皺皮木瓜總黃酮對(duì)胃腸平滑肌的松弛作用及其機(jī)制分析

1、皺皮木瓜總黃酮對(duì)胃腸平滑肌的松弛作用及其機(jī)制分析【摘要】目的討論皺皮木瓜總黃酮(FL)對(duì)胃腸平滑肌的松弛作用及其相關(guān)機(jī)制。方法采用家兔離體空腸、回腸和胃底平滑肌生物測(cè)定法,觀察FL對(duì)空腸自主性收縮和Ah誘導(dǎo)收縮的影響,以及回腸和胃底對(duì)不同沖動(dòng)劑Ah和al2的反響。結(jié)果FL對(duì)空腸自主性收縮和Ah誘導(dǎo)收縮反響均呈抑制作用;劑量依賴性抑制a2+誘導(dǎo)回腸收縮P0.01及Ah所致胃底肌條的收縮，非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗Ah和al2累積量效曲線,壓低最大反響。結(jié)論FL松弛胃腸平滑肌與阻斷VD減少外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放作用有關(guān),但與膽堿受體阻斷無(wú)關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】皺皮木瓜總黃酮胃腸平滑肌機(jī)制分析Abstrat:bjetiveT

2、eluidatetherelaxanteffetsandrelatedehanissfttalflavnefrhaeneleslagenariaKidz(FL)nrelaxantgastrintestinalsthusles.ethdsTherelaxanteffetsandrelatedehanisfFLerestudiednthentratinfislatedrabbitjejunu,ileuandgastrifundusagnizedbyAhandal2.ResultsFLinhibitedthentratinfislatedjejunalautniandjejunuagnizedbyA

3、h.Intheislatedrabbitgastrifundusrileu,FLerefundtinhibitthentratininduedbyAhandal2indse-dependentanner,andnn-petitivelyantagnizetheAhral2uulativedse-respnseurvesithaleraxialrespnse,hileAtr(atrpine)petitivelyinhibitedthegastrifundusntratininduedbyAh.nlusinTheehanissfrelaxantgastrintestinalsthuslefFLis

4、relatedtitsblkingeffetnthevltagedependenta2+hannelVD,butisntrelatedtusarinireeptrblking.Keyrds:FL;Gastrintestinalsthusle;ehanisanalysis皺皮木瓜為薔薇科植物貼梗海棠haeneleslagenaria(Lisel)Kidz的果實(shí)，主產(chǎn)于我國(guó)安徽，湖北和四川等地,其中的主要成分包括有機(jī)酸、黃酮類和皂苷等。針對(duì)皺皮木瓜的臨床應(yīng)用根底，我室曾對(duì)其乙醇提取物進(jìn)展過(guò)整體動(dòng)物研究。實(shí)驗(yàn)說(shuō)明：皺皮木瓜乙醇粗提物具有松弛胃腸平滑肌和鎮(zhèn)痛作用1，2，為了討論其中的有效部位和深化的藥

5、效機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)利用皺皮木瓜總黃酮對(duì)胃腸平滑肌的松弛機(jī)制進(jìn)展了分析和討論。1材料和方法1.1材料安康家兔，雌雄兼用，體重2.03.0kg,由三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。皺皮木瓜取自湖北長(zhǎng)陽(yáng)資丘，由三峽大學(xué)天然藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室汪鋆植教授鑒定。皺皮木瓜總黃酮FL由三峽大學(xué)化生學(xué)院提供，制備過(guò)程參照文獻(xiàn)3以ADS-17大孔樹(shù)脂純化即得FL，臨用時(shí)用雙蒸水配制相應(yīng)濃度備用。氯化乙酰膽堿Aetylhlinehlride，Ah,上海試劑三廠產(chǎn)品。維拉帕米Verapail,Ver購(gòu)自天津藥業(yè)集團(tuán)公司。硫酸阿托品注射液Atrpine,Atr購(gòu)自武漢遠(yuǎn)大藥業(yè)集團(tuán)公司。ADS-17大孔樹(shù)脂，南開(kāi)大學(xué)化工廠。其他試劑均為

