植物細胞精品課件

1、關于植物細胞第一張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 植物組織和細胞培養(yǎng)基礎知識 第二張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月一、植物細胞培養(yǎng)應用前景植物細胞培養(yǎng)在工業(yè)上主要應用于:1. 獲得細胞或次級代謝物；2. 進行生物轉化，將外源底物轉化為所需的產(chǎn)物；3. 在農(nóng)業(yè)上主要應用于種質保存；4. 人工種子的制備；5. 植株的大規(guī)?？焖俜敝场５谌龔?，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）次級代謝物的生產(chǎn)1.植物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)各種天然產(chǎn)物，具有如下顯著特點。1）提高產(chǎn)率使用優(yōu)良的植物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)天然產(chǎn)物可以明顯提高天然產(chǎn)物的產(chǎn)率。第四張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月例如

2、，日本三井石油化學工業(yè)公司于1983年在世界上首次成功地采用紫草細胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫草寧，他們用750 L的反應器，培養(yǎng)23d，細胞中紫草寧的含量達到細胞干重的14，比紫草根中紫草寧的含量高10倍。第五張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月其后的許多研究表明：采用植物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、人參皂苷、迷迭香酸、黃連素、胡蘿卜素、維生素E、花青素、超氧化物歧化酶、蒽醌等物質，其產(chǎn)率均達到或者超過完整植株的產(chǎn)率。第六張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月2）提高效率植物細胞生長一般生產(chǎn)周期1530d，與完整植物的生長周期比較，卻是大大地縮短了生產(chǎn)周期。一般植物從發(fā)芽、生長到收獲，

3、短則幾個月，長則數(shù)年甚至更長時間。例如，木瓜的生長周期一般為8個月，紫草為5年，野山參則更長。第七張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 3）易于管理，減輕勞動強度植物細胞培養(yǎng)在人工控制條件的生物反應器中進行生產(chǎn)，不受地理環(huán)境和氣候條件等的影響。易于操作管理，大大減輕勞動強度，改善勞動條件。第八張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）進行生物轉化，將外源底物轉化為所需的產(chǎn)物1.生物轉化即通過植物細胞內(nèi)生成和積累的各種酶的催化作用，將外源底物轉化為藥物、食品添加劑等具有較高應用價值的產(chǎn)物2.植物細胞生物轉化具有：轉化率高、選擇性強、副產(chǎn)物少等顯著特點.第九張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于

4、2022年6月（三）在農(nóng)業(yè)上主要應用于種質保存 1.傳統(tǒng)上植物保存是利用植物種子進行長期保存的，由于自然災害、生物競爭等因素，使不少植物品種已經(jīng)或正在消失；對于無性繁殖的植物，由于沒有可供保存的種子，很難保存。第十張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月2.采用植物細胞培養(yǎng)或者冷凍保存的方法進行種質保存，簡單方便，可以使植物的遺傳特性得以長期穩(wěn)定地保存，對于稀有植物品種、優(yōu)良植物品種和新型植物品種的種質保存具有重要的意義。第十一張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（四）人工種子的制備 人工種子的制備與植物常規(guī)種子的生產(chǎn)相比，具有不占用耕地，不受地理、氣候等條件的影響，可以快速、大量地進

5、行工業(yè)化生產(chǎn)，生產(chǎn)效率高，種質長期穩(wěn)定等顯著特點。第十二張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月人工種子胚狀體第十三張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（五）植株的大規(guī)?？焖俜敝?.傳統(tǒng)的植物繁殖是在田間或在溫室中進行有性繁殖或無性繁殖，效率低，時間長。2.采用植物細胞培養(yǎng)技術，可以快速、高效地進行植物的繁殖，并且不受地理環(huán)境和氣候條件的影響第十四張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月二 植物細胞和組織培養(yǎng)的概念1.植物細胞和組織培養(yǎng)（plant cell and tissue culture, PCTC）第十五張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月將植物的器官、組織、細胞或細

