分子生物學(xué)習(xí)題答案

1、分子生物學(xué)習(xí)題答案 篇一：分子生物學(xué)習(xí)題集答案(1) 第一章 二、問答題 1.重組 DNA的含義是什么? 目的基因的獲得。從細(xì)菌或動(dòng)植物細(xì)胞中取出染色體的DNA，用內(nèi)切酶將之切成若干片段，從中鑒定出目的基因。另一種方法是從細(xì)胞中分離到信使核糖核酸核(mRNA)用反轉(zhuǎn)錄酶的作用獲得該基因的互補(bǔ)DNA(cDNA)。如果預(yù)先知道某種蛋白質(zhì)的氨基酸順序，可以破譯它的遺傳密碼，用DNA合成的方法獲得基因。 運(yùn)載體的選擇。運(yùn)載體一般為質(zhì)粒，是細(xì)菌中染色體以外的DNA。但它不是正常的成分，即沒有質(zhì)粒也完全可以正常生長。質(zhì)粒是環(huán)狀的DNA，能自主復(fù)制，有若干內(nèi)切酶切口和某些抗生素的抗藥性基因?？梢宰鳛檗D(zhuǎn)基因的

2、載體。 內(nèi)切酶切割。將目的基因與質(zhì)粒DNA如pBR322質(zhì)粒，用相同的內(nèi)切酶分別進(jìn)行切割，結(jié)果它們都會(huì)形成相同的切口。 連接酶連接。DNA連接酶，常用的有T4。在三磷酸腺苷(ATP)及鎂離子存在的條件下，T4連接酶能將切口相同的兩種DNA連接起來，形成一個(gè)插入目的基因的質(zhì)粒，叫重組質(zhì)粒。 宿主菌。宿主菌如大腸桿菌作為受體菌，需要培養(yǎng)到旺盛生長階段，叫感受態(tài)細(xì)胞。一般在液體培養(yǎng)基中，37振蕩培養(yǎng)過夜即可。 重組DNA的轉(zhuǎn)化。將插入目的基因的質(zhì)粒加入呈感受態(tài)的大腸桿菌中，同時(shí)加入適當(dāng)?shù)拟}鹽(Ca+2)，振蕩培養(yǎng)。大腸桿菌將重組質(zhì)粒吞入胞內(nèi)。這個(gè)過程叫轉(zhuǎn)化。 轉(zhuǎn)化子的篩選。pBR322質(zhì)粒的PstI

3、酶切口處插入目的基因時(shí)，則會(huì)破壞了抗氨芐青霉素的基因。將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌單個(gè)菌落，挑取菌體分別接種于含氨芐青霉素及鏈霉素的培養(yǎng)基中。如在鏈霉素培養(yǎng)基上生長而在氨芐青霉素培養(yǎng)基上不能生長的菌落即為轉(zhuǎn)化子。 第二章 二、問答題 1.什么是細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng)(restriction-modificaton system, R-M system)，細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng)有什么意義? 即限制性內(nèi)切酶和與其對(duì)應(yīng)的甲基化酶系統(tǒng)，稱R-M system。限制性內(nèi)切酶識(shí)別特異的DNA序列并打斷DNA，同時(shí)對(duì)應(yīng)的甲基化酶能把該段特異的序列甲基化，使得限制性內(nèi)切酶無法識(shí)別。 這種系統(tǒng)在細(xì)菌中起到了免疫的作用，即外來入侵

4、的DNA在限制性內(nèi)切酶的作用下被水解，而細(xì)菌自身的DNA在甲基化酶的作用下被保護(hù)起來。 2.何謂斷裂基因( split gene)?何謂重疊基因( overlapping gene)?它們?cè)谏镞M(jìn)化與適應(yīng)上有何意義? 重疊基因：不同基因共用一段相同的DNA序列。 斷裂基因：真核生物結(jié)構(gòu)基因，有若干個(gè)編碼區(qū)和非編碼區(qū)互相間隔開但又連續(xù)鑲嵌而成，去除非編碼區(qū)再連接后，可翻譯出由連續(xù)氨基酸組成的完整蛋白質(zhì)，這些基因稱為斷裂基因或間隔基因。 重疊基因生物學(xué)意義： 原核生物進(jìn)化的經(jīng)濟(jì)原則(較小的C值編碼較多的基因信息)； 遺傳信息量的估算、突變效應(yīng)的鑒定、表達(dá)調(diào)控的理論發(fā)展； 豐富和發(fā)展了基因的概念(部

5、分回答 C不等于c)。 間隔基因的生物學(xué)意義：有利于生物遺傳的相對(duì)穩(wěn)定。在突變隨機(jī)發(fā)生的前提下，間隔基因的內(nèi)含子突變不會(huì)承受自然選擇壓力； 增加變異概率，有利于生物的進(jìn)化。間隔基因長度的增加在某種程度上與增加了基因內(nèi)的重組變換概率，這樣可形成蛋白結(jié)構(gòu)域的重新組合； 擴(kuò)大生物體的遺傳信息儲(chǔ)量。通過改變讀碼框或利用內(nèi)含子編碼基因，或?qū)?nèi)含子以不同方式剪接； 利用內(nèi)含子進(jìn)行代謝調(diào)節(jié)。例：酵母細(xì)胞色素b基因內(nèi)含子II編碼一個(gè)成熟酶，利用成熟酶切除未成熟的mRNA中的內(nèi)含子。 3.什么是順反子?用“互補(bǔ)”和“等位基因”說明“基因”這個(gè)概念。 4.IS元件整合到靶位點(diǎn)時(shí)會(huì)發(fā)生什么，IS元件整合到靶位點(diǎn)時(shí)會(huì)

