核酸結(jié)構(gòu)和功能(6)課件

1、關(guān)于核酸的結(jié)構(gòu)與功能 (6)第一張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月核 酸(nucleic acid) 是以核苷酸為基本單位的生物大分子。脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid, DNA）核糖核酸（ribonucleic acid, RNA）概 述脫氧核糖核苷酸：組成DNA核糖核苷酸：組成RNA核 酸的分類 第二張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月核酸的分布及功能存在于細(xì)胞核和線粒體 分布于細(xì)胞核、線粒體、細(xì)胞質(zhì)(deoxyribonucleic acid, DNA)(ribonucleic acid, RNA)脫氧核糖核酸 核糖核酸攜帶遺傳信息，并通過復(fù)制傳遞給

2、下一代。是DNA轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物，參與遺傳信息的傳遞與表達(dá)。某些病毒RNA也可作為遺傳信息的載體第三張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 核酸的化學(xué)組成及一級結(jié)構(gòu)核酸的元素組成C、H、O、N、P（910%）與蛋白質(zhì)比較：不含S，P的含量多且 恒定。核酸的基本結(jié)構(gòu)單位核苷酸核酸核酸酶核苷酸完全水解堿基戊糖磷酸第四張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月堿基(base)是含氮的雜環(huán)化合物。堿基嘌呤堿嘧啶堿腺嘌呤鳥嘌呤尿嘧啶胸腺嘧啶胞嘧啶存在于DNA和RNA中主要存在于DNA中僅存在于RNA中1. 堿基（一）核苷酸的基本組成成分第五張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月嘌呤(purine

3、，Pu) 腺嘌呤(adenine, A)鳥嘌呤(guanine, G)第六張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月嘧啶(pyrimidine，Py)胞嘧啶(cytosine, C)尿嘧啶(uracil, U)胸腺嘧啶(thymine, T)第七張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第八張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月稀有堿基（tRNA中最多）核酸中除了5種常見的堿基外，還有一些含量很少的堿基，稱為稀有堿基，大多數(shù)為甲基化堿基。N,N二甲基鳥嘌呤雙氫尿嘧啶N6-異戊烯腺嘌呤4-巰尿嘧啶第九張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月2.戊糖（構(gòu)成RNA）12345核糖(ribose

4、)（構(gòu)成DNA）脫氧核糖(deoxyribose)OHOCH2OHOHOH第十張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月嘌呤N-9或嘧啶N-1與核糖C-1通過-N-糖苷鍵相連形成核糖核苷。1. 核苷的形成HNNNNN92（二）核酸的組成方式OOHOHHHHCH2OHH121）核糖核苷NNNH2O1糖苷鍵連接第十一張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月嘌呤N-9 或嘧啶N-1與脫氧核糖C-1通過-N-糖苷鍵相連形成脫氧核糖核苷。2）脫氧核糖核苷OHOHHHHCH2OHH12NNNH2O1NNNN9NH2糖苷鍵連接第十二張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月核糖核苷或脫氧核糖核苷與磷酸通過

5、酯鍵結(jié)合構(gòu)成核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸。2.核苷酸(ribonucleotide)的形成NNNN9NH2OOHOHHHHCH2H12OPO-HOO酯鍵345345NNNN9NH2OHOHHHHCH2H12OPO-HOO酯鍵第十三張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月核苷酸形成戊糖堿基嘌呤堿嘧啶堿核糖脫氧核糖核苷磷酸核苷酸鳥嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶尿嘧啶胞嘧啶A G C U T第十四張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月酯鍵腺苷腺苷一磷酸(AMP)腺苷二磷酸(ADP)腺苷三磷酸(ATP)HO多磷酸核苷酸（磷酸基團(tuán)數(shù)目）酯鍵脫氧腺苷脫氧腺苷一磷酸(dAMP)脫氧腺苷二磷酸(dADP)脫氧腺苷三磷

6、酸(dATP)第十五張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月cAMP、cGMP，是細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的第二信使。cAMP環(huán)化核苷酸第十六張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月核苷酸的生理功能：是DNA、RNA合成的原料；作為輔酶的結(jié)構(gòu)成分：如NAD+（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）、NADP+作為能量載體：ATP是能量通貨； UTP參加糖轉(zhuǎn)化、合成，CTP參與嘌呤、蛋白質(zhì)的合成；調(diào)節(jié)功能：cAMP、cGMP第十七張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月一個核苷酸戊糖上3羥基與另一個核苷酸5的磷酸脫水縮合形成3,5-磷酸二酯鍵。兩個核苷酸分子通過3,5-磷酸二酯鍵連接形成二聚核苷酸分子.多個核苷酸分

