白色念珠菌細(xì)胞壁β葡聚糖升白細(xì)胞藥效學(xué)作用的研究

1、白色念珠菌細(xì)胞壁-葡聚糖升白細(xì)胞藥效學(xué)作用的研究【摘要】目的研究白色念珠菌andidaAlbians細(xì)胞壁差異溶解性的-葡聚糖-gluan對環(huán)磷酰胺ylphsphaide，endxan，ytxan，TX所致小鼠外周血白細(xì)胞淘汰的上升作用。要領(lǐng)接納TX所致的小鼠外周血白細(xì)胞淘汰模子，研究白色念珠菌細(xì)胞壁-葡聚糖對小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)的影響。效果三種溶解性的白色念珠菌細(xì)胞壁-葡聚糖均能升高小鼠外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)。各組小鼠脾臟指數(shù)增長，脾臟、骨髓巨核細(xì)胞系增生。不溶性的-葡聚糖作用更顯著。結(jié)論白色念珠菌-葡聚糖尤其是不溶性-葡聚糖對TX所致的白細(xì)胞淘汰有上升作用，是一種很有前程的免疫

2、調(diào)治劑。【關(guān)鍵詞】白色念珠菌；-葡聚糖；生物學(xué)活性；提取闡發(fā)；免疫藥理作用【Abstrat】bjetiveTstudythepharalgialeffetfthebasi-gluan，aidi-gluanandinsluble-gluanextratsfandidaalbiansntheleukytpiesis-prtingintheleukpeniaie.ethdsiefeahgrupexepttheuntreatedntrlgrupereadinisteredylphsphaideintraperitneally100g/(kgd)frthreedaystdevelpleupenia.Th

3、eexperientalgrupereadinisteredthreekindsfandidaalbians-gluanintravenuslyfrsixdaysseparately.TheperipherialleukytesfallieereuntedbefretreatedTX，and1，3，5，7daysaftertreatedTX.ResultsThreekindsfandidaalbians-gluananinreasethenubersfleukytes，neutrphiligranulytesandnytesintheperipheralbld.Thespleenindexin

4、eahgrupanialareinreased，andegakaryytesareinreasedinspleenandarr.nlusinandidaalbians-gluanspeiallyinsluble-gluansisakindfiundulatrhihaninreasethenubersfleukytesintheperipheralbld.【Keyrds】-gluan；andidaalbians；leukyte；iundulatr-葡聚糖-gluan是白色念珠菌細(xì)胞壁中含量最高的多糖。作為一類條件致病真菌多糖，白色念珠菌-葡聚糖有著多種生物學(xué)活性和免疫藥理學(xué)作用，在抗炎、抗腫瘤、

5、刺激造血等方面都有很高的藥效學(xué)作用1，但有關(guān)差異性子的白色念珠菌-葡聚糖升白細(xì)胞作用的研究甚少。本研究制備三種溶解性的-葡聚糖，不雅察其對環(huán)磷酰胺ylphsphaide，endxan，ytxan，TX所致的小鼠外周血白細(xì)胞淘汰的上升作用，為進(jìn)一步確證白色念珠菌-葡聚糖刺激造血體系使白細(xì)胞升高的作用機(jī)制，和進(jìn)一步研究白色念珠菌-葡聚糖有用身分或有用因子，為建立藥物質(zhì)量操縱尺度和量效干系提供理論根據(jù)。1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1動物與試劑昆明種小白鼠，46周齡，體重202g，昆明醫(yī)學(xué)院動物科云南省實(shí)行質(zhì)量及格證0000481號。沙氏液體造就基Saburaudsdextrseagar：卵白胨10g、葡萄糖40