6、胞器進行離體、無菌培養(yǎng)，并重新再生成細胞或植株的過程為植物細胞和組織培養(yǎng)第十六張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月植物細胞和組織培養(yǎng)主要包括：植物器官培養(yǎng)：包括離體的器官如根尖、莖尖、葉原基、花器官和果實等在適當條件下進行無菌培養(yǎng)，以及從各種器官增殖而形成愈傷組織的培養(yǎng)。第十七張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月離體胚胎培養(yǎng)：包括成熟或未成熟的胚胎離體培養(yǎng)，通常使用相應的培養(yǎng)基使離體胚正常的萌發(fā)生殖，以供研究和操作使用。菊 花第十八張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月植物細胞培養(yǎng)：是指在無菌條件下，將植物細胞從機體內(nèi)分離出來，在營養(yǎng)培養(yǎng)基上使其生存和生長的一種方法。將植物細胞

7、微生物化，在一定容積的反應器中得到大量的植物細胞。植物細胞培養(yǎng)主要依據(jù)“細胞的全能性”。第十九張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月原生質體培養(yǎng)：將植物細胞去除細胞壁形成原生質體后進行培養(yǎng)，它是利用原生質體進行操作的基礎。外植體（explant）：植物組織培養(yǎng)中,作為離體培養(yǎng)材料的器官或組織的片斷統(tǒng)稱為外植體。第二十張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月愈傷組織（callus）:是由母體外植體組織的增生細胞產(chǎn)生的一團不定型的疏松排列的高度液泡化的薄壁細胞。一般愈傷組織在培養(yǎng)中沒有明顯的組織或器官的分化。第二十一張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 細胞全能性：（cell toti

8、potency）:是指植物體的每個細胞在離體條件下都具有誘導生長分化形成完整植株的潛在能力，這是由于每個細胞都有一套完整的基因組而實現(xiàn)的。第二十二張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月細胞分化細胞在形態(tài)結構和功能上發(fā)生差異的過程稱為細胞分化分化過程中細胞經(jīng)歷了從全能性到多能性再到單能性，最后失去分化潛能稱為成熟定型的細胞幾個過程第二十三張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十四張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十五張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月細胞的脫分化植物細胞的脫分化：由高度分化的植物器官、組織或者細胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，又稱為去分化。脫分化是已經(jīng)分化定

9、型的細胞經(jīng)過誘導具有分裂能力（也就是成為分生狀態(tài)）細胞的過程第二十六張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月細胞的再分化植物細胞的再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織在培養(yǎng)過程中重新分化根或芽等器官的過程第二十七張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月植物組織培養(yǎng)的核心環(huán)節(jié)：在誘導脫分化、再分化過程中不同激素搭配的培養(yǎng)基的選擇和應用 第二十八張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 三 培養(yǎng)基的組成和類型第二十九張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）培養(yǎng)基的成分和作用 通常植物組織和細胞培養(yǎng)所用培養(yǎng)基包括以下六大類成分，即礦質營養(yǎng)、有機成分、植物生長調節(jié)劑、碳源、瓊脂以及其他附加物等。

10、 培養(yǎng)基的主要指標是營養(yǎng)成分及植物生長調節(jié)物質的濃度。第三十張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月礦質營養(yǎng)： 礦質營養(yǎng)又稱無機營養(yǎng)，是指植物生長發(fā)育所需要的各種化學元素。 根據(jù)植物對元素的吸收量，可以將礦質元素分為大量元素和微量元素。 國際植物生理學會建議將植物所需濃度大于0.5 mmol/l的的元素稱為大量元素。低于0.5 mmol/l的元素稱為微量元素。第三十一張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月根據(jù)此規(guī)則大量元素種類包括:N、P、K、Ca、Mg、S。六種為礦質元素，分別占植物干重的百分數(shù)為0.3%、0.07、0.3%、0.3 、0.07%、0.05。 微量元素包括:Fe、B、M

11、n、Zn、Mo、Cu、Co、Cl等。第三十二張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月名稱化學式含量(mg/L)硝酸鉀KNO31900硝酸銨NH4NO31650磷酸二氫鉀KH2PO4170MS 培養(yǎng)基的大量元素成分第三十三張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月名稱化學式含量(mg/L)碘化鉀KI0.83硼酸H3BO36.2硫酸錳MnSO44H2O22.8硫酸鋅ZnSO47H2O8.6鉬酸鈉Na2MoO42H2O0.25硫酸銅CuSO45H2O0.025氯化鈷CoCl26H2O0.025MS 培養(yǎng)基的微量元素成分第三十四張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月MS培養(yǎng)基的鐵鹽成分名稱化學式