6、發(fā)生什么?IS元件的末端是反向重復(fù)序列，這兩個(gè)重復(fù)序列高度同源，由供體提供IS元件的一個(gè)拷貝到靶位點(diǎn)，涉及酶切、復(fù)制、重組，即通過轉(zhuǎn)座酶與末端IR和受體靶位點(diǎn)序列DNA雙鏈進(jìn)行特定長度的交錯(cuò)切割，再將IS元件連接到靶位點(diǎn)的凸出單鏈上，最后由聚合酶填補(bǔ)空缺完成轉(zhuǎn)座。當(dāng)IS元件整合到靶位點(diǎn)后，插入位點(diǎn)的宿主靶DNA序列被復(fù)制，在轉(zhuǎn)座子兩端產(chǎn)生宿主靶DNA序列的正向重復(fù)，因此IS DNA兩側(cè)的IR總是與短的正向重復(fù)相連，正向重復(fù)序列的長短受控于轉(zhuǎn)座子插入時(shí)對(duì)靶位點(diǎn)產(chǎn)生錯(cuò)切序列的長短。 5.列出一個(gè)轉(zhuǎn)座子插入到一個(gè)新位點(diǎn)所要求的步驟。 復(fù)制型轉(zhuǎn)座：發(fā)生轉(zhuǎn)座的整個(gè)DNA序列是原轉(zhuǎn)座因子的一個(gè)拷貝，轉(zhuǎn)座伴

7、隨著新拷貝的復(fù)制。 a.轉(zhuǎn)座酶對(duì)供體轉(zhuǎn)座子的末端反向重復(fù)序列和受體靶位點(diǎn)序列的DNA雙鏈進(jìn)行特定長度的交錯(cuò)切割； b.共同的機(jī)制使轉(zhuǎn)座子和靶序列的切口末段發(fā)生交叉共價(jià)連接，形成單鏈轉(zhuǎn)移復(fù)合體； c.DNA聚合酶利用連接缺口處的3-OH末端和模板鏈填補(bǔ)缺口，完成轉(zhuǎn)座子及正向重復(fù)序列的復(fù)制，最后將供體復(fù)制子與受體復(fù)制子分子連接成具有兩個(gè)轉(zhuǎn)座子的共聯(lián)體，兩個(gè)拷貝的轉(zhuǎn)座子位于兩個(gè)復(fù)制子的連接處，方向相同，正向重復(fù)； d.由拆分酶催化在兩個(gè)轉(zhuǎn)座子拷貝之間的同源重組交換，釋放出兩個(gè)獨(dú)立的復(fù)制子，另一個(gè)復(fù)制子則獲得了被復(fù)制的轉(zhuǎn)座子，并在轉(zhuǎn)座子的兩端形成與最初發(fā)生錯(cuò)切長度相同的，短的正向重復(fù)序列。 非復(fù)制型轉(zhuǎn)

8、座：轉(zhuǎn)座因子作為一個(gè)整體直接從原始位點(diǎn)插入轉(zhuǎn)座到新的靶位點(diǎn)，而供體原來的位點(diǎn)上已沒有轉(zhuǎn)座因子了。有兩種轉(zhuǎn)座機(jī)制：A.利用供體和受體靶DNA序列的直接連接完成轉(zhuǎn)座，只需轉(zhuǎn)座酶，涉及轉(zhuǎn)座子從供體DNA釋放和在靶位點(diǎn)上的插入，在供體位點(diǎn)會(huì)造成DNA的斷裂，轉(zhuǎn)座子的一條單鏈與靶位點(diǎn)的單鏈連接，互補(bǔ)鏈缺口經(jīng)修復(fù)合成填補(bǔ)，完成轉(zhuǎn)座后同樣在轉(zhuǎn)座子兩側(cè)形成靶位點(diǎn)序列的正向重復(fù)。 B.保守轉(zhuǎn)座：轉(zhuǎn)座酶在轉(zhuǎn)座子兩端發(fā)生剪切，產(chǎn)生雙鏈斷裂，完整的轉(zhuǎn)座子從供體中釋放出來，轉(zhuǎn)座子與已切斷的靶位點(diǎn)連接，復(fù)制、修補(bǔ)缺口。 6.比較基因組的大小和基因組復(fù)雜性的不同： 個(gè)基因組有兩個(gè)序列，一個(gè)是 A，另個(gè)是 B，各將2000b

9、P長。其中個(gè)是由400bp的序列重復(fù)5次而成，另一個(gè)則由50bp的序列重復(fù)40次而成，問： (1)這個(gè)基因組的大小怎樣? (2)這個(gè)基因組的復(fù)雜性如何? 7.被加工的假基因與其他假基因有哪些不同?它是如何產(chǎn)生的？ 功能基因累積突變型假基因：某基因發(fā)生了對(duì)其表達(dá)過程中的一個(gè)階段或全部階段具有阻斷作用的突變，就會(huì)使該基因失去活性。這些變化包括消除起始轉(zhuǎn)錄的信號(hào)，阻止在外顯子與內(nèi)含子的連接點(diǎn)進(jìn)行剪接或過早地終止翻譯等。加工假基因：基因組中與RNA轉(zhuǎn)錄物相似的失活基因。已加工過的假基因有明顯的RNA加工反應(yīng)的印跡，這表明它們?cè)谀撤N程度上經(jīng)過RNA階段。形成：DNA轉(zhuǎn)錄前體RNA后經(jīng)剪接加工形成成熟的R