6、g、溶于1000l蒸餾水，高壓滅菌后備用；淀粉酶：分子量9600，酶活力：50/g上海伯奧生物科技；白色念珠菌堿溶性-葡聚糖andidaalbiansbasi-gluan，ABBG、酸溶性-葡聚糖andidaalbiansaidi-gluan，AABG)和不溶性-葡聚糖andidaalbiansinsluble-gluan，AIBG：均按文獻(xiàn)要領(lǐng)制備2。1.2儀器LRH-250Z型震蕩造就箱廣東醫(yī)療東西廠；81-2型恒溫磁力攪拌器上海司樂儀器廠。1.3白念珠菌的造就和三種白色念珠菌-葡聚糖的制備取少量保存于密封無菌容器中的純白色念珠菌菌落，接種于沙氏液體造就基，接種后37恒溫?fù)u床160次/in

7、震蕩造就67天，3000rp離心30in，網(wǎng)絡(luò)菌體，冷凍保存。提取葡聚糖的流程，見圖1。1.4小鼠白細(xì)胞淘汰模子的創(chuàng)立除空缺比較組外，各組小鼠腹腔注射TX100g/(kgd)，一連3天，創(chuàng)立小鼠外周血白細(xì)胞淘汰模子。1.5確定三組-葡聚糖的給藥劑量參照急性毒性實(shí)行探究LD50值，各組給藥劑量末了如表1。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰急性毒性學(xué)實(shí)行效果接納Bliss法盤算LD50值。藥效學(xué)實(shí)行接納SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件舉行數(shù)據(jù)處置懲罰闡發(fā)，全部指標(biāo)均以均數(shù)尺度差xs表現(xiàn)，組間比力接納方差闡發(fā)，以P0.05為差異有明顯性。圖1從白色念珠菌提取ABBG、AABG、AIBG的流程表示圖Table1Dsedes

8、ignfexperient2效果2.1急性毒性學(xué)實(shí)行通過急性毒性實(shí)行得到LD50值別離為：ABBG36.8937g/kg，AABG89.23549g/kg，AIBG767.7753g/kg；95%可信區(qū)間別離為ABBG組32.005242.5289g/kg，AABG組76.7182103.8025g/kg，AIBG組663.748888.106g/kg。各實(shí)行組小鼠肉眼不雅察，除肝臟增大外未見顯著變革，病理HE切片表現(xiàn)肝細(xì)胞有差異程度的腫脹和空泡變。2.2外周血白細(xì)胞變革實(shí)行第5、7、9天ABBG、AABG、AIBG組小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)均明顯增高，此中第7天、第9天，

9、AIBG組白細(xì)胞數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)較陽性比較組rhG-SF升高，差異有明顯性。Table2Nubersfleukytefperipheralbldineahgrupanial(xs)注：Nte：*P0.05，parediththenralntrl；*P0.05，parediththepsitiventrlTable3Nubersfneutrphiligranulytefperipheralbldineahgrupanial(xs)注：Nte：*P0.05，parediththenralntrl；*P0.05，parediththepsitiventrlTable4Nubersfnytefperip

10、heralbldineahgrupanial(xs)注：Nte：*P0.05，parediththepsitiventrl2.3脾臟、胸腺指數(shù)變革實(shí)行第5、7、9天，各組小鼠胸腺指數(shù)比力，差異無明顯性(P0.05)。各組小鼠給藥后，脾臟指數(shù)均增長。Table5Theeffetf-gluannthespleenindexineahgrupanial(xs)注：Nte：*P0.05，parediththepsitiventrl2.4藥效學(xué)實(shí)行病理構(gòu)造學(xué)改變脾臟：白髓、紅髓分界不甚明晰，紅髓內(nèi)細(xì)胞數(shù)增多，與空缺比較組比力，ABBG、AABG、AIBG組脾竇出現(xiàn)較多的巨核細(xì)胞；骨髓：實(shí)行組小鼠骨髓細(xì)胞

11、增生存潑，與空缺比較組比力，ABBG、AABG、AIBG組的巨核細(xì)胞數(shù)增多，提示巨核細(xì)胞系增生存潑。3討論多能造血干細(xì)胞具有多向分化的潛能，成年小鼠體內(nèi)的多能造血干細(xì)胞重要漫衍在脾臟和骨髓3。本研究表現(xiàn)，實(shí)行第7天時，各實(shí)行組白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)都較rhG-SF高(P0.05)；實(shí)行第7天、第9天，AIBG升高外周血白細(xì)胞、單核細(xì)胞數(shù)顯著高于ABBG、AABG和rhG-SF(P0.05)，說明-葡聚糖，尤其是AIBG可刺激血液體系白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞數(shù)差異程度的升高。實(shí)行第7天，ABBG、AABG、AIBG組小鼠脾臟指數(shù)均與rhG-SF差異有明顯性(P0.05)；第9天，AIBG脾