12、用量（mg/L)乙二胺四乙酸二鈉Na2EDTA37.3硫酸亞鐵FeSO47H2O27.8第三十五張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月有機成分： 主要包括各種維生素和氨基酸，如硫胺素（VB1）、煙酸（VB3）、吡哆醇（VB6）、泛酸鈣（VB5）、生物素、鈷胺素（VB12）、葉酸等以及甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰氨、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰氨、丙氨酸等。此外肌醇是另外一種重要的有機成分，又叫環(huán)己六醇，在糖類的轉化中起重要作用，此外還參與磷脂代謝及維持離子平衡等生理作用。第三十六張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月名稱化學式用量（mg/L)肌醇（環(huán)己六醇）C6H12O62H2O100甘氨酸（氨

13、基乙酸）NH2CH2COOH2鹽酸硫胺素（維生素B1)C12H17ClN4OSHCl0.1鹽酸吡哆醇（維生素B6）C8H11O3NHCl0.5煙酸（維生素B3或維生素PP）NC5H4COOH0.5MS培養(yǎng)基的有機成分第三十七張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月植物生長調節(jié)物質： 植物激素是植物新稱代謝中產(chǎn)生的天然化合物，它能以極微小的用量直接影響植物細胞的分化、分裂以及發(fā)育，影響植物的形態(tài)建成、開花、結實、成熟、衰老脫落、休眠、萌發(fā)等生理活動。 在植物組織培養(yǎng)中，主要通過植物激素及生長調節(jié)物質對離體的組織、器官的形態(tài)發(fā)生進行調控。包括誘導細胞分裂、愈傷組織的生長、根芽的分化以及體細胞胚胎

14、發(fā)生等。 第三十八張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 常用的植物激素及生長調節(jié)物涉及五大類：1、生長素類：2、細胞分裂素類：3、赤霉素類：4、脫落酸：5、乙烯：第三十九張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1）生長素類： 主要促進細胞伸長生長和細胞分裂，誘導形成愈傷組織，促進生根。 第四十張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月經(jīng)常使用的植物生長素有：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、2.4-二氯苯氧乙酸（2.4-D）等。具有誘導細胞分裂的作用。第四十一張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月2）細胞分裂素類： 促進細胞分裂和擴大，促進植物莖增粗，抑制莖伸長；誘導芽的分化、

15、促進側芽萌發(fā)；延緩衰老。第四十二張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月對芽的誘導有重要作用。常用的濃度范圍為0.011mg/L。主要有激動素（N6- 呋喃甲基腺嘌呤，KT）、6-芐基腺嘌呤(BA)和玉米素（N6-異戊烯腺嘌呤,ZT）等。細胞分裂素第四十三張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月生長素/細胞分裂素比例兩種激素配比模式有利于根芽的分化有利于芽的形成有利于根的形成和愈傷組織的形成；高低適中第四十四張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月3）赤霉素類： 主要具有誘導莖的細胞伸長，對根無效；與生長素協(xié)同作用；可以誘導離體成花；打破休眠等功能。 常用GA3、GA4等。第四十五張，P

16、PT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月4）脫落酸（ABA） 促進休眠、衰老和脫落。組織培養(yǎng)中較少使用，主要用于調節(jié)激素平衡，促進形態(tài)建成。第四十六張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月5）乙烯： 主要促進衰老和脫落，高濃度易形態(tài)變化。第四十七張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十八張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十九張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第五十張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第五十一張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第五十二張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月碳源： 碳源主要為細胞提供合成新化合物的骨架，為細胞的呼吸代謝提供

17、底物與能源，此外還能維持一定的滲透壓。 常用的碳源主要是蔗糖，使用濃度在25，此外果糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨糖、甘露糖及可溶性淀粉等也常用于植物組織培養(yǎng)。 糖濃度高低直接影響形態(tài)建成。第五十三張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月蔗糖 （0%）蔗糖含量（ 1%）蔗糖含量（ 5%）外植體完全被綠色的芽所包裹，根生長在其下表面在外植體上既沒有芽發(fā)生，也沒有根和愈傷組織產(chǎn)生在外植體上表面邊緣產(chǎn)生芽，也有一些根發(fā)生芽從外植體的上表面發(fā)生而根從下表面發(fā)生tissue culture in the African Violet（非洲紫羅蘭） 第五十四張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月瓊脂： 瓊