10、NA,再反轉(zhuǎn)錄成cDNA，隨后插入到基因中；DNA轉(zhuǎn)錄的前體RNA經(jīng)加工形成成熟的RNA，進(jìn)而與DNA形成雜合雙鏈插入到基因中，形成無啟動(dòng)子，無內(nèi)含子，無終止子的加工型假基因，或反轉(zhuǎn)座假基因。 假基因生物學(xué)意義：假基因以基因家族中的一個(gè)成員存在，在進(jìn)化上具有進(jìn)化的整體性，不承受選擇壓力；無論其序列是否有功能，基因簇每個(gè)成員都會(huì)發(fā)生重復(fù)、缺失和重排。通過對(duì)突變體的自然選擇，使優(yōu)良突變基因得以進(jìn)化；部分回答了生物進(jìn)化的C值矛盾。 8.請(qǐng)描述 C值矛盾，并舉一個(gè)例說明。 某生物單倍體基因組DNA的核苷酸數(shù)為大C值，受中心法則限定，編碼結(jié)構(gòu)基因DNA的核苷酸數(shù)為小c值。生物進(jìn)化的C值矛盾表現(xiàn)為： 生物

11、體進(jìn)化程度高低與大C值不成明顯相關(guān)（非線性）。例：有些哺乳動(dòng)物的基因組叫兩棲類的多數(shù)生物還要?。?親緣關(guān)系相近的生物大C值相差較大。例：昆蟲類、兩棲類和顯花植物類C值相差幾乎上百倍 ； 一種生物內(nèi)大C值與小c值相差極大。例：Euk. 人體 c = C/10； Prok. x174 c C )。 9.跳躍復(fù)制的結(jié)果是什么? 基因的重復(fù)可以通過跳躍復(fù)制產(chǎn)生，復(fù)制后的拷貝發(fā)生突變和突變累積，然后 形成基因簇，最后分化成執(zhí)行不同功能的基因。重復(fù)序列的突變?cè)谀撤N意義上又進(jìn)一步抑制了不對(duì)稱交換，維持了進(jìn)化所選留的新基因的相對(duì)穩(wěn)定。 10.列舉一個(gè)已知的 DNA序列編碼一種以上蛋白質(zhì)的三種方法。 出現(xiàn)在重疊

12、基因中：在核糖體結(jié)合位點(diǎn)之后含有多重起始位點(diǎn)，或終止密碼的漏讀（其中UGA、UAG易被漏讀、錯(cuò)讀，UAA能嚴(yán)格終止），例如兩種蛋白質(zhì)均從同一起始密碼開始起譯，其中一種蛋白在遇到第一個(gè)終止密碼是就停止翻譯，另一種蛋白由于發(fā)生漏讀，核糖體繼續(xù)翻譯到下一個(gè)終止密碼處； 以不同的讀碼框架對(duì)同一條mRNA進(jìn)行識(shí)讀和翻譯； 選擇不同的起始密碼AUG，但按同一個(gè)讀碼框架對(duì)同一條mRNA進(jìn)行識(shí)讀和翻譯； 編碼在同一DNA區(qū)段不同極性單鏈上的重疊基因，即反向重疊基因； 真核生物內(nèi)含子選擇性剪接可由同一初級(jí)轉(zhuǎn)錄物產(chǎn)生多種蛋白質(zhì)，即同源異型蛋白。 另一個(gè)版本： 在核糖體結(jié)合位點(diǎn)之后含有多重起始位點(diǎn) 在一兩個(gè)堿基的移

13、碼方式出現(xiàn)重疊的可讀框 不同的剪接方式，產(chǎn)生不同的mRNA方式 第三章 二 問答題: 1.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)克隆大腸桿菌的復(fù)制子。 用熒光物質(zhì)特異性標(biāo)記大腸桿菌的復(fù)制子，利用相同的限制性內(nèi)切核酸酶分別酶解E.coli DNA復(fù)制子和具有抗生素基因（例如Ampr）質(zhì)粒DNA，根據(jù)熒光標(biāo)記篩選出切下的的E.coli DNA復(fù)制子片段，與質(zhì)粒DNA片段連接后，轉(zhuǎn)化缺乏Ampr基因的受體菌（Amps），接種于含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中，選擇能正常生長的菌落，即可克隆到E.coli 復(fù)制子的DNA片段，因?yàn)橹挥型瑫r(shí)具有復(fù)制子和Ampr的基因組DNA的菌落才能既檢測到熒光標(biāo)記，由能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中正常繁殖。

14、 2.試證明一個(gè)基因中只有一條 DNA鏈作為模扳被轉(zhuǎn)錄。 分子雜交試驗(yàn)：分別將體外雙向轉(zhuǎn)錄體系和體外不對(duì)成體系（與體內(nèi)相同方向的單向轉(zhuǎn)錄）中分離得到的轉(zhuǎn)錄物與體內(nèi)轉(zhuǎn)錄物雜交，如果能檢測到雜交雙鏈產(chǎn)物，則可證明體內(nèi)的目標(biāo)片段是按雙向轉(zhuǎn)錄模式進(jìn)行轉(zhuǎn)錄的，反之，就是以不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄方式進(jìn)行單向轉(zhuǎn)錄。 3.描述 Matthew Meselson-Franklin Stahl試驗(yàn)，說明這一實(shí)驗(yàn)加深我們對(duì)遺傳理解的重要性。 將N加入到培養(yǎng)E.coli的培養(yǎng)基內(nèi)，標(biāo)記合成的新生DNA單鏈；將E.coli轉(zhuǎn)移到N14培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)一個(gè)世代后，提取E.coli DNA Cscl密度梯度離心，測定DNA分子密度。 15