12、臟指數(shù)較rhG-SF、ABBG、AABG組高，統(tǒng)計(jì)學(xué)表白差異均具有明顯性(P0.05)。與成年小鼠體內(nèi)造血干細(xì)胞的漫衍同等，實(shí)行創(chuàng)造ABBG、AABG、AIBG組小鼠的構(gòu)造病理學(xué)改變重要表如今骨髓和脾臟。與空缺比較組比力，三組小鼠脾臟、骨髓巨核細(xì)胞數(shù)增多，AIBG組要更顯著。因此，綜合外周血細(xì)胞數(shù)、脾臟指數(shù)、構(gòu)造改變，我們推測-葡聚糖在刺激小鼠外周血白細(xì)胞總數(shù)升高的歷程中大概與刺激FU-S增殖，向粒系、巨核系組細(xì)胞分化，進(jìn)而天生粒細(xì)胞、單核細(xì)胞。造血器官中基質(zhì)細(xì)胞是造血微情況中緊張的身分，與造血有關(guān)的基質(zhì)細(xì)胞涉及到巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和載脂肪細(xì)胞。此中，巨噬細(xì)胞被

13、證明是在造血產(chǎn)生歷程中有緊張作用的一個微情況因素。巨噬細(xì)胞可通過細(xì)胞彼此作用和排泄SF、Ep、BPA、PGE和IL-1因子，調(diào)治全部四系血細(xì)胞的生長和分化4。以往研究證明念珠菌多糖可刺激巨噬細(xì)胞開釋細(xì)胞因子K如IL-6、IL-8、IL-1、TNF等5，6。這些細(xì)胞因子可調(diào)控造血細(xì)胞的增殖運(yùn)動：IL-1、TNF可刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生粒細(xì)胞集落刺激因子G-SF及粒-巨噬系集落刺激因子G-SF，G-SF和G-SF是使粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的母細(xì)胞增殖分化的特異性誘導(dǎo)劑，并能刺激骨髓向外周血液開釋成熟的中性粒細(xì)胞，收縮中性粒細(xì)胞的成熟期7。同時，SF可作用于粒-單系祖細(xì)胞FU-G，誘導(dǎo)其增殖分化。IL-1還能激

14、活干細(xì)胞從G0期進(jìn)入增殖周期，擴(kuò)大干細(xì)胞池；可為早期干細(xì)胞對SF起反響做預(yù)備，并誘導(dǎo)幫助細(xì)胞產(chǎn)生SF及其他K，從而間接調(diào)治造血。-葡聚糖是念珠菌緊張的抗原決定簇8，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞上都存在-葡聚糖的特異性受體9。白色念珠菌的三種溶解性的-葡聚糖，在布局上都是切合單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞上-葡聚糖受體對付配體的要求，即能被特異識別-13和-16糖苷鍵10。巨噬細(xì)胞作為一類抗原遞呈細(xì)胞AP攝取-葡聚糖抗原，隨后誘導(dǎo)性的表達(dá)高程度H，H與Th細(xì)胞上的TR和D4彼此作用。使Th細(xì)胞成效加強(qiáng)，IL-2排泄增多，IL-2又能保持T細(xì)胞的存活與增殖Th細(xì)胞被激活后刺激B細(xì)胞分化、增殖11。實(shí)行中，小鼠脾臟指數(shù)的顯著增長、脾臟、骨髓細(xì)胞增生，說明白-葡聚糖在升高外周血白細(xì)胞的同時，也對激活機(jī)體的整個免疫體系活性產(chǎn)生影響。因此，AABG、ABBG、AIBG升高小鼠外周