18、脂作為固化劑用于組織培養(yǎng)中，起支持植物的作用，不提供營養(yǎng)，為海藻中提取的一種高分子化合物，僅溶于熱水（90 oC以上），成為凝膠，冷卻后（40 oC以下）即凝固為凝膠。 瓊脂的用量通常在410g/L. 瓊脂是組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中主要的成本支出，約占80。第五十五張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月有機附加物： 1）椰子汁： 用量為100200g/L。 2）香蕉泥： 使用量為150200g/L。 3）蘋果汁、番茄汁等。第五十六張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月其他成分： 1）活性炭： 使用量為0 .2-1%。 應用：莖尖初代培養(yǎng)，可以吸附外植體產(chǎn)生的致死性褐化物，一般為0.1%0.2%

19、，不能超過0.2%?；钚蕴吭谏鶗r有明顯的促進作用，可能是通過減弱光照保護IAA。降低玻璃苗的產(chǎn)生頻率，對防止產(chǎn)生玻璃苗有良好作用，一般濃度為0.3%。活性炭在胚胎培養(yǎng)中也有一定作用，如在葡萄胚珠培養(yǎng)時向培養(yǎng)基加入0.1%的活性炭，可減少組織變褐和培養(yǎng)基變色，產(chǎn)生較少的愈傷組織。第五十七張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月2）抗生素： 常用青霉素、鏈霉素、慶大霉素等，用量在520mg/L。第五十八張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月3）抑制酚類物質形成的物質：（1）抗壞血酸： 可以加入培養(yǎng)基或浸泡處理外植體。（2）聚乙烯吡咯烷酮（PVP）： 加入培養(yǎng)基中。第五十九張，PPT共九十五

20、頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）培養(yǎng)基的類型：1、高鹽濃度培養(yǎng)基：MS、B5、SH等。 適用于多數(shù)營養(yǎng)需求量較大的植物。2、低鹽培養(yǎng)基：WPM、 White、 Nitsh等。 適用于木本植物的培養(yǎng)。第六十張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月應用最廣的培養(yǎng)基： Murashing和Skoog的Ms培養(yǎng)基（煙草細胞） Linsmaier和Skoog的Ls培養(yǎng)基。 Ms和Ls特別適用于植株再生。第六十一張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月表1MS培養(yǎng)基的組成配方組成成分數(shù)量(mg/l)組成成分數(shù)量(mg/l)NH4NO31650 Na2-EDTA37.3 KNO31900 FeSO47H2

21、O 27.8 CaCl22H2O 440 CuSO45H2O 0.025 MgSO47H2O 370 蔗糖 30 KH2PO4170 pH 5.8 KI0.83 肌醇 100.0 H3BO36.2 煙酸 0.5 MnSO44H2O22.3 鹽酸吡哆醇 0.5 ZnSO47H2O8.6 甘氨酸 2.0 Na2MoO42H2O0.25 鹽酸硫銨等 0.4 CoCl26H2O0.025 第六十二張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月Gamborg等的B5培養(yǎng)基（1968）及衍生出來的其他培養(yǎng)基適用于植物細胞及原生質體的培養(yǎng)；E1培養(yǎng)基是Phillip和Colins 為了培養(yǎng)苜蓿植物而改進的Ls培

22、養(yǎng)基，特別適合大豆培養(yǎng)，還可用于胚胎形成和原生質體的培養(yǎng)；第六十三張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月表2B5培養(yǎng)基的組成和配方組成成分 數(shù)量(mg/l） 組成成分 數(shù)量(mg/l) KNO3 2500 FeSO47H2O 27.8 CaCl22H2O 150 CuSO45H2O 0.025 MgSO47H2O 250 蔗糖40 (NH4)2SO4 134 pH 5.5KI 0.75 肌醇 100 H3BO4 3.0 煙酸 1.0 MnSO44H2O 10 鹽酸吡哆醇 1.0 ZnSO47H2O 2.0 激動素 0.1 Na2MoO42H2O0.25 2,4D 0.11.0 CoCl26