15、分析：如果為全保留復(fù)制，則出現(xiàn)兩條不同密度DNA帶紋； 如果為隨機(jī)復(fù)制，則出現(xiàn)一條中等密度DNA； 如果為半保留復(fù)制，則出現(xiàn)一條中等密度DNA. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果將全保留復(fù)制否定； 提取在N14培養(yǎng)基內(nèi)復(fù)制一代后的DNA（即第二世代），密度梯度離心 1的N15隨機(jī)分布在4條雙DNA鏈中，出現(xiàn)一4 條低密度DNA；如果為半保留復(fù)制，則出現(xiàn)兩條低密度DNA，兩條中等密度DNA 將這些DNA分子熱變性，單鏈DNA密度梯度離心 分析：如果為隨機(jī)復(fù)制，則出現(xiàn)一條帶紋；如果為半保留復(fù)制，則出現(xiàn)一條高密度帶紋和一條低密度帶紋； 讓E.coli再繼續(xù)復(fù)制第三代、四代，兩條帶紋中，低密度DNA帶紋逐漸變寬，中等密度DN

16、A始終為兩條帶兩種放射性標(biāo)記的雙鏈DNA. 分析：如果為隨機(jī)復(fù)制，則占 4.什么是質(zhì)粒的相容性?什么是不相容群?機(jī)制是什么? 質(zhì)粒的相容性是指兩種質(zhì)粒是否可以共存于同一個(gè)細(xì)胞，如果能夠共存則叫相容（又叫親和），不能共存則稱為不相容。從本質(zhì)上說，能夠共存于同一個(gè)細(xì)胞中的質(zhì)粒具有不同的復(fù)制機(jī)制，因而復(fù)制時(shí)互不干涉，并保持穩(wěn)定。根據(jù)質(zhì)粒的這一特性將質(zhì)粒分為若干個(gè)不相容群。同一個(gè)不相容群中的質(zhì)粒不能共存于同一個(gè)細(xì)胞，因而他們的復(fù)制機(jī)制相同，因此凡能共存于同一個(gè)細(xì)胞中的質(zhì)粒屬于不同的不相容群，因而他們的復(fù)制機(jī)制不同 不相容性質(zhì)粒：具有共同的復(fù)制調(diào)控機(jī)制(相互競爭, 相互制約)； 相容性質(zhì)粒( F, Co

17、lEI )：復(fù)制調(diào)控機(jī)制完全不同(和平共處, 互不干擾)。 5.解釋在DNA復(fù)制過程中，后隨鏈?zhǔn)窃鯓雍铣傻摹?雙鏈DNA分子復(fù)制起始時(shí)RNA聚合酶從復(fù)制原點(diǎn)處使雙鏈DNA分子局部開鏈，前導(dǎo)鏈在一段RNA引物的發(fā)動(dòng)下按連續(xù)合成的模式完成合成過程：在合成10-12個(gè)核苷酸的RNA片段之后，再由DNA聚合酶完成前導(dǎo)鏈DNA的合成，在完成近1000-2000個(gè)核苷酸的DNA合成后，后隨鏈才在引發(fā)酶的作用下開始啟動(dòng)岡崎片段的引物RNA的合成：引發(fā)酶往往與其他相關(guān)酶類結(jié)合在一起形成引發(fā)體合成RNA引物分子，為DNA聚合酶III合成DNA分子提供了啟動(dòng)聚合的3-OH末端，岡崎片段聚合完成后，DNA聚合酶I利

18、用其外切和聚合功能降解RNA引物分子，同時(shí)利用前一個(gè)岡崎片段DNA的3-OH聚合DNA,完成類似切口平移的過程，填補(bǔ)切除引物分子后的缺口，最后由DNA連接酶將岡崎片段連接。 6.描述滾環(huán)復(fù)制過程及其特征。 過程：單鏈DNA經(jīng)復(fù)制成為雙鏈復(fù)制型（RF），復(fù)制的起始是在RF型DNA分子的正鏈（+）上形成一個(gè)切口，當(dāng)有3末端外露，5末端游離后，以另一單環(huán)負(fù)鏈（-）為模板開始啟動(dòng)新生正鏈的前導(dǎo)鏈合成，游離的5端按岡崎片段方式啟動(dòng)后隨鏈的合成；隨模板鏈（-）的滾動(dòng)，新生正鏈不斷在3末端延伸（共價(jià)延伸方式），當(dāng)其完全游離出親本單環(huán)負(fù)鏈后，自身立即作為模板鏈按不連續(xù)方式合成岡崎片段，經(jīng)過多輪的滾動(dòng)，合成出的

19、雙鏈DNA分子是多個(gè)基因組串聯(lián)在一起的多聯(lián)體，后經(jīng)切割才形成單體分子。篇二：分子生物學(xué)試題及答案(重點(diǎn)版) 廣石化分子生物學(xué)試題及答案 一、名詞解釋 1cDNA與cccDNA：cDNA是由mRNA通過反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。 2標(biāo)準(zhǔn)折疊單位：蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)單元螺旋與折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結(jié)構(gòu)塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級(jí)結(jié)構(gòu)。幾乎所有的三級(jí)結(jié)構(gòu)都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標(biāo)準(zhǔn)折疊單位。 3CAP：環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein

20、），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互補(bǔ)序列，常是限制性酶切位點(diǎn)。 5micRNA：互補(bǔ)干擾RNA或稱反義RNA，與mRNA序列互補(bǔ)，可抑制mRNA的翻譯。 6核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。 7模體：蛋白質(zhì)分子空間結(jié)構(gòu)中存在著某些立體形狀和拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)頗為類似的局部區(qū)域 8信號(hào)肽：在蛋白質(zhì)合成過程中N端有1536個(gè)氨基酸殘基的肽段，引導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜。 9弱化子：在操縱區(qū)與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列。 10魔斑：當(dāng)細(xì)菌生長過程

