DNA提取各種緩沖液的配制資料講解

1、DNA 提取各種緩沖液的配制精品資料植物總 DNA 的提取一、所需儀器設(shè)備及消耗品剪刀、塑料袋（封口）、冰箱、棕色廣口瓶（ 1000、500、200、 100、50ml）、量筒（ 1000、 500、 100、10ml）、燒杯（ 1000、500、 200、100ml）、 pH 試紙、電子天平、高壓滅菌鍋、研缽、液氮罐（液氮）、水浴鍋、離心機、移液器（ 1 套）、槍頭（ 1ml、 200ml、20l）、槍頭盒、離心管（ 1.5ml）（包括盒和架）、一次性手套、電泳儀、電泳槽、塑料膠帶（寬）、微波爐、凝膠成像系統(tǒng)、垃圾桶、冰盒（自制）、記號筆、單面刀片二、所需化學(xué)藥品及試劑CTAB 、 NaCl

2、、 EDTA-Na 2 2H2O、Tris、冰乙酸、硼酸、 -巰基乙醇、NaAc、氯仿（三氯甲烷）、異戊醇、無水乙醇、溴酚藍、瓊脂糖、蔗糖、溴化乙錠（ EB）、 RNase、 NaOH、HCl （濃）、 ddH2O三、各種緩沖液的配制（一） 2%CTAB 提取緩沖液（ 300ml）（高壓滅菌）4mol/L 的 NaCl35ml3=105ml1mol/L 的 Tris-HCl10ml3=30ml0.5mol/L 的 EDTA4ml3=12mlCTAB2g 3=6g（二） 1TE（母液 pH8.0）（ 50ml）（高壓滅菌）1mol/L 的 Tris-HCl （pH8.0）500l0.5mol/L

3、 的 EDTA （pH8.0）100l最后加 ddH2O 定容到50ml工作液為 0.1 TE （45ml 滅菌的 ddH2O 中，加入 5ml 已滅菌的 1TE）（三） 4mol/L 的 NaCl（150ml）（高壓滅菌）35.055g的 NaCl，加 ddH2O120ml 溶解，再加水定容到150ml（四） 1mol/L 的 NaCl（400l）（用于配制 RNase儲存液）僅供學(xué)習(xí)與交流，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝 1精品資料取 4mol/L 的 NaCl（已滅菌） 100l，加 300l 滅菌的 ddH2O。（五） 3mol/L 的 NaAc 溶液（ pH5.2）（ 50ml）（高壓滅

4、菌）NaAc3H2O20.405g加 ddH2O30ml用冰乙酸調(diào)節(jié) pH 至5.2加 ddH2O 定容到50ml（六） RNase儲存液（ 10mg/ml）（ 1ml）1mol/L 的 Tris-HCl （pH7.5） 10l1mol/L 的 NaCl15lRNase10mg沸水浴 1520min（七） EB 儲存液（ 1mg/ml）EB30mgddH2O30ml磁力攪拌至完全溶解，裝入棕色瓶，鋁箔包裹，保存于室溫。制膠時 EB 終濃度為 0.5g/ml （30ml 加 15l、40ml 加 20l）（八） 10TBE 緩沖液（電泳緩沖液） （高壓滅菌）Tris 堿54g硼酸27.5g0.5

5、mol/L 的 EDTA （ pH8.0） 20ml以上溶于 400ml 的 ddH2O 中，在定容到 500ml工作液為 1TBE 或 0.5 TBE（九） 6上樣緩沖液（ 4保存）0.25%的溴酚藍（ 2.5mg/1ml 40%（w/v ）的蔗糖水溶液）僅供學(xué)習(xí)與交流，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝 2精品資料40%（w/v ）蔗糖水溶液（ 2g/5ml 的 ddH2O，加熱溶解，注：溫度不能太高）（十） 1mol/L 的 HCl 溶液（不用滅菌）8.62 ml 的濃鹽酸，加滅菌ddH 2O 91.38ml，混勻，室溫保存（ 100ml）。（十一） 5mol/L 的 NaOH 溶液（ 50ml