7、子通過3,5-磷酸二酯鍵連接就形成了多核苷酸。3.多核苷酸的連接第十八張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月5-末端3-末端CGA磷酸二酯鍵交替的磷酸和戊糖構(gòu)成鏈的骨架5 3多核苷酸鏈具有方向性： 5 3 有兩個末端： 5末端 3末端多聚核苷酸特點(diǎn)第十九張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月A G P5 P T PG PC PT P OH 3 5 pApCpTpGpCpT-OH 3 5 A C T G C T 3多核苷酸鏈的表示方法第二十張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月定義核酸中核苷酸的排列順序，即核酸序列。由于核酸中核苷酸間的差異主要是堿基不同，所以也稱為堿基序列。5端3端

8、CGA4.核酸的一級結(jié)構(gòu)第二十一張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月DNA和RNA的區(qū)別核糖 A、U、C、G、T和稀有堿基RNA脫氧核糖 A、T 、C、GDNA堿基核糖核酸第二十二張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月一、DNA的空間結(jié)構(gòu)(spatial structure)： 定義：構(gòu)成DNA的所有原子在三維空間的相對位置關(guān)系。第二節(jié) DNA的空間結(jié)構(gòu)與功能二級結(jié)構(gòu)超級結(jié)構(gòu)分類第二十三張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）、DNA的二級結(jié)構(gòu)1.定義： 主要指兩條DNA單鏈結(jié)合形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)。第二十四張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十五張，PPT共八十五頁，

9、創(chuàng)作于2022年6月第二十六張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月3.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)（1）兩條DNA單鏈反向平行形成右手雙螺旋結(jié)構(gòu)；（2）雙螺旋的表面形成大溝和小溝；磷酸和脫氧核糖骨架位于雙螺旋的表面，堿基位于內(nèi)側(cè)；3.54 nm2. 37 nm小溝大溝第二十七張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月親水性的磷酸和脫氧核糖構(gòu)成的骨架位于雙螺旋的表面。 疏水性的堿基位于雙鏈的內(nèi)側(cè)。骨架與堿基第二十八張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)（3）每個螺旋含10.5個堿基對，螺距3.54nm，垂直于螺旋軸相鄰的堿基平面間距離0.34nm,螺旋直徑2.37nm3

10、.54 nm2. 37 nm（4）維持雙螺旋的穩(wěn)定的力量是堿基堆積力和堿基之間的氫鍵(A=T,CG)；第二十九張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）氫鍵1：A/T（堿基互補(bǔ)配對 ）維持雙螺旋結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的化學(xué)鍵第三十張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月氫鍵2: G/C（堿基互補(bǔ)配對）第三十一張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月上下層堿基之間的疏水作用稱為堿基堆積力(base stacking interaction)。堿基堆積力和互補(bǔ)堿基對的氫鍵共同維系著DNA結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。（2）堿基堆積力第三十二張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的多樣性第三十三

11、張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十四張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十五張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（四）DNA的多鏈螺旋結(jié)構(gòu) 三鏈結(jié)構(gòu) Hoogsteen氫鍵在酸性的溶液中，胞嘧啶的N-3原子被質(zhì)子化，可與鳥嘌呤的N-7原子形成氫鍵；同時，胞嘧啶的N-4的氫原子也可與鳥嘌呤的O-6形成氫鍵，這種氫鍵被稱為Hoogsteen氫鍵。Hoogsteen氫鍵，不破壞Watson-Crick氫鍵，由此形成了CGC的三鏈結(jié)構(gòu)(triplex)。第三十六張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月三鏈結(jié)構(gòu)第三十七張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月真核生物DN