21、中，遇到氨基酸全面缺乏時(shí)，細(xì)菌將會(huì)產(chǎn)生一個(gè)應(yīng)急反應(yīng)，停止全部基因的表達(dá)。產(chǎn)生這一應(yīng)急反應(yīng)的信號(hào)是鳥苷四磷酸(ppGpp)和鳥苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp與pppGpp的作用不只是一個(gè)或幾個(gè)操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級(jí)調(diào)控子或稱為魔斑。 11上游啟動(dòng)子元件：是指對(duì)啟動(dòng)子的活性起到一種調(diào)節(jié)作用的DNA序列，-10區(qū)的TATA、-35區(qū)的TGACA及增強(qiáng)子，弱化子等。12DNA探針：是帶有標(biāo)記的一段已知序列DNA，用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應(yīng)用。 13SD序列：是核糖體與mRNA結(jié)合序列，對(duì)翻譯起到調(diào)控作用。 14單克隆抗體：只針對(duì)單一抗原決定簇起作用的抗體。 15

22、考斯質(zhì)粒：是經(jīng)過人工構(gòu)建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質(zhì)粒連接構(gòu)成。 16藍(lán)-白斑篩選：含LacZ基因（編碼半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNA插入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來篩選重組細(xì)菌。稱之為藍(lán)-白斑篩選。 17順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對(duì)基因的表達(dá)起到調(diào)控作用的基因元件。 18Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5 3外切酶活性 19錨定PCR：用于擴(kuò)增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然

23、后分別用多聚dC和已知的序列作為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 20融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時(shí)表達(dá)翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結(jié)合在一起所組成的蛋白質(zhì)。 二、填 空 1 DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內(nèi)切酶酶解 ）片段的排列順序。 2 RNA酶的剪切分為（自體催化 ）、（異體催化 ）兩種類型。 3原核生物中有三種起始因子分別是（IF-1）、（ IF-2 ）和（IF-3 ）。 4蛋白質(zhì)的跨膜需要（ 信號(hào)肽 ）的引導(dǎo)，蛋白伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構(gòu)象的蛋白質(zhì)）。5啟動(dòng)子中的元件通?？梢苑譃閮煞N：（核心啟動(dòng)子元件 ）和（上游啟動(dòng)子元件 ）。 6分子生物學(xué)的研究內(nèi)容主要包含（結(jié)

24、構(gòu)分子生物學(xué) ）、（基因表達(dá)與調(diào)控 ）、（ DNA重組技術(shù) ）三部分。 7證明DNA是遺傳物質(zhì)的兩個(gè)關(guān)鍵性實(shí)驗(yàn)是（肺炎球菌感染小鼠 ）、（ T2噬菌體感染大腸桿菌 ）這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中主要的論點(diǎn)證據(jù)是：（生物體吸收的外源DNA改變了其遺傳潛能 ）。 8hnRNA與mRNA之間的差別主要有兩點(diǎn)：（ hnRNA在轉(zhuǎn)變?yōu)閙RNA的過程中經(jīng)過剪接，）、 （ mRNA的5末端被加上一個(gè)m7pGppp帽子，在mRNA3末端多了一個(gè)多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。 9蛋白質(zhì)多亞基形式的優(yōu)點(diǎn)是（亞基對(duì)DNA的利用來說是一種經(jīng)濟(jì)的方法 ）、（可以減少蛋白質(zhì)合成過程中隨機(jī)的錯(cuò)誤對(duì)蛋白質(zhì)活性的影響）、（活性能夠非常有效和

25、迅速地被打開和被關(guān)閉 ）。 10蛋白質(zhì)折疊機(jī)制首先成核理論的主要內(nèi)容包括（成核 ）、（結(jié)構(gòu)充實(shí)）、（最后重排）。 11半乳糖對(duì)細(xì)菌有雙重作用；一方面（可以作為碳源供細(xì)胞生長 ）；另一方面（它又是細(xì)胞壁的成分 ）。所以需要一個(gè)不依賴于cAMPCRP的啟動(dòng)子S2進(jìn)行本底水平的永久型合成；同時(shí)需要一個(gè)依賴于cAMPCRP的啟動(dòng)子S1對(duì)高水平合成進(jìn)行調(diào)節(jié)。有G時(shí)轉(zhuǎn)錄從（ S2 ）開始，無G時(shí)轉(zhuǎn)錄從（ S1 ）開始。 12DNA重組技術(shù)也稱為（基因克?。┗颍ǚ肿涌寺?）。最終目的是（把一個(gè)生物體中的遺傳信息DNA轉(zhuǎn)入另一個(gè)生物體）。典型的DNA重組實(shí)驗(yàn)通常包含以下幾個(gè)步驟： 提取供體生物的目的基因（或稱

26、外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個(gè)新的重組DNA分子。將這個(gè)重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞中復(fù)制保存，這個(gè)過程稱為轉(zhuǎn)化。 對(duì)那些吸收了重組DNA的受體細(xì)胞進(jìn)行篩選和鑒定。 對(duì)含有重組DNA的細(xì)胞進(jìn)行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達(dá)。 13、質(zhì)粒的復(fù)制類型有兩種：受到宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的嚴(yán)格控制的稱為（嚴(yán)緊型質(zhì)粒 ），不受宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的嚴(yán)格控制稱為（ 松弛型質(zhì)粒 ）。 14PCR的反應(yīng)體系要具有以下條件： a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補(bǔ)的 DNA引物（約20個(gè)堿基左右）。 b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：TagDNA聚合酶。 c、dNTP d、作為模板的