6、市售分析純。實(shí)驗(yàn)用StandardTyrde液(l/L)：Nal136.9,Kl2.68,al21.80,gl21.05,NaH2P40.42，Gluse5.55。無(wú)鈣Tyrde液中不加鈣而另加0.1l/LEDTA，使之成為含EDTA的無(wú)鈣液。無(wú)鈣高鉀Tyrde液除無(wú)鈣外，Kl改為40l/L，替代等l/L的Nal。PerLab離體器官灌流儀澳大利亞。1.2方法取禁食24h家兔,擊頭致昏后,迅速剪取與十二指腸相連的空腸約2.0和距回盲部約3的回腸1.52.0,用Tyrde液反復(fù)沖洗腸腔內(nèi)容物備用;同時(shí)取胃底全層肌標(biāo)本約22,Tyrde液沖洗干凈后,按Vane氏法制備胃底肌條。受試標(biāo)本分別置于含1

7、0l的Tyrde液(370.5)的浴槽中,pH7.27.4,標(biāo)本一端連于張力換能器,另一端固定,標(biāo)本張力負(fù)荷1g,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中持續(xù)通入95%2+5%2混合氣體,標(biāo)本張力變化通過(guò)張力換能器記錄于PerLab離體器官灌流儀。實(shí)驗(yàn)所用藥物濃度均按浴液終濃度計(jì)算。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)以s表示,應(yīng)用SPSS10.0軟件,組間比擬用t檢驗(yàn)；作圖采用SigaPlt2001軟件。2結(jié)果2.1FL對(duì)家兔空腸自主性收縮和Ah誘導(dǎo)收縮的影響空腸在Tyrde液平衡30in后，產(chǎn)生規(guī)律而衡定的自主性收縮，參加0.01l/LAh后收縮頻率與正常無(wú)異，但張力增加約30%，然后分別參加0.2%,0.4%和0.8%FL，記錄在不同實(shí)

8、驗(yàn)條件下空腸收縮頻率和張力的變化，觀察10in。結(jié)果見(jiàn)表1。2.2FL對(duì)al2誘導(dǎo)回腸平滑肌收縮的影響實(shí)驗(yàn)方法和條件同2.1項(xiàng)，標(biāo)本溫育后換無(wú)鈣Tyde液，可見(jiàn)回腸自主性收縮逐漸減弱，當(dāng)收縮頻率和張力明顯受抑制后，參加al22.0l/L,可見(jiàn)回腸收縮作用迅速恢復(fù)，記錄收縮幅度和張力的變化，用無(wú)鈣Tyde液沖洗標(biāo)本3次，分別參加0.2%，0.4%和0.8%的FL，5in后同法參加al22.0l/L，比擬給藥前后標(biāo)本對(duì)al2收縮作用的影響。結(jié)果見(jiàn)表2。表1FL對(duì)家兔空腸自主性收縮和Ah誘導(dǎo)收縮的影響略aP0.05vs給藥前;bP0.01vs給藥前，n=6由表1可見(jiàn)，F(xiàn)L無(wú)論是對(duì)空腸自主性收縮，還是

9、Ah誘導(dǎo)收縮均劑量依賴性抑制其功能，對(duì)收縮頻率與收縮張力相比，張力抑制更明顯。表2FL對(duì)al2誘導(dǎo)家兔回腸平滑肌收縮的影響略aP0.05，vsntrlgrup;bP0.01；n=6由表2可見(jiàn)，當(dāng)參加不同濃度的FL，再次復(fù)鈣時(shí)，回腸的收縮張力明顯減弱,且具有劑量依賴性P0.01,0.8%FL較對(duì)照組下降了75%。2.3FL和Atr對(duì)Ah致家兔胃底肌條收縮的影響標(biāo)本在Tyrde中平衡1h后，參加不同濃度的Ah可見(jiàn)胃底肌條產(chǎn)生迅速而短暫的收縮，得Ah累積濃度的量效曲線，用Tyrde液沖洗標(biāo)本，待肌張力恢復(fù)至基線，分別參加0.2%，0.4%，0.8%的FL和0.001l/LAtr,10in后重測(cè)Ah量

10、效曲線，結(jié)果0.4%，0.8%FL使Ah量效曲線非平行右移，濃度依賴性壓低Ah量效曲線，而Atr使Ah量效曲線呈典型的競(jìng)爭(zhēng)性拮抗,最大反響不壓低。見(jiàn)圖1。圖1FL和Atr對(duì)Ah致家兔胃底平滑肌收縮的影響略2.4FL和Ver對(duì)al2致家兔回腸收縮的影響回腸標(biāo)本在無(wú)鈣Tyrde液中平衡30in，換無(wú)鈣高鉀液穩(wěn)定30in，建立al2累積濃度依次為0.1，0.5，1.0，2.0，5.0，10l/L量效曲線,其他操作方法同“2.3項(xiàng)。結(jié)果FL和Ver均能濃度依賴性使al2量效曲線非平行右移，壓低最大反響，Ver的pD2值為7.210.31。3討論皺皮木瓜為傳統(tǒng)中藥，應(yīng)用歷史悠久，具有多方面的藥理作用，但