6、，10g 的 NaOH 溶于 50ml 滅菌的 ddH 2 O中）（不用滅菌）200g 的 NaOH，溶于滅菌的 ddH2O 中，定容至 1000ml（十二） 1mol/L 的 Tris-HCl （pH8.0）（ 100ml）（高壓滅菌）12.11g的 Tris 堿80ml 的 ddH2O加濃鹽酸調(diào)節(jié) pH 值至 8.0（大約加 4.2ml）（十三） 0.5mol/L 的 EDTA （pH8.0）（ 50ml）（高壓滅菌）9.305g的 EDTA-Na 22H2O1g 的 NaOH磁力攪拌器劇烈攪拌40ml 的 ddH2O最后加水定容到50ml，用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 值至 8.0DNA 定

7、量用紫外分光光度計法，1 OD260 50 g/ml雙鏈 DNA 。僅供學(xué)習(xí)與交流，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝 3精品資料PCR （聚合酶鏈反應(yīng)）一、所需儀器設(shè)備及消耗品冰箱（ 4、20 ）、高壓滅菌鍋、離心機、移液器（1 套）、槍頭、槍頭盒、 PCR 管（包括盒和架）、 PCR 儀、離心管（包括盒和架）、一次性手套、電泳儀、電泳槽、塑料膠帶（寬）、微波爐、凝膠成像系統(tǒng)、垃圾桶、冰盒（自制）、記號筆、單面刀片二、所需化學(xué)藥品及試劑質(zhì)粒（陽性對照）、引物（1、 2）、 4dNTP、 DNA 模板、 bufferMgCl2）、 TaqDNA 聚合酶、 ddH2O、瓊脂糖、 DNA 標(biāo)準(zhǔn)樣品（ DN

8、A ladder）、溴化乙錠（ EB）、 5TBE 電泳緩沖液（ Tris、硼酸、 EDTA ）三、 PCR 反應(yīng)體系與反應(yīng)程序僅供參考成分母液濃度各成分加入量（ l/20l）各成分終濃度或含量無離子水9.7緩沖液1021（buffer）MgCl 225mmol/L1.21.5 mmol/L4dNTP2mmol/L20.2 mmol/L引物5pmol/L20.5pmol/L僅供學(xué)習(xí)與交流，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝 4精品資料TaqDNA 聚合酶5U/ l0.63U模板 DNA20ng/ l2.550ng操作順序： 水、 4dNTP 混合buffer、taqDNA 聚合酶混合，、混合 加入引物

9、 混勻、分裝 PCR 管 向每個 PCR 管加入模板 DNAPCR 擴增反應(yīng)程序：94預(yù)變性 35min。進入循環(huán)： 94變性 30s56退火 3045s72延伸 12min，3036個循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后再 72延伸 7min。外源脫水應(yīng)答轉(zhuǎn)錄因子 DREB 基因在轉(zhuǎn)基因小麥中的誘導(dǎo)型表達與抗旱生理效果Induced Expression ofDREB Transcriptional Factor and Study on Its Physiological Effects of Drought Tolerance in Transgenic Wheat成分母液濃度各成分加入量（ l/25l）各成分終濃度或含量無離子水13？緩沖液102.51僅供學(xué)習(xí)與交流，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝 5精品資料（buffer）4dNTP2mmol/L20.2 mmol/L引物 15？1mol/L ？引物 25？1mol/L ？TaqDNA 聚合酶5U/ l0.2？1U模板 DNA20ng/ l1？50ngPCR 擴增反應(yīng)程序：94預(yù)變性 5min。進入循環(huán)： 94變性 45s45 退火 45s72延伸 1min，35 個循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后再 72延伸 10min。一般 PCR 反應(yīng)中引物的終濃度為0.21.0mol/L ， 1.0mol/L 時，特異性降低或形成引物二聚體，