27、目的DNA序列 15PCR的基本反應(yīng)過程包括：（變性）、（退火）、（延伸 ）三個(gè)階段。 16、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的基本過程通常包括： 將克隆的外源基因?qū)氲揭粋€(gè)受精卵或胚胎干細(xì)胞的細(xì)胞核中； 接種后的受精卵或胚胎干細(xì)胞移植到雌性的子宮； 完成胚胎發(fā)育，生長為后代并帶有外源基因； 利用這些能產(chǎn)生外源蛋白的動(dòng)物作為種畜，培育新的純合系。 17雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生是由（脾B）細(xì)胞與（骨髓瘤 ）細(xì)胞雜交產(chǎn)生的，由于（脾細(xì)胞）可以利用次黃嘌呤，（ 骨細(xì)胞 ）提供細(xì)胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長。 18隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體）、第二代（單克隆抗體）、第三代（基因工程抗體 ）。 19目前對(duì)昆

28、蟲病毒的基因工程改造主要集中于桿狀病毒，表現(xiàn)在引入（外源毒蛋白基因 ）；（ 擾亂昆蟲正常生活周期的基因 ）；（ 對(duì)病毒基因進(jìn)行修飾 ）。 20哺乳類RNA聚合酶啟動(dòng)子中常見的元件TATA、GC、CAAT所對(duì)應(yīng)的反式作用蛋白因子分別是（ TFIID ）、（ SP-1 ）和（ CTF/NF1 ）。 21RNA聚合酶的基本轉(zhuǎn)錄因子有、TF-A、TF-B、TFII-D、TF-E他們的結(jié)合順序是： （ D、A、B、E ）。其中TFII-D的功能是（與TATA盒結(jié)合 ）。 22與DNA結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子大多以二聚體形式起作用，轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合的功能域常見有以下幾種（ 螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋 ）、（ 鋅指模體 ）

29、、（堿性-亮氨酸拉鏈模體 ）。 23限制性內(nèi)切酶的切割方式有三種類型分別是（在對(duì)稱軸5 側(cè)切割產(chǎn)生5 粘端 ）、（在對(duì)稱軸3 側(cè)切割產(chǎn)生3 粘端）（在對(duì)稱軸處切割產(chǎn)生平段）。 24質(zhì)粒DNA具有三種不同的構(gòu)型分別是：（ SC構(gòu)型 ）、（ oc構(gòu)型 ）、（ L構(gòu)型 ）。在電泳中最前面的是（ SC構(gòu)型 ）。 25外源基因表達(dá)系統(tǒng)，主要有（大腸桿菌 ）、（ 酵母）、（ 昆蟲 ）和（ 哺乳類細(xì)胞表 ）。 26轉(zhuǎn)基因動(dòng)物常用的方法有：（逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法）、（DNA顯微注射法）、（胚胎干細(xì)胞法 ）。 三、簡 答 1 分別說出5種以上RNA的功能？ 轉(zhuǎn)運(yùn)RNA tRNA 轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸 ；核蛋白體RNA rRN

30、A 核蛋白體組成成 ；信使RNA mRNA 蛋白質(zhì)合成模板 ；不均一核RNA hnRNA 成熟mRNA的前體 ；小核RNA snRNA 參與hnRNA的剪接；小胞漿RNA scRNA/7SL-RNA 蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號(hào)識(shí)別體的組成成分；反義RNA anRNA/micRNA 對(duì)基因的表達(dá)起調(diào)節(jié)作用；核酶 Ribozyme RNA 有酶活性的RNA 2原核生物與真核生物啟動(dòng)子的主要差別？ 原核生物 TTGACA - TATAAT-起始位點(diǎn)篇三：分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題及 第一章緒論 一簡述分子生物學(xué)的主要內(nèi)容。 1.DNA重組技術(shù)（又稱基因工程） 2. 基因表達(dá)調(diào)控研究 3.生物大分子的結(jié)構(gòu)功能的

31、研究結(jié)構(gòu)分子生物學(xué) 4.基因組、功能基因組與生物信息學(xué)研究 二什么是遺傳學(xué)的中心法則和反中心法則？ 遺傳學(xué)中心法則：描述從一個(gè)基因到相應(yīng)蛋白質(zhì)的信息流的途徑。遺傳信息貯存在DNA中，DNA被復(fù)制傳給子代細(xì)胞，信息被拷貝或由DNA轉(zhuǎn)錄成RNA，然后RNA翻譯成多肽。 反中心法則：由RNA逆轉(zhuǎn)錄到DNA，再由DNA轉(zhuǎn)錄到RNA，然后RNA翻譯成多肽、蛋白質(zhì)。 第二章染色體與DNA 一、名詞解釋 半保留復(fù)制：DNA復(fù)制時(shí)，以親代DNA的每一條鏈作為模版，合成完全相同的兩個(gè)雙鏈自帶DNA分子，每個(gè)子代DNA分子中都含有一條親代DNA鏈的復(fù)制方式。 岡崎片段：在DNA復(fù)制過程中，前導(dǎo)鏈能連續(xù)合成，而滯后

32、鏈只能是斷續(xù)的合成5?3 ?的多個(gè)短片段，這些不連續(xù)的小片段稱為岡崎片段。 復(fù)制子：從復(fù)制原點(diǎn)到終點(diǎn)，組成一個(gè)復(fù)制單位，叫復(fù)制子。 插入序列：最簡單的轉(zhuǎn)座子，不含有任何宿主基因，它們是細(xì)菌染色體或質(zhì)粒DNA的正常組成部分。DNA的變性和復(fù)性：變性：指DNA雙鏈的氫鍵斷裂，完全變成單鏈。復(fù)性：指熱變性的DNA緩慢冷卻，單鏈恢復(fù)成雙鏈。 雙向復(fù)制：復(fù)制從一個(gè)固定的起始點(diǎn)開始，同時(shí)向兩個(gè)方向等速進(jìn)行。 引物酶：一種特殊的RNA聚合酶，在DNA模版上合成一段RNA鏈，這段RNA鏈?zhǔn)荄NA復(fù)制起始時(shí)必需的引物。 轉(zhuǎn)座子：存在與染色體DNA上可自主復(fù)制和位移的基本單位。 堿基切除修復(fù)：首先由糖苷水解酶識(shí)別