23、H2O0.025 鹽酸硫銨 10 Na2-EDTA37.3 第六十四張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 N6培養(yǎng)基是我國朱至清（1978）為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)而設計的。其特點是硝酸鹽、銨鹽濃度較低，適合于禾本植物的組織培養(yǎng)；第六十五張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 表3 N6培養(yǎng)基的組成和配方組成成分 數(shù)量(mg/l)組成成分(mg/l) KNO3 2.3 Na2EDTA 37.3 CaCl22H2O 166 FeSO47H2O 27.8 MgSO47H2O 185 蔗糖 50 KH2PO4 400 pH 5.8 (NH4)2SO4 463 煙酸 0.5 KI 0.8

24、鹽酸吡哆醇 0.5 H3BO3 1.6 甘氨酸 2.0 MnSO44H2O 4.4 鹽酸硫銨 1.0 ZnSO47H2O1.5 第六十六張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月與微生物培養(yǎng)基的區(qū)別需要大量無機鹽多種微生物和激素一般采用無機氮源一般以蔗糖為碳源第六十七張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 （三）培養(yǎng)基的配制和滅菌第六十八張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)基及母液的配制：1）量取母液：營養(yǎng)元素和激素。2）稱量蔗糖、瓊脂，放入600ml左右蒸餾水的鍋內(nèi)，電路上加熱，使瓊脂溶化。3）加入母液，混合均勻，調整pH值。4）分裝入瓶，每瓶4050ml。5）封口：用46層稱

25、量紙封口，之后滅菌備用。第六十九張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月各種試劑母液濃度及配制幾種基本培養(yǎng)基的用量培養(yǎng)基成分母液濃度（mg/ml幾種基本培養(yǎng)基1L吸取母液量（ml)MSMT改良WhiteNitschN6B5KNO319000/50050502.13.2974.4765.79Ca(NO3)24H2O3470/100/8.6514.4/NH4NO316500/5005050/(NH4)2SO49260/200/103.24MgSO47H2O7400/200101019.463.385.06.76KH2PO43400/2001010/7.3523.53/NaH2PO42H2O/5.

26、0/10CaCl24H2O4400/1001010/3.77/MnSO44H2O500/1004.464.461.40.60.882.0ZnSO47H2O200/1004.304.301.50.250.751.0H3BO3200/1003.103.100.750.250.801.5NaMoO42H2O5/1005.0/0.5/5.0CuSO45H2O2.5/1001.01.00.041.0/10鐵鹽EDTAFeSO47H2O1862.5/2001392.5/2004.04.0/4.04.0第七十張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)基成分母液濃度（mg/ml幾種基本培養(yǎng)基1L吸取母液量

27、（ml)MSMT改良WhiteNitschN6B5肌醇2000/1005.05.05.0/5.0煙酸100/1000.55.00.31.250.50.63甘氨酸150/1001.321.328.05.03.33/硫胺酸10/1001.01001.02.510100吡哆素10/1005.01001.02.55.010KI16.6/1005.05.04.5/4.82/CoCl26H2O25/1001.01.0/Na2SO41000/50/10/KCl1300/100/5.0/Fe2(SO4)3250/100/1.0/MoO32.5/100/0.004/第七十一張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年

28、6月、培養(yǎng)基的滅菌：1）加熱： 滅菌前檢查滅菌鍋內(nèi)水量是否充足，然后將培養(yǎng)基放于滅菌鍋內(nèi)，改好蓋，關閉放氣閥，打開電源，加熱升溫。2）排氣： 當溫度升至0.5kg/cm時，打開放氣閥徹底排出鍋內(nèi)冷空氣。然后關閉放氣閥，促使壓力繼續(xù)上升。第七十二張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月3）溫度控制： 當鍋內(nèi)壓力升至1.1kg/cm2（）時，計時20分鐘，計時結束后，關閉電源。4）出鍋： 當滅菌鍋自然冷卻后，取出培養(yǎng)基，放置于接種室備用。*培養(yǎng)基進行蒸汽滅菌所需的大致最短時間：體積：20-50ml 滅菌時間：15min體積：75ml 滅菌時間：20min第七十三張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于202

