DB11-T1397-2017魚類口服抗菌藥物選用技術(shù)規(guī)程

1、176-2017北 京 市DB 11地 方 標 準DBT17北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā) 布IDBT72017前 言GBT。這些專利的責任。 1DBT72017魚類口服抗菌藥物選用技術(shù)規(guī)程于養(yǎng)殖魚類細菌感染判斷和治療時口服抗菌藥物選用。范性引用文件 GBT 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法BT SCT42006 水生動物檢疫實驗技術(shù)規(guī)范SCT12006 魚類細菌病檢疫技術(shù)規(guī)程 第1部分：通用技術(shù)用原則和程序1 原則；醇類。 程序的選用程序參見附錄A。 操作流程4.1 病魚采集SC/T 70142006第6章的規(guī)定進行。4.2 病原菌的分離參見附錄B。附錄B中的BHIA的培養(yǎng)基配方參見C.1。

2、4.3 細菌感染判斷。2DBT720174.4 敏感藥物篩選 一個樣品僅獲得一株病原菌，選擇該菌的敏感藥物種類；個樣品獲得多株病原菌，選擇共同的敏感藥物種類； 4.5 用藥劑量確定4.5.1 檢測病原菌的最小抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration，MIC) 采用濃度梯度稀釋法(參見D.4)檢測其對樣品所有病原菌的MIC值。4.5.2 計算樣品每千克魚的日用藥劑量 HYPERLINK l _bookmark1 U 每千克魚的日藥物使用劑量(指有效成分劑量)， 單位為毫克每千克 (mg/kg)； MIC 抗菌藥物對病原菌的MIC值，單位為毫克每升 (mg/L)；

3、S系數(shù)，鯉科魚類為8.1，冷水魚類為9.4，養(yǎng)殖者可依經(jīng)驗微調(diào)該系數(shù)；p 水的密度，數(shù)值約為1，單位為千克每升 (kg/L) 。4.5.3 計算樣品池塘的日藥物總使用劑量按公式 (2) 計算樣品池塘的日總用藥劑量。M = U T 1000 ( ) HYPERLINK l _bookmark2 2M 樣品池塘的日藥物總使用劑量(指有效成分劑量)， 單位為克 (g)；U 每千克魚的日藥物使用劑量(指有效成分劑量)， 單位為毫克每千克 (mg/kg)； 4.6 使用方法入餌料中， 喂使用。4.7 用藥效果評價原則判斷用藥效果：如用藥后 3 d5 d，魚的日死亡數(shù)量保持治療前的水平或者超過治療前的水平

4、，則認定藥物 3否A(資料性附錄)程序分離是否有菌藥物菌藥物A示意4DBT72017(資料性附錄)分離B備和材料B.1.1 普通天平：0 g210 g，精確至0.01 g。B壓滅菌鍋。B波爐。B物安全柜或超凈工作臺。B養(yǎng)皿：直徑90 mm。B (500 mL) 等。 B劑和培養(yǎng)基B心浸液瓊脂 (Brain Heart Infusion Agar, BHIA)：參見C.1。B位、腎、脾、性腺、腦。B原菌分離B魚病原菌分離用接種環(huán)從取樣部位蘸取病料，無菌操作劃線接種于BHIA平板， 22 C2 C培養(yǎng)24h48h，無dB魚病原菌分離用接種環(huán)從取樣部位蘸取病料，無菌操作劃線接種于BHIA平板，28

5、C2 C培養(yǎng)24 h48 h，無 d5DBT72017(資料性附錄)制方法C腦心浸液瓊脂 (BHIA)C成分 5.0 g2.5 gC制法CpHmin，冷至50 左右， C解酪蛋白瓊脂 (MHA)C成分胨 6.0 gC制法將C.2.1中各成分混勻，加熱溶解，調(diào)pH至7.30.1，121 高壓滅菌15min，冷至50 左右，傾 中的培養(yǎng)基厚度4 mm。C解酪蛋白肉湯 (MHB)C成分胨 6.0 g6DBT72017 1000 mLC制法將C.3.1中各成分混勻，加熱溶解，調(diào)pH至7.30.1，121 高壓滅菌15 min。如檢測鏈球菌，臨 0.5%。7DBT72017(資料性附錄)的藥物敏感性檢測

6、D備和材料D.1.1恒溫培養(yǎng)箱：0 60 。.0001 g。D.1.3凈工作臺。D.1.6D.1.7微量移液器：100 L1000 L，10 L100 L。多通道移液器：50 L300 L。0 mm。5 mm150 mm，15 mm100 mm。D.1.11D培養(yǎng)基D.45%氯化鈉緩沖液。D基甲酰胺：分析純。D化鈉：分析純。D%酒精。D.2.6 藥敏紙片。-20保存，藥物種類及其溶解試劑見表D.1。藥敏紙片可從可靠的供應商采購或自 D抗菌藥物標準品?？咕幬锓N類參見表D.1，標準品由獸藥管理部門指定單位提供。D解酪蛋白瓊脂 (Mueller-Hinton Agar, MHA)：參見C.2。D.

7、2.9 水解酪蛋白肉湯(Mueller-Hinton Broth, MHB)：參見C.3。D片擴散法D備菌懸液從培養(yǎng)16 h24 h的BHIA斜面上挑取純培養(yǎng)菌，用0.45%氯化鈉緩沖液配制成1.0108CFU/mL2.0 D平板液應在15 min內(nèi)使用。用微量移液器取100 L到MHA平板上，滅菌玻璃涂布棒涂勻。8DBT72017D藥敏紙片 2 )孵育15 min。D菌圈直徑將D.3.3孵育后的平板倒置于28 2 (殺鮭氣單胞菌為22 2 )生化培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 hmmD解釋D菌對抗菌藥物敏感或耐藥。D菌的抑菌圈直徑解釋標準和相對應的最低抑菌濃度值 (MIC)藥 名 MIC (mg/L)(mm)啶lLNaOH5D度梯度稀釋法D懸液制備D的菌懸液，用滅菌的MHB稀釋100倍備用。D菌藥物的配制 D菌藥物藥液濃度梯度的建立GB/T 27623.12011中的第5.