33、特定受損核苷酸上的N-糖苷鍵，在DNA上形成AP位點(diǎn)，由AP核酸內(nèi)切酶把受損的核苷酸的糖苷-磷酸鍵切開，移去包括AP位點(diǎn)在內(nèi)的小片段DNA，由聚合酶合成新片段，DNA連接酶最終把兩者連接成新的DNA鏈。 DNA重組修復(fù)：即“復(fù)制后修復(fù)”。機(jī)體細(xì)胞對(duì)在復(fù)制起始時(shí)尚未修復(fù)的DNA部位可先復(fù)制再修復(fù)。在復(fù)制時(shí)，先跳過損傷部位，在和成鏈中留下一個(gè)缺口。對(duì)該缺口的修復(fù)即“DNA重組修復(fù)”：先從同源DNA母鏈上將相應(yīng)核苷酸序列片段移至子鏈缺口處，然后再用新合成的序列補(bǔ)上母鏈空缺。 解旋酶：通過水解ATP獲得能量來解開雙鏈DNA的酶。 單鏈結(jié)合蛋白：與解開的DNA單鏈緊密結(jié)合，防止重新形成雙鏈，并免受核酸酶

34、降解。在復(fù)制中維持模板處于單鏈狀態(tài)。 DNA連接酶：連接DNA鏈3?-OH末端和相鄰DNA鏈5?-P末端，形成磷酸二酯鍵，從而把兩段相鄰的DNA鏈連接成完整的鏈。 轉(zhuǎn)座子：一段DNA順序可以從原位上單獨(dú)復(fù)制或斷裂下來，環(huán)化后插入另一位點(diǎn)，并對(duì)其后的基因起調(diào)控作用。 P轉(zhuǎn)座子：是一種能夠誘發(fā)雜種不育的果蠅轉(zhuǎn)座子，果蠅中幾乎所有的雜種不育都由P轉(zhuǎn)座子引起。 二、理解題 1DNA和RNA分子的基本組成成分。 1、DNA由4種主要的脫氧核苷酸(dAMP、dGMP、dCMT和dTMP)通過3，5-磷酸二酯鍵連接而成。 2、RNA是由核糖核苷酸經(jīng)磷酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個(gè)核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和堿

35、基構(gòu)成。RNA的堿基主要有4種，即A腺嘌呤，G鳥嘌呤，C胞嘧啶，U尿嘧啶。 2.DNA分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)：定義、組成和表示方法。1、定義：指DNA分子中多個(gè)脫氧核苷酸的排列順序。即數(shù)目龐大的四種堿基的排列順序。 2、DNA的堿基組成符合Chargaff定則：（1）在所有的DNA中，A=T，G=C 即A+G=T+C （2）DNA的堿基組成具有種的特異性，即不同生物物種的DNA具有自己獨(dú)特的堿基組成，但沒有組織和器官的特異性。 表示方法：（1）結(jié)構(gòu)式表示法： （2）線條式表示法： （3）字母式表示法： 3.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的基本特點(diǎn)？ 1、螺旋直徑2nm；螺旋周期包含10對(duì)堿基；螺距3.4nm；相鄰堿

36、基對(duì)平面的間距0.34nm。 2、嘌呤和嘧啶堿基對(duì)層疊于雙螺旋的內(nèi)側(cè)。順著螺旋軸心從上向下看，可見堿基平面與縱軸垂直，且螺旋的軸心穿過氫鍵的中點(diǎn)。 3、兩鏈上的堿基以氫鍵相連，C與G，A與T配對(duì)。 4、由兩條反向平行的多核苷酸鏈圍繞同一中心軸構(gòu)成的右手螺旋結(jié)構(gòu)。一條由5端到3端，另一條從3端到5端。鏈間有螺旋形的凹槽，其中一個(gè)較淺的叫小溝（約1.2nm）一個(gè)較深的叫大溝（約2.2nm）。 4.DNA復(fù)制體系包括哪些要素？ 底物：dNTP (dATP、dGTP 、 dCTP 、dTTP) ； 聚合酶(polymerase)：依賴DNA的DNA聚合酶, 簡寫為DNA-pol； 模板(templat

37、e)：解開成單鏈的DNA母鏈； 引物(primer)：提供3-OH末端的寡核苷酸； 其他的酶和蛋白質(zhì)因子 5.原核生物DNA聚合酶的種類和異同？ 原核生物DNA聚合酶種類的比較 6.DNA復(fù)制的基本過程和終止機(jī)理？ 1、DNA雙螺旋的解旋： DNA在復(fù)制時(shí)，其雙鏈?zhǔn)紫冉忾_，形成復(fù)制叉，這是一個(gè)有多種蛋白質(zhì)以及酶參與復(fù)制的過程。 2DNA復(fù)制的引發(fā)：所有的DNA聚合酶都從3羥基端起始DNA合成。DNA復(fù)制時(shí)，往往先由引發(fā)每在DNA復(fù)制時(shí)，往往先由引發(fā)酶在DNA模版上合成一段RNA鏈，它提供引發(fā)末端（即引物），接著由DNA聚合酶從RNA聚合酶從RNA引物3端開始合成新的DNA鏈。 3、在DNA聚合