12、A3-末端是富含GT的多次重復(fù)序列，因而自身形成了折疊的四鏈結(jié)構(gòu)。四鏈結(jié)構(gòu)第三十八張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月四鏈結(jié)構(gòu)鳥嘌呤之間通過Hoogsteen氫鍵形成特殊的四鏈結(jié)構(gòu)(tetraplex)。第三十九張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月DNA的高級結(jié)構(gòu)第四十張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月二、DNA的高級結(jié)構(gòu)是超螺旋結(jié)構(gòu)DNA高級結(jié)構(gòu)的定義： DNA在二級結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上進(jìn)一步扭曲折疊形成的超螺旋結(jié)構(gòu)。正超螺旋：盤繞方向與DNA雙螺旋方向相同負(fù)超螺旋：盤繞方向與DNA雙螺旋方向相反分類：（一）概述第四十一張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1.超螺旋DNA比松

13、弛型DNA更緊密，使DNA分子的體積變得更小，得以包裝在細(xì)胞內(nèi)。2.超螺旋會影響雙螺旋分子的解旋能力，從而影響到DNA與其他分子之間的相互作用。3.超螺旋有利于DNA的轉(zhuǎn)錄，復(fù)制及表達(dá)調(diào)控。 超螺旋結(jié)構(gòu)的意義第四十二張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1. 原核生物DNA的環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)（二）原核與真核生物的超螺旋結(jié)構(gòu)類核結(jié)構(gòu)第四十三張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 在細(xì)胞周期的大部分時間里，DNA以松散的染色質(zhì)(chromatin)形式存在，在細(xì)胞分裂期，則形成高度致密的染色體(chromosome)。 2.真核生物DNA高度有序和高度致密的結(jié)構(gòu)1）染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)（DNA染色質(zhì)

14、的電鏡圖像）第四十四張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月DNA染色質(zhì)呈現(xiàn)出的串珠樣結(jié)構(gòu)。染色質(zhì)的基本單位是核小體。核小體的結(jié)構(gòu)核心顆粒2分子H2B、H2A、H3和H4核心組蛋白1.75圈DNA雙鏈DNA雙鏈連接區(qū)H1DNA雙鏈約60bp150bp60bp第四十五張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月染色體核小體相連構(gòu)成串珠狀的染色質(zhì)細(xì)絲染色質(zhì)細(xì)絲進(jìn)一步盤繞成外徑為30nm的染色質(zhì)纖維空管，每圈6個核小體組成，H1位于螺旋管內(nèi)側(cè)。染色質(zhì)纖維空管進(jìn)一步卷曲折疊形成染色質(zhì)纖維2）染色體的形成第四十六張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月真核生物DNA組裝.mov第四十七張，PPT共八十

15、五頁，創(chuàng)作于2022年6月三、DNA的生物學(xué)功能DNA是遺傳信息的載體 DNA分子中A、T、C、G的排列順序中蘊(yùn)藏著遺傳信息DNA 為基因信息復(fù)制、轉(zhuǎn)錄提供模板 DNA突變會引起疾病或物種變異（進(jìn)化）第四十八張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) RNA分子的結(jié)構(gòu)與功能功能：RNA與蛋白質(zhì)共同負(fù)責(zé)基因的表達(dá)和表達(dá)過程的調(diào)控。RNA分子組成：堿基A、G、C、U 核糖2位都有羥基大?。篟NA比DNA??；通常以單鏈形式存在，但也有局部雙鏈區(qū)，具有二級結(jié)構(gòu)或三級結(jié)構(gòu)。RNA的種類、大小和結(jié)構(gòu)遠(yuǎn)比DNA表現(xiàn)出多樣性。第四十九張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月RNA的種類、分布、功能核蛋

16、白體RNA信使RNA轉(zhuǎn)運(yùn)RNA核內(nèi)不均一RNA核內(nèi)小RNA胞漿小RNA 細(xì)胞核和胞液線粒體功能rRNAmRNA mtrRNAtRNAmtmRNAmttRNAHnRNASnRNASnoRNAscRNA/7SL-RNA 核蛋白體組分蛋白質(zhì)合成模板轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸成熟mRNA的前體參與hnRNA的剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)rRNA的加工、修飾蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號識別體的組分核仁小RNA核蛋白體RNA信使RNA轉(zhuǎn)運(yùn)RNA核內(nèi)不均一RNA核內(nèi)小RNA胞漿小RNA 細(xì)胞核和胞液線粒體功能rRNAmRNA mtrRNAtRNAmtmRNAmttRNAHnRNASnRNASnoRNAscRNA/7SL-RNA 核蛋白體組分蛋

