火焰操作。.器皿使用前必須過(guò)火滅菌.繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時(shí)仍要過(guò)火。.各種操作要靠近酒精燈，動(dòng)作要輕、準(zhǔn)確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。.吸取兩種以上的使用液時(shí)要注意更換吸管，防止交叉污染。器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：.自來(lái)水刷洗，除去灰塵。.烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5%稀鹽酸中12小時(shí)以除去臟物、鉛、碑 等物。.刷洗、烘干：12小時(shí)后立即用自來(lái)水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來(lái)水沖干凈后用烤 箱烘干。.泡酸、清洗：用清潔液（重銘酸

5、鉀120g：濃硫酸200ml：蒸儲(chǔ)水1000ml）浸泡12 小時(shí)，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來(lái)水沖洗15次，最后蒸儲(chǔ)水沖洗3.5次和用雙蒸 水過(guò)3次。.烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙（油光紙）包裝。.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，翻開(kāi)開(kāi)關(guān)和安全閥，當(dāng)蒸氣成直 線上升時(shí)，關(guān)閉安全閥，當(dāng)指針指向15磅時(shí)，維持20-30分鐘。.高壓消毒后烘干二、舊的玻璃器皿的洗消：.刷洗、烘干：使用過(guò)的玻璃器皿可直接泡入來(lái)蘇爾液或洗滌劑溶液中，泡過(guò)來(lái)蘇爾溶液（洗滌劑）的器皿要用清水刷洗干凈，然后烘干。.泡酸、清洗：烘干后泡入清潔液（酸液），12小時(shí)后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來(lái) 水沖洗（防止蛋白

6、質(zhì)干涸后粘附于玻璃上難以清洗），再用蒸儲(chǔ)水沖洗3次。.烘干、包裝：洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙（油光紙）等包裝，以便于消毒儲(chǔ) 存及防止灰塵和再次被污染。.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)，蓋好蓋子，翻開(kāi)開(kāi)關(guān)和安全閥，隨著溫度 的上升安全閥冒出蒸氣，當(dāng)蒸氣成直線冒出3-5分鐘后，關(guān)閉安全閥，氣壓表指數(shù) 隨之上升，當(dāng)指針指向15磅時(shí)，調(diào)節(jié)電開(kāi)關(guān)維持20-30分鐘即可。（玻璃培養(yǎng)瓶消 毒前可將膠帽輕輕蓋上）.烘干備用：因?yàn)楦邏合竞笃髅髸?huì)被蒸氣打濕，所以要放入烤箱內(nèi)烘干備用。金屬器械洗消：金屬器皿不能泡酸，洗消時(shí)可先用洗滌劑刷洗，后用自來(lái)水沖干凈，然后用75%酒 精擦拭，再用自來(lái)水，然后用蒸馀水

7、沖洗，再烘干或空氣中晾干。放入鋁制盒內(nèi)包 裝好在高壓鍋內(nèi)15磅高壓（30分鐘）消毒，再烘干備用。橡膠和塑料：橡膠和制品通常處理方法是：先用洗滌劑洗刷干凈，再分別用自來(lái)水和蒸鏘水沖干凈， 再用烤箱烘干，然后根據(jù)不同品質(zhì)進(jìn)行如下的處理程序：.針式濾器帽不能泡酸液，用NaOH泡6-12小時(shí)，或者煮沸20分鐘，在包裝之前要裝好 濾膜兩張，安裝濾膜時(shí)注意光面朝上（凹向上），然后將螺旋稍微擰松一些，放入鋁 盒中在高壓鍋內(nèi)15磅30分鐘消毒，再烘干備用。注意在超凈臺(tái)內(nèi)取出使用時(shí)應(yīng)該 立即將螺旋旋緊。.膠塞烘干后用2%氫氧化鈉溶液煮沸30分鐘（用過(guò)的膠塞只要用沸水處理30分鐘）, 自來(lái)水洗凈，烘干。然后再泡入

8、鹽酸液30分鐘，再用自來(lái)水，蒸儲(chǔ)水，三蒸水洗凈， 烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用。.膠帽，離心管帽烘干后只能在2%氫氧化鈉溶液中浸泡6-12小時(shí)（切記時(shí)間不能過(guò) 長(zhǎng)），自來(lái)水洗凈，烘干。然后再泡入鹽酸液30分鐘，再用自來(lái)水，蒸儲(chǔ)水，三蒸 水洗凈，烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用。.膠頭可用75%酒精浸泡5分鐘，然后紫外照射后使用即可。.塑料培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)板，凍存管：.其他消毒方法：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸氣消毒，可用70%酒精浸泡消 毒。塑料培養(yǎng)皿翻開(kāi)蓋子，放在超凈臺(tái)臺(tái)面上，直接暴露在紫外線下消毒。也可用 氧化乙烯消毒塑料制品，消毒后需要用23周時(shí)間洗除殘留的氧化乙烯。用20000 -lOOOOOrad的r射線消毒塑料制品效果最好。為了防止清洗器材已消毒與末消毒發(fā)生混淆，可在紙包裝后，用密寫(xiě)墨水作好標(biāo)記。 其法即用沾水筆或毛筆沾以密寫(xiě)墨水，在包裝紙上作一記號(hào)，平時(shí)這種墨水不帶痕 跡，一經(jīng)高溫，即出現(xiàn)字跡，從而可以判定它們是否消毒。密寫(xiě)墨水的配制：氯化 鉆(CoC12 6H2o)2g, 30%鹽酸 10ml,蒸僧水 88ml?？记绊氈?嚴(yán)格執(zhí)行高壓鍋的操作規(guī)程：高壓消毒時(shí)，先檢查鍋內(nèi)是否有蒸儲(chǔ)水，以防高壓時(shí) 燒干，水不能過(guò)多因?yàn)槠鋵⑹箍諝饬鲿呈茏瑁瑫?huì)降低高壓消毒效果。檢查安全閥是 否通暢，以防高壓時(shí)爆炸