38、酶的作用下，水解切除RNA引物，填補(bǔ)空缺。 4、在DNA連接酶的作用下，連接相鄰DNA片段。 5、終止機(jī)理：當(dāng)復(fù)制叉前移遇到22個(gè)堿基的重復(fù)性終止序列（TER）時(shí)，Ter-Tus復(fù)合物能使DnaB不再將DNA解鏈，阻擋復(fù)制叉的繼續(xù)遷移，等到相反方向的復(fù)制叉到達(dá)后，停止復(fù)制。期間，人后50100bp未被復(fù)制，由修復(fù)方式填補(bǔ)空缺，而后兩條鏈解開。 7.DNA復(fù)制保真信的原理？ 至少依賴三種機(jī)制：1. 遵守嚴(yán)格的堿基配對(duì)規(guī)律；2. 聚合酶在復(fù)制延長中對(duì)堿基的選擇功能；3. 復(fù)制中的即時(shí)校讀功能。 8.什么是RNA反轉(zhuǎn)錄，以及他的生物學(xué)意義？ 定義：以RNA為模版以四種dNTP為原料，在PBA指導(dǎo)的D

39、NA聚合酶的催化下，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則合成DNA的過程。 意義：對(duì)分子生物學(xué)的中心法則進(jìn)行了修正和補(bǔ)充；在實(shí)際工作中，有助于基因工作的實(shí)施，可用于目的基因的制備。 9.什么是DNA自發(fā)性損傷？ 復(fù)制過程中堿基配對(duì)時(shí)產(chǎn)生的誤差，經(jīng)DNA聚合酶校正和SSB等綜合校對(duì)，任未被校正的DNA損傷。包括：DNA復(fù)制中的錯(cuò)誤；DNA的自發(fā)性化學(xué)變化（堿基的異構(gòu)互變、堿基的脫氨基作用、脫嘌呤與嘧啶、堿基修飾與鏈斷裂）； 10.DNA修復(fù)包括哪些類型？ 第三章 RNA的合成 一 名詞解釋 有義鏈: 與mRNA序列相同的那條DNA鏈,也稱為編碼鏈。 反義鏈：根據(jù)堿基互補(bǔ)原則指導(dǎo)mRNA合成的 DNA鏈,也稱為

40、模板鏈。 啟動(dòng)子：指能被RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合并啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。 因子：原核生物RNA聚合酶的一個(gè)亞基，是轉(zhuǎn)錄起始所必需的因子，主要影響RNA聚合酶對(duì)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的識(shí)別。 剪接體：是在真核生物中，mRNA前體在剪接過程中組裝形成的多組分復(fù)合物，主要由細(xì)胞核內(nèi)小分子RNA和多種蛋白質(zhì)因子組成。 轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)：是指與新生RNA鏈第一個(gè)核苷酸相對(duì)應(yīng)DNA鏈上的堿基. 三元起始復(fù)合物：又稱三元起始復(fù)合物。為全酶、模板DNA和新生RNA形成的復(fù)合物，亦可理解為由全酶、DNA和核苷三磷酸(NTP)構(gòu)成。于RNA聚合酶正確識(shí)別DNA模板上的啟動(dòng)子后形成。 轉(zhuǎn)錄終止子：在DNA分子上（基因末端）提

41、供轉(zhuǎn)錄停止信號(hào)的DNA序列稱為終止子,它能使RNA聚合酶停止合成RNA并釋放出RNA。 轉(zhuǎn)錄單元：是一段從啟動(dòng)子開始至終止子結(jié)束的DNA序列。RNA聚合酶從轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)開始沿著模板前進(jìn)，直到終止子為止，轉(zhuǎn)錄出一條RNA鏈,稱為轉(zhuǎn)錄單元。 Pribnow框：Pribnow分離了fd噬菌體等被酶保護(hù)的區(qū)域，在被保護(hù)區(qū)內(nèi)有一個(gè)由5個(gè)核苷酸組成的共同序列，是RNA聚合酶的緊密結(jié)合點(diǎn)，現(xiàn)在稱為Pribnow區(qū)。 內(nèi)含子/外顯子：真核基因表達(dá)往往伴隨著RNA的剪接過程,從mRNA前體分子中切除被稱為內(nèi)含子的非編碼區(qū)，并使基因中被稱為外顯子。 可讀框：由DNA轉(zhuǎn)錄生成的原始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物核不均一RNA(hnRNA)，

42、經(jīng)過5加帽和3酶切加多聚腺苷酸，再經(jīng)過RNA的剪接，編碼蛋白質(zhì)的外顯子部分就連接成為一個(gè)連續(xù)的可讀框 RNA編輯：RNA的編輯是某些RNA，特別是mRNA的一種加工方式，如插入。刪除或取代一些核苷酸殘基；它導(dǎo)致了DNA所編碼的遺傳信息的改變。 RNA拼接：將內(nèi)含子部分切除，將外顯子部分進(jìn)行拼接或選擇性拼接而成為成熟的mRNA，這個(gè)過程被稱為RNA的拼接過程。 核酶：是具有催化功能的RNA分子,是生物催化劑。 二、理解題 1.簡述RNA的種類和生物學(xué)功能。 1、種類：mRNA(信使RNA) 、rRNA(核糖體RNA) 、tRNA(轉(zhuǎn)運(yùn)RNA) 、snRNA 2、功能： rRNA：是核糖體的組成成分，由細(xì)胞核中的核仁合成，而mRNA tRNA 在蛋白質(zhì)合成的不同階段分別執(zhí)行著不同功能。 mRNA：是以DNA的一條鏈為模板，以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈，主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá)，是遺傳信息傳遞過程中的橋梁 tRNA：功能是攜帶符合要求的氨基酸，以連接成肽鏈，再經(jīng)過加工形成蛋