17、白質(zhì)合成模板轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸成熟mRNA的前體參與hnRNA的剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)rRNA的加工、修飾蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號識別體的組分核仁小RNA第五十張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月hnRNA 內(nèi)含子(intron)mRNA 外顯子(exon)一、信使RNA (messenger RNA, mRNA)（一）初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物-核不均一RNA(hnRNA)，含有外顯子(exon)和內(nèi)含子(intron)；需要經(jīng)過剪切加工后成為成熟的mRNA，作為蛋白質(zhì)合成的模板。 第五十一張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月mRNA種類很多，但含量很少（25）；mRNA壽命最短，不穩(wěn)定；1.成熟的真核生物mR

18、NA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)5 非編碼區(qū)3 非編碼區(qū)（二）mRNA第五十二張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月m7G -ppp- 5-mRNAmRNA1）真核生物mRNA 5末端帽子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：5-5連接、三個磷酸基團(tuán)、含有甲基第五十三張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第五十四張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月帽子結(jié)構(gòu)功能由于甲基化，保護(hù)mRNA不被外切酶水解,維持其穩(wěn)定性（NO.1）與核糖體識別，與翻譯起始相關(guān)與CBP（cap binding protein）結(jié)合 mRNA從細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、與核糖體結(jié)合、與翻譯起始因子結(jié)合、mRNA穩(wěn)定性的維持等均起到重要作用第五十五張，PPT共八

19、十五頁，創(chuàng)作于2022年6月2）真核生物mRNA3末端多聚腺苷酸尾 poly(A) AAAA.AAAA-3 80-250個5增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性；有利于mRNA從細(xì)胞核向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)；促進(jìn)mRNA與核糖體、翻譯起始因子的結(jié)合。10-20個腺苷酸單體結(jié)合一個PABPpoly(A)結(jié)合蛋白 帽子結(jié)構(gòu)和多聚A尾的功能(結(jié)合蛋白）第五十六張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 mRNA上存在遺傳密碼 ，從5 至3 方向 mRNA分子上由AUG開始，每3個核苷酸為一組，決定肽鏈上一個氨基酸,稱為一個密碼子或三聯(lián)體密碼。起始密碼(initiation coden): AUG 終止密碼(terminati

20、on coden):UAA，UAG，UGA 3）mRNA 堿基序列決定蛋白質(zhì)的氨基酸序列5 非編碼區(qū)3 非編碼區(qū)開閱放讀框（open reading frame）:ORF第五十七張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月二、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(transfer RNA, tRNA) tRNA 的功能 在蛋白質(zhì)合成過程中作為各種氨基酸的載體, 將氨基酸轉(zhuǎn)呈給核糖體。組成：tRNA由7495核苷酸組成，種類多，占細(xì)胞總RNA的15%；穩(wěn)定性： tRNA分子具有很好的穩(wěn)定性。第五十八張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月tRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 1、tRNA中含有多種稀有堿基（10-20%）第五十九張，PPT

21、共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月2、 tRNA二級結(jié)構(gòu)呈三葉草型氨基酸接受臂反密碼子tRNA具有局部的莖環(huán)(stem-loop)結(jié)構(gòu)或發(fā)卡(hairpin)結(jié)構(gòu)，使其具有三葉草結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)： 氨基酸臂 DHU環(huán) 反密碼環(huán) TC環(huán) 額外環(huán)第六十張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 （1）tRNA的3 端均有CCA結(jié)構(gòu)tRNA的3-末端都是以CCA結(jié)尾。3-末端的A與氨基酸共價連結(jié)，tRNA成為了氨基酸的載體。不同的tRNA可以結(jié)合不同的氨基酸。 第六十一張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月tRNA的反密碼子環(huán)上有一個由三個核苷酸構(gòu)成的反密碼子(anticodon)。tRNA上的反密碼子

22、依照堿基互補(bǔ)的原則識別mRNA上的密碼子。（2）tRNA的反密碼子識別mRNA的密碼子第六十二張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月3、 tRNA三級結(jié)構(gòu)是倒 L 型第六十三張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1. rRNA的功能 rRNA和多種蛋白質(zhì)結(jié)合形成一種大的核糖核蛋白顆粒，稱為核糖體，是蛋白質(zhì)生物合成的場所。三、核糖體RNA (ribosomal RNA, rRNA)第六十四張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月rRNA的種類（根據(jù)沉降系數(shù)） 真核生物5S rRNA28S rRNA5.8S rRNA18S rRNA原核生物5S rRNA23S rRNA16S rRNA第