11、其中的化學(xué)成分復(fù)雜，藥理作用機(jī)制不清。根據(jù)以往的研究根底,我們將其中的黃酮作為重點(diǎn)研究對(duì)象。植物中的黃酮類化合物具有廣泛的藥理作用，而植物來(lái)源不同又有差異，如銀杏黃酮、葛根黃酮、水杉黃酮抗心律失常，預(yù)防和逆轉(zhuǎn)心肌肥厚；黃芪和黃芩總黃酮具有保肝及免疫調(diào)節(jié)作用；甘草黃酮等具有抑制胃腸平滑肌功能等49。皺皮木瓜的胃腸解痙作用早已被中醫(yī)臨床所證實(shí)，然而其藥理作用機(jī)制和有效成分并不清楚。胃腸平滑肌的運(yùn)動(dòng)受多種因素的調(diào)控，包括神經(jīng)因素，體液因素和部分激素等,其中神經(jīng)因素和體液因素是主要因素,然而無(wú)論是神經(jīng)因素,還是體液因素引起胃腸平滑肌收縮,最終均需要依賴胞內(nèi)a2+介導(dǎo)，細(xì)胞內(nèi)的a2+濃度的調(diào)節(jié)由細(xì)胞膜鈣

12、通道、細(xì)胞器鈣攝取和釋放、鈣泵及Na+-a2交換系統(tǒng)參與。靜息狀態(tài)下,a2+不能自由通過(guò)功能正常的細(xì)胞膜。當(dāng)細(xì)胞膜興奮時(shí),膜特異的鈣通道開(kāi)放,細(xì)胞內(nèi)a2+濃度升高,同時(shí)觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器鈣庫(kù)釋放a2+,胞漿內(nèi)a2+升高到達(dá)一定程度(150l/L)時(shí),a2+與肌鈣蛋白或肌調(diào)蛋白結(jié)合,從而產(chǎn)生細(xì)胞收縮活動(dòng)等。對(duì)于主要是依外鈣而實(shí)現(xiàn)收縮(相對(duì)于骨骼肌)的胃腸平滑肌,一旦影響了外鈣濃度或內(nèi)流,即會(huì)明顯影響其收縮活動(dòng)。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：FL對(duì)復(fù)鈣后的回腸標(biāo)本呈濃度依賴性抑制；在無(wú)鈣高鉀Tyrde液中標(biāo)本引起的收縮為高鉀去極化，K+促使電壓依賴性鈣通道VD開(kāi)放，胞內(nèi)細(xì)胞器鈣庫(kù)釋放a2+所致，經(jīng)典的鈣拮抗劑Ver可

13、阻斷這一通道，從而抑制心血管和胃腸功能等，F(xiàn)L對(duì)a2+和高鉀致腸平滑肌收縮均呈抑制作用，由此說(shuō)明FL具有與Ver相似的作用,特異性阻斷VD，減少外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放而松弛平滑跡在與阿托品的對(duì)照性實(shí)驗(yàn)中，可見(jiàn)FL并非通過(guò)阻斷膽堿受體而松弛胃腸平滑跡本實(shí)驗(yàn)研究為皺皮木瓜用于胃腸解痙提供了理論基矗【參考文獻(xiàn)】1楊興海，柳蔚，錢京萍資木瓜乙醇提取物對(duì)胃腸道平滑肌的實(shí)驗(yàn)研究J.四川中醫(yī)，2022，223：19.2柳蔚，楊興海，錢京萍資木瓜乙醇提取物鎮(zhèn)痛抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究J.四川中醫(yī)，2022，228：7.3廖亮.銀杏黃酮提取方法的研究J.食品科學(xué)，1994,8：33.4耿秀芳,李桂芝,康白,等銀杏葉總黃酮對(duì)縮血管物質(zhì)活性的影響J.濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，22(3)：192.5劉賽,蘇冬梅,王春波,等葛根總黃酮對(duì)離體家兔主動(dòng)脈平滑肌的作用J.青島醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998，34(3):191.6劉維莞,楊曉茹,屠治本,等水杉總黃酮抗實(shí)驗(yàn)性心肌肥厚及