29、2年6月（四）培養(yǎng)基的保存：1、防塵： 防治灰塵污染。2、避光：吲哚乙酸等易于分解，要注意遮光。3、恒溫：4 oC可保存36周，室溫下兩周內(nèi)用完。4。定期更新：不易長期保存。第七十四張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 四 植物組織培養(yǎng)中的消毒、滅菌及環(huán)境控制 第七十五張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）消毒和滅菌的概念：消毒 是指應用消毒劑等方法殺滅物體表面和內(nèi)部的病原菌營養(yǎng)體的方法。滅菌 是指用物理和化學方法殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物（包括芽胞），使之呈無菌狀態(tài)。經(jīng)過滅菌的物品稱“無菌物品”。 消毒與滅菌是兩個不同的概念。滅菌可包括消毒，而消毒卻不能代替滅菌。第七十六

30、張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）消毒和滅菌方法：消毒方法： 1）化學藥劑消毒：采用化學消毒劑殺滅或抑制病原微生物的方法。 2）煮沸消毒：在熱水中煮沸殺滅病原微生物的方法。 3）射線消毒：利用紫外線或r射線對接種室等處的病原微生物進行殺滅或抑制。第七十七張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月滅菌方法： 1）物理法滅菌： （1）干熱滅菌法： a、干熱空氣滅菌法：即把待滅菌的物品均勻地放入烘箱中，升溫至160C，恒溫1小時即可。此法適用于玻璃皿、金屬用具等的滅菌。 b、灼燒滅菌法：利用火焰直接把微生物燒死。此法徹底可靠，滅菌迅速，但易焚毀物品，所以使用范圍有限，只適合于接種針、環(huán)

31、、試管口及不能用的污染物品或實驗動物的尸體等的滅菌。 第七十八張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月濕熱滅菌法：在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好，這是因為一方面細胞內(nèi)蛋白質含水量高，容易變性。另一方面高溫水蒸汽對蛋白質有高度的穿透力，從而加速蛋白質變性而迅速死亡。a 高溫高壓蒸汽滅菌法：它適用于各種耐熱、體積大的培養(yǎng)基的滅菌，也適用于玻璃器皿、工作服等物品的滅菌。b.巴氏消毒法：有些食物會因高溫破壞營養(yǎng)成分或影響質量，如牛奶、醬油、啤酒等，所以只能用較低的溫度來殺死其中的病原微生物，這樣既保持食物的營養(yǎng)和風味，又進行了消毒，保證了食品衛(wèi)生。該法一般在62C，30分鐘既可達到消毒目

32、的。此法為法國微生物學家巴斯德首創(chuàng)，故名為巴氏消毒法。第七十九張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月c.煮沸消毒法：直接將要消毒的物品放入清水中，煮沸15分鐘，即可殺死細菌的全部營養(yǎng)和部分芽孢。若在清水中加入1%碳酸鈉或2%的石炭酸，則效果更好。此法適用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。d.間歇滅菌法：上述兩種方法在常壓下，只能起到消毒作用，而很難做到完全無菌。若采用間歇滅菌的方法，就能殺滅物品中所有的微生物。具體做法是：將待滅菌的物品加熱至100C，1530分鐘，殺死其中的營養(yǎng)體。然后冷卻，放入37C恒溫箱中過夜，讓殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體。第2天再重復上述步驟，三次左右，就可達到滅菌的目的

33、。此法不需加壓滅菌鍋，適于推廣，但操作麻煩，所需時間長。第八十張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月 影響濕熱滅菌的因素a.不同的微生物或同種微生物的不同菌齡對高溫的敏感性不同。多數(shù)微生物的營養(yǎng)體和病毒在5065C，10分鐘就會被殺死；但各種孢子、特別是芽孢最能抗熱。對同種微生物來講，幼齡菌比老齡菌對熱更敏感。b.微生物的數(shù)量多少顯然會影響滅菌的效果，數(shù)量越多，熱死時間越長。c.培養(yǎng)基的成分與組成也會影響滅菌效果。一般地講，蛋白質、糖或脂肪存在，則提高抗熱性，pH在7附近，抗熱性最強，偏向兩極，則抗熱能力下降，而不同的鹽類可能對滅菌產(chǎn)生不同的影響；固體培養(yǎng)基要比液體培養(yǎng)基滅菌時間長。第八十一張，PPT共九十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（3）過濾滅菌：采用機械方法，設計一種濾孔比細菌還小的篩子，做成各種過濾器。通過過濾，只讓液體培養(yǎng)基從篩子中流下，而