23、六十五張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 2.不同生物核糖體的組成第六十六張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月mRNA、tRNA、rRNA的功能mRNA：把DNA所攜帶的遺傳信息，按堿基互補(bǔ)配對原則，抄錄并傳送至核糖體，用以決定其合成蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序tRNA：活化、搬運(yùn)氨基酸到核糖體，參與蛋白質(zhì)的翻譯rRNA：參與組成核蛋白體，作為蛋白質(zhì)生物合成的場所。第六十七張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月四、細(xì)胞內(nèi)其他RNAsnmRNAs細(xì)胞的不同部位存在的許多其他種類的小分子RNA，統(tǒng)稱為非mRNA小RNA(small non-messenger RNAs, snmRNAs

24、)。包括了核內(nèi)小RNA、核仁小RNA、胞質(zhì)小RNA、催化性小RNA、小片段干涉RNA snmRNAs的功能主要參與hnRNA和rRNA轉(zhuǎn)錄后的加工、轉(zhuǎn)運(yùn)以及基因表達(dá)的調(diào)控過程。核酶具有催化RNA降解作用的小RNA亦被稱為核酶(ribozyme)或催化性小RNA(catalytic RNA)。 第六十八張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月核酸核苷酸核酸酶3-5磷酸二酯鍵堿基核糖磷酸多元酸高分子化合物第四節(jié) 核酸的理化性質(zhì)紫外吸收變性和復(fù)性第六十九張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月一、核酸的一般理化性質(zhì)2.核酸的酸堿性（磷酸基） 核酸為多元酸，具有較強(qiáng)的酸性。在酸性條件時比較穩(wěn)定；堿

25、性時易降解。1.核酸的高分子性質(zhì)（高分子化合物） 粘度：DNARNA dsDNA ssDNA 沉降行為:不同構(gòu)象的核酸分子的沉降的速率有很大 差異，這是超速離心法提取和純化核酸的理論基礎(chǔ)。第七十張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）核酸紫外吸收的原因：二、核酸的紫外吸收 嘌呤和嘧啶堿基中都含有共軛雙鍵，而共軛雙鍵具有紫外吸收的性質(zhì)，所以堿基乃至核苷酸都具有紫外吸收的性質(zhì)。第七十一張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）核苷酸的紫外吸收光譜由于核苷酸中共軛雙鍵的存在，所以核酸在波長 260nm 處有強(qiáng)烈的吸收，這一特性常用作核酸的定性和定量分析。第七十二張，PPT共八十五頁，創(chuàng)

26、作于2022年6月1.DNA或RNA的定量 A260 = 1.0 相當(dāng)于 50g/ml 雙鏈DNA(dsDNA) 40g/ml 單鏈DNA (ssDNA or RNA) 20g/ml 寡核苷酸2.確定樣品中核酸的純度 純 DNA: A260/A280 = 1.8 純 RNA: A260/A280 = 2.0（三）紫外吸收的應(yīng)用第七十三張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月三、核酸的變性、復(fù)性、雜交1.定義：在某些理化因素作用下，DNA雙鏈解開 成兩條單鏈的過程。2.本質(zhì)：雙鏈間氫鍵的斷裂。3.變性的理化因素：高溫、低鹽、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等。（一）DNA變性（denaturation）第七十四張，

27、PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月增色效應(yīng)(hyperchromic effect)：DNA變性時更多共軛雙鍵暴露導(dǎo)致其溶液OD260增高的現(xiàn)象。 DNA解鏈時的紫外吸收變化4.結(jié)果：粘度降低、紫外吸收增加。第七十五張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月DNA的解鏈曲線連續(xù)加熱DNA的過程中以溫度相對于OD260值作圖，所得的曲線稱為解鏈曲線。 解鏈溫度 (melting temperature，Tm)解鏈過程中，紫外吸光度的變化達(dá)到最大變化值的一半時所對應(yīng)的溫度（50的DNA雙螺旋解鏈）。Tm與鏈長度、 GC含量、溶液離子強(qiáng)度有關(guān)。6.加熱變性的研究第七十六張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月G+C 含量越高，解鏈溫度就越高。解鏈曲線的變化第七十七張，PPT共八十五頁，創(chuàng)作于2022年6月當(dāng)變性條件緩慢地除去后，兩條解離的互補(bǔ)鏈可重新配對，恢復(fù)原